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Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera Qumica
Laboratorio de: Microbiologa
Impartido por: Ing. Carlos Salvador Wong Davi
Seccin Jueves en la tarde




Prctica No. 4
Mohos, levaduras, Microbiologa del Agua, Microbiologa del Aire.






Ricardo Antonio Blanco Velsquez, Carnet: 2010-20913
Guatemala, 09 de Octubre de 201

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1. MICROBIOLOGIA DEL AGUA

Procedimiento para determinar la microbiologa del agua con la tcnica
de los tubos mltiples de fermentacin.

a) Prueba Presuntiva:

1. Preparar varios tubos con su campanilla de Durham con caldo lactosado
simple y doble de 10 mL c/u.
2. Llevar las muestras a la autoclave para eliminar el aire contenido en la
campanilla de Durham aumentando la temperatura y asimismo el
volumen.
3. Mezclar la muestra de agua contaminada agitndola muy bien.
4. Inocular 15 tubos necesarios para la prueba: 5 de caldo lactosado doble
con 10 mL de la muestra contaminada para c/u, 5 de caldo lactosado
simple con 1 mL de la muestra contaminada para c/u y 5 de caldo
lactosado simple con 0.1 mL de la muestra contaminada para c/u.
5. Identificar los tubos incluyendo la cantidad de agua de la muestra
contaminada agregada.
6. Incubar los 15 tubos de 24 a 48 horas a 35C.
7. Observar la presencia de gas CO
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a las 24 horas, si alguno es negativo
tomar otras 24 horas para poder realizar la prueba confirmativa de
grupos coliformes.

b) Prueba Confirmativa:

1. Preparar varios tubos con caldo lactosado de bilis de verde brillante para
las pruebas con su respectiva campanilla de Durham.






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2. Transferir asadas de los tubos que mostraron produccin de gas a un
tubo con caldo lactosado de bilis de verde brillante.

3. Incubar por 48 horas a 35C los tubos de verde brillante.

4. La formacin de gas CO
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en cualquier momento dentro de las 48 horas
constituye una prueba confirmativa positiva.






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Resultados
Prueba Presuntiva:
Nmero de tubos positivos
5 tubos de caldo
lactosado doble de
10 mL de muestra.
5 tubos de caldo
lactosado simple
1 mL de muestra.
5 tubos de caldo
lactosado
simple de 0.1
mL de muestra.
Nmero ms
probable
(NMP)
3 2 2 20

La prueba presuntiva indico que existen 20 NMP de bacterias coliformes
por 100 mL de muestra.

Prueba Confirmativa:
Positivos Negativos
0 7

Prueba negativa de grupos coliformes, no se puede realizar la prueba en
su totalidad.
Proceso de Tratamiento de Aguas

a) La potabilizacin de agua de fuentes subterrneas: Existen tambin
dentro de este sistema dos variables de las cuales depender la complejidad de
la extraccin del agua. Si es el caso de una napa extrada de poca profundidad,
existe el riesgo de que haya sido expuesta a algn tipo contaminacin qumica
o biolgica, lo que pone en peligro la calidad del agua.
En cambio, si se extrajo de una fuente profunda, este proceso de purificacin
resulta ms simple y confiable, ya que presenta un proceso de filtracin natural.

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Esto quiere decir que queda libre de slidos en suspensin al pasar a travs de
las distintas capas porosas del terreno donde se encuentra. Por lo tanto, se
simplifica el proceso de depuracin, siendo solo necesario desinfectarla
posteriormente.

b) La potabilizacin del agua en fuentes superficiales: En este caso, al estar
ms expuesta a sustancias dainas, presenta un sistema ms complejo de
potabilizacin. La calidad del agua extrada va a estar ligada adems a las
diferentes variables que pueden afectar el proceso, como son el factor tiempo,
es decir, puede variar de un da a otro o depender del comportamiento de cada
estacin. Por ejemplo, en verano, el agua proveniente de un deshielo es ms
turbia que en invierno.
El modo ms comn de potabilizar el agua de una fuente superficial es el rio,
por lo que tomaremos como ejemplo esta fuente para explicar cmo se obtiene
agua potable. Este proceso consta de variadas etapas sucesivas, que se
complementan, es decir, lo que no se pudo eliminar en una etapa, se desecha
durante la siguiente, hasta lograr limpiarla completamente. El proceso de
potabilizacin del agua se divide en 8 pasos:

