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FACULDADES INTEGRADAS APARCIO DE CARVALHO - FIMCA

CURSO DE FARMCIA
JOELMA ALVES LCIO
ATIVIDADE PEROXIDSICA EM FOLHAS DE FEIJOEIRO
(Phaseolous vulgaris) RIZOBACTERIZADAS EM DEFESA AO
FUNGO Thanatephorus cucumeris
PORTO VELHO/RO
2!
JOELMA ALVES LCIO
ATIVIDADE PEROXIDSICA EM FOLHAS DE FEIJOEIRO (Phaseolous vulgaris )
RIZOBACTERIZADAS EM DEFESA AO FUNGO Thanatephorus cucumeris
Trabalho de Concluso de Curso realizado
como requisito parcial para obteno do grau
de Farmacutico Generalista,apresentado as
Faculdades ntegradas Aparcio Carvalho.
O"#$%&'()" * D.Sc. Clberson de Freitas Fernandes
C)-)"#$%&'()" * D.Sc. Jos Roberto Vieira Junior
PORTO VELHO/RO
2!
JOELMA ALVES LCIO
ATIVIDADE PEROXIDSICA EM FOLHAS DE FEIJOEIRO (Phaseolous vulgaris )
RIZOBACTERIZADOS EM DEFESA AO FUNGO Thanatephorus cucumeris
Trabalho de Concluso de Curso elaborado como requisito parcial
para obteno do grau de Farmacutico Generalista do Curso de Graduao em
Farmcia das Faculdades ntegradas Aparcio Carvalho FMCA.
Data de aprovao: ____/____/_____
Conceito: ________________
B'%+' E,'-#%'()"'*
D.Sc. Clberson de Freitas Fernandes
Orientador
D.Sc. Jos Nilton Medeiros Costa
Examinador 1
D.Sc. Alaerto Luiz Marcolan
Examinador 2
...................................................................
D.Sc. Jos Roberto Vieira Junior
Examinador Suplente
i
A/"'($+#-$%&)0
Agradeo a Deus por toda a fora que Ele me deu durante esses quatro anos
e meio de trabalhos e provas, conquistas e realizaes.
Ao meu Orientador, Professor Clberson Fernandes, que me possibilitou
conhecer um pouco do universo da pesquisa no Brasil, e me ajudou muito na
elaborao desse trabalho.
Agradeo tambm ao meu Co orientador, Jos Roberto, que teve suas
pesquisas sobre Rizobactrias utilizadas como um dos nortes do meu trabalho.
Ao meu colega, futuro Engenheiro Agrnomo, Hildebrando Antunes Junior,
sem o qual esse trabalho no teria sido possvel, j que ele foi um dos responsveis
pela primeira parte do meu trabalho.
A Raize Ferraz, que me ensinou a utilizar (e a zelar) os equipamentos do
Laboratrio de Fitopatologia, e que tambm participou da realizao desse
experimento.
Agradeo ao Sr. Domingos Svio, pela ajuda e companhia durante a
realizao desse trabalho, e tambm pelas histrias que me foram contadas de uma
Embrapa que h muito existe no estado de Rondnia, da qual ele um dos
pioneiros.
Agradeo a Embrapa Rondnia, pela possibilidade de realizar um trabalho de
pesquisa em suas dependncias e a todos os seus funcionrios, que direta ou
indiretamente contriburam com a realizao do presente trabalho.
Ao meu noivo, Tiago Francisco, que esteve presente em todos os momentos
da realizao do meu Curso, me apoiando e ajudando na realizao desse sonho.
Aos meus pais, Juarez Antnio Lcio e Silvani Alves Lcio, e minha irm,
Priscila, pela ajuda e incentivo durante todos os anos da minha vida.
Agradeo tambm ao Dr. Francisco Padilha e Sra. Rosenilda Padilha, por
terem me acolhido to carinhosamente em sua famlia, e tambm pelo apoio e
incentivo durante todos esses anos.
Agradeo a minha amiga Mayara Frana, que comigo pesquisou e debateu os
mecanismos e induo de resistncia, alm de outros assuntos, menos importantes,
mas nem por isso menos interessantes.
ii
A minha amiga Denize Cristina, que durante todo esse semestre, atravs de
seus e-mails mais que carinhosos, transmitiu a fora e alegria que eu precisava para
concluir meu Curso de Farmcia.
iii
SUMRIO
RESUMO....................................................................................................................................v
ABSTRACT...............................................................................................................................vi
LISTA DE FIGURAS...............................................................................................................vii
LISTA DE TABELAS.............................................................................................................viii
ABREVIATURAS E DEFINIES.........................................................................................ix
1. INTRODUO......................................................................................................................1
1.1 IMPORTNCIA DA CULTURA DO FEIJOEIRO..........................................................1
1.2 MECANISMO DE DEFESAS DAS PLANTAS..............................................................2
1.2.1 Re!"#$ %i!e&e'i#iv$ (%R)....................................................................................*
1.2.2 Re!"#$ Si#+,i-$ A./0i&i.$ (SAR)........................................................................1
1.* INDUTORES DE RESPOSTA DE DEFESA...................................................................2
1.*.1. I'.0#"&e A3i4#i-"...................................................................................................5
1.*.2 I'.0#"&e Bi4#i-"......................................................................................................5
1.*.2.1 Ri6"3$-#7&i$ -"," I'.0#"&e .e Rei#+'-i$.........................................................8
1.1 PROTE9NAS RELACIONADAS : PATOG;NESE (PR < PROTE9NAS).....................8
1.1.1 C=$i>i-$?@"..............................................................................................................A
1.1.2. I,!"&#B'-i$ .$ Pe&"xi.$e '" Me-$'i," .e De>e$...........................................A
1.1.*. Me-$'i," .e $?@" .$ Pe&"xi.$e.........................................................................1C
2. OBJETIVOS.........................................................................................................................11
2.1 OBJETIVO GERAL.......................................................................................................11
2.2 OBJETIVO ESPEC9FICO..............................................................................................11
*. MATERIAIS E MDTODOS.................................................................................................12
*.1. MATERIAIS..................................................................................................................12
*.1.1 Se,e'#e..................................................................................................................12
*.1.2 Ri6"3$-#7&i$............................................................................................................12
*.1.* Re$Ee'#e.................................................................................................................12
*.2 MDTODOS.....................................................................................................................12
*.2.1. O3#e'?@" e T&$#$,e'#" .$ Ri6"3$-#7&i$..............................................................12
