UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA







TITULO :
BIOQUIMICA BACTERIANA
N DE PRCTICA: 7
PARTICIPANTE:
GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO

DOCENTE
DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA
SECCION
FECHA
MIRAFLORES, 24 de junio, 2013





OBJETIVO GENERAL


Reconocer las reacciones de los microorganismos o bacterias ante pruebas
bioqumicas con carbohidratos, y el porqu de esa reaccin.



OBJETIVO ESPECIFICO


Conocer como los microorganismos reaccionan frente a diversos tipos de
cultivo, en su propia reaccin metablica, el cual podremos apreciarlo por el
cambio de coloracin o viraje as como la presencia de gas y presencia de
SH2, esto nos ayuda a reconocer las capacidades que posee y diferenciarlos.






FUNDAMENTO

Se fundamenta en la degradacin de los carbohidratos a cidos

Los microorganismos poseen la capacidad de fermentar diversos sustratos, los
productos finales dependen del tipo de microorganismo, del tipo de sustrato y del tipo
de enzimas que se encuentren presentes. El anlisis qumico de estos productos
finales ayuda a identificar los microorganismos.










MARCO TEORICO
Metabolismo microbiano como el conjunto de procesos por los cuales un
microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que
necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de
estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base
a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un microorganismo
constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico, su responsabilidad
en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales.

Metabolismo de los carbohidratos

Determinar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los
productos terminales cidos de la fermentacin de la glucosa y vencer la capacidad
amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la
produccin de acido y requiere que los microorganismos produzcan cidos fuertes a
partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta
distincin puede hacerse a travs del indicador Rojo de metilo que presenta color
amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende
a 4.4.

Reaccin en el agar triple azcar hierro
Es una prueba usada para la fermentacin de la glucosa, lactosa y sacarosa y la
produccin de H2S por parte de la bacteria sumndole produccin de gas. El cambio
de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentacin. Si se
fermenta nicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el
fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la
lactosa, adems los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.
Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el
fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo
indica presencia de gas como producto final de la fermentacin.
La produccin de H2S se manifiesta por la aparicin de un precipitado color negro
debido a la reduccin de la sal de hierro presente en el medio.

PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)

1. METABOLISMOS DE LOS CARBOHIDRATOS:
La desintegracin de los hidratos de carbono que realizan los microorganismos se ve
acompaada de ala aparicin de una reaccin acida. Los fermentos que desintegran
los hidratos de carbono efectan la hidrolisis de este hasta convertirlo en glucosa o en
otro monosacridos , de esta manera bajo la accin de la maltosa , la sacarosa y la
lactosa de los disacridos que penetran en el interior del cuerpo bacteriano sufren
hidrolisis y desintegracin de los poli y disacridos en monosacridos .
a) Pasos a seguir :

Identificar cada tubo
Replicar la cepa en estudio en tubos que contenga glucosa, lactosa, sacarosa y
manitol.
Considerar positivo al cambio de pH del medio acido que da un color amarillo,
considerndose fermentativa, si hay ruptura del medio se considera
fermentativa con gas.
Medios de cultivo:





Sacarosa
Lactosa
Manitol Glucosa

PROCESO DE LABORATORIO
Regeneracin de los medios
Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado das antes de la
inoculacin (medio gelificado)

Tiene por finalidad eliminar las burbujas de aire que se presentar nuestro
medio de cultivo y as no dar resultados errneos en el momento de la
lectura. El medio es sometido a un bao mara con agua hirviendo por un
tiempo no prolongado (generalmente hasta que est en forma inicial en medio
lquido).

Cuando nuestro medio de cultivo ha sido preparado en mismo da en la
que se va hacer la inoculacin (medio liquido)

No es necesario el proceso de regeneracin de medio, se puede utilizar
directamente.

Trabajamos con medio de cultivo pre-preparados das antes:
Proceso de regeneracin:
Por un tiempo no muy prolongado.




a) metabolismo de los carbohidratos :

Identificacin de los tubos debidamente rotulados; sacarosa(s), lactosa (L),
glucosa (G) y manitol (M).



inoculacin con el microorganismo (Staphylococcus aureus) en los tubos con
medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple
estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo.




Ejemplo


G G G G L G S M
G G G G L G S M


acondicionar nuestras muestras para la incubacin


Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37c por
un promedio de 12 a 48 horas.