1. Ro: El agua para potabilizar, es decir, para que sea apta para el
consumo humano, puede obtenerse de fuentes superficiales (ros, lagos,
diques) o fuentes subterrneas (aguas de perforacin).
2. Toma: Aqu se capta el agua. En ella se encuentra un sistema de rejas
y compuertas que retienen los materiales de gran tamao (palos,
maderas, plsticos, etc.) para evitar que entren al acueducto o canal
abierto que conduce el agua hacia el establecimiento potabilizador.
3. Pre-Filtro: Aqu, el agua circula lentamente para que la arena y otros
slidos pesados en suspensin, caigan al fondo. El agua con menos
material suspendido, pero todava turbia, se desborda por la parte superior
de las piletas y pasa a otra etapa.
4. Agregado de coagulantes: Las partculas en suspensin que no caen
por su propio peso y son tratadas con productos qumicos (cal y sulfato de
aluminio) para que se agrupen en pequeas pelotitas llamadas flculos.

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5. Floculador: En este equipo el agua cambia de velocidad y se agita con
paletas o canales en forma de serpentn que permite que los flculos
pequeos se mezclen y formen flculos ms grandes y pesados.
6. Sedimentador: Estas grandes piletas permiten que los flculos, ya
grandes, caigan al fondo por su propio peso. En el tramo final de las
piletas hay vertederos que toman las capas superiores de agua ms clara
y la envan al siguiente equipo.
7. Filtro: Todo lo que no precipit en el sedimentador es retenido en el
filtro. Los filtros son piletas con un manto de arena y piedritas que retienen
partculas, microorganismos y flculos que no precipitaron en el
sedimentador. El agua entra por encima del filtro y por efecto de su peso,
cae por el manto filtrante hacia abajo. El agua clara que sale es enviada
mediante caeras a la etapa de desinfeccin.
8. Reserva y desinfeccin: En un gran tanque el agua limpia se acumula
y desinfecta para ser distribuida a los usuarios. La desinfeccin se hace
con cloro, que es un gas que elimina todas las bacterias que an quedan.













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2. MICROBIOLOGIA DEL AIRE

Procedimiento para determinar microbiologa del aire.

1. Licuar los tubos de ensayo con agar nutritivo que vienen del balde.
2. Colocar el agar en las cajas de cultivo, rotndolas en forma de 8 para
que cubran toda la superficie de la caja de Petri.
3. Dejar solidificar el agar.
4. Exponer las cajas de Petri sin la tapadera en el entorno del laboratorio
por 5 minutos.
5. Colocar las tapaderas de las cajas de Petri.
6. Incubar las cajas de Petri a 35C durante el tiempo necesario.
7. Observar las colonias que all crecieron, determinarlas y describirlas.

Resultados

Cajas de Petri durante la
recoleccin de microorganismos
presentes en el aire






Recuento de la colonias de cada
caja de Petri

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Diametro Caja de Petri (d): 9 cm = 0.09 m
Alturas (H):


En promedio hay 1652 unidades formadoras de colonias por m dentro del
laboratorio
H1 = 0.5 m H3 = 1.5 m H5 = 1.65 m
H2 = 1.5 m H4 = 1.5 m
Muestra
Tiempo
encubado
hasta la
observacin
Lugar Colonias
Volumen
(m)
V =(d/4)*H
No. de
Colonia /
m
Apariencia
macroscpi
ca de las
colonias
Morfologa
de los
organismos
1 12 das
Arriba de los
estante
13 0.0032 4063
Color caf
amarillento
opaco,
blanco
translucido, y
rosado
translucido.
Redonda co
nmargen
dentado en
forma de
riso, redonda
lisa, irregular
y expansiva
lobulada.


