You are on page 1of 3

PRACTICA # 01

1.1 DETERMINACION DE LOS PROCESOS DE
TRANSAMINACION DE LOS L- ALFA AMINOACIDOS.

I . RESULTADOS

I II III IV
C
O
M
P
O
N
E
N
T
E
S

 α-cetoglutarato 0.2 M -
- 0.3 ml 0.3 ml
 L-alanina sol. 0.2 M - - 0.3 ml 0.3 ml
 Piruvato de Sodio. 0.2 M 0.3 ml 0.3 ml - -
 Arsenito de Sodio 0.1 M 0.4 ml 0.4 ml 0.4 ml 0.4 ml
 L-glutamato 0.2 M 0.3 ml 0.3 ml - -
 Centrifugado celular hervido - 1.0 ml - 1.0 ml
 Centrifugado celular frío 1.0 ml
- 1.0 ml -
1° Observación



(+)



(-)



(+)



(-)
Incubar    
Etanol 6 ml 6 ml 6 ml 6 ml
Centrifugar a 2500 r.p.m. 10'    
2° Observación



(+)



(-)



(+)



(-)
Con el sobrenadante obtenido se realiza la cromatografía para identificar los aminoácidos
Soporte: Líquido, papel Eluyente: Fenol, Agua Patrón: Alanina, Glutamato
Revelado Cromatográfico







Datos:

- Medida de la línea basal a la línea del solvente = 8.8 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (Alanina) = 4.2 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (I) = 2.9 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (II) = 1.75 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (III) = 3.3 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (IV) = 4 cm
- Medida de la línea basal a la altura del problema (Glutamato)= 2.3 cm

Cálculos:


Alanina

Rf
Ala
: 4.2 cm = 0.48
8.8 cm

Tubo I

Rf
Ala
2.9 cm = 0.33
8.8 cm



Tubo II

Rf
Glu
: 1.75 cm = 0.10
8.8 cm


Glutamato

Rf
Glu
: 2.3 cm = 0.26
8.8 cm

Tubo III

Rf
Ala
: 3.3 cm = 0.38
8.8 cm



Tubo IV

Rf
Ala
: 4 cm = 0.45
8.8 cm

II. DISCUSIÓN

La primera etapa común del catabolismo de los Aa es la pérdida del grupo amino o
desaminación. Éste proceso ocurre en 2 etapas:
1.Reacción de transaminación.
2.Reacción de desaminación oxidativa.
En la reacción de transaminación el grupo amino es transferido a un α-cetoácido por la acción de
una enzima transferasa específica (transaminasa) para cada Aa, formando un nuevo Aa y un nuevo
cetoácido. Estas reacciones son reversibles y necesitan como cofactor el fosfato de piridoxal (B
6
).
El grupo amino es aceptado por la coenzima y forma piridoxamina -s-fosfato. El fosfato de piridoxal
establece un enlace covalente.
O
O
R
1
OH
α -acetoácido
+
O
NH
2
R
2
OH
Transaminasa
Fosfato de piridoxal
O
NH
2
R
1
OH
aminoácido 1 aminoácido 2
O
O
R
2
OH


En la práctica tenemos:
Tubo I:
Piruvato
GPT
L-Alanina


L-Glutamato α-cetoglutarato

El arsenito de sodio es un inhibdor de la α-cetoglutarato. En este caso la Enzima es la
Glutamicotransaminasa. Al observar el revelado cromatográfico (que contiene ninhidrina, la cual
reconoce Aa), podemos verificar la reacción: El piruvato dio como producto al Aa L-alanina y el otro
Aa presente es el L-glutamato (uno de los sustratos), estos 2 Aa se presentan como dos manchas lilas
correspondientes a la altura de los respetivos Aa patrón.

Tubo III:
α-cetoglutarato
GPT
L-Glutamato


L-Alanina Piruvato

Como la reacción es reversible, se podrían observar 2 Aa: L-alanina (sustrato) y L-Glutamato
(producto)

En el Tubo II igual que para el Tubo IV se le agregó el centrifugado celular hervido, lo que significa
que la GPT está desnaturalizada y por lo tanto no hay reacción.
El Rf de la alanina es mayor porque tiene mayor peso molecular.

III. RESUMEN

Para el desarrollo de la presente práctica se uso de 4 tubos de ensayo; colocando en los tubos I
y II los sustratos piruvato y L-Glutamato más Arsenito de sodio más centrifugado celular frío
en el tubo I y el centrifugado celular hervido en el tubo II. En el tubo III y IV se colocó α-
cetoglutarato más L-alanina más Arsenito de sodio más centrifugado celular frío en el tubo III
y el centrifugado celular hervido en el tubo IV. Así mismo se preparó el papel de filtro
respectivo para el procedimiento cromatográfico empleándose como solvente el fenol- agua y
como revelador la ninhidrina. Luego se midieron las distancias recorridas para cada muestra y
se determinó sus Rf.

IV. CONCLUSIONES

i. Las reacciones de transaminación son reacciones reversibles, en donde un Aa y un
acetoácido darán como productos a otro cetoácido y otro Aa respectivamente. Esta
reacción es catalizada por la enzima transaminasa.
ii. El glutamato, producto final de la mayor parte de las transaminasas, actúa como dador del
grupo amino específico. Las transaminasas se encuentran en las mitocondrias y en el
citosol de las células eucariotas.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS


1) Murray P, Mayer P, Granner D, Rodwell V. Bioquimica de Harper ed. El Manual
Moderno S.A. de C.V. México 1997.pp 138,149.
2) Vásquez-Contreras, E.: http://loq.unam.mx/~evasquez Universidad Nacional
Autónoma de México 2003.
3) Enciclopedia GER. Aminoácidos.
http://www.canalsocial.net/GER/ficha_GER.asp?id=10386&cat=quimica





FECHA: 25/01/07
PROFESOR: Mg. Francisco Avanto Zamora
ALUMNO: Carbajal Muñoz Luis Enrique MESA: 1