RESULTADO: etapa oxidativa



Sacarosa
Lactosa
Manitol Glucosa

2. REACCIN EN EL AGAR TRIPLE AZCAR HIERRO:
Sembrar la cepa en agar TSI (triple sugar iron agar) por puntura profunda y estra en la
superficie inclinada. Incubar a 37C por 24 horas .observar la base y la parte inclinada
acida (amarilla) considerando la prueba positiva, con o son ennegrecimiento
considerando presencia de SH2 positivo, y si hay produccin de gas como
fermentativo.
b) Pasos a seguir :

Identificar el tubo TSI
Replicar la cepa en estudio en el tubo que contenga los 3 carbohidratos en las
siguientes proporciones glucosa (1 g), lactosa (10 g) y sacarosa (10 g).
Considerar los parmetros que se pueda presentar.

Nota: como la finalidad es ver la reaccin en el agar, este proceso no necesita pasar
por la regeneracin de medios.


Medio de cultivo: TSI (triple sugar iron agar)





PROCESO DE LABORATORIO
b) Reaccin en el agar triple azcar hierro :

Identificacin del tubo TSI (triple sugar iron agar) el cual debe estar
debidamente rotulado


inoculacin con el microorganismo (Staphylococcus aureus) en el tubo con
medio de cultivo predeterminado con anterioridad, el proceso es una simple
estocada vertical y central hacia el fondo de cada tubo, seguido de una estra
sobre la superficie inclinada del medio.


Ejemplo





Acondicionar e Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura
optima de 37c por un promedio de 12 a 48 horas.




RESULTADO:


Vista de Pinchazo profundo




Vista de la superficie





RESULTADOS Y CONCLUSIONES
CUADRO N1

METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS

Lectura

Incubacin a 37C / por 24 a 48 horas
Inoculacin : Staphylococcus aureus

sacarosa

lactosa

glucosa

manitol




Oxidativa
SH2




oxidativa
SH2





oxidativa
SH2




oxidativa
SH2


Conclusin:
En conclusin el Staphylococcus aureus , solo llego a la etapa oxidativa ,
etapa en la cual usa el oxigeno del tubo para hacer la degradacin ,el cual ha
producido cambio de viraje en la coloracin tornndose amarillo solo en la parte
superficial
El microorganismo utiliza la fuente de carbono ms asequible en el medio,
la glucosa, esta por estar en menor proporcin (1g). Pero como se encuentra
en el medio y en muy baja concentracin se agota rpidamente. Los productos
de su degradacin acidifican el medio que cambia de rojo a amarillo.

Sacarosa
Lactosa Manitol Glucosa


CUADRO N2

REACCIN EN EL AGAR TRIPLE AZCAR HIERRO

Lectura

Incubacin a 37C / por 24 a 48 horas
Inoculacin : Staphylococcus aureus



glucosa
SH2
(fermentativo)









Conclusin:
En conclusin el Staphylococcus aureus , nos dio los resultados de
glucosa(positivo) , SH2 (negativo) y fermentativo , el medio sembrado no
cambio de coloracin a rojo en la superficie , se mantuvo en la etapa
fermentativa
Hubo proceso de utilizacin de la sacarosa o lactosa por lo que se mantuvo de
color amarrillo y no viro de coloracin.





DISCUSIN:


Si fermenta glucosa cambia a amarillo en todo el tubo, lo que pasa que
en el pico de flauta los productos cidos de la fermentacin de la
glucosa se oxidaron y tambin se oxidaron las peptonas a aminas
alcalinas, quedando el pico de color rojo. Ahora si adems fermenta
lactosa y o sacarosa esto hace que en el pico de flauta se neutralicen
las aminas y el exceso de cido hace virar el indicador al color amarillo.-
-Gmez Del Mnaco, Natalia 14 may 2009 (UTC)



BIBLIOGRAFIA


M.; ARIAS MICROBIOLOGA EN LOS ALIMENTOS, metabolismo bacteriano.

Microbiologa 5a Ed. Prescott, Harley & Klein | 2004 | McGraw-Hill-


Pgina de internet:
http://www.saberdeciencias.com.ar/index.php/apuntes-de-microbiologia/167-
microbiologia-metabolismo-bacteriano