*.2.2. Ri6"3$-#e&i6$?@" .$ P=$'#$..................................................................................1*
*.2.*. P=$'#i"F I'"-0=$?@" ." F0'E" Thanatephorus cucumeris e C"=e#$ .$ P=$'#$......11
*.2.1. P&e!$&$?@" ." Ex#&$#" T"#$=....................................................................................12
*.2.2. D"$Ee, .e P&"#eG'$.............................................................................................15
*.2.5. A#ivi.$.e Pe&"xi.Hi-$............................................................................................18
*.2.5. De=i'e$,e'#" Ex!e&i,e'#$=....................................................................................18
1. RESULTADOS E DISCUSSO...........................................................................................1A
1.1 DETERMINAO DOS TEORES DE PROTE9NAS..................................................1A
1.2 DETERMINAO DA ATIVIDADE PEROIIDJSICA.............................................22
2. CONCLUSES E PERSPECTIVAS FUTURAS................................................................25
5. REFER;NCIAS BIBLIOGRJFICAS..................................................................................28
iv
RESUMO
Sendo um dos principais componentes da dieta alimentar brasileira, o feijo
comum tambm uma importante fonte de protena vegetal. De grande importncia
econmica e social no Brasil, o feijo representa um dos granferos mais produzido,
segundo a Companhia Nacional de Abastecimento (Conab). Na Regio Norte,
Rondnia foi o segundo maior produtor de feijo em 2007, de acordo com dados do
BGE. Porm, em Rondnia a cultura do feijoeiro passa por problemas adaptativos,
entre eles a alta susceptibilidade das cultivares murcha de teia miclia,
popularmente conhecida como "mela, causada pelo fungo Thanatephorus
cucumeris. As plantas defendem-se do ataque de patgenos utilizando defesas
constitutivas ou induzidas, como por exemplo as mediadas por protenas, como a
peroxidase, que uma importante enzima das plantas e est envolvida em diversas
reaes, tais como ligaes de polissacardeos, ligaes de monmeros,
lignificao, cicatrizao de ferimentos, oxidao de fenis, defesa de patgenos,
regulao da elongao de clulas e outras. Com o objetivo de avaliar o potencial de
induo de resistncia ao fungo Thanatephorus cucumeris em plantas de feijoeiro
foram usadas 13 solues de rizobactrias em sementes e a seguir estas foram
semeadas. As plntulas de feijoeiro foram ento expostas ao fungo Thanatephorus
cucumeris e depois de 25 dias coletadas e armazenadas para a realizao da
anlise dos nveis de peroxidase dos 13 tratamentos, para determinar qual/quais das
13 solues foi capaz de induzir maior resistncia contra Thanatephorus cucumeris.
Em adio, foram determinados os nveis de protenas dos diferentes tratamentos
avaliados. Os resultados obtidos mostraram os tratamentos T39, T78 e T26 com
maiores atividades peroxidsica, 183,98 UA/mgP, 145,12 UA/mgP e 135,55 UA/mgP,
respectivamente, enquanto que as plntulas controle apresentaram atividade
peroxidsica de 61,76 UA/mgP. Os resultados obtidos sugerem fortemente que esta
enzima desempenhe um papel importante na defesa do feijoeiro contra o ataque de
fitopatgenos, podendo as respectivas rizobactrias testadas atuarem como
indutores deste mecanismo de resistncia.
P'1'2"'0-C3'2$* Rizobactrias, induo de resistncia, feijoeiro, peroxidase.
v
ABSTRACT
One of the main component of the Brazilian diet, the bean is also an important
source of vegetable protein. With a great economic and social importance in Brazil,
bean represents one of the most crop grain, according to National Company of
Supply (Conab). n the North Region, Rondnia was the second biggest producer of
bean in the year of 2007, according to BGE. Although, in Rondnia the bean crop
suffers with adaptive problems as well as high susceptibility of cultivars to wilt web
micelle, popularly known as "blight" caused by the fungus Thanatephorus cucumeris.
Plants defend themselves against attack by pathogens using constitutive or induced
defenses, such as those mediated by proteins, such as peroxidase, that is an
important plant enzyme and is involved in many reactions, such as bonds of
polysaccharides, links monomers, lignification, wound healing, oxidation of phenolics,
defense of pathogens, regulation of cell elongation and others. Aiming to assess the
inducing resistance potential to the fungus Thanatephorus cucumeris in bean plants
were used 13 solutions of rhizobacteria on seeds and then they were sown. The
bean seedlings were then exposed to the fungus Thanatephorus cucumeris, and
after 25 days, were collected and stored for the analysis of peroxidase levels in the
13 treatments, to determine what / which of the 13 solutions was able to induce
greater resistance against Thanatephorus cucumeris. n addition, protein levels in the
different treatments were determined. The results showed that treatments T39, T78
and T26 presented higher peroxidase activity, 183.98 UA/mgP, 145.12 UA/mgP and
135.55 UA/mgP, respectively, while the control seedlings showed peroxidase activity
of 61.76 UA/mgP. The results tightly suggest that this enzyme plays an important role
in bean defense mechanisms against the attack of phytopathogens, and the
rhizobacteria tested here can act as inducers of this resistance mechanism.
4$56)"(0* Rhizobacteria, nduction of resistance, bean, peroxidase.
vi
LISTA DE FIGURAS
FIGURA Pgina
1 Rotas de sinalizao e ativao dos mecanismos de defesa de
plantas.
5
2 Etapas utilizadas para obteno dos isolados de rizobactrias de
filoplano de feijoeiro.
14
3. A Plantio do feijo, j inoculado com o fungo Thanatephorus
cucumeris em casa de Vegetao da Embrapa Rondnia.
15
3. B Detalhe das plntulas de feijo inoculadas com o fungo
Thanatephorus cucumeris.
15
4 Etapas utilizadas para obteno dos extratos totais de folhas de
feijo comum (Phaseolus vulgaris). Adaptado de Fernandes
(2004).
16
5 Determinao dos teores de protenas em extratos totais de
folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e
inoculadas com Thanatephorus cucumeris.
18
6 Grupo 1: Determinao dos teores de protenas em extratos
totais de folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris)
rizobacterizadas e inoculadas com Thanatephorus cucumeris.
19
7 Grupo 2: Determinao dos teores de protenas em extratos
totais de folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris)
rizobacterizadas e inoculadas com Thanatephorus cucumeris.
20
8 Grupo 3: Determinao dos teores de protenas em extratos
totais de folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris)
rizobacterizadas e inoculadas com Thanatephorus cucumeris.
21
9 Determinao da atividade peroxidsica em extratos totais de
folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e
inoculadas com Thanatephorus cucumeris.
