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TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENTICO II: ENSAYOS DE RESTRICCIN DE PLSMIDO

1. Qu parte de la molcula de DNA le confiere la carga negativa?


Los grupos fosfato presentes en los nucletidos del DNA
2. Cul es el papel de cada componente del amortiguador de carga, en particular de los dos
colorantes que contiene?
El