habita en el Pacifico suroriental a lo largo de la costa del Per y Chile, su distribucion abarca desde Paita Per (5S) hasta Valparaiso, Chile (33S). esta especie vive , en las aguas costera entre los 5 a 30 m de profundidad, (Cantillanez, 2000) su clasificacion taxonomica es la uiente: Phylum : Molusca Clase : Bivalva Sub-clase : Lamenlinobranchia Orden : Filibranchia Super familia : Pectinacea Familia : Pectinadae Genero : Chlamys Especie : Argopecten purpuratus. 1HABITAT: En el Per existen numerosos bancos naturales de esta especie, tales como los de Baha de Sechura y lobos de Tierra en Piura , Baha de los Chims y el Dorado en Chimbote , Baha de Guaynuna en Casma y Baha de Independencia y Paracas en Pisco. Se encuentran en aguas costeras entre 3 a 30 m, con fondos variables; fondo blando , arena endurecida, de conchuela con algas y cascajo, las Conchas de abanico vive normalmente en bahas protegidas del oleaje a temperatura entre 14 a 20C. esta especie requiere de agua bien oxigenada y con una salinidad de 34.4 a 34.9 por mil incluyendo este parmetro en el desarrollo, alimentacin y reproduccin. Esta especie tiene dos valvas en forma orbicular , siendo una de ellas mas convexa que la otra ,las valvas presentan expansiones laterales denominadas orejas que poseen adems de 23 a 25 estras y presentan anillos de crecimiento representado por lneas concntricas. Esta especie es Hermafrodita, es decir posee los dos sexos masculino y femenino en una misma especie , pero funcionalmente son insuficientes ,siendo la produccin de gametos (vulos y espermatozoides ) en forma alternada, su ciclo reproductivo es continuo. La gnada que contiene ambos Argopecten purpuratus sexos es llamada coral , la cual tiene una coloracin anaranjada (parte femenina) y blanco (parte masculina). (Foto. N 1 y 2 ) Foto N 1 Foto N 2 Fuente: fondepez, 2005 Actualmente se vienen desarrollando actividades de cultivo de en las bahas de Guaynuna, los Chims y el Dorado, estas actividades de crianza de moluscos demandan la coleccin de semillas y su confinamiento para su posterior engorde. Sin embargo, continua extraccin de semillas desde los bancos naturales, pueden en determinado momento hacer colapsar al recurso, sobre todo en pocas fras, donde la reproduccin de . se atena. Por tal motivo se hace necesario estudios de reproduccin y desarrollo de este molusco en condiciones de laboratorio. El xito en la industria de la acuicultura depende en gran medida de la disponibilidad de juveniles de alta calidad que puedan crecer rpidamente hasta un tamao comercial. Existen muchos factores, tanto endgenos como exgenos, que afectan tanto el desempeo de las larvas como el de los juveniles tempranos y tardos. Son tres etapas principales en las cuales puede manifestarse el efecto de esos factores: Desarrollo de las gnadas y gametos Desove y fecundacin Desarrollo y crecimiento de la progenie Argope cte n purpuratus Argope cte n purpuratus Argopecten purpuratus Argopecten p Considerando que los factores endgenos son ms difciles de manejar experimentalmente, los esfuerzos destinados a controlar la produccin de semillas se han dirigido a los de naturaleza exgena, principalmente a aquellos que se refieren a la dieta y temperatura. 9.2 FACTORES EXGENOS QUE AFECTAN EL CICLO REPRODUCTIVO Entre los factores exgenos ms significativos se pueden nombrar: la temperatura, el alimento, fotoperiodo, salinidad, etc. Efecto del alimento Numerosos estudios han sido enfocados a analizar el efecto de las dietas y sus diferentes componentes nutricionales tanto sobre la maduracin gonadal como sobre el desarrollo larval en los bivalvos. Aunque estos aspectos sern revisados en otra presentacin podemos sealar que nuestro grupo ha realizado estudios para mejorar el acondicionamiento de reproductores de en los cuales hemos demostrado que una dieta mixta de microalgas y enriquecida en lpidos insaturados permite mejorar los resultados en la maduracin y porcentajes de desove (Martinez ., 2000a). Efecto de la temperatura La temperatura del agua es el factor ambiental que se cita ms frecuentemente afectando la reproduccin de los bivalvos. El patrn de ciclo reproductivo y los cambios que lo acompaan son afectados por la temperatura dependiendo de la historia trmica de las especies y de su distribucin regional. Sastry (1979), ha establecido que el crecimiento gonadal y la gametognesis en varias especies de bivalvos, se correlacionan positivamente con cambios estacionales de la temperatura, en algunos casos con la declinacin de la temperatura en el otoo o con su incremento en primavera y verano. Se ha discutido por mucho tiempo, la validez del concepto da-grado (D) (Grubert y Ritar, 2005) utilizado para predecir la duracin del perodo de acondicionamiento Argopecten purpuratus etal reproductivo. Sin embargo, el nmero de das-grados, por s solo, no es un buen predictor del tiempo requerido para alcanzar una condicin apta para desovar pues es dependiente de la condicin fisiolgica inicial de s reproductores (Lannan , 1980), de la disponibilidad y calidad del alimento durante el acondicionamiento y de otros factores ambientales (Sastry, 1979). Existen estudios que muestran que aumentos en la temperatura del agua no dan por resultado necesariamente una mejora en el desempeo reproductivo de los bivalvos. En , temperaturas