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PRACTICA No.

1

Conocimiento del material y equipo del laboratorio de bioqumica y
adiestramiento en su empleo

OBJETIVOS: Que el alumno conozca el uso, manejo y cuidado que se le da a los
materiales, instrumentos y equipos que se emplean en el laboratorio de
bioqumica.

Que el alumno conozca las pipetas, su uso y las tcnicas de pipeteo, as como
aprender a medir volmenes pequeos.

El alumno aprender a manejar de manera correcta y adecuada tanto el equipo
como el material que empleara.

FUNDAMENTO
Conocer y manejar el equipo y material del laboratorio de bioqumica, que se
emplea en las practicas de la materia de bioqumica resulta fundamental por varias
razones como :
Didcticas, de aprendizaje, de colaboracin, de comunicacin, etc.

MATERIAL, INSTRUMENTOS Y REACTIVOS
Espectrofotometro, medidor de pH, balanzas analticas, balanza de precisin, balanza
granataria, centrifuga, bao maria.

Pipetas de vidrio de 1, 5, 10 y 0.1 mililitros. Pipetas volumtricas. Pipetas Pasteur. Pipetas
de Thomas y de Sal. Micropipetas automticas.

METODOLOGA
Se describe el equipo y material as como el fundamento tcnico-cientfico de
funcionamiento con que se cuenta el laboratorio de bioqumica.
Se muestran los aparatos, describiendo el uso que tienen cada uno de ellos as
como su funcionamiento y cuidado.
Se muestran diferentes tipos de pipetas, los alumnos practican con pipetas
graduadas midiendo volmenes de agua.

RESULTADOS
En general se les pide a los alumnos que describan la estructura y funcionamiento
de los diversos equipos y material que se emplean, tanto con los que se cuenta
como otros de tecnologa mas avanzada.

CONCLUSIONES




INVESTIGACIN

Cul es la diferencia entre fotocolormetro y
espectrofotmetro? R= La base de la colorimetra y la espectrofotometra es que
muchas sustancias tienen color propio, o pueden dar lugar a productos finales
coloreados en ciertas reacciones qumicas. Hay una relacin entre la intensidad de
este color y la concentracin del producto final, o sea la concentracin de uno o
varios de los reactivos; de esta manera, la intensidad del color puede utilizarse
para medir la concentracin. Existen muchos instrumentos para la medicin del
color; pero antes de hablar de su funcionamiento y manejo, es preciso conocer las
leyes fsicas sobre las cuales se basan.
Luz. La luz es una variedad de energa radiante que forma parte del
espectro electromagntico. Como todas las radiaciones de este espectro, tiene
una velocidad de 3 x 10
10
cm/seg aproximadamente; posee propiedades mixtas,
de onda y de corpsculo, y se propaga en lnea recta en todas las direcciones
desde su fuente de origen.
Soluciones coloreadas. Algunas soluciones tienen color, porque
absorben la luz de cierta longitud de onda y dejan pasar la de otras longitudes de
onda. Una solucin roja debe su color a que transmite el color cuya longitud de
onda se encuentra entre 650 y 750m , en tanto que absorbe la luz de longitud de
onda ms corta. Las soluciones que no absorben la luz visible, vindose incoloras,
pueden absorber en el infrarrojo o en el ultravioleta. Por ejemplo, la absorcin
mxima del dinucletido de nicotinamida y adenina reducido (NADH) se situa en
340m .
Ley de Lambert o de Beer. La ley de Beer relaciona la cantidad de luz
absorbida con la concentracin del componente coloreado. En condiciones
adecuadas, la cantidad de luz absorbida por una solucin coloreada, cuando se
ilumina con luz de longitud de onda conveniente, es directamente proporcional a la
concentracin del componente coloreado; A = abc, donde a = absorcin
especfica, b = longitud del trayecto luminoso, y c = concentracin del componente
coloreado.
Absorcin especfica. Es una caracterstica constante de un sistema
particular soluto-solvente para una cierta longitud de onda. Puede desecharse en
una medicin dada cuando se compara el problema con un patrn.
Longitud del trayecto luminoso. Depende del tamao del tubo o de la
cubeta que se utiliza; si se emplea el mismo tubo o la misma cubeta para todas las
mediciones, se puede descartar este factor tambin.
En estas condiciones, la ley de Berr-Lambert se escribe A c
(absorbancia proporcional a concentracin).
Absorbancia. La absorbancia puede definirse como el logaritmo negativo
de la transmitancia o el logaritmo del recproco de la transmitancia.

A = - log T o A = log 1/T

Transmitancia. La transmitancia puede definirse como la relacin entre la
luz transmitida P (luz que sale de la solucin) y la luz incidente P
0
(luz que entra a
la solucin). En otras palabras, T = P/ P
0
.
Transmitancia por 100. Las escalas de ciertos instrumentos estn
graduadas en unidades de transmitancia por 100 (T por 100), lo que corresponde
simplemente a unidades de transmitancia multiplicadas por 100.
Cuando se hacen mediciones en unidades de transmitancia por 100, se
debe de emplear papel semilogartmico, poniendo las unidades de T por 100 en el
eje logartmico y las concentraciones patrn en el eje aritmtico.
Tambin se puede transformar las unidades de transmitancia por 100 en
unidades de absorbancia de la siguiente manera, pasando luego los resultados a
una grfica en papel milimtrico.