23
vii
LISTA DE TABELAS
TABELA Pgina
1 Famlias de Protenas Relacionadas a Patognese (PR-
Protenas).
9
2 Determinao dos teores de protenas dos extratos totais de
feijoeiro comum rizobacterizados e inoculados o fungo
Thanatephorus cucumeris.
22
3 Atividade peroxidsica dos extratos totais de feijoeiro comum
rizobacterizados e inoculados o fungo Thanatephorus cucumeris
divididos em grupos,de acordo com os nveis de ao (%).
23
4 Determinao da atividade peroxidsica dos extratos totais de
feijoeiro comum rizobacterizados e inoculados o fungo
Thanatephorus cucumeris.
24
ABREVIATURAS E DEFINI78ES
BSA Albumina Srica Bovina
cv. Cultivar
viii
hai Horas aps a inoculao
HR Resposta Hipersensitiva ou Reao de Hipersensibilidade
ISR Resistncia Sistmica Induida
!"# !ero$idase
!R!s !rote%nas Relacionadas & !ato'nese
SAR Resistncia Sistmica Ad(uirida
)A! )nidade de Atividade !ero$id*sica
ix
!9 INTRODU7:O
1.1 MPORTNCA DA CULTURA DO FEJOERO
O feijo um alimento muito antigo, sendo cultivado no antigo Egito e na
Grcia. Tambm existem aluses ao seu cultivo na dade do Bronze, na Sua, e
entre os hebraicos, cerca de 1.000 a.C. Em algumas regies j foi cultuado com
smbolo da vida, e foi provavelmente disseminado pelo mundo, segundo
especialistas, em decorrncia das guerras, j que este era um alimento essencial
para os guerreiros. Para as demais regies do planeta foi levado pelos grandes
exploradores em suas expedies (EMBRAPA ARROZ E FEJO, 2010).
A produo mundial de feijo vem crescendo progressivamente desde os
anos 60. No incio da dcada de 80 alcanou cerca de 15 milhes de toneladas e
desde o seu final passou a oscilar em torno de 16 milhes de toneladas (FUSCALD
& PRADO et al., 2005).
O Brasil o segundo produtor mundial de feijoeiros do gnero Phaseolus e o
primeiro na espcie Phaseolus vulgaris. A importncia dessa produo deve-se a
que o feijo, alm de se constituir em um dos alimentos bsicos da populao
brasileira, com consumo atual mdio de cerca de 16 kg/hab/ano, um dos principais
produtos fornecedores de protena na dieta alimentar da parcela menos favorecida
da populao brasileira (EMBRAPA ARROZ E FEJO, 2010).
O feijoeiro comum afetado por inmeras doenas, que alm de diminuir a
produtividade da cultura, depreciam a qualidade do produto. Estas doenas podem
ser de origem fngica, bacteriana, virtica assim como as incitadas por nematides.
Entre as principais doenas fngicas encontra-se a mancha angular, a antracnose, a
ferrugem, o mofo branco, as podrides radiculares de Fusarium e Rhizoctonia, a
murcha de teia miclia, a podrido do colo e, mais recentemente o carvo e a sarna
(EMBRAPA ARROZ E FEJO, 2010).
Em Rondnia, estado em que prevalece o modelo de agricultura familiar, o
cultivo de feijo se d dessa forma e de grande importncia social e econmica,
juntamente com as culturas de caf, arroz e milho para os que praticam esse modelo
de agricultura (EMBRAPA RONDNA, 2005). A rea plantada com feijo, em
1
Rondnia, no ano de 2009, foi de 66 681 ha, com uma produo de 46 580 t e
portanto, produtividade mdia de 699 kg/ha, que baixa, comparada a mdia
nacional de 849 kg/ha (BGE, 2010).
Entre as causas da baixa produtividade do estado pode-se citar a alta
susceptibilidade da cultura murcha de teia miclia, popularmente conhecida como
"mela", um problema adaptativo que as plantas do feijoeiro costumam enfrentar nos
trpicos midos causada pelo fungo Thanatephorus cucumeris (EMBRAPA
RONDNA, 2005; COSTA et al., 2005)
A murcha de teia miclia afeta toda parte area da planta. nicialmente
aparecem pequenas manchas aquosas nas folhas da planta, arredondadas, de cor
mais clara que a parte sadia, rodeadas de bordas de cor castanho-avermelhada
(ZAUMEYER & THOMAS, 1957; LUZ, 1978; CARDOSO & LUZ, 1981 apud
CARDOSO, et al., 1996). Quando a infeco progride, ocorre uma intensa produo
de miclio de cor castanho-clara em ambas as faces da folha, formando uma teia
miclia que, em condies climticas favorveis atinge as folhas adjacentes da
prpria planta, interligando toda a parte area, assim como as folhas de plantas
vizinhas (ZAUMEYER & THOMAS, 1957; LUZ, 1978; CARDOSO & LUZ, 1981 apud
CARDOSO, et al., 1996).
1.2 MECANSMO DE DEFESAS DAS PLANTAS
A exposio das plantas a fatores do ambiente, como variaes em
temperatura, umidade e radiao, e a agentes biolgicos, como fungos, bactrias,
vrus, nematides, insetos e herbvoros, faz com que elas necessitem reagir contra
esses estresses, que so responsveis por grandes perdas da agricultura, por
causarem injrias e doenas, alm de se alimentarem dos tecidos de plantas
(FRANCO et al., 1999; RZZARD et al., 2003).
As plantas, alm de no possurem um sistema imunolgico para lutar contra
essas adversidades, tambm so seres imveis, o que torna a batalha contra
patgenos e condies adversas ainda mais difcil. Esses fatos, juntos, fizeram com
que as plantas aperfeioassem em suas clulas tanto defesas pr-formadas quanto
induzidas (HAMMOND-KOSACK & JONES, 2000).
2
Geralmente, plantas se defendem contra patgenos de duas formas: defesas
estruturais que atuam como barreiras fsicas que inibem a ao e a propagao do
patgeno na planta e reaes bioqumicas que ocorrem em clulas e tecidos da
planta e que produzem substncias que so txicas para o patgeno ou que criam
condies que inibem o crescimento e multiplicao do patgeno na planta
(AGROS et al., 2005).
A defesa pr-formada o principal mecanismo no caso de resistncia no
especfica, em que as plantas sintetizam peptdeos, protenas e metablitos
secundrios, que restringem a infeco por patgenos (HEATH, 2000 apud
RZZARD et al., 2003 ).