bajas mostraron ser importantes en estimular tanto la ovognesis temprana como la espermatognesis (Jeffs ., 2002). Sin embargo, Chavez-Villalba . (2002) examinando el efecto de esta variable sobre el acondicionamiento reproductivo de ; detectaron que efectivamente se acelera el crecimiento de los ovocitos entre 16 y 22 C pero, a 25 C decrece significativamente. En los estudios en ostin , citados anteriormente (Martnez ., 2000a), adems de probar dietas, se ensayaron dos temperaturas para el acondicionamiento de reproduc y se encontraron mejores resultados, tanto en porcentaje de maduracin como en respuesta a estmulos desovantes, en aquellos individuos mantenidos a 16 C que en aquellos a 20 C. Con el fin de profundizar acerca de este efecto positivo, observado a temperatura ms baja, se realiz otro estudio en el que se evalu la influencia de cambios en la temperatura, aplicados durante el proceso de acondicionamiento reproductivo, sobre el desarrollo gonadal y calidad de la progenie en este bivalvo (Martnez y Prez, 2003). Los individuos fueron acondicionados bajo diferentes regmenes de temperatura: 15 C constante (15 C), 19 C constante (19 C), a 15 C en una primera etapa y luego 19 C (15 [19 C) y finalmente a 19 C en la pri etapa y luego 15 C (19 [15 C). Los resultados obtenidos mostraron que los reproductores de , mantenidos a la menor temperatura, durante todo el proceso de acondicionamiento, presentaron el mayor porcentaje de desove, liberaron ms gametos y de mayor tamao, de todos los mientos experimentales. 9.3 FACTORES ENDGENOS QUE AFECTAN LA GAMETOGENESIS et al. Os trea chilensis et al et al Cras s os trea gigas A. purpuratus et al
Argopecten purpuratus En ltima instancia, son factores endgenos los que determinan la respuesta a las variables ambientales en las distintas etapas del ciclo reproductivo en los bivalvos. Estos ciclos son el resultado de interacciones complejas entre factores endgenos y exgenos y para asegurar un buen desempeo reproductivo no slo se requiere tener conocimiento acerca de las mltiples variables ambientales en juego sino tambin en cmo afectan o se ven afectadas por factores propios de los individuos. Entre dichos factores endgenos debemos considerar aquellos inherentes a la biologa de la especie, como seran su estrategia reproductiva, su gentica misma y los relacionados con la regulacin de sus funciones. Luego de alcanzar cierto estado fisiolgico, en un organismo expuesto a las condiciones ambientales adecuadas, se inicia el crecimiento de la gnada y la gametognesis. Aunque se conoce bastante menos respecto a los factores endgenos que regulan el proceso reproductivo, no podemos ignorar que los seres vivos son sistemas estructurales, funciona les y autorregulados que poseen mecanismos de adaptacin frente a seales que reciben del medio externo o interno. Esas seales eden traducirse en otros (primeros mensajeros) que lleguen hasta el tejido cuya funcin ser regulada . Este primer mensajero puede tratarse de hormonas o neurotransmisores. En las respuestas a esos mensajes se manifiestan tres elementos bsicos: el receptor, un elemento transductor y el elemento efector o amplificador que originar la respuesta intracelular. El receptor, componente macromolecular ubicado en la membrana plasmtica de la clula blanco, es un elemento bifuncional que acta discriminando entre determinadas sea les o mensajes. Al producirse la interaccin con el receptor, ste sufre un cambio conformacional que inicia la respuesta celular posibilitando su unin al elemento transductor. Este ltimo es ahora capaz de transducir la informacin a un sistema enzimtico que genera un segundo mensajero intracelu lar, el cual puede regular la actividad de las protenas (enzimas u otras) y afectar as funciones celulares especficas. Los segundos mensajeros ms conocidos son los nucletidos cclicos (Adenosn monofosfato cclico [cAMP] y Guanosn monofosfato cclico [cGMP]), el ion calcio, las prostaglandinas, e inositol trifosfato y el diacilglicerol. En nuestro inters de conocer el control del ciclo reproductivo en los moluscos bivalvos, hemos tomado este esquema como base. Dado que no existen rganos endocrinos diferenciados en moluscos marinos se ha partido de la base que el sistema nervioso participa en la regulacin central de la funcin reproductiva. Se sabe que el tejido nervioso mantiene el control y la regulacin a travs de compuestos biolgicamente activos. Estas molculas, de diferentes estructuras qumicas, adems de cumplir su funcin en la trasmisin de impulsos nerviosos estaran regulando funciones de otra naturaleza, una de las cuales sera la reproduccin. As, hemos estudiado los distintos niveles de las aminas dopamina, noradrenalina y serotonina en distintos momentos del ciclo reproductivo de , especie que siempre hemos usado como modelo para estudiar el control endgeno de la reproduccin en moluscos bivalvos Tambin hemos estudiado los segundos mensajeros descritos en el esquema de la Figura 1, entre ellos el AMP cclico (cAMP), las prostaglandinas (PGs), el inos trifosfato (IP3). De estos estudios podemos decir que los niveles de estos compuestos cambian durante dicho ciclo confirmando nuestra hiptesis que uno de los mecanismos de control posibles es a travs de la regular la movilizacin de sustratos que aportan energa para el desarrollo de los gametos. Estos resultados han sido publicados y estn resumidos en Romn . (2001). 9.4 DESARROLLO GONADAL En la mayora de los bivalvos, la madurez sexual depende del tamao del animal ms que de su edad, y el tamao que alcanzan en la madurez sexual vara de una especie a otra y segn la distribucin geogrfica. La produccin de vulos y esperma es un proceso denominado gametognesis, cuyo inicio depende de varios factores, como el tamao del bivalvo, la temperatura y la cantidad y calidad de alimento que recibe. La gnada est compuesta por conductos ciliados ramificados desde donde se abren numerosos sacos o folculos. La proliferacin de las clulas germinales recubren la pared del folculo da lugar a los gametos. Aunque el desarrollo la gnada es un proceso continuo, se pueden distinguir varias fases de ptivas; descanso, desarrollo, madurez, desove parcial y desove completo. Cuando las gnadas o el tejido gonadal han alcanzado la plena madurez, son les de ver y ocupan A. purpuratus . et al gran parte del cuerpo blando del animal. Los gonaductos que transportan los gametos hasta la cavidad corporal se desarrollan, aumentan de tamao y se pueden observar a simple vista en la gnada. Se han empleado varios mtodos en los bivalvos para determinar el momento en que alcanzan la madurez y estn listos para desovar. El mtodo ms preciso consiste en cortar secciones histolgicas de la gnada (Foto N 3 ), pero es costoso, lleva mucho tiempo y requiere el sacrificio del animal. La tcnica alternativa, utilizada con ms frecuencia, es de tomar un frotis de la gnada o extraer pequeas muestras de las gnadas de varios individuos y observarlas bajo el microscopio. En la vieira, a veces se utiliza el ndice gonadal (peso de la gnada dividido por el peso de las partes blandas, multiplicado por 100). Generalmente en los criaderos se sigue una rutina estricta para preparar a los adultos para el desove y la mayora de los tcnicos de criadero aprenden enseguida a reconocer cundo ha alcanzado el animal la madurez y est listo para el desove con un examen macroscpico de la gnada. A veces se utiliza el trmino virgen para referirse a aquellos bivalvos que han alcanzado el tamao de madurez sexual y desovan por primera vez. Aunque estos animales alcanzan la madurez sexual, el nmero de gametos producidos es limitado y a veces no todos son viables. Durante las puestas posteriores el nmero de gametos producidos aumentar considerablemente. El perodo de desove en poblaciones naturales vara segn la especie y situacin geogrfica. Existen varios factores ambientales que pueden inducir el desove, de los cuales cabe mencionar la temperatura, los estmulos qumicos y fsicos, las corrientes de agua o una combinacin de stos y otros factores. La presencia de esperma en el agua a menudo estimula el desove de animales de la misma especie. En ambientes tropicales, algunas especies de bivalvos mantienen sus gametos maduros durante todo el ao y desovan cantidades limitadas durante los doce meses. En las zonas templadas, la puesta suele estar limitada a un perodo concreto del ao. Muchos b vos desovan en masa, y el perodo de puesta es muy corto, durante el que expulsan casi todo el contenido de la gnada. Otras especies de bivalvos durante ms tiempo, incluso durante varias semanas, y se les conoce como desovadores parciales, ya que van liberando unos cuantos gametos un perodo ms largo, con uno o dos valores mximos durante ese tiempo. En otras especies puede haber ms de un desove bien diferenciado al ao, mientras que en las especies hermafroditas, el esperma se expulsa antes o despus de los vulos, minimizando as la posibilidad de autofecundacin. Foto N 3 Desarrollo gonadal (ovocitario) en A En crecimiento B Maduros
Fuente: 9.5 ESTADIOS DE MADUREZ SEXUAL Los estadios de madurez sexual, La evolucin reproductiva se estudia a partir de reparaciones microscpicas de la gnada, determina estadios principales: a)-gonada en reposo o vacia b)-gnada en desarrollo c)-gnada madura d)-gnada en periodo de puesta a)Gnada en reposo o inactiva.- son animales vrgenes o animales que han completado el desove. b)Gnada en desarrollo: Estado 1 comienza la gametognesis, no son visibles los gametos maduros. Estado 2 aparecen los primeros gametos maduros. El tamao de la gnada es 1/3 del que tendr cuando este totalmente madura. Argopecten purpuratus Estado 3 hay un incremento general de la masa de la gnada siendo aproximadamente la mitad de la masa que tendr cuando este madura. Estado 4 La gnada tiene 2/3 o mas del que ser su tamao final , la gametognesis continua pero los folculos contienen principalmente gametos maduros. c)Gnada madura. Estado 5 totalmente madura, puede haber en cantidades reducidas , los ovocitos, dentro de los folculos, estan apretados unos contra otros, teniendo conformacin poligonal, Las gnadas masculinas estn istendidas, llenas de espermatozoides. d)Gnada en periodo de puesta: 9.6 SELECCIN DE REPRODUCTORES La seleccin de reproductores se orienta bsicamente a la obtencin de ejemplares adultos con caractersticas deseables y acondicionamiento para liberar gametos de buena calidad. Las caractersticas deseables es ms difcil de explicar porque dependen de varios aspectos , generalmente son caractersticas que tienen relacin con caracterstica morfolgicas como: apariencia externa general, forma, tamao, color, peso. Estas caractersticas tratan se satisfacer al consumidor , pero hay otras tanto o mas importantes y buscan satisfacer al cultivador como: -Rpido crecimiento -alta tasa de conversin alimentaria -Resistencia a enfermedades -Tolerancia a cambios ambientales (T, salinidad, Oxigeno etc) -Capacidad reproductiva 9.7 ACONDICIONAMIENTO DE REPRODUCTORES Para acondicionar a los reproductores se emplean prct mente los mismos mtodos que para todos los bivalvos. En el mbito local, los criaderos suelen contar con sus propios stocks de produccin para el engorde en el mar. Estos stocks se guardan en las mejores condiciones posibles, con gran caudal de agua y a baja densidad, en equipos de engorde mantenid correcto estado. Muchas veces se trata de las cras de generaciones anteriores, procedentes del criadero y seleccionadas por sus caractersticas deseables, como por ejemplo, el ndice de crecimiento, la forma de la concha o su coloracin. Fig. N 1 Acondicionamiento de Reproductores Fuente: Una vez se sacan los adultos del mar se les lleva al criadero y all se les restriega y se lava la concha meticulosamente para retirar los organismos de la epifauna (incrustaciones) y sedimentos adheridos. Foto N 4 Reproductores maduros Foto N 5 limpieza de reproductores
Fuente: Fondepez, 2005 Luego se colocan en tanques similares a los que se pueden ver en la Fig 1. Las almejas, as como las especies de vieiras (p. ej. c) que en la naturaleza normalmente se encuentran semienterradas en el sustrato, se alimentan ms eficazmente si se mantienen en un sustrato adecuado. En tanques del tipo ilustrado, las vieiras pueden enterrarse en bandejas de 10 cm de profundidad rellenas de arena gruesa o arena de concha triturada, a una profundidad suficiente del sustrato sobre un filtro ba arena (Ilustracin ). Las bandejas estn separadas del fondo del tanque de acond ionamiento cuando contienen bivalvos que no requieren sustrato, p. ej. ostras, mejillones y algunas especies de vieiras (Ilustraciones 2). Foto N 6 Tanques de acondicionamiento de reproducotres de Fuente : reproduccion de moluscos,FAO 1989 Tanto la salinidad como la temperatura deberan ser la apropiadas para las especies que se estn acondicionando. Los bivalvos que se cultivan habitualmente siguen un desarrollo reproductor y los gametos maduran a salinidades superiores a 25 PSU (unidades prcticas de salinidad, equivalentes a partes por mil) y a temperaturas que oscilan entre los 16 y 24 C. Sin embargo, cada especie tiene sus valores ptimos para estos parmetros. La almeja japonesa y el ostin japons, por ejemplo, responden mejor a temperaturas de agua de entre 22 y 24 C. El ostin japon iciona en un rango ms amplio de salinidades (15 a 34 PSU), mientras que la almeja japonesa prefiere salinidades superiores, de entre 25 34 PSU con un valor Pecten zicza Argopecten p. ptimo de alrededor de 30 PSU. La ostra virgnica, , se acondiciona a salinidades mucho ms bajas. Como sera esperar en mar abierto, las especies de aguas ms profundas requieren condiciones ms fras y una salinidad cercana a la ocenica. La velocidad del caudal de agua a travs de los tanques de acondicionamiento debera superar los 25 ml por minuto por adulto. Adems, en un tanque con capacidad para 120 150 l no debera mantenerse ms de 5 kg de peso vivo de biomasa de stock . Sera aconsejable no reciclar el agua ni reutilizarla en tanques tan pequeos cuando la densidad de carga es muy alta. Cuando se emplea como stock a los bivalvos de fuera de la zona ms cercana, es conveniente desviar el agua que sale de los tanques a tanque de tratamiento para evitar transferir patgenos y parsitos a la zona circundante. Es conveniente tratar el efluente con >100 mg por l de cloro libre, un desinfectante o un esterilizante de igual eficacia (p. ej. ozono) durante un perodo mnimo de 24 horas (preferiblemente 48 horas) antes de devolverlo al mar. Los criaderos suelen contar con una sala independiente para el acondicionamiento de reproductores o en su defecto los tanques de acondicionamiento se ubican en una zona tranquila de la instalacin donde el stock no sea sometido a frecuentes perturbaciones. La mayora de las especies cierran las valvas de sus conchas como respuesta a las sombras y a la vibracin. Cuanto menos se les moleste ms tiempo pasarn alimentndose. Los criaderos pequeos y medianos suelen tener de entre 5 a 20 tanques de acondicionamiento para poder acomodar a las varias especies que se cran y para permitir la introduccin regular del nuevo stock, mantener la rotacin y garantizar un aporte continuo de larvas. Los criaderos grandes pueden tener muchos tanques pequeos o pocos pero de gran tamao. Cuando se necesita una produccin constante de semilla de una especie en cular a lo largo de un perodo prolongado del ao, se trae nuevo stock para comenzar el proceso de acondicionamiento cada semana o cada quince das. De esta manera, los adultos estn disponibles para desovar cada semana. Cras s os trea virginica 9.8 ALIMENTACIN DE LOS REPRODUCTORES Durante el acondicionamiento suelen emplearse, las especies de algas marinas cultivadas como principal alimento. Otras fuentes alternativas son el fitoplancton natural que prolifera de forma extensiva en tanques o estanques en el exterior, o en forma de pastas que se encuentran disponibles en el mercado. Las especies de algas