Describir la estructura y funcin de los componentes del espectrofotmetro
Todos los instrumentos para medir absorbancia poseen los mismos
componentes de base: fuente de luz, dispositivo para monocroma, soporte para
las muestras, control de sensibilidad, detectores fotosensibles, control de corriente
sin luz, y aparatos de medicin.
Fuente de luz. Cuando se trabaja con luz visible y ultravioletas largos, se
emplea un foco con filamento de tungsteno. Habitualmente, se trata de una
lmpara de bajo voltaje, que recibe corriente de un transformador de voltaje
constante, o de una batera. En la gama de los ultravioletas, se necesita una
lampara de descarga en atmsfera de hidrgeno.
Dispositivo de monocroma. En los medidores de absorcin por filtro, de
costo bajo, suelen emplearse filtros de luz, de vidrio coloreado, o de gelatina
coloreada con sustancias adecuadas, entre dos placas de vidrio, los filtros de
vidrio o gelatina coloreada transmiten la luz entre lmites bastante amplios de
longitudes de onda, y no pueden utilizarse cuando se requiere trabajar con
longitudes de onda ms precisas. Existen filtros de interferencia cuya anchura de
banda es de 20m .
Algunos espectrofotmetros emplean rejillas de difraccin. Con los
adelantos recientes de los mtodos de fabricacin, estos artefactos son
probablemente tan buenos como los prismas en general. La anchura de banda de
los instrumentos que emplean rejillas suele ser del orden de 20m .
Los prismas de vidrio, satisfactorios para la luz visible, no pueden usarse
para la luz ultravioleta, pues el vidrio absorbe casi todas estas radiaciones.
En los instrumentos de mayor costo, suele trabajarse con prismas de
cuarzo, que transmiten con la misma eficacia el rango de los UV y en el visible.
Portamuestras. Los portamuestras deben ser tubos de ensayo redondos
o cubetas de paredes planas. En los colormetros y espectrofotmetros ms
baratos, de filtro, se emplean generalmente tubos redondos, por su menor costo.
Los aparatos ms caros utilizan cubetas que pueden fabricarse con ms precisin
que los tubos, permitiendo resultados ms exactos. Con ultravioletas se necesitan
cubetas de cuarzo.
Control de sensibilidad. A menudo se utiliza una hendidura variable o un
diafragma iris para modificar la cantidad de luz que llega al elemento fotosensible.
Tambin puede ponerse en el circuito del galvanmetro una resistencia variable,
que permite modificar la sensibilidad del instrumento.
Detectores fotosensibles. Fotoceldas de capa interpuesta. La clula
fotosensible de capa interpuesta est formada por una placa metlica sobre la cual
se deposita un semiconductor, como selenio u xido cuproso. Luego, esta capa se
cubre de una pelcula trasparente de otro metal, generalmente plata. Cuando llega
luz a la capa semiconductora, se produce una diferencia de potencial entre la
placa metlica posterior y la pelcula metlica superficial, con polaridad aquella
positiva respecto a esta. El voltaje que produce la clula de capa interpuesta es
proporcional a la cantidad de luz que le llega, y puede medirse directamente con
un galvanmetro o un miliampermetro en un circuito de baja resistencia.
Tubos fotemisores. El tubo fotoemisor comprende una hoja metlica
cubierta de una sustancia que pierde electrones bajo la influencia de la luz, y de
un nodo, que es un alambre situado por delante del ctodo, cerca de su centro.
Los electrodos se encuentran en un recinto envoltura de vidrio de cuarzo, en el
vaco o en atmsfera de gas inerte a baja presin. El nodo posee un potencial
positivo; cuando llega luz a la superficie fotosensible, los electrones liberados son
atrados por el nodo positivo, y aparece una corriente en el circuito. El voltaje que
produce el tubo fotoemisor es proporcional a la cantidad de luz que llega a la
superficie productora de elctrones.
Tubos fotomultiplicadores. Los tubos fotomultiplicadores son
semejantes a los tubos fotoemisores, pero en lugar de un solo elemento
fotoemisor, tienen varios. La luz que llega a la superficie fotosensible primaria
libera electrones, que llegan a una segunda superficie fotosensible, liberando ms
electrones. Pueden lograrse amplificaciones de muchos miles de veces, en
funcin del nmero de elementos fotoemisores en el tubo.
Control de corriente sin luz. En los instrumentos que utilizan tubos
fotoemisores, se encuentra un control de corriente sin luz; es una resistencia
variable que permite corregir el voltaje del tubo cuando no llega ninguna luz al
elemento fotosensible.
Aparatos de medicin. En muchos instrumentos, se utilizan
galvanmetros o miliampermetros de lectura directa, calibrados en unidades de
absorbancia o de transmitancia por 100.
En otros instrumentos, existe un sistema de punto cero, que utiliza un
potencimetro calibrado en absorbancia o en transmitancia por 100; en este caso,
el voltaje del tubo fotnico se equilibra con una FEM patrn. La resistencia que se
necesita para lograr el equilibrio constituye una medicin de la absorbancia de la
solucin que se analiza.