ESPECTRO DO REAGENTE DE BRADFORD

RELATÓRIO
Autores
Turno
1
Grupo
4
Contacto
936977241
Joana Sofia Sousa
4.
Inês Dantas
5.
Data da aula:
3.
29
09
2014
I. Resultados
|acsp|bioquímica| 1
Comprimento de Onda (λ)nm
400
415
475
505
565
595
625
655
700
Absorvância
0
0
0
0
0,347
0,465
0,380
0,238
0,087
Tabela 1: a!ores de Absorvância obtidos aos respectivos comprimentos de onda" a#$ando da an%!ise
da &ormona '(A (Albumina sérica bovina) por espectro)otometria
|acsp|bioquímica| 2
Gráfico 1: *r%)ico representativo do espectro de absor+,o da '(A" e!aborado a partir dos res$!tados
apresentados na tabe!a 1 (va!ores de comprimento de onda apresentados em nm)
II. Dscuss!o e consdera"#es $nas
A actividade !aboratoria! e-ec$tada" teve como principa! ob.ectivo de e!aborar o espectro de
absor+,o da '(A (A!b$mina (/rica 'ovina) atrav/s de espectro)otometria0 1oi $ti!i2ado o
m/todo de 'rad)ord #$e consiste em $sar $m corante" o rea3ente de 'rad)ord (a2$! de
Coomassie)" #$e" por s$a ve2 tem a)inidade com as prote4nas" detectando5as" !i3ando5se %s
mesmas e criando $m comp!e-o prote4na6a2$! de Coomassie" o #$e )a2 com #$e a so!$+,o
passe de acastan&ado para a2$!0
7e se3$ida" $so$5se a espectro)otometria para determinar a absorvância do comp!e-o
A!b$mina6a2$! de Coomassie" a v%rios comprimentos de onda previamente se!eccionados0
Antes de cada medi+,o" )oi $sado o branco" o$ se.a" $ma so!$+,o em t$do seme!&ante 8
amostra em est$do" e-cepto pe!a a$s9ncia do comp!e-o '(A6a2$! de Coomassie" para tarar o
espectro)ot:metro e assim asse3$rar #$e seriam obtidos os va!ores de absorvância apenas da
biomo!/c$!a em #$est,o0
eri)ico$5se #$e" para os comprimentos de onda se!eccionados" se obteve va!ores de
absorvância n,o n$!os a partir dos 565 nm" observando5se $m pico de absorvância aos 595
nm" ap:s o #$a! a absorvância )oi dimin$indo" ta! como representado no 3r%)ico 10 7evido a
estes va!ores" conc!$i5se #$e 595 nm / o comprimento de onda :timo para an%!ise
espectro)otom/trica da '(A0
O espectro de absor+,o de $ma s$bstância" consiste n$m 3r%)ico #$e re!aciona os va!ores de
absorvância obtidos (ei-o das ordenadas) a $ma 3ama de comprimentos de onda (ei-o das
abcissas)" re3istando $m va!or de absorvância em )$n+,o do comprimento de onda0 O
espectro de absor+,o di)ere de s$bstância para s$bstância" ta! como $ma impressao di3ita!"
permitindo assim a identi)ica+,o de $ma s$bstância" #$ando assim / necess%rio0 ;o caso
est$dado" era con&ecida a s$bstancia a ana!isar0 (e assim n,o )osse" poder5se5ia identi)icar a
s$bstância" comparando os va!ores obtidos com bib!io3ra)ia previamente e-istente"
ass$mindo #$e a actividade !aboratoria! decorreria norma!mente0
Conc!$indo" a )$ndamenta+,o da espectro)otometria incide no )acto das s$bstâncias
absorverem ener3ia radiante" absor+,o essa" c$.o va!or varia dependendo" tanto da
concentra+,o do ana!ito" como dos comprimentos de onda $ti!i2ados0 <sto permite $ma
an%!ise" tanto #$antitativa como #$a!itativa" sendo #$e esta actividade !aboratoria! incidi$
apenas nos )actores #$a!itativos da espectro)otometria" na medida em #$e esta )oi $ti!i2ada
para determinar o espectro de absor+,o do comp!e-o '(A6A2$! de Coomassie0
Declaro que sou responsável pela infora!"o con#i$a nes#e rela#%rio:
(Assinat$ra dos a!$nos)
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|acsp|bioquímica| 4