2 12 das
Cerca del
lavamanos
9 0.0095 948
3 12 das
Esquina
izquierda del
lavamanos
9 0.0095 948
4 12 das
Centro de la
mesa de la
ventana
11 0.0095 1158
5 12 das
Parte
cercana de la
pared con los
escritorios
12 0.0105 1143
Promedio 1652

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Mtodos de Control del aire en el ambiente

a) SEDIMENTACIN
Es el mtodo ms rudimentario de medicin de microorganismos en el
ambiente. Consiste en la exposicin de placas de Petri al ambiente durante un
cierto tiempo.
Este mtodo tiene la ventaja de que se puede realizar en todas las
condiciones habituales de trabajo y en tiempo real, es el ms econmico y
requiere muy poco tiempo de dedicacin.
El resultado ha de expresarse como: u.f.c (unidades formadoras de colonias)
/cm2/hora (no puede referirse a un volumen de aire, por lo que los resultados no
pueden ser cuantitativos/volumen de aire, pero si comparativos).
Los tiempos de exposicin no deben ser extremadamente largos para evitar
que se reseque la superficie de la placa. Se utilizan placas de Petri estndares
de 90 mm de dimetro y los medios ms utilizados son:
Agar de Triptona y Soja (T.S.A) para el recuento de aerobios
Agar Rosa de Bengala o Agar de Sabouraud cloranfenicol para el
recuento de hongos.

b) RECOGIDA EN MEDIO LQUIDO
Consiste en hacer pasar un volumen determinado de aire en forma de
burbujas a travs de un caldo de cultivo o solucin isotnica, en los cuales,
tericamente, quedan retenidos la mayor parte de los microorganismos.
El recuento de microorganismos se realiza a partir de la siembra de
alicuotas de esta muestra, pudiendo utilizar a continuacin las distintas tcnicas
de anlisis cuantitativo (NMP, inclusin en agar, filtracin).
Este mtodo es ms laborioso que el anterior y necesita ms utillaje (bomba
de vaco o trompa de agua, material de vidrio). Se introducen por tanto en el

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ambiente ms variables (el propio utillaje y el analista, que debe estar presente
mientras se efecta el muestreo).
En este caso no existe peligro de desecacin del medio de cultivo y hay
exactitud en el recuento que se puede expresar en u.f.c/m3 de aire. Una posible
proliferacin bacteriana en el lquido puede conducir a errores en la
cuantificacin.
c) FILTRACIN
Se hace pasar un volumen determinado de aire a travs de un filtro en el
cual quedan retenidas las partculas portadoras de microorganismos.
Se pueden utilizar distintos tipos de filtros, siendo los ms comunes los de
membrana celulsica, o los de gelatina, los cuales se llevan directamente sobre
un medio de cultivo slido o bien se lavan, realizando posteriormente siembras
en un medio slido a partir del lquido de lavado.
Tiene las mismas ventajas y desventajas que el mtodo anterior, a
excepcin de que en este caso s que puede producirse la muerte de
microorganismos por desecacin con volmenes de muestreo superiores a 250
l.
d) IMPACTACIN
Este mtodo es el ms costoso en cuanto a material y a mantenimiento.
Requiere formacin del analista y su presencia durante el muestreo, por lo que,
en el ambiente, se incluyen variables distintas a las habituales en tiempo real.
Disminuye el tiempo de recogida de la muestra. En muestreos prolongados y
en condiciones de sequedad y altas temperaturas puede desecarse el medio de
cultivo.






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3. HONGOS Y LEVADURAS

3.1 Hongos

Definicin
Son un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que se
alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los alimentos se
disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; despus se absorben a
travs de la fina pared de la clula y se distribuyen por difusin simple en el
protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la
putrefaccin y descomposicin de toda la materia orgnica. Hay hongos en
cualquier parte en que existan otras formas de vida. Algunos son parsitos de
organismos vivos y producen graves enfermedades en plantas y animales. La
disciplina cientfica que estudia los hongos se llama micologa.

Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una divisin del
reino Plantas. Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas que,
en el transcurso de su transformacin en organismos capaces de absorber su
alimento, haban perdido la clorofila, y con ello, su capacidad para realizar
la fotosntesis. Sin embargo, en la actualidad los cientficos los consideran un
grupo completamente separado, que evolucion a partir de flagelados sin
pigmentos. Ambos grupos se incluyen dentro del reino Protistas, o bien se
coloca a los hongos como un reino aparte, debido a la complejidad de su
organizacin. Hay unas cien mil especies conocidas de hongos. Se cree que los
grupos ms complejos derivan de los tipos ms primitivos, los cuales tienen
clulas flageladas en alguna etapa de su ciclo vital.

Procedimiento para observacin de Mohos

1. Tomar una porcin pequea de moho de pan integral y de pan cubilete
con el asa bacteriolgica
2. Colocar las muestras de moho de pan en el portaobjetos y extenderlos
con la aguja de diseccin para tener una mejor visin de la estructura y

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tipo de moho; luego agregar el cubreobjeto para analizar en el
microscopio.
3. Analizar los mohos de pan utilizando los objetivos de menor a mayor
aumento y determinar el tipo de moho comn que se presenta.

Observacin durante la Prctica y Resultados
Tipo de
pan
Tipo de
hongo
Foto Laboratorio Foto Terica
Pan
integral
Penicillium




Pan
Cubilete
Rhizopus








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3.2 Levadura

Definicin
Las levaduras se han definido como hongos microscpicos, unicelulares, la
mayora se multiplican por gemacin y algunas por escisin. Este grupo de
microorganismos comprende alrededor de 60 gneros y unas 500 especies.
Histricamente, los estudios sobre microbiologa enolgica se han centrado en
las levaduras pertenecientes al gnero Saccharomyces, que son las
responsables de la fermentacin alcohlica. Anteriormente se crea que slo
ellas participaban en el proceso de produccin de alcohol, sin embargo, las
diferentes levaduras no-Saccharomyces, especialmente durante la fase inicial
de la fermentacin, pueden influir en las propiedades organolpticas de las
bebidas alcohlicas.
El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido
por sino hasta 1856 por Luis Pasteur. Las teoras cientficas de esa poca
reconocan la presencia de estas en la fermentacin alcohlica, pero eran
consideradas como compuestos qumicos complejos, sin vida. Esta era teora
mecanistica liderada por los qumicos alemanas Von Liebig y Wohler. Luis
Pasteur, propuso la teora vitalistica y demostr que las clulas viables de
levaduras causan fermentacin en condiciones anaerobias; durante la cual el
azcar presente en el jugo es convertido en etanol y CO2.
Las levaduras son los agentes de la fermentacin y se encuentran
naturalmente en la superficie de las plantas, el suelo es su principal hbitat
encontrndose en invierno en la capa superficial de la tierra. En verano, por
medio de los insectos, polvo y animales, son transportados hasta el fruto, por lo
que su distribucin se produce al azar. Existe un gran nmero de especies que
se diferencian por su aspecto, sus propiedades, sus formas de reproduccin y
por la forma en la que transforman el azcar. Como todos los seres vivos,
tienen necesidades precisas en lo que se refiere a nutricin y al medio en el que
viven. Son muy sensibles a la temperatura, necesitan una alimentacin
apropiada rica en azucares, elementos minerales y sustancias nitrogenadas,
tienen ciclos reproductivos cortos, lo que hace que el inicio de la fermentacin

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sea tan rpido, pero as como se multiplican, pueden morir por la falta o el
exceso de las variables mencionadas.

Procedimiento para observacin de levaduras

1. Tomar de un frasco de levaduras la muestra en crecimiento.
2. Colocar dos lupas de levadura en el portaobjetos y cubrir con el
cubreobjetos la muestra.
3. Enfocar con el objetivo de menor aumento hasta el de mayor aumento.
4. Examinar las clulas de levadura y sus partes.

Observacin durante la Prctica



Resultado:
Como se muestra las levaduras en crecimiento
solo presentan clulas normales, sin rganos.

Observacin de la levadura en el
microscopio