Uma das principais revelaes das pesquisas sobre defesa vegetal que a
resistncia a patgenos usualmente complexa e tem como base a ao
combinada de diversos fatores e no apenas um componente (SOARES et al.,
2007).
!929! R$0;)0&' H#;$"0$%0#&#2' (HR)
A resposta hipersensitiva (HR) ou reao de hipersensibilidade em plantas
um mecanismo de defesa contra fitopatgenos, sendo considerada como um dos
principais componentes da resposta de defesa da planta (LAMB e DXON, 1997).
Caracteriza-se pelo rpido e localizado colapso do tecido vegetal ao redor do stio de
infeco, compreendendo a formao de leses em volta do local da infeco
ocasionadas pela morte celular programada. So estas leses que impossibilitam a
propagao do patgeno para outros tecidos da planta, parando, assim, a
manifestao da doena (GOODMAN E NOVACKY, 1994; PASCHOLAT E LETE,
1994).
Algumas mudanas nas membranas celulares desempenham um papel
importante na resposta hipersensitiva. Os fatores mais importantes associados a
defesa contra patgenos atravs das membranas celulares so: a liberao de
molculas importantes na transduo de sinais dentro e ao redor da clula, e
possivelmente sistemicamente atravs da planta; a liberao e o acmulo de
espcies reativas de oxignio; e a oxidao de compostos fenlicos decorrentes da
descompartimentalizao da membrana celular (AGROS, 2005).
*
Outro fator que desempenha um papel de destaque na HR a induo da
produo de protenas relacionadas a patognese, tambm chamadas de PR -
Protenas, que so um grupo de protenas com estruturas variadas, que so txicas,
particularmente, contra patgenos fngicos. Elas esto amplamente distribudas nas
plantas, embora em baixos nveis, mas so produzidas em maiores concentraes
quando h ataque de patgenos ou estresse. Dentre essas protenas se destacam
as peroxidases, quitinases e -1,3-glucanases (AGROS, 2005; FERNANDES, 2004;
FERNANDES et al., 2006).
!9292 R$0;)0&' S#0&<-#+' A(=>#"#(' (SAR)
A maioria das defesas bioqumicas das plantas esto inativadas at que elas
sejam mobilizadas por algum sinal transmitido por um ataque patognico. A
resistncia adquirida aparece primeiramente prxima ao ponto de necrose causado
pela resposta hipersensitiva a infeco, e chamada de resistncia local adquirida.
Subsequentemente, a resistncia se propaga sistemicamente por toda a planta,
mesmo nas regies que no foram expostas ao patgeno, sendo assim denominada
resposta sistmica adquirida (SAR) (AGROS, 2005).
A resposta sistmica adquirida pode ser ativada por fungos, bactrias e vrus
(fatores biticos) e por agentes qumicos (fatores abiticos) e age inespecificamente em
todas as partes da planta reduzindo a severidade da doena causada por todas as
classes de patgenos, incluindo as virulentas. (AGROS, 2005; FERNANDES, 2004).
O incio do processo de SAR se d incio a partir do momento de interao planta
- patgeno ou do tratamento com fatores abiticos, quando ocorrem alteraes no
metabolismo da planta e esta envia sinais para outras partes da mesma, ento a planta,
em resposta a esses sinais, produz agentes de defesa, incluindo as PR - Protenas,
alm da formao de barreiras estruturais, como a lignina. (DEVERALL E DANN, 1995;
ROMERO, 2010).
1
FIGURA ! - Rotas de sinalizao e ativao dos mecanismos de defesa de plantas.
Figura adaptada de Buchanan et al., 2000.
1.3 NDUTORES DE RESPOSTA DE DEFESA
A induo de resistncia consiste no aumento do nvel de resistncia atravs
do uso de agentes externos (indutores), sem qualquer alterao no genoma da
planta (STADNK, 2000 apud BONALDO et al., 2005). Ocorre de maneira no
especfica, por meio da ativao de genes que codificam diversos tipos de respostas
de defesa, como por exemplo, produo de PR- Protenas e acmulo de lignina em
tecidos prximos ao local de infeco (BONALDO et al., 2005).
A induo de resistncia pode ocorrer em condies controladas e tambm
em campo, e apresenta vantagens como: efetividade contra vrus, bactrias, fungos
2
e nematides; estabilidade devido a ao de vrios mecanismos de resistncia;
carter sistmico, persistente e natural da proteo (PASCHOLAT, 2002 apud
BONALDO et al., 2005) Como desvantagem temos o fato que a resistncia parcial,
incompleta e pode requerer reativaes temporrias (SLVA, RESENDE 2001 apud
BONALDO et al., 2005)
Agentes indutores so compostos ou fatores capazes de ativar mecanismos
de defesa da planta e elicitores so as molculas presentes nesses indutores
diretamente responsveis por essa ativao podendo ser classificados de acordo
com a sua origem em abiticos ou biticos (EBEL, 1986; HAHN, 1996; SMTH, 1996
apud BONALDO et al., 2005).
!9?9!9 I%(>&)"$0 A@#A&#+)0
A SAR pode ser aumentada pelo uso de indutores abiticos, os quais ativam o
sistema de defesa das plantas, envolvendo vrias etapas e rotas, potencializadas
aps a interao com o patgeno. Dentre os indutores mais utilizados, destacam-se
o cido saliclico, Acibenzolar-S-methil (ASM), cido -aminobutrico (BABA) e
quitosana (GORLACH et al., 1996; FERNANDES, 1998; BENHAMOU et al., 1998;
COLE, 1999; JAKAB et al., 2001 apud RODRGUES et al., 2006), porm, apenas o
ASM liberado para uso comercial (RESENDE et al., 2000 apud RODRGUES et
al., 2006). Acredita-se que o ASM seja o primeiro representante de uma nova
gerao de protetores de plantas eficientes na induo de resistncia (LYON &
NEWTON, 1997 apud SLVA, 2008).
!9?92 I%(>&)"$0 B#A&#+)0
ndutores biticos so organismos vivos ou partes destes capazes de ativar
respostas de defesa localizadas ou sistmicas em plantas. Bactrias, fungos, vrus,
nematides e insetos so alguns exemplos (DUKE et al., 1987 apud D PERO et al.,
2005).
As plantas tm o potencial de reagir a microorganismos invasores, e
desencadear respostas de defesa. sso ocorre quando receptores vegetais,
localizados geralmente na membrana plasmtica das clulas, interagem com
molculas presentes na parede celular dos microorganismos ou por substncias
5
secretadas por esses durante o seu desenvolvimento. Depois do reconhecimento
inicial do indutor pela planta, uma cascata de eventos relacionados a transduo de
sinais intracelular desencadeada, juntamente com a posterior ativao dos
mecanismos de defesa (MTRAUX, 2001 apud D PERO et al., 2005).