tiles que pueden cultivarse intensivamente a gran escala son (varias especies, incluyendo , y ), (y el clon T-Iso), , (antes denominada ), y y (esta lista no es de ninguna manera exhaustiva). Es preferible emplear una mezcla, proporcional, de estas especies que una dieta basada en una nica especie. Hay que tener precaucin de no alimentar con especies relativamente indigestas (p. ej. sp.) o, con especies que se sabe carecen de los cidos grasos ms saturados (p. ej. ). Un ejemplo de las consecuencias de emplear una dieta deficiente es la baja produccin de larvas de adultos de cuando se mantienen en agua filtrada y slo se les alimenta con . Se sabe que carece de los cidos grasos muy insaturados C20 y C22, que se consideran esenciales desde el punto de vista nutritivo. En este se mantuvieron grupos de 60 adultos en tanques que reciban un flujo continuo de agua de mar sin filtrar o bien de agua de mar filtrada a un tamao de partcula de 2 m (el sistema de tanques experimental aparece en la fotografa inferior derecha de la Ilustracin 5C). A tres de estos grupos se les di una racin diaria del 3% basada en el peso seco inicial de la carne de las ostras, en forma de sola o en combinacin con o con T-Iso. Se mantuvieron grupos de control en el caso del agua filtrada circulante y del agua de mar sin filtrar sin adicin de algas cultivadas. Tetras elmis T. chuii T. tetrahele T. s uecica Is ochrys is galbana Pavlova lutherii Chaetoceros muelleri C. gracilis Thalass ios ira ps eudonana T. weis floggii S keletonema cos tatum Chlorella Dunaliella tertiolecta Os trea edulis Dunaliella tertiolecta Dunaliella Dunaliella Tetraselmis s uecica CLCULO DE RACIONES ALIMENTICIAS PARA EL ACONDICIONAMIENTO La racin alimenticia necesaria para los reproductores se basa en el peso seco de la carne de los adultos, que normalmente oscila entre el 2% y el 4% del peso seco medio de carne de los adultos al comienzo del perodo de acondicionamiento en peso seco de algas suministradas da. Las raciones que sobrepasan el 6% no suponen un xito en el acondicionamiento, sino que hacen que los bivalvos crezcan con vigor como respuesta a una ali entacin ms rica y a temperaturas elevadas de acondicionamiento, a expensas del desarrollo reproductor. Se trata de un proceso simple en el que hay que determ el peso seco de la carne de los bivalvos de peso vivo conocido trados al criadero para su acondicionamiento. Para calcular la racin es necesario obtener datos abriendo una muestra al azar de 10 12 individuos, retirando los tejidos blandos del cuerpo y pesando la carne despus de secarlos a un peso constante en un horno (de 60 a 80 C de 48 a 72 horas). La ecuacin que a continuacin se detalla sirve para determinar el peso seco por adulto las algas necesario para una racin diaria al 3%. g de racin por da por adulto = 3 x peso seco medio de la carne (g)/100 As, una racin al 3% para un adulto de un peso seco de la carne de 0,75 g asciende a 0,0225 g de peso seco de algas por da. La lta de los datos sobre peso seco para las diferentes especies de algas Cuadro 1 - Seccin 3.1) muestra que 1 milln de clulas de tienen un peso seco (orgnico) de aproximadamente 0,2 mg. Suponiendo que el 50% de la racin diaria al 3% (= 1,5%) se vaya a dar a los reproductores en forma de y que la biomasa total del peso seco de la carne del stock sea 50 g (convertido a mg en la ecu n de abajo), entonces: Racin (1,5%) por da (en millones de clulas) = [(1,5x (50x1 000))/100]/0,2 Tetras elmis Tetras elmis = 3 750 millones de clulas Si, por ejemplo, la densidad de cosecha de un da en particular es de 1,5 millones de clulas por ml, entonces el volumen requerido para dar al stock una racin de 1,5% ser 3 750/1,5 = 2 500 ml, l. El clculo de la racin restante es similar para las otras especies que forman parte de la dieta. Si en lugar de, o adems de, , se utiliza a una densidad de cosecha de 7 millones de clulas por ml, entonces el volumen necesario para una racin de 1,5% ser 3,57 l. tiene un peso seco aproximado de 0,03 mg por milln de clulas. 9.9 INDUCCION AL DESOVE Ejemplares que alcancen desarrollo gonadal propicio (FotoN7B),son colocados en tanques de bajo volumen (tanques de 100 litros)(Foto N 7C). Se produce una elevacin de la temperatura con calentadores individuales hasta alcanzar los 26 o 27C. Esto es suficiente para estimular el desove entre 3 a 7 horas mas tarde. La fecundidad puede variar entre 500 a 4 000 000de vulos por animal. Espermios y vulos son obtenidos por separado. Posteriormente son unidos en otro tanque similar (mximo en un tiempo de una hora). Foto N 7 A) Reproductor maduro C) induccin al desove por Schok termico Fuente: Cultivo de moluscos Silva 1987 Tetras elmis Tetras elmis Chaetoceros muelleri Chaetoceros muelleri Se conoce que la concha de abanico es una especie hermafrodita, que libera gametos al medio acutico (mar), en donde se lleva a cabo la fecundacin, proceso embriolgico, desarrollo de la larva, asentamiento larval y la metamorfosis, se concoce tambin las condiciones ambientales y la alimentacin, tanto en la etapa larvaria como en los adultos, esto hace posible llevar a cabo la reproduccin de desove, fecundacin y cultivo larvario. El desove requiere saber identificar bien los animales maduros y en condiciones de desovar, ya sea provenientes del a iente natural o previamente acondicionados en Hatchery; de tal manera encuentren en las mejores condiciones de evacuar gametos viables y en cantidades adecuadas a las necesidades. La fecundacin, se hace necesario conocer las condiciones ambientales que requieren los gametos asi mo las caractersticas de los gametos y sus concentraciones y la proporcines para una buena fecundacin. En la mayora de las especies de bivalvos de inters comercial, los gametos se expulsan al medio exterior, donde tiene lugar la fecundacin. El esperma es expulsado a travs de la abertura o sifn exhalante en un chorro fino y constante (Foto N 8A ) La expulsin de los vulos es ms intermitente y se emiten en nubes desde la abertura exhalante o sifn ( Foto N 8B ). Foto N 8 Espermiacion (A) y desove (B) de Argopecten purpuratus
