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CIPNA-UNAS

Science and Nature for the Benefit of Human Kind
Av. Universitaria Km. 1.5, Tingo María, Perú -Teléfono: (51) 62-561280 - Fax: (51) 62-561156
Email: cipna@msn.com
UNAS CIPNA
Universidad Nacional Agraria de la Selva Centro de Investigación de Productos
National Agrarian University of the Jungle Naturales de la Amazonía


Determinación de Polifenoles Totales
Método: Espectrofotometría

I. Materiales
- Espectrofotómetro UV/VIS
- Cuvetas 1 ml
- Tubos de vidrios
- Micropipetas (1000 l, 200 l, 100 l)
- Pipetas, tips.

II. Reactivos
- (+)-Catequin.
- Solución de fenol de Folin – Ciocalteu
- Carbonato de sodio (NaCO
3
)

III. Procedimiento
1. Preparar las siguientes soluciones stocks:
20% NaCO
3
100 mL
1 mM (+)-Catequin en metanol 10 mL
2. Agregar a cada tubo 1.58 mL de agua destilada desionizada (ddH2O) y 20 l de muestra,
control y estandares. Vortear ligeramente.
Para los controles agregar 20 l de agua destilada desionizada.
Para los estandares preparar de la solución stock de 1 mM (+)-Catequin las siguientes
concentraciones:


[Cat] ug/mL V
met
V
cat
V
F


S0 0 1000 L 0 L 1000 L
S1 1 999 1 
S2 3 997 3 
S3 10 990 10 
S4 30 970 30 
S5 100 900 100 

Donde:
V
met
: Volumen en L de metanol.
V
cat
: Volumen en L de 1 mM (+)-Catequin (estándar).
V
F
: Volumen final.

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Las muestras, controles y estandares deben ser corridos en triplicados para mayor precisión y
reproducibilidad en los resultados.
3. Luego agregar 100 l de la solución de fenol Folin-Ciocalteu. Mezclar nuevamente.
4. Incubar por 1 min a temperatura de ambiente.
5. Para neutralizar la reacción agregar 300 l de 20% de NaCO
3
.
6. Incubar por 2 horas a temperatura de ambiente, tiempo en el que hay una completa
reacción.
7. Para determinar la cantidad de compuestos fenólicos producidos durante la reacción,
agregar 1 mL de muestra, control o estandar en una cuveta de poliestireno (1 cm x 1 cm x
4.5 cm) y leer la absorbancia por espectrofotómetro a 700 nm.
Precaución: Debido a que algunos reactivos son tóxicos, corrosivos e irritantes se recomienda
el uso de guantes. Todo desperdicio líquido o sólido deben ser tratados como material tóxico
y eliminados en envaces adecuados.

VI. Cálculos
Determinar el contenido de fenoles totales a partir de una curva estandar
generada por las absorbancias obtenidas con el estandar (+)-Catequin a
700 nm.


V. Referencias
1. Amakura Y., Umino Y., Tsuji S., and Tonogai Y. Influence of jam processing on the radical
scavenging activity and phenolic content in berries. J Agric Food Chem. 48:6292-7; 2000.
2. Sanoner P., Guyot S., Marnet N., Molle D., and Drilleau JP. Polyphenol profiles of French
cider apple varieties (Malus domestica sp.). J Agric Food Chem. 47:4847-53; 1999.
3. Saucier, C. and Waterhouse, A. Synergetic Activity of Catechin and Other Antioxidants. J.
Agric. Food Chem. 47:4491-4494; 1999.

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