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Dra.

Margarita Arana
Facultad de Ciencias y Filosofía
“Alberto Cazorla Talleri”
Cultivos celulares
Fraccionamiento celular
Crecimiento y mantenimiento de células vegetales y animales bajo
condiciones estériles
Requerimientos básicos
Medio de cultivo
Condiciones estériles
1. Suplemento continuo de material celular homogéneo
2. Fácil manipulación
3. Criopreservación sin alterar composición genética
4. Más económico que criar y experimentar animales intactos
5. Salvan la vida de animales
Cuando el cultivo proviene de células que han sido disgregadas
de un tejido original tomado de un órgano de un animal recién
sacrificado recibe el nombre de “Cultivo primario”.
Cultivos primarios
Cultivos secundarios
• Cuando uno o varios tipos de
células de un cultivo primario se
re-siembran (sub-cultivo), el
cultivo obtenido se denomina
Cultivo secundario. La
heterogeneidad celular será
menor y el medio utilizado
determinará qué células se
desarrollarán.
Fibroblasto
humano
• Cuando el cultivo primario o
secundario es sometido a
procesos de transformación que
le confiere capacidad ilimitada de
multiplicación, recibe el nombre
de “Líneas celulares”.
COS1. Riñón. African Green Monkey
(Cercopithecus aethiops). SV40
transfected
Anticuerpos
monoclonales
Virus Sendai o
polietilenglicol
http://glencoe.mcgraw-
hill.com/sites/0011042009/student_view0/chapter17/monoclonal_antibody_production.html
Clonación
https://www.youtube.com/watch?v=q0B9Bn1WW_4
https://www.youtube.com/watch?v=tELZEPcgKkE
• Células no especializadas
• Capaces de dividirse y
producir copias de sí mismas
• Tienen el potencial de
producir otros tipos de
células en el organismo
Multipotentes
 S= Autorenovación de
células madre
 D=Diferenciación
terminal
Trofoblasto
(placenta)
Tipos de células madre
Totipotentes: Mórula.
Un individuo completo.
Pluripotentes: (embrionarias) Células masa interna
blastocisto.
Todos los tejidos excepto placenta
Multipotentes: (adultas). Varios tipos de tejidos.
cordón umbilical
mesenquimales:
médula ósea
pulpa dental
Unipotentes: Sólo un tipo de tejido
Piel, músculo, cel. Nerviosas.
Células madre embrionarias
(Pluripotentes)
Blastocisto antes (a) y después (b) de ser
seccionado con láser y sin zona pelúcida (c)
En (d) el fragmento pequeño corresponde a la masa
interna de células y el más grande al trofoblasto
Trofoblasto
Células de
la masa
interna
http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/stemcells.html
Origenes de células madre pluripotentes de ratón
129X1/SvJ
Células madre pluripotentes
teratocarcinomas
Células madre multipotentes (adultas
mesenquimales): Células madre
hematopoyéticas y de la pulpa dental
Células madre multipotentes (adultas)
Células madre de cordón umbilical
Existen diferencias significativas entre la sangre de
cordón umbilical y la médula ósea:
1. Las células de la médula ósea son difíciles
de compatibilizar entre dador y receptor,
porque usualmente se requiere una
compatibilidad perfecta.
2. La sangre del cordón umbilical se obtiene
de forma simple y menos traumática que la
de la médula ósea.
3. La recolección de la sangre de cordón no
es invasiva.
4. Los transplantes de células madre del cordón umbilical son
menos costosos de realizar que los transplantes de médula
ósea.
5. Las células madre de cordón umbilical tienen
mayor capacidad proliferativa.
6. La disponibilidad es más rápida
Células madre epidermales formando colonias
en el laboratorio
Células madre unipotentes: piel
BL = Capa basal; SL = capa espinosa;
GL = capa granular; SC= estrato corneo.
