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Testes de Sensibilidade

aos Antimicrobianos
Indicaes do Antibiograma
Quando o perfil de susceptibilidade no
previsvel
Estudos de epidemiologia de resistncia
Estudos de novos agentes
antimicrobianos
No recomendado em microrganismos da
microbiota normal
Ex: Staphylococcus coagulase negativo de
secreo nasal
Seleo dos antimicrobianos
Responsabilidade do laboratrio testar os
antimicrobianos mais apropriados para o microrganismo
isolado e stio da infeco
Os antimicrobianos testados devem ser apropriados
para o tipo de hospital ou instituio
As orientaes sobre os antimicrobianos mais
adequados para cada grupo de microrganismos so
publicadas e atualizadas anualmente pelo NCCLS
(National Committee for Clinical Laboratory Standards)
Principais Classes de Antimicrobianos
Classes Subclasses Exemplos
Penicilinas
(Betalactmicos)
Penicilinas naturais Penicilina G
Penicilinas resistentes a
betalactamases
Oxacilina, meticilina e cloxacina
Aminopenicilinas Ampicilina e amoxicilina
Carboxipenicilinas Carbenicilina e ticarcilina
Ureidopenicilinas Piperacilina, mezlocilina e azocilina
Betalactmicos +
inibidores de
betalactamases
Amoxicilina + cido clavulnico
Ampicilina + Sulbactam
Tirarcilina + cido clavulnico
Piperacilina + Tazobactam
Cefens
(Betalactmicos)
Cefalosporinas de 1 Gerao Cefalotina, cefazolina, cefalexina
Cefamicinas (2 Gerao) Cefoxitina, cefotetan, cefmetazol
Cefalosporinas de 2 Gerao Cefuroxima sdica, cefamandol,
cefonicida
Cefalosporinas de 3 Gerao Cefoperazona, cefotaxima, ceftriaxona
Cefalosporinas de 4 Gerao Cefepima
Carbapenens
(Betalactmico)
Imipenem, meropenem, ertapenem
Aminoglicosdeos Amicacina, gentamicina, netilmicina,
neomicina
Quinolonas cido nalidxico, cido pipemdico
Principais Classes de Antimicrobianos
Classes Subclasses Exemplos
Fluoroquinolonas Ciprofloxacina, norfloxacina,
levofloxacina
Lincosamidas Clindamicina, lincomicina
Ansamicinas Rifampicina
Macroldeos Eritromicina, azitromicina
Glicopeptdeos Vancomicina, teicoplanina
Tetraciclina Tetraciclina
Nitromidazol Metronidazol
Oxazolidinona Linezolida
Inibidores do cido
flico
Sulfametoxazol / trimetoprima,
sulfonamidas, trimetoprima
Mtodos de avaliao
Mtodos convencionais:
Microdiluio ou macrodiluio
Difuso dos discos (Kirby-Bauer)
Mtodos no convenionais:
E-test
Testes especiais
Resistncia a Meticilina (MRSA)
Resistncia a Vancomicina (VISA)
Deteco de betalactamases
Automatizado
Mtodo da microdiluio ou
macrodiluio
Diluio do antibitico
Em caldo Concentrao Inibitria Mnima (CIM)
Macromtodo
Micromtodo
Em gar CIM
Mtodo de Difuso
Tcnica qualitativa
Meio de cultura: gar Meller-Hinton
Transparncia e reprodutibilidade
Baixos teores de inibidores
Crescimento satisfatrio
Vantagens
Fcil execuo
Grande utilizao
Escolha flexvel dos antibiticos
Custo operacional menor
Mtodo de Difuso
Princpio do mtodo da difuso de discos
Mtodo de Difuso
Padronizao de Kirby e Bauer
Preparo do inculo
Turbidimetria
Meio de escolha
Semeadura
Uso de discos
Incubao e leitura
Preparao do inculo
bacteriano
Padro de turvao para o preparo do
inculo:
Escala de McFarland 0,5
0,5ml de BaCl
2
99,5ml de H
2
SO
4
10
8
UFC/ml
Carto para ajuste do inculo
Preparao do inculo
bacteriano
Mtodo do crescimento
Selecionar 3-4 colnias com a mesma morfologia
Inocular em 3ml de caldo TSB ou Mueller-Hinton
Incubar 33-35
o
C at atingir turvao 0,5 McFarland
Se ultrapassar a turbidez ajustar com caldo TSB, Mueller-
Hinton ou soluo salina estril
Mtodo da suspenso direta de colnias
Suspenso direta em meio lquido ou salina de colnias
crescidas por 16-24 horas
Ajuste at atingir turvao 0,5 McFarland
Distenso do inculo
Dentro de 15 minutos aps
ajuste do inculo
Introduzir swab estril na
suspenso ajustada
Comprimir o swab na
parede interna do tubo para
retirar o excesso do inculo
Semear na superfcie do
meio em 3 direes, sem
deixar nenhuma rea sem
semear
Deixar secar com as
tampas semi-abertas
Inculo Inadequado Inculo Adequado
Distenso do inculo
Seleo dos Antibiticos a
Testar
Microrganismo isolado
Local da infeco
Origem do paciente externo ambulatrio
interno hospital
Paciente dependente da via de administrao
Idade do paciente quinolonas e tetraciclinas no so
indicadas em pacientes peditricos
Disponibilidade no mercado local / nacional
Aplicao dos Discos
Colocar no mximo 12 discos em placas de 150mm
e no mais que 5 discos em placas de 90mm
Distncia entre discos e entre borda da placa de
2,5-3cm
Colocar o disco e pressionar levemente com auxlio
de uma pina
Uma vez colocado o disco, no mais remover do
lugar pois a difuso da droga imediata
Aplicao dos Discos
Medida do Halo de Inibio
O dimetro do halo de inibio lido com auxlio de uma
rgua sobre o fundo da placa
Em placas de MH com sangue deve-se ter cuidado para ler a
zona de inibio e no a zona de hemlise
Amostras de Proteus spp. podem apresentar pequeno vu
dentro do halo de inibio ignorar o vu e ler do ponto onde
se inicia o crescimento
Colnias pequenas dentro do halo de inibio devem ser
verificadas se so clones resistentes ou eventual
contaminao
Halos de inibio devem ser interpretados nas categorias
sensvel, intermedirio ou resistente, de acordo com critrios
estabelecidos pelo NCCLS
Medida do Halo de Inibio
Halo de
leitura
em mm
Medida do Halo de Inibio
Paqumetro Rgua milimetrada
Sinergismo
Antagonismo Autonomia
Sinergismo
Associaes
de Antibiticos
Mtodo do E-test
Combina os princpios da difuso do
disco e da diluio
Consiste de uma fita plstico inerte,
medindo 5,5mm de largura por
60mm de comprimento
De um lado da fita est impressa
uma escala de CIM (g/ml) com um
gradiente de concentrao que varia
de 0,016 a 256 g/ml ou 0,002 a 32
g/ml, a depender do antimicrobiano
Pode ser utilizado para uma grande
variedade de microrganismos
Deteco de ESBL
Beta-lactmico associado ao inibidor de
beta-lactamase
E. coli e K. pneumoniae
Mtodos:
Disco aproximao
Disco combinado
E-test
Aumento do halo ou zonas fantasmas
Reportar resistncia todas as
cefalosporinas, penicilinas e aztreonam
Deteco de ESBL
Disco aproximao
3
3mm
3mm
AZT
CAZ
CRO CTX
AMO/AC
AZT = Aztreonam
CRO = Ceftriaxona
CAZ = Ceftazidima
CTX = Cefotaxima
AMO/AC = Amoxicilina +
cido clavulnico
Deteco de ESBL
Interpretao do Antibiograma
Gnero ou espcie Resistncia a
Citrobacter amalonaticus Ampicilina
Citrobacter freundii Ampicilina, cefalotina, cefazolina
Citrobacter diversus Ampicilina
Edwardsiella tarda Colistina
Enterobacter sp. Ampicilina, cefalotina, cefazolina, betalactamicos com
inibidores de betalactamases
Hafnia alvei Ampicilina, cefalotina
Klebsiella pneumonia Ampicilina
Proteus mirabilis Polimixinas, tetraciclina, nitrofurantona
Proteus vulgaris Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantona, tetraciclina
Morganella morganii Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantona, cefalotina
Providencia rettgeri Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantona, tetraciclina
Providencia sp. No-
rettgeri
Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantona,
Serratia marcescens Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantona, cefalotina
Resistncia intrnseca apresentada por algumas espcies bacterianas
Interpretao do Antibiograma
Antimicrobianos Microrganismos
Cefalosporinas de 1 e 2 geraes
e aminoglicosdeos
Salmonella e Shigella isoladas de fezes
Betalactmicos e carbapenens Staphylococcus spp. resistentes
oxacilina
Cefalosporinas, aminoglicosdeos,
clindamicina e
sulfametoxazol/trimetoprima
Enterococcus spp.
Cefalosporinas Listeria spp.
Resultados que no devem ser liberados mesmo que a leitura no
antibiograma apresente sensibilidade