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ISOENZIMAS

Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminocidos, pero
que catalizan la misma reaccin qumica. Estas enzimas suelen mostrar diferentes
parmetros cinticos (i.e. diferentes valores de K
M
), o propiedades de regulacin diferentes.
La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las
necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo. En bioqumica, las
isoenzimas son isoformas (variantes estrechamente relacionadas) de las enzimas. En
muchos casos, son codificadas por genes homlogos que han divergido con el tiempo.
Aunque de forma estricta, las aloenzimas representan enzimas de diferentes alelos de un
mismo gen y las isoenzimas representan enzimas de diferentes genes cuyos productos
catalizan la misma reaccin, los dos trminos se suelen usar indistintamente.
TIPOS:
CREATIN KINASA

1) CONCEPTO
La creatinfosfoquinasa (CPK)es una enzima citoplasmtica que cataliza la transferencia de
un fosfato de alta energa desde el fosfato de creatina, principal depsito de
almacenamiento energtico en el msculo en reposo, a la adenosina difosfato. De tal
manera, produce trifosfato de adenosina para su empleo por los miocitos.
Si bien se halla en altas concentraciones en el tejido muscular esqueltico y cardaco, se la
encuentra igualmente, aunque en menores concentraciones, en el cerebro y otros rganos.

2) ORIGEN GENETICO
No especifica.
3) IZOENCIMAS
SE PUEDE DIVIDIR EN TRES ISOENZIMAS:
MM, MB, y BB. El msculo esqueltico contiene principalmente MM (95%), el msculo
cardaco MM (80%) y MB (20%) y el cerebro, el sistema gastrointestinal y el aparato
genitourinario contienen mayoritariamente BB.
CPK-MM es la isoenzima que constituye casi todas las enzimas circulantes en personas
sanas. La CPK se utiliza en el diagnstico de infarto agudo de miocardio y como medida
confiable de enfermedades esquelticas e inflamatorias del msculo. Los niveles de CPK
tambin pueden ayudar al reconocimiento de distrofia muscular incluso antes de que
aparezcan sntomas clnicos.
4) SIGNIFICADO CLINICO
El principal componente fosforilado del msculo es la fosfocreatina, que est,
aproximadamente unas ocho veces en exceso sobre el ATP.
Varias condiciones fisiolgicas van acompaadas de cambios en la concentracin srica de
CPK. Los niveles tambin varan entre individuos normales y tal variacin persiste luego de
la correccin con la masa muscular y talla. La razn de estas diferencias sistemticas es
desconocida aunque probablemente corresponda a factores genticos. Los afroamericanos
presentan niveles ms altos de CPK. Los valores de referencia en hombres son hasta 174
U/L y en mujeres hasta 140 U/L.
Cuando el msculo se contrae, el ATP se consume y la CREATNquinasa cataliza la
refosforilacin del ADP para formar ATP, usando fosfocreatina como reservorio de la
fosforilacin. La Actividad en suero parece estar en funcin de la masa muscular del
individuo, por ello las mujeres tienen actividades sricas ms bajas que el hombre. Tambin
varan las cifras con la Edad. De aqu la importancia de utilizar el ndice de Corte [(CK
Total / CK MB masa) x 100] en la valoracin del origen de un aumento de CK MB masa:
msculo esqueltico o cardaco.
Elevaciones transitorias de los niveles de CPK resultan comunes luego de injurias
musculares reversibles como traumas (inclusive inyecciones intramusculares), realizacin
de ejercicios vigorosos (despus de ellos el valor puede persistir elevado hasta 7 das) o aun
en calambres musculares.
Asimismo, puede aumentar en varias condiciones sistmicas, incluidas infecciones virales,
enfermedades del tejido conectivo, alteraciones hidroelectrolticas y trastornos tiroideos.
Tambin en enfermedad celaca, condicin frecuentemente subdiagnosticada.
El aumento de la CPK en plasma es inespecfico y podemos verlo en mltiples patologas.
Su elevacin puede conducir a un diagnstico incierto cuando se acompaa de una
manifestacin levemente sintomtica o asintomtica.
Lo primero a tener en cuenta es si este hallazgo de laboratorio se acompaa de sntomas
que nos orienten a una patologa en particular y, en segundo lugar, descartar aquellas
drogas que puedan estar elevando sus niveles sricos. En pacientes asintomticos, con CPK
alta sin causa aparente, resulta prudente realizar un seguimiento capaz de descartar otras
patologas. CPK y mialgias. Los dolores musculares son comunes en los individuos
normales. Dado que algunos casos de mialgia se asocian a miopatas especficas son
necesarios datos de laboratorio que ayuden a seleccionar quienes requerirn ms estudios.
Las pruebas de screening de miopatas incluyen CPK y velocidad de eritrosedimentacin
(VES), que han demostrado ser altamente especficos (81% y 93% respectivamente) para
miopatas.
La eritrosedimentacin, aunque menos sensible que la CPK para el diagnstico de
miopatas, es til para evaluar causas de mialgias que no cursan con elevacin de CPK
como la polimialgia reumtica.
La aldolasa, presente en el msculo esqueltico, hgado y eritrocitos, no se considera una
buena prueba para la deteccin de miopata ya que esta enzima no es fcilmente liberada en
lesiones musculares y, a menudo, se halla tcnicamente comprometida por hemlisis de la
muestra srica. Sin embargo, aproximadamente el 10% de las miopatas inflamatorias
activas pueden tener elevacin de aldolasa con CPK normal.
Si las pruebas de screening sricas resultan anormales corresponde continuar la
investigacin con electromiografa (EMG) y eventualmente con biopsia muscular
(sensibilidad para diagnstico de miopata: 81%).
Otro estudio a considerar es la determinacin de tirotrofina (TSH) srica dada la frecuente
asociacin con hipotiroidismo.
CPK y empleo de frmacos Variados frmacos pueden elevar el valor srico de CPK. Un
estudio demostr que de 171 casos, las drogas ms frecuentemente involucradas fueron:
estatinas (46.4%), fibratos (14.3%), antirretrovirales (14.3%), antagonistas del receptor de
angiotensina (10.5%), inmunosupresores (7.1%) e hidroxicloroquina (7.1%).
CARACTERISTICAS DIAGNSTICAS

La creatina kinasa est compuesta de 2 cadenas polipeptdicas, denominadas B (de cerebro)
y M (de msculo), que dan origen a los tres isoenzimas dimricos: MM (CK-1), MB (CK-
2) y BB (CK-3).
Los porcentajes de la actividad de CK-MB srica respecto a la actividad CK total suele ser
inferior al 6%. Sin embargo, estos valores aumentan al 10 a 30% despus de un infarto de
miocardio dependiendo de la extensin de tejido miocrdico afectado y de la localizacin
del infarto. No obstante, pueden encontrarse ndices bajos de CK-MB srica tras un infarto
de un miocardio previamente sano. Por consiguiente, el diagnstico de infarto de miocardio
debe basarse en la historia clnica y otros datos, junto con la magnitud de la elevacin de
CK-MB y su perfil en el tiempo4,7.
El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico
ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.

LACTATO DESHIDROGENASA

.1. CONCEPTO

La LDH es una enzima citoplasmtica. Su centro activo se encuentra en el interior de cada
subunidad, siendo especfico para L-lactato, y utiliza nicamente NAD+ como coenzima.
La unin de la coenzima provoca un cambio de conformacin diferente segn su estado de
oxidacin, lo que permitir el acceso del sustrato.

La lactato deshidrogenasa (E.C.1.1.1.27) es una enzima dependiente de NAD que se
encuentra ampliamente distribuida en tejidos animales, vegetales y en microorganismos.
Cataliza la transformacin anaerobia de piruvato a lactato segn la siguiente reaccin:

Tiene un importante papel en el metabolismo de glcidos, interviniendo en el ltimo paso
de la glucolisis anaerobia y en un primer paso hacia la gluconeognesis a partir de lactato.
Adems aporta combustible al ciclo de Krebs en tejidos consumidores de lactato como el
msculo cardaco.
Su peso molecular es aproximadamente 140.000 Da y su estructura es la de un tetrmero
dispuesto tetradricamente, en el que la subunidades van unidas por enlaces hidrfobos,
puentes de hidrgeno y fuerzas electrostticas.

.2. ORIGEN GENTICO

Las estructuras de LD-H y LD-M estn determinadas por los loci situados en los
cromosomas 12 y 11, respectivamente.

.3.ISOENZIMAS

Existen dos tipos distintos de subunidades: M y H, que dan lugar a cinco tipos de
isoenzimas distintas (H4, MH3, M2H2, M3H y M4) las cuales se han numerado del 1 al 5
en funcin de su movilidad electrofortica.
As la LDH-1 (H4) es la que ms avanza hacia el nodo mientras que la LDH-5 (M4) es la
de menor movilidad electrofortica. Las distintas isoenzimas presentan caractersticas
cinticas diferentes. Su proporcin varia segn la especie animal, el tejido y el grado de
desarrollo del mismo. La isoenzima M4 (tpica de msculo) cataliza mejor el paso de
piruvato a lactato, mientras que la H4 (tpica de corazn) pasa preferentemente de lactato a
piruvato, inhibindose por este ltimo.

.La LDH est presente en casi todas las clulas del organismo humano, principalmente en:
hgado, miocardio, msculo esqueltico y hemates. Estos tejidos muestran diferentes
composiciones isoenzimticas. Pueden aislarse diferentes formas moleculares en el mismo
tejido o en tejidos distintos. A estas diferentes formas moleculares las denominamos
isoenzimas de la LDH. Hemos dicho que la LD tiene dos tipos de subunidades: M y H. Se
diferencian por el contenido y secuencia de aminocidos y pueden combinarse para formar
5tetrmeros (isoenzimas), separables por electroforesis.1 La subunidad M, se encuentra
principalmente en el msculo esqueltico (Muscle) e hgado.2 La subunidad H, se
encuentra principalmente en el corazn ( Heart ).Los tetrmeros son: M4, M3H, M2H2,
MH3, H4.Las isoenzimas son: LD5, LD4, LD3, LD2, LD1

.4. SIGNIFICADO CLNICO

La determinacin de la actividad lactato deshidrogenasa, en suero, tiene una gran variedad
de aplicaciones clnicas.

Por ser una enzima intracelular, su elevacin es ndice de dao tisular con la consecuente
liberacin de sta a la circulacin. El dao puede ser desde una simple anoxia con ligero
dao celular y prdida de citoplasma hasta una necrosis celular severa, producindose por
lo tanto, diversos grados de elevacin de la actividad enzimtica en suero .Con niveles
alterados de LDH total, la determinacin de la isoenzima predominante posibilita la
identificacin del rgano comprometido:

LD1: corazn, hemates, crtex renal 27% del nivel srico total
LD2: hemates, crtex renal, pulmn 37% del nivel srico total
LD3: pulmn, glbulos blancos, pncreas, plaquetas 27% del nivel srico total
LD4: msculo esqueltico, mdula renal, plaquetas 8% del nivel srico total
LD5: hgado, msculo esqueltico, tejidos neoplsicos 5% del nivel srico total

El comportamiento de las isoenzimas (separacin electorfortica en acetato de celulosa o
poliacrilamida
inmunoinhibicin, inhibicin qumica) no debe ser interpretado sino a la luz del
conocimiento de la historia clnica del paciente. En este sentido la inversin de los valores
de LD1/LD2 (flip) constituye un indicio de injuria miocrdica, como s tambin el
aumento de LD5 orienta hacia una hepatopata. El aumento de la fraccin LD2, LD3, LD4
refleja una masiva destruccin plaquetaria (tromboembolismo pulmonar).


En general, los tejidos que muestran metabolismo aerobio revelan, predominantemente,
isoenzimas de movimiento electrofortico ms rpido (LDH1), con mayor nmero de
subunidades H.Los tejidos que muestran metabolismo anaerobio revelan,
predominantemente, isoenzimas de movimiento electrofortico ms lento (LDH5),con
mayor nmero de subunidades M. La proporcin de enzimas vara de un tejido a otro. En el
corazn, predomina la isoenzima LDH1 (del 18 al 33% de la actividad de la LDH Total).En
el hgado, en cambio, es mayoritaria la isoenzima LD5 (del 2 al 13% de la actividad de la
LDH Total).La LD2 representa un 28 a 40% de la actividad de la LDH Total. LaLDH3, del
18 a 30%. La LD4, del 6 al 16%.Existe una LDH-X, que se presenta en testculos y
esperma

FOSFATASA ALCALINA

1. CONCEPTO
Es un enzima hidrolasa responsable de la remocin de grupos fosfato de muchos tipos de
molculas, incluyendo nucletidos, protenas y alcaloides; cataliza la hidrlisis del enlace
ster fosfrico, entre un grupo orgnico y un grupo fosforilo a pH alcalino, lo que libera
fosfato al medio.

.2. ORIGEN GENTICO
Es la enzima se encuentra en el organismo en diferentes formas mltiples que son el
resultado bien de la expresin de genes distintos, bien de modificaciones postraduccionales.
Las diferentes formas de fosfatasa alcalina difieren entre s en su estructura molecular
(secuencia de aminocidos, contenido en carbohidratos. etc.).
Adems pueden presentar "diferencias en sus propiedades fisicoqumicas (movilidad
electrofortica, estabilidad trmica, etc.), antignicas y/o catalticas (especificidad por
ciertos sustratos, respuesta a inhibidores. etc.).