(Hipodermis)
Tipo de célula
madre
Ventajas Desventajas
Embrionaria
Flexibles: Poseen potencial de formar
cualquier célula del cuerpo
Pueden ser difíciles de controlar
Inmortales: Un linaje celular puede
aportar indefinidamente células
cuidadosamente definidas
Pueden producir rechazo
inmunológico
Fácilmente obtenidas del interior de
embriones humanos
Origina frecuentemente tumores en el
tejido receptor
Controversiales por motivos de ética y
moral
Adulta
Ya se encuentran parcialmente inducidas
y especializadas
Estar disponibles en cantidades
reducidas
No producen rechazo inmunológico por
ser de implante autólogo
Finitas: No se dividen por tiempos tan
largos como las embrionarias
Son flexibles, pueden ser usadas para
formar otro tipo de tejido
Son susceptibles de transdiferenciarse
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
Desarrollo de
medicamentos
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
Las aplicaciones de las células madre en
terapia
• Actualmente se pueden usar en el tratamiento de enfermedades como:
Algunos tipos de leucemias (linfocítica aguda, mielocítica crónica, mielógena aguda),
linfoma de tipo no Hodgkin, Mieloma múltiple, Neuroblastoma, anemias (aplástica,
Fanconi, Falciforme), osteoporosis, Lupus, síndrome de Wiskott Aldrich, síndrome de
Hunter, Tay Sachs, Beta Talasemia.
• Actualmente se están realizando estudios de terapia celular aplicada en:
La reparación de daño cerebral luego de una embolia, daños en la médula espinal,
tratamientos de enfermedades cardiovalculares, diabetes, cáncer (ovarios, testículos,
mama, pulmón), melanoma, regeneración de tejidos, sida, alzheimer, parkinson, artritis
reumatoide, cirrosis, etc. También se realizan estudios en la terapia genética.
• Importante: Esta terapia es prometedora pero aún está en proceso de investigación. Las
investigaciones se deben realizar con un consentimiento informado del paciente.
Clonamiento terapéutico
“Dolly”
Ej: célula epitelial
Solter Nature Reviews Genetics advance online publication;
published online 14 March 2006 | doi:10.1038/nrg1827
Reprogramación nuclear de células
diferenciadas
iPS: "induced Pluripotent Stem“
ES: “Embryonic stem”
Células madre unipotentes: piel
http://channel.nationalgeographic.com/channel/explorer/videos/the-skin-gun/
APLICACIONES
(Ratones
Knockout)
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2007/illpres/index.html
Introducción de cambios genéticos
utilizando células madre (Ratones
Knockout)
neo
r
: resistencia a
neomicina
Células
recombinantes
HSV-tk: gen
timidina quinasa del
herpes virus.
Cultivos tejidos vegetales
Referencias
Molecular Biology of the Cell. 4th edition. Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21054/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26851/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK26851/
Videos células madre
• http://www.youtube.com/watch?v=EQTdhhplyeI&feature=related
• http://www.youtube.com/watch?v=BVsaPKlC2DE&feature=related
• http://www.youtube.com/watch?v=_TLwdHtaaAg&feature=related
• http://www.youtube.com/watch?v=BlUe1wroNb0&feature=related
• http://www.youtube.com/watch?v=ZyuiJhh7PUQ
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/CellCultureBasics.html?CID=ccbvid1
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/SterileTechnique.html?CID=ccbvid2
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/4CellPassagingCells.html?CID=ccbvid3
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/FreezingCells.html?CID=ccbvid4
http://media.invitrogen.com.edgesuite.net/Cell-
Culture/videos/ThawingCells.html?CID=ccbvid5
Videos cultivo de células
• http://www.cellsalive.com/cam1.htm
• http://stemcells.nih.gov/info/basics/pages/basics1.aspx
http://www.youtube.com/watch
?v=u54bRpbSOgs
http://www.ehu.es/biofisica/jua
nma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf