REBIOL. Vol.

29, N° 1: enero - junio, 2009
Organo oficial de la Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Perú

Nota Científica


Desarrollo in vitro de plántulas de
Epidendrum sp. (Orchidaceae) utilizando
carbón activado y 6-bencil-amino purina
(BAP)

In Vitro growt of Epidendrum sp (Orchidaceae) plants utilizing
activated coal and 6-bencil-amino purine (BAP)

Shirley Valderrama Alfaro, Paola Tejada-Castillo, Raquel Sánchez-
Marín, Cynthia Parimango-Quispe, Ana Santa María-Reyes, Amelia
Vega-Huamán, Julio Chico-Ruiz

Laboratorio de Fisiología y Cultivo de Tejidos Vegetales
Universidad Nacional de Trujillo

RESUMEN

La importancia de las orquídeas radica exclusivamente en la belleza, fragancia y exotismo de sus
flores. Su crecimiento en condiciones naturales es muy lento por lo que la obtención de las
florestambién demora, sin embrago esta dificultad se puede superar con los medios de cultivo
artificiales. Con el objeto de obtener numerosas plántulas in vitro, se formuló un medio nutritivo
utilizando carbón activado y 6-bencil aminopurina (BAP) para evaluar el desarrollo de yemas
axilares, protocormos y raíces de Epidendrum sp. (Orchidaceae). Se utilizaron plántulas germinadas
in vitro de un año de edad, e introducidas en el medio basal Knudson suplementado con 0.5% de
carbón activado y 4 mg/l de BAP. Se obtuvieron 75% de plántulas con formación de
yemas axilares, 45% de plántulas enraizadas, 17% de plántulas con desarrollo de
protocormos y 8% de plántulas con formación de raíces y protocor mos a la vez. La
formación de yemas axilares y protocormos se inició a los 40 días después de la siembra,
se obtuvo 13 protocormos de un solo individuo y de 2 a 4 yemas axilares, como máximo,
al final de esta experiencia. Con respecto a las raíces se obse rvó de 1 a 2 raíces a los 30
días de iniciada la siembra y de 2 a 4 raíces a los 60 días. Se concluye que el medio
nutritivo utilizado favorece el desarrollo de taíces, protocormos y yemas axilares en
plántulas de Epidendrum sp.
Palabras claves: Epidendrum sp, enraizamiento, protocormos, Yemas axilares, BAP,
carbón activado.

ABSTRACT

The importance of orchids lies solely in the beauty, fragrance and exotic flowers. Its growth in
natural conditions is very slow in obtaining the delay florestambién, no clutch this difficulty can be
overcome with artificial culture media. In order to obtain numerous seedlings in vitro, was
formulated nutrient media using activated charcoal and 6-benzyl aminopurine (BAP) to evaluate the
development of axillary buds and roots protocorms Epidendrum sp. (Orchidaceae). Germinated
seedlings were used in vitro than a year old, and introduced into the basal medium supplemented
with 0.5% Knudson activated carbon and 4 mg / l BAP. We obtained 75% of seedlings with axillary
bud formation, 45% of rooted plantlets, 17% of seedlings with development of PLB and 8% of
seedlings with root formation and PLB at a time. The formation of axillary buds and PLB was
initiated 40 days after sowing, we obtained 13 protocorms of a single individual and 2-4 axillary
buds than at the end of this experience. With respect to the roots was observed from 1-2 roots at 30
days into the seed and 2-4 roots at 60 days. We conclude that the nutrient medium used will
facilitate the development of Taico, PLB and axillary buds in seedlings of Epidendrum sp.
Key words: Epidendrum sp, rooting, PLB, axillary buds, BAP, activated charcoal.

La familia Orchidaceae, está constituida aproximadamente por 37 000 especies repartidas
en 750 géneros y nuevas variedades se descubren cada año, ocupando de esta manera el
segundo lugar entre las plantas superiores
6
. Son plantas herbáceas que forman rizomas o
seudobulbos sobre los cuales se desarrollan las hojas; aunque hay un buen número de
especies terrestres, la gran mayoría son epífitas, es decir que se han adaptado para vivir
sobre los árboles
1
. Epidendrum sp. (Orquidaceae) es un género representante de las epifitas,
de interés ornamental y ampliamente cultivado, pueden producir hasta 30 flores en
sucesión durante todo el año, se encuentran distribuidas en Centroamérica y Sudamérica
9
.
Las orquídeas son fácilmente propagadas aplicando cultivo de tejidos, éstas técnicas han
mostrado resultados poco exitosos en nuestro país, limitándose a la extracción y
comercialización directa en el campo, lo cual reduce significativamente el número de éstas
en su hábitat, por lo tanto es necesario establecer pautas acerca de su conservación o
manejo sostenible, puesto que constituyen uno de nuestros patrimonios nacionales
2,3,5,12,15