Sendo assim, a induo de resistncia pode ser obtida com o uso de
patgenos ativos ou inativos, raas avirulentas de microorganismos patognicos,
no - patgenos e com metablitos desses microorganismos que atuam como
elicitores (D PERO et al., 2005).
1.3.2.1 Rizobactrias como ndutores de Resistncia
Rizobactrias (bactrias colonizadoras de razes) tem se mostrados capazes
de induzir resistncia em plantas contra algumas doenas. Essas bactrias esto
presentes em grandes quantidades na superfcie das razes, local onde ocorre a
liberao de exsudatos vegetais ricos em nutrientes. Algumas rizobactrias, alm de
atuar no processo de induo de resistncia, podem atuar como promotoras de
crescimento de plantas (D PERO et al., 2005).
As rizobactrias induzem resistncia em plantas contra fungos, bactrias,
vrus, nematides e insetos (MAURHOFER et al., 1998; SKORA, 1998 apud
HERNNDEZ - RODRGUEZ et al., 2004).
1.4 PROTENAS RELACONADAS PATOGNESE (PR - PROTENAS)
O termo PR - Protenas foi primeiramente utilizado para descrever
numerosas protenas extracelulares que se acumulavam em plantas de fumo (Nicotiana
tabacum) infectadas com o vrus do mosaico do fumo (TMV) (GANNAZZ et al., 1970;
VAN LOON e VAN KAMMEN, 1970).
Hoje se tem conhecimento que PR - Protenas so produzidas por muitas plantas
como resposta a infeco por patgenos e que participam ativamente no fenmeno de
resistncia induzida, tanto quando a induo por fatores biticos como por abiticos.
(STCHER et al., 1997; BOWLES, 1990; FERNANDES, 2004; SHAH et al., 1997 apud
ROMERO, 2010).
PR - Protenas esto localizadas intra- e extracelularmente, se acumulam em
tecidos vegetais intactos ou em cultura de clulas aps o tratamento com elicitores ou
8
ataque de patgenos. Esse acmulo pode ocorrer em locais de infeco ou em stios
distantes destes, em casos de induo de resistncia sistmica. (BOWLES, 1990;
STCHER et al., 1997).
Muitas PR - Protenas possuem tanto atividade antifngica como
atividade antibacteriana in vitro, como por exemplo quitinases, glucanases e
protenas que se ligam quitina (RAUSCHER et al., 1999; ZAREE et al., 2002). A
degradao de polissacardeos estruturais da parede celular de fungos ou
alteraes na sua arquitetura, promovidas por estas enzimas, podem prejudicar o
desenvolvimento do microrganismo, impedindo seu crescimento (ZAREE et al.,
2002).
!9B9! C1'00#C#+'DE)
O fato das PR - Protenas apresentarem algumas caractersticas fsico-
qumicas e imunolgicas comuns permitiu que elas sejam agrupadas em diferentes
grupos, de acordo com a similaridade entre elas. Entretanto, estas PR - Protenas
so encontradas nas plantas como isoenzimas ou isoformas, apresentando, entre si,
certas caractersticas fsico-qumicas diferentes, particularmente em relao ao
carter aninico ou catinico (MELLON, 1991). Atualmente, as PR - Protenas esto
classificadas em 17 grupos, variando de PR-1 at PR-17, de acordo com as
caractersticas de cada protena, conforme na Tabela 1.
!9B929 I-;)"&F%+#' (' P$"),#('0$ %)0 M$+'%#0-)0 ($ D$C$0'
A peroxidase uma importante enzima das plantas e est envolvida em
diversas reaes, ligaes de polissacardeos, oxidao do cido indol-3-actico,
ligaes de monmeros, lignificao, cicatrizao de ferimentos, oxidao de fenis,
defesa de patgenos, regulao da elongao de clulas e outras (GASPAR et al.,
1982; KAO, 2003 apud CAMPOS, 2004).
A
T'@$1' ! G Famlias de Protenas Relacionadas a Patognese (PR-Protenas)
a
F'-H1#' M$-@") P");"#$('($0
PR-1 Fumo PR-1a Antifngico, anti-oomicetos
PR-2 Fumo PR-2 -1,3-glucanase
PR-3 Fumo P, Q Quitinase
PR-4 Fumo R Quitinase
PR-5 Fumo S Thaumatina-like
PR-6 Tomate nibidor nibidor de protease
PR-7 Tomate P69 Endoproteinase
PR-8 Quitinase pepino Quitinase
PR-9 Peroxidase formadora de lignina em
fumo
Peroxidase
PR-10 Salsinha PR-1 Ribonuclease-like
PR-11 Quitinase classe V fumo Quitinase
PR-12 Defensinas Antifngico
PR-13 Tioninas Antifngico
PR-14 LTP4 cevada Protena transferncia de
lipdos
PR-15 OxOa cevada Oxalato oxidase
PR-16 OxOLP cevada Oxalato oxidase-like
PR-17 PRp27 fumo Desconhecida
K A.$!#$.$ .e Fe&'$'.e (2CC1).

!9B9?9 M$+'%#0-) ($ 'DE) (' P$"),#('0$
L
A peroxidase catalisa a oxidao e a eventual polimerizao do lcool
hidroxicinmico em presena de perxido de hidrognio, originando lignina, que
juntamente com a celulose e outros polissacardeos que ocorrem na parede celular
das plantas superiores, funciona como barreira fsica na penetrao fngica (VANCE
et al., 1980 apud CAVALCANT et al., 2005). A lignificao pode impedir o
desenvolvimentos dos fungos nos tecidos vegetais estabelecendo uma barreira
mecnica ao avano e ao crescimento do patgeno; modificando a parede celular,
tornando-a mais resistente ao ataque de enzimas hidrolticas; e aumentando a
resistncia das paredes difuso de toxinas produzidas pelos patgenos, impedindo
que os nutrientes do hospedeiro sejam utilizados pelo invasor (CAVALCANT et al.,
2005).
Danos na membrana plasmtica da clula, causados por ao de enzimas
proteolticas ou ruptura mecnica, ativam peroxidases, que so protenas de
membrana (REMMANN et al., 1992 apud CAVALCANT et al., 2005). As
peroxidases participam da sntese do hormnio vegetal etileno (SGHE et al., 1993
apud CAVALCANT et al., 2005) e da oxidao de compostos fenlicos, que se
acumulam em resposta infeco (FRY, 1986 apud CAVALCANT et al., 2005).
29 OBJETIVOS
1C
2.1 OBJETVO GERAL
dentificar qual ou quais dos tratamentos de rizobacterizao nas sementes
do feijo comum conseguiu/conseguiram uma melhor induo de resistncia contra
o fungo Thanatephorus cucumeris.
2.2 OBJETVO ESPECFCO
Analisar a atividade peroxidsica atravs da sua concentrao em
cultivares de feijo comum (Phaseolous vulgaris) rizobacterizados.
Definir se algum dos tratamentos de rizobacterizao nas sementes de
feijo conseguiu induzir resistncia contra o fungo Thanatephorus cucumeris.
Classificar o melhor/os melhores tratamento(s) para estudos
posteriores que permitiro a identificao da rizobactria responsvel pela induo
de resistncia nas plantas de feijoeiro comum contra o fungo Thanatephorus
cucumeris.
?9 MATERIAIS E MITODOS
11
3.1. MATERAS
?9!9! S$-$%&$0
As sementes utilizadas foram do tipo Carioca Precoce, fornecidas pelo
Laboratrio de Sementes da Embrapa Rondnia.
?9!92 R#J)@'+&K"#'0
As rizobactrias foram provenientes do rizoplano do Campo Experimental da
Embrapa Rondnia, localizado em Porto Velho, e foram mantidas no Laboratrio de
Fitopatologia.
?9!9? R$'/$%&$0
Os reagentes utilizados no presente trabalho, tais como, acetato de sdio,
guaiacol, perxido de hidrognio, foram de grau analticos e adquiridos pela
Embrapa Rondnia.
3.2 MTODOS
?929!9 O@&$%DE) $ T"'&'-$%&) ('0 R#J)@'+&K"#'0
Para obteno das rizobactrias foram extrados 300g de solo do rizoplano do
Campo Experimental da Embrapa Rondnia, que foram diludos em 3000 mL de
gua (proporo de 1:10 p/v). Este preparado (Soluo de Rizobactrias 1) foi
mantido em mesa agitadora por 2h 30min, e em seguida feita uma diluio seriada
de 1,0 mL dessa soluo em 10 mL de soluo salina (Soluo de Rizobactrias 2),
que depois foi diluda novamente na mesma proporo (1:10), obtendo-se a Soluo
de Rizobactrias 3.
Essas duas solues (2 e 3) foram semeadas em placas de Petri contendo
meio de cultura MB1, e mantidas em estufa incubadora tipo B.O.D. por 72 h a 27 C.
12
Aps esse perodo, as colnias que se formaram individualizadas e contrastantes em
sua morfologia foram transferidas para tubos de ensaio numerados, com meio MB1
inclinado (Figura 2).
Para os ensaios, os isolados foram novamente transferidos para placas de Petri
com meio MB1 e mantidos em estufa incubadora tipo B.O.D. por 72 h a 27 C. Depois
desse perodo de incubao, foi preparada uma soluo suspensa das colnias que se
desenvolveram nas placas de Petri utilizando gua e ala de Drigalsky para misturar a
soluo. Essas solues foram ento ajustadas para absorbncia a 540nm (A
540
).
Ao total foram obtidos 150 isolados diferentes, que em estudos prvios utilizando
cultivares de feijo Carioca Precoce e analisando a severidade da doena causada por
Thanatephorus cucumeris de acordo com a escala diagramtica de severidade
foram escolhidos os 13 melhores isolados, que foram testados nesse experimento.

?92929 R#J)@'+&$"#J'DE) ('0 P1'%&'0
Os tratamentos foram testados utilizando 5 repeties para cada, sendo que
para cada repetio foram utilizadas 3 sementes de feijo Carioca Precoce,
somando um total de 15 sementes por tratamento.
No total foram avaliados 13 grupos com 15 sementes cada, os quais foram
colocados em copos plsticos com capacidade para 300 mL, e a seguir adicionado
50 mL das solues de rizobactrias. Os copos, devidamente identificados com o
nmero de seu tratamento (26, 39, 43, 53, 54, 60, 71, 78, 90, 96, 103, 115, 146),
foram ento transferidos, juntamente com mais um copo descartvel que possua 15
sementes e 50 mL de gua (Controle), para um agitador de plataforma, no qual
permaneceram por 24 h .
1*
FIGURA 2 G Etapas utilizadas para obteno dos isolados de rizobactrias de
filoplano de feijoeiro.
?929?9 P1'%&#)L I%)+>1'DE) () F>%/) Thanatephorus cucumeris $ C)1$&' ('0
P1'%&'0
O plantio das sementes foi realizado em copos plsticos com capacidade de
300 mL contendo solo previamente autoclavado. Foram feitas 5 repeties para
cada tratamento e para o controle, e em cada um desses copos foram plantadas 3
sementes de feijo Carioca Precoce previamente rizobacterizadas.
Esse experimento foi conduzido em Casa de Vegetao da Embrapa
Rondnia. A inoculao do fungo Thanatephorus cucumeris se deu
espontaneamente devido s condies de temperatura e umidade da regio.
Depois de 25 dias as plantas foram coletadas e estocadas em freezer a -20C
para anlises enzimticas posteriores.
? / S)1) () R#J);1'%)
+
? -1 H2
A/#&'()" ;)" 23 ?
-#%
S)1>DE) ($ R#J)@'+&K"#'0 !
S)1>DE) ($ R#J)@'+&K"#'0 2
S)1>DE) ($ R#J)@'+&K"#'0 ?
D#1>#DE) !*! $- S)1>DE)
S'1#%'
D#1>#DE) !*! $- S)1>DE)
S'1#%'
11

FIGURA ? - Plantio do feijo, j inoculado com o fungo Thanatephorus cucumeris em
casa de Vegetao da Embrapa Rondnia (A). Detalhe das plntulas de
feijo inoculadas com o fungo Thanatephorus cucumeris (B).
?929B9 P"$;'"'DE) () E,&"'&) T)&'1
A representao esquemtica das etapas de preparo do extrato total
apresentada na Figura 3. Para tanto, folhas das plantas dos diferentes tratamentos
avaliados neste estudo foram maceradas com tampo acetato de sdio 0,05 M, pH
5,2, na proporo de 1:5 (p/v), por 10 minutos, em gral, sob banho de gelo. A
suspenso resultante foi filtrada em pano de trama fina e centrifugada a 13.000 x g ,
4C, 15 minutos. Aps centrifugao o sobrenadante foi armazenado em tubos de
ensaio devidamente identificados e armazenados em freezer a -20C para
posteriores anlises enzimticas e determinao dos teores de protenas.