Fuente: Alvarado- Alvarez , 1996 Argopecten purpuratus ; En especies como las vieiras ( ) o las ostras, las hembras baten las valvas para expulsar los vulos, despegando as los que se han quedado adheridos a las branquias. En muchas especies, las gnadas se encuentran vacas despus del desove y es imposible distinguir a mple vista el sexo de cada individuo. Se conoce esta fase como la de descanso. En los desovadores parciales, puede que la gnada nunca llegue a vaciarse del todo. En esta presentacin profundizaremos en algunos puntos de la regulacin del desove de estudios del control de esta etapa del ciclo reproductivo nos han llevado a proponer un mtodo de fecundacin que podra incidir positivamente en el cultivo de este bivalvo y otros de caractersticas reproductivas similares. Respecto al desove, hemos demostrado que las monoaminas: serotonina, dopamina y noradrenalina cambian su contenido en la gnada durante este proceso como tambin sucede con los segundos mensajeros medidos. Existen numerosos estudios indicando que la serotonina es en general un inductor efectivo del desove. No obstante, esta induccin en pectnidos gonocricos, requiere mayores dosis para liberar gametos femeninos que para la expulsin de los masculinos (Matsutani, 1990) y en los hermafroditas funcionales (Gib bons y Castagna, 1984), . (Vlez ., 1990), y (Martnez ., 1996) slo induce liberacin de espermatozoides y no de ovocitos. Con respecto a otras amina no se han logrado resultados exitosos excepto en casos aislados usando dosis muy altas de ellas. Nuestros ensayos en (Martnez ., 1996) mostraron que noradrenalina y dopamina al igual que la serotonina, no inducen liberacin de ovocitos pero, si se las inyecta mezcladas con prostaglandina E2, logran en un porcentaje significativo esta liberacin. Al permitir un control ms estrecho de la fecundacin, otra posibilidad es que cada adulto se transfiera a un pequeo recipiente de agua de mar filtrada a la temperatura necesaria en cuanto empiece a desovar (Foto N 9 ). Se marca el recipiente indicando la hora y un nmero de referencia para facilitar el seguimiento de este adulto en particular a lo largo de sus actividades de Argopecten A. purpuratus, A. irradians P ziczac et al A. purpuratus et al A. purpuratus et al desove. A medida que los adultos desovan y nublan el agua con los gametos, se les traslada a un recipiente nuevo y limpio, previo aclarado con agua filtrada. Se marca el recipiente nuevo indicando la hora de transferencia y el mismo nmero de referencia del adulto. Se observa con atencin cada vaso que contiene un adulto que est expulsando esperma para detectar enseguida el comienzo de la liberacin de vulos, que suele ocurrir de forma repentina. Cuando un adulto cambia a la produccin de huevos se le retira inmediatamente y se le transfiere a otro recipiente despus del aclarado, marcando con el mismo nmero de referencia y la hora de la transferencia. Cuando se ha expulsado un nmero suficiente de huevos, se retiran los adultos de los vasos antes de que vuelvan a producir esperma. De esta manera, los huevos y el esperma de cada adulto se acumulan por separado, y se identifican por su nmero especfico de referencia y tiempo de produccin. Foto N 9 Proceso de espermiacion (F) y desove por schok termico (E)
Fuente: Disalvo y Alarcon, 1984 D E F Se observan los moluscos con atencin para identificar las que empiezan a desovar en la bandeja de agua templada. Los reproductores que desovan se aclaran con agua de mar filtrada y se les transfiere individualmente a vasos de precipitados marcados que contienen entre 0,5 y 1 l de agua de mar dentro de otras bandejas que actan como baos de agua templada la temperatura de desove. Despus de expulsar el esperma, las vieiras cambian bruscamente y comienzan a liberar vulos de color naranja. Inmediatamente despus de este cambio es necesario retirar las vieiras, aclararlas y devolverlas a vasos limpios con agua de mar filtrada para continuar la liberacin los vulos. Si la produccin de los vulos es rpida y prolfica, a menudo se aade esperma de otras vieiras en este momento. Los vulos de buena calidad, determinada por un examen microscpico, se ponen juntos en cubos de 10 l. Cabe destacar la utilizacin de una rasera circular de plstico para agitar suavemente el contenido del cubo y mantener los vulos fecundados en suspensin. El cubo puede contener entre 5 y 10 millones de huevos a ojo de buen cubero. 