El uso de reguladores de crecimiento como alternativa para el incremento de la
proliferación de brotes y raíces ha sido ensayado con diferentes concentraciones de
auxinas y citoquininas en diferentes géneros como Cattleya aurantiaca, Cymbidium aloifolium,
Dendrobium aphyllum, Phalaenopsis sp, Vanda spathulata, Catasetum fimbriatum y Dendrobium
moschatum, obteniendo buenos resultados
5,7,8,11,13,14,16

El interés por las orquídeas , apreciadas por sus vistosos colores, formas de sus flores y
por la durabilidad de las mismas; es que requieren de condiciones especiales para la
germinación de las semillas y de períodos vegetativos largos antes de su floración, las
cuales son necesarias diferentes técnicas para su propagación. Conociendo esta realidad, el
objetivo de este trabajo fue inducir el desarrollo in vitro de yemas axilares, protocormos y
raices de Epidendrum sp. (orchidaceae) utilizando carbón activado y 6-bencil aminopurina
(BAP)
La experiencia se realizó en el Laboratorio de Fisiología y Cultivo de Tejidos Vegetales
(UNT). Se utilizaron plántulas in vitro de seis meses de edad (Fig. 2b) que fueron obtenidas
de semillas germinadas in vitro. Las cápsulas fueron colectadas del BOSQUE DE CACHIL
y posteriormente determinadas en el Herbarium Truxillense (HUT) (Fig. 2a ). Se utilizó el
medio basal de Knudson, suplementado con 4 mg/l de 6-bencil aminopurina (BAP),
0.5% de carbón activado, 2% de sacarosa y agar agar al 1%. Los medios tuvieron un
pH ajustado a 6. Se esterilizaron en una autoclave durante 30 minutos con 15 libras de
presión y 121°C. Los explantes de 6 meses de edad fueron introducidos en frascos de vidrio
con 4 ml de medio de cultivo y se incubaron a 25 ± 1°C, y fotoperiodo 16:8 utilizando tres
fluorescentes de luz blanca (40 w). Se utilizaron 65 unidades experimentales y hubo tres
repeticiones. La evaluación se realizó a los 70 días y se anotó la presencia y número de
yemas axilares, raíces y protocormos.
El desarrollo de yemas axilares se inicio a los 15 días de iniciada la siembra, se obtuvo de
1 a 2 yemas en el primer mes y de 2 a 3 yemas completamente desarrolladas a los 70 días
de iniciada la siembra (75%, Tabla 1, Fig. 2c1), considerando el desarrollo de solo 2 yemas
axilares por plántula, se recuperó el doble de plántulas que lo inicial. Hubo 1 a 2 raíces en
el primer mes de inducción, las raíces color verde claro aumentaron en número a los 70
días (45%, Tabla 1, Fig.2c2).
Con respecto a la formación de protocormos, se inició a los 30 días del contacto con el
medio inductor, el porcentaje de plántulas con protocormos (17%) fue relativamente bajo,
pero esto fue compensado con el número de protocormos obtenidos por plántula, se pudo
observar la formación de hasta 13 protocormos en algunas plántulas y en promedio 5
protocormos por plántula a los 70 días, solo con este porcentaje se recuperó el doble de
plántulas utilizadas en la experiencia (Tabla 1, Fig. 2d). Luo et al
10
trabajando con
Dendrobium densiflorum encontraron resultados similares pero con BAP a 5 mg/l y si
aumenta la concentración inhibe el desarrollo de yemas axilares pero a la concentración de
BAP que utilizamos (4 mg/l) encontramos alta respuesta en la formación de yemas axilares
Sólo 8% de plántulas presentaron raíces y protocormos a la vez (Tabla1). Esto se explica
por el carbón activados utilizado (0.5%) el cual se usa ampliamente en cultivo de tejidos de
plantas para estimular enraizamiento en propagación de yemas puesto que puede adsorber
la citoquinina favoreciendo un balance endógeno auxina/citoquinina que facilite la
iniciación de las raíces (Cheruvatour y col., 2010; Luo y col., 2008)
En la fig. 1., se comparan el desarrollo de las yemas, raíces y protocormos a los
30, 50 y 70 días de iniciada la siembra, vemos como las barras van en aumento.
En esta experiencia se obtuvieron mayor número de yemas axilares, que
formación de protocormos,

Fig. 1. Comparación del desarrollo (%) de yemas axilares, protocormos y raices de Epidendrum sp. a los 30, 50
y 70 días de siembra in vitro.
















0
10
20
30
40
50
60
70
80
30 Días 50 Días 70 Días
Yemas
Raíces
Protocormos
a
b


Fig. 2: (a) Cápsulas de Epidendrum sp. , (b) plántulas in vitro de seis meses de edad, (c) 1. yema axilar, 2. raíz, (c)
protocormos
Tabla 1: Resultados promedios (%) de la obtención de yemas axilares, protocormos y raíces de
Epidendrum sp. a los 70 días de siembra in vitro.









REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Plantas con:

Porcentaje (%)

N° por planta (x)

Yemas axilares

75

3 ±1

Raíces

45

2 ±1

Protocormos

17

5 ±1

Raíces y Protocormos

8

---
c d
1
2
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Correspondencia: Shirley Valderrama Alfaro
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