12
A
B
+ 5 mL tampo acetato de sdio 0,05 M, pH 5,2
+ Macerao 4
o
C, 10 min.
+ Filtrao em pano de trama fina
+ Centrifugao (13000 x g, 4
o
C, 15 min)


A&,$6e'$." e,
>&ee6e& $ <2C MC
FIGURA B G Etapas utilizadas para obteno dos extratos totais de folhas de feijo
comum (Phaseolus vulgaris). Adaptado de Fernandes (2004).
?929M9 D)0'/$- ($ P")&$H%'0
A dosagem das protenas solveis foi avaliada de acordo com a metodologia
descrita por Bradford (1976). A mistura reacional consistiu de alquotas de 5 L dos
extratos totais armazenados e adicionados a eles 20 L do reagente de Bradford. A
reao foi conduzida em placas de Elisa, as quais foram incubadas a temperatura
ambiente por 10 minutos e, em seguida, submetidas leitura da absorbncia A
595 nm
em Leitor de Elisa.
15
F)13' (! /)
Resduo Sobrenadante
+#,RA," ,",A-
Albumina srica bovina foi utilizada em doses crescentes para a obteno da
curva padro e definio do fator de correo necessrio para determinar o teor de
protenas solveis presentes em cada extrato. O ensaio foi realizado em triplicata.
?929N9 A&#2#('($ P$"),#(O0#+'
A atividade da enzima peroxidase foi realizada de acordo com a metodologia
descrita por Urbanek e colaboradores (1991). Como substratos da reao foram
utilizados o guaiacol, doador de prtons, e o perxido de hidrognio, receptor. A
peroxidase cataliza a reao, produzindo um composto colorido, 3,3'-dimetoxi-4-4'-
bifenolquinona (DOERGE et al., 1997), que medido por espectrofotometria na
regio do visvel. Alquotas de 0,02 mL do extrato das folhas foram adicionadas a
uma soluo contendo 1,98 mL de tampo acetato de sdio 0,05 M, pH 5,2, 1,0 mL
de perxido de hidrognio 0,06 M e 1,0 mL de guaiacol 0,02 M, perfazendo o volume
total de 4,0 mL. A mistura foi deixada em banho-maria a 30 C, durante 10 minutos.
Em seguida, a leitura da absorbncia do composto colorido formado na reao foi
medida a 480 nm em Espectrofotmetro FEMTO 700 Plus. A variao de uma
unidade de absorbncia por minuto foi assumida como sendo 1,0 unidade de
atividade peroxidsica (1 UAP).
?929N9 D$1#%$'-$%&) E,;$"#-$%&'1
O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com 3
repeties. A comparao entre as mdias foi feita atravs do desvio padro da
mdia, onde cada mdia foi resultado de determinaes em triplicata para cada um
dos parmetros estudados. O programa Excel foi utilizado para tabulao e anlise
dos dados.
18
B9 RESULTADOS E DISCUSS:O
No presente estudo foram avaliadas 13 solues de rizobactrias, as quais
foram previamente selecionadas dentre 150 rizobactrias em ensaio de casa de
vegetao quanto ao potencial como indutores de resistncia no feijoeiro contra ao
ataque do fungo T. cucumeris.
Neste estudo foram avaliados os teores de protenas totais e os nveis de
atividade peroxidsica nos extratos totais de folhas de feijoeiro.
4.1 DETERMNAO DOS TEORES DE PROTENAS
Os resultados obtidos mostraram um aumento nos teores de protenas em
todos os tratamentos utilizados. Os resultados obtidos so apresentados na Figura
6.
FIGURA M G Determinao dos teores de protenas em extratos totais de folhas de
feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e inoculadas com
Thanatephorus cucumeris.
1A
De forma mais didtica, os resultados so apresentados em grupos, onde o
Grupo 1 so os tratamentos que induziram aumento nos nveis de protenas de at
60% quando comparado com o tratamento controle. O Grupo 2 apresenta os
tratamento com induo entre 60 100% dos nveis de protenas e o Grupo 3 com
induo superior a 100% (Figuras 7, 8 e 9, respectivamente).
FIGURA N G Grupo 1: Determinao dos teores de protenas em extratos totais de
folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e inoculadas com
Thanatephorus cucumeris.
1L
FIGURA P G Grupo 2: Determinao dos teores de protenas em extratos totais de
folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e inoculadas com
Thanatephorus cucumeris.
2C
FIGURA Q G Grupo 3: Determinao dos teores de protenas em extratos totais de
folhas de feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e inoculadas com
Thanatephorus cucumeris.
Os valores relativos a cada tratamento so apresentados na Tabela 2.
21
T'@$1' 2 G Determinao dos teores de protenas dos extratos totais de feijoeiro comum
rizobacterizados e inoculados o fungo Thanatephorus cucumeris.
R
Mdia de medidas em
triplicata das cinco
repeties de cada
tratamento.
4.2 DETERMNAO
DA ATVDADE
PEROXDSCA
Os resultados obtidos mostraram que em apenas dois dos tratamentos (T 53
e T103) no houve induo dos nveis de peroxidase, quando comparado ao
Controle. Em todos os outros tratamentos ocorreu um aumento nos teores de
peroxidase quando comparados ao controle, como mostra a Figura 8.
T"'&'-$%&)0
T$)" ($ P")&$H%'
(-/P/-L)
R
Controle 0,029
T26 0,041
T39 0,035
T43 0,042
T53 0,065
T54 0,060
T60 0,067
T71 0,044
T78 0,036
T90 0,034
T96 0,068
T103 0,112
T115 0,047
T146 0,049
22
FIGURA S G Determinao da atividade peroxidsica em extratos totais de folhas de
feijo comum (Phaseolus vulgaris) rizobacterizadas e inoculadas com
Thanatephorus cucumeris.
Os resultados da atividade peroxidsica foram divididos em grupos, sendo o
Grupo 1 os tratamentos que induziram aumento nos nveis de peroxidase em at
60% quando comparado com o tratamento controle; o Grupo 2 apresenta os
tratamento com induo entre 60 100% dos nveis de peroxidase e o Grupo 3 com
induo superior a 100% (Tabela 3).
T'@$1' ? G Atividade peroxidsica dos extratos totais de feijoeiro comum
rizobacterizados e inoculados o fungo Thanatephorus cucumeris divididos em
grupos,de acordo com os nveis de ao (%).
A&#2#('($ P$"),#(O0#+' T"'&'-$%&)0
Grupo 1 (At 60 %) T53, T60, T96, T103, T146
Grupo 2 (60 - 100%) T54, T71
Grupo 3 ( > 100 %) T26, T39, T43, T78, T90, T115
2*
Dentre os tratamentos avaliados no presente trabalho, pode-se verificar que
os tratamentos T39, T78 e T26 foram os mais eficientes quanto ao potencial de
induo da atividade peroxidsica, apresentando nveis de atividade de 183,98
UA/mgP, 145,12 UA/mgP e 135,55 UA/mgP, respectivamente. Comparando esses
resultados com o tratamento Controle (61,76 UA/mgP), observa-se um aumento de 3,
2,4 e 2,2 vezes, respectivamente, nos nveis de atividade peroxidsica. Os valores
relativos a cada tratamento so apresentados na Tabela 4.
T'@$1' B G Determinao da atividade peroxidsica dos extratos totais de feijoeiro
comum rizobacterizados e inoculados o fungo Thanatephorus cucumeris.
R
Mdia de medidas em triplicata das cinco repeties de cada tratamento.
Estes resultados sugerem o potencial destas rizobactrias em atuarem como
agentes indutores de resistncia no feijoeiro comum contra o ataque do fungo T.
cucumeris.
As rizobactrias tem sido muito estudadas dentre os microrganismos no
patognicos capazes de induzir resistncia sistmica em plantas. Rizobactrias no
patognicas podem induzir em plantas resistncia sistmica a vrios patgenos,
como demonstrado para vrias espcies de fungos, bactrias e vrus (TEXERA et
al., 2005). Algumas rizobactrias so capazes de reduzir doenas na parte area
T"'&'-$%&)0
A&#2#('($ P$"),#(O0#+'
(UA/-/P)
R
Controle 61,76
T26 135,55
T39 183,98
T43 127,82
T53 62,25
T54 116,61
T60 97,15
T71 123,34
T78 145,12
T90 131,93
T96 86,84
T103 52,96
T115 126,11
T146 96,11
21
atravs de um mecanismo chamado de resistncia sistmica induzida (SR) (VAN
LOON et al., 1998).
Alguns isolados de rizobactrias, promotoras de crescimento em eucalipto,
podem provavelmente induzir resistncia sistmica ferrugem em Eucalyptus spp,
como os isolados FL2 (Pseudomonas aeruginosa) e MF4 (Pseudomonas sp.)
testadas por Teixeira (2005). Rizobactrias tambm lograram xito em induzir
resistncia em plntulas de feijo contra o fungo Colletotrichum lindemuthianum,
diminuindo a quantidade de leses provocadas (HERNNDEZ - RODRGUEZ et al.,
2004).
Envolvida nesse mecanismo de induo de resistncia est a peroxidase, que
uma importante enzima das plantas e participa em diversas reaes, ligaes de
polissacardeos, oxidao do cido indol-3-actico, ligaes de monmeros,
lignificao, cicatrizao de ferimentos, oxidao de fenis, defesa de patgenos,
regulao da elongao de clulas e outras (GASPAR et al., 1982; KAO, 2003).
Muitos trabalhos tem comprovado que a peroxidase est envolvida no
mecanismo de defesa das plantas contra vrios estmulos biticos e abiticos. Na
interao feijo-de-corda (igna unguiculata), gentipos TE 97 411-1E e BR 3
TRACUATEUA, com o fungo Colletotrichum lindemuthianum houve significativo
aumento da atividade peroxidsica nas folhas do feijoeiro (BARRETO, 2005). A
inoculao da bactria !anthomonas oryzae pv. oryzae em plntulas de arroz
induziu o aumento de peroxidase nas clulas do parnquima e nas paredes e lmem
dos vasos do xilema, aps 12 h de tratamento (HLARE et al., 2001). Jung (2004)
demonstrou que a atividade de peroxidase aumentou cerca de 100 vezes, sete dias
aps o tratamento de folhas de "rabidopsis thaliana com metil jasmonato.
Fernandes e colaboradores (2006) identificaram um aumento da atividade
peroxidsica em cultivares de feijo caupi (igna unguiculata) tratados com cido
saliclico.
Halfeld-Vieira e colaboradores (2003), observaram que plantas colonizadas e
inoculadas aps 4 dias com P. s. pv. tomato apresentaram atividade peroxidsica
significativamente superior aos demais tratamentos, indicando uma possvel
resposta de resistncia induzida pelo agente de biocontrole UFV-EA 6.
Rodrigues e colaboradores (2006) verificaram que o ASM teve o efeito de,
aps cinco dias da inoculao com o patgeno, aumentar a atividade da peroxidase
22
na cultivar PA-206 e que aos 10 dias este efeito foi verificado tanto na cultivar PA-
206 como na BR-17 Gurguia, em resposta ao mesmo indutor.
Os resultados de Fernandes (2004) sugerem uma participao importante da
enzima peroxidase no mecanismo de defesa do feijo-de-corda contra o ataque do
fungo Colletotrichum lindemuthianum. Resultados semelhantes foram obtidos em
1998, onde Fernandes selecionou a cultivar Vita-3 de caupi pela maior produo
constitutiva de duas peroxidases (catinica e aninica) e observou aumento da
atividade enzimtica, aps tratamento com cido saliclico, principalmente, da
peroxidase aninica e, sugeriu que essa enzima poderia estar relacionada com a
resistncia das plantas (FERNANDES 1998; FERNANDES et al., 2006)
M9 CONCLUS8ES E PERSPECTIVAS FUTURAS
Os resultados obtidos mostraram os tratamentos T39, T78 e T26 com maiores
atividades peroxidsica. Estes resultados sugerem fortemente que esta enzima
desempenhe um papel importante na defesa do feijoeiro contra o ataque de
fitopatgenos, podendo as respectivas rizobactrias testadas atuarem como
indutores deste mecanismo de resistncia.
Estudos posteriores fazem-se ento necessrios para identificar outros
componentes que possam estar associados ao mecanismo de defesa do feijoeiro
contra o ataque do fungo, quando na presena destas rizobactrias, notadamente
enzimas associadas a estes mecanismos, tais como, glucanases, quitinases e
enzimas relacionadas ao estresse oxidativo, tais como superxido dismutase,
polifenoloxidase, fenilalanina amonia liase.
A participao de compostos como perxido de hidrognio e cido saliclico
tambm devem ser avaliadas, de forma que se possa identificar os principais
componentes desta resposta de defesa, podendo-se, assim, contribuir para futuros
programas de melhoramento do feijoeiro e para o desenvolvimento de variedades
mais adaptadas.
25
N9 REFERTNCIAS BIBLIOGRFICAS
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