9.10 PROCEDIMIENTOS PARA LA FECUNDACIN Antes de la fecundacin, si no se ha hecho anteriormente, se mizan suavemente las suspensiones de vulos utilizando un cedazo de tamao apropiado (luz de malla de 90 m o mayor) sostenido de tal manera que el cedazo se encuentre debajo del nivel del agua en un cubo o recipiente de mayor volumen, para eliminar restos fecales contaminantes de los adultos antes de aadir el esperma, reduciendo as el riesgo de una proliferacin posterior de bacterias y de otros microorganismos durante la fase siguiente del proceso del cultivo. El mtodo utilizado para fertilizar los huevos es esencialmente el mismo para las especies monoicas que para las dioicas, con la excepcin de los bivalvos hermafroditas, con los que se debe tomar especial precaucin para asegurar la fecundacin cruzada de los vulos con esperma de adultos distintos del lote en cuestin. Por este motivo, los lotes de vulos de los distintos adultos se guardan por separado y se fecundan por separado con esperma recin liberado de 3 4 machos a un cociente de 2 ml de esperma por l de suspensin de vulos. Despus de aadir el esperma, se dejan posar durante 60 a 90 minutos antes de agregarse si es necesario a los huevos fecundados de otros adultos. 9.11 DESARROLLO EMBRIONARIO Dentro del mismo perodo de tiempo, a la temperatura adecuada para la especie, los huevos fecundados empezarn a dividirse, al principio si en dos clulas iguales y luego de manera desigual en 4 clulas cuando se observa una clula grande, recubierta de 3 clulas mucho ms pequeas. Sin embargo, el primer signo de una fecundacin exitosa, antes de que comience la divisin celular, es la extrusin del vulo del primer cuerpo polar, que tiene una estructura pequea en forma de bveda (FigN 2). Se puede evaluar el porcentaje de vulos con desarrollo normal con la ayuda de un microscopio de baja potencia (aumento de x20-40). Las tasas de fecundacin invariablemente superan el 90%, suponiendo que los vulos estn completamente duros. Fig N2 Desarrrollo embrionario en Fuente: Primeras etapas en el desarrollo de los vulos; espermatozoides nadando alrededor de un vulo redondeado; extrusin del primer cuerpo polar despus de la fecundacin; fase de dos clulas que tambin muestra el segundo cuerpo polar; fase de cuatro clulas; fase de ocho clulas. Los vulos de la mayora de los bivalvos ovparos alcanzan tamaos de entre 60 y 80 m, segn la especie. El tiempo transcurrido desde la fecundacin hasta las distintas fases de desarrollo depende de la especie y de la temperatura. Argopecten purpuratus Fig N 2: A B C D E 9.12 DESARROLLO LARVARIO Tanques para embriones y larvas Los huevos fecundados siguen desarrollndose en tanques como los que aparecen en las Ilustraciones 50 y 52 hasta que llegan a la fase de larva veliger D de concha completa, llamada as por la caracterstica forma en D de las valvas de la concha (Ilustracin 51). Las larvas D de los distintos bivalvos cultivados comercialmente se parecen mucho entre s .Existe un amplio abanico de tanques circulares o semicuadrados (cuadrados de esquinas redondeadas) que se pueden utilizar para el desarrollo embrionario y larvario (Ilustracin 52). Es aconsejable construirlos de polietileno o de fibra de vidrio con material nuevo y no reciclado (tambin llamado PRV, plstico reforzado con vidrio, o fibra de vidrio). Los tanques que se utilizan por primera vez se llenan de agua de mar y se dejan de 2 a 4 meses, ca ando el agua semanalmente. Esto permite la eliminacin de sustancias txicas del material plstico nuevo que se lixivian a la superficie y que pueden ser perjudiciales para las larvas. Se puede reducir este tiempo de remojo con agua de mar empleando otro procedimiento ms rpido, que consiste en limpiar los tanques de fibra de vidrio con vapor. Los tanques de fondo plano o los de fondo cnico con una pendiente pequea (p. ej. con el fondo casi plano) son los ms utilizados para el desarrollo embrionario (Ilustracin 52). Los tanques de fondo cnico de pendiente muy pronunciada son menos apropiados porque los primeros embriones son inmviles y tienen tendencia a quedarse agregados en el fondo del cono. Foto N 11 Tanques de incubacin de larvas de Argopecten purpuratus Fuente: Tratamiento del agua: Los tanques de cultivo se llenan de agua de mar filtrada a un tamao de partculas de 1 a 2 m (Ilustracin 53A) y se calientan a la temperatura necesaria (normalmente entre 18 y 24 C; excepto para las especies de aguas fras que requieren una temperatura ms baja). Algunos criaderos desinfectan el agua despus de la filtracin fina pasndola por una unidad de luz ultravioleta (UV) (Ilustracin 53B), pero el valor de este mtodo es cuestionable a menos que se utilice correctamente y a discrecin. El mantenimiento de las unidades de UV tiene que realizarse siguiendo las recomendaciones del fabricante, debindose guardar un registro de las horas de uso de las lmparas. Es necesario sustituir las lmparas cuando stas alcancen las horas de uso recomendadas, momento en el que conviene limpiar la funda de slice de cuarzo que separa la lmpara de la circulacin del agua, utilizando un trapo suave mojado en alcohol. Adems, estas unidades estn diseadas para desinfectar agua dulce y no son tan eficaces a la hora de eliminar o inmovilizar las bacterias marinas u otros microorganismos. A veces conviene filtrar el agua y llenar los tanques de cultivo 24 horas antes de ser utilizados. Esto ocurre con ms frecuencia en los criaderos ubicados cerca