.3.ISOENZIMAS
La actividad plasmtica de FA es el resultado de la suma de las actividades plasmticas de
sus diferentes isoenzimas procedentes del hgado, intestino, hueso, rin... ampliamente
estudiadas y fcilmente identificables por electroforesis.

ISOENZIMA HEPTICA AP-1
ISOENZIMA SEA AP-2
ISOENZIMA INTESTINAL AP-3
ISOENZIMA PLACENTARIA AP-2-4

V.4. SIGNIFICADO CLNICO
La actividad srica de la fosfatasa alcalina heptica est inducida por una sntesis de novo
en el hepatocito, vinculada al proceso hepatobiliar y su separacin de la membrana celular
del hepatocito por medio de una fosfolipasa D, produce el aumento en circulacin. En los
ductos biliares esta liberacin es llevada a cabo por complejos macromoleculares
(lipoprotena X), que se detectan por electroforesis delas isoenzimas en los casos de
colestasis (fraccin biliar).Es termoestable

La actividad srica de fosfatasa alcalina sea, en condiciones normales, alcanza su mayor
actividad en los nios en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto)
debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la
calcificacin y formacin de estructuras seas).Es termolbil.

Tambin es fisiolgico el aumento que se produce al final del primer trimestre del
embarazo, aexpensas de la isoenzima placentaria, que en este perodo alcanza niveles
mximos (aproximadamenteel doble de los valores normales), mantenindose durante todo
el embarazo y decayendo a partir del parto, encontrndose los valores basales alrededor de
un mes post-parto.

TRANSAMINASAS

. 1 CONCEPTO

Las transaminasas son enzimas intracelulares presentes en todas las clulas del organismo,
principalmente en el hepatocito, el msculo esqueltico y el corazn. Pertenecen al grupo
de las transferrasas (aminotransferrasas).
Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia reversible de un grupo amino
entre un aminocido y un cetocido. Esta funcin es esencial para la produccin de los
aminocidos necesarios para la sntesis de protenas en el hgado.

2 ISOENZIMAS

Las dos transaminasas que habitualmente se determinan en la prctica mdica son:

Transaminasa glutmico-oxa-lacetica (SGOT, GOT) aspartato-aminotransferasa (ASAT,
AST).
Transaminasa glutmico - pirvica (SGPT, GPT) Alaninaamino- transferasa (ALAT,
ALT)

La aspartato aminotransferasa (AST = glutmico oxalactico transaminasa = GOT ) se
localiza sobre todo en la mitocondria y est presente en otros rganos, adems de hgado,
como son, en orden de frecuencia, el miocardio, msculo esqueltico, riones, cerebro,
pncreas, pulmn, leucocitos y eritrocitos. Por el contrario, la alanina aminotransferasa
(ALT = glutmico pirvico transaminasa = GPT) se localiza fundamentalmente a nivel
citoslico en el hepatocito, lo que explica su mayor especificidad.


3 ORIGEN GENTICO
El origen de las transaminasas se da en el hgado, a nivel de las clulas hepticas, por lo
mismo que aqu se encuentra la mayor concentracin de las Transaminasas. Genticamente
el origen de las transaminasas se dan a nivel cromosmico como lo es en el caso de la GTO
(Cr. 10 q24.1-25.1), y en el caso de la GTP (Cr. 8 q24.2-qter)

4 SIGNIFICADO CLNICO

Ambas estn presentes en suero en concentraciones inferiores a 30-40 UI/l, aunque el valor
considerado como normal vara entre laboratorios, y se debera ajustar segn sexo e ndice
corporal, presentando tambin algunas diferencias tnicas. La elevacin plasmtica de las
transaminasas es un indicador sensible de dao hepatocelular, aunque no especfico.
Prcticamente cualquier enfermedad heptica que comporte un dao necroinflamatorio
puede ser la causa. El aumento de transaminasas en sangre aparece cuando existe dao de la
membrana celular y no siempre requiere la necrosis de los hepatocitos.
De hecho, hay escasa correlacin entre el dao celular heptico y el grado de elevacin de
las transaminasas. Adems, enfermedades no hepticas tambin pueden ocasionar la
elevacin, aguda o crnica, de las cifras de transaminasas, sobre todo de la AST.

Para esto los valores que debemos conocer de las transaminasas con los siguientes:

GTO: 5-40 u/ml
GTP: 5-30 u/ml