de estuarios contaminados por residuos industriales o domsticos o por la lixiviacin a travs de estratos geolgicos metalferos (y restos de minera) en la cuenca de captacin, que puede contener cantidades elevadas de metales pesados. El paso siguiente consiste en tratar el agua con 1 mg por l de EDTA (sal sdica como la que se usa en la preparacin del medio de cultivo de algas) y 20 mg por l de metasilicato sdico y luego airearla vigorosamente durante 24 horas. El tratamiento previo ayuda a complejar los metales pesados y volverlos inocuos durante las primeras fases del desarrollo larvario de los bivalvos. No es necesario filtrar el agua despus del tratamiento previo, aunque s apagar la aireacin durante el desarrollo embrionario. Cultivo de embriones Los embriones se almacenan en los tanques de cultivo unas 2 horas despus de la fecundacin a la densidad adecuada. Las larvas D que han completado su desarrollo se recuperan unas 24 a 48 horas ms tarde, en funcin la especie y la temperatura del agua . Se utiliza poca o ninguna aireacin durante el desarrollo embrionario. muchas especies de vieira una densidad alta inicial de similar tipo produce un desarrollo anormal y por este motivo los nmeros generalmente se restringen de 10 000 a 15 000 huevos fecundados por l de volumen de tanque en especies de aguas ms templadas. En las especies de vieiras de aguas fras las densidades de huevos se basan con mayor frecuencia en la superficie de los tanques ms que en el volumen del tanque, donde la densidad mxima no debe superar los 1 000 por cm2.el primer estadio larval en aparecer son las larvas trocoforas ( 12 horas) y tienen las siguientes caractersticas. Talla de 70 um. Color anaranjado. Las primeras formas larvarias mviles, no consumen alimento Una corona de cilios mviles conocida como prototroca est centrada en el polo animal y realiza eventualmente la cin de locomocin de la larva. Foto N A), B) larvas trocoforas C) y D) larvas D Fuente: Cultivo de moluscos FAO, 1997 Foto N 12 Larvas D Foto N 13 Larvas umbonadas
Fuente:
A las 24 horas despus de la fecundacin aparen las larvas D (Foto N ),
miden un promedio de 95 micrones de longitud y 79 micrones de altura valvar es un nadador activo comienza a alimentarse, aparece la primera valva larval , la caracterstica mas importante es la aparicin es el velo que lo mantiene durante todo el estado de veliger Alos 5 a 6 dias aparece la larva umbonada mide aproximadamente 161 micras de longitud y 144 micras de alyura valvar, se cracteriza por la elevacion dorsal en la valva. (Foto N 13) Manejo de cultivos larvarios Los cultivos larvarios requieren un mantenimiento diario. Funcionan normalmente como sistemas estticos de agua, es decir, sin un intercambio continuo de agua, aunque algunos criaderos utilizan sistemas de cultivo de circulacin continua . Las concentraciones de clulas alimenticias deben mantenerse a un nivel suficiente para propiciar una actividad alimentaria eficiente. Para evitar la acumulacin de metabolitos potencialmen ivos, los tanques requieren cambios completos de agua a intervalos regulares durante el desarrollo larvario desde la fase D hasta el inicio de la metamorfosis. La frecuencia con que se hagan los cambios depende del nmero y talla media las larvas cultivadas. El agua se cambia a intervalos de 48 horas 3 veces cada semana: - a densidad mayor de larvas en fases iniciales (15 000 20 000 por l a <120 m), - a densidad menor de larvas en fases finales (<5 000 por litro desde 150 a 200 m) o, - a unas 2 000 por litro desde 250 a 300 m.
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C. . 71 Mercenaria Pecten maximus Os trea edulis
ESTUDIOS DEL DESOVE En esta presentacin profundizaremos en algunos puntos de la regulacin del desove de porque nuestros estudios del control de esta etapa del ciclo reproductivo nos han llevado a proponer un mtodo de fecundacin que podra incidir positivamente en el cultivo de este bivalvo y otros de caractersticas reproductivas similares. Respecto al desove, hemos demostrado que las monoaminas: serotonina, dopamina y noradrenalina cambian su contenido en la gnada durante este proceso como tambin sucede con los segundos mensajeros medidos. Existen numerosos estudios indicando que la serotonina es en general un inductor efectivo del desove. No obstante, esta induccin en pectnidos gonocricos, requiere mayores dosis para liberar gametos femeninos que para la expulsin de los masculinos (Matsutani, 1990) y en los hermafroditas funcionales (Gib bons y Castagna, 1984), . (Vlez ., 1990), y (Martnez ., 1996) slo induce liberacin de espermatozoides y no de ovocitos. Con respecto a otras aminas, no se han logrado resultados exitosos excepto en casos aislados usando dosis muy altas de ellas. Nuestros ensayos en (Martnez ., 1996) mostraron que noradrenalina y dopamina al igual que la serotonina, no inducen liberacin de ovocitos pero, si se las inyecta mezcladas con prostaglandina E2, logran en un porcentaje significativo esta liberacin. Se sabe que la gametognesis en el ovario de moluscos bivalvos se detiene con la formacin de ovocitos en profase I de la meiosis y se reinicia posterior mente, una vez que se rompe la vescula germinativa. Esta ruptura de la vescula (germinal vesicle) A. purpuratus A. irradians P ziczac et al A. purpuratus et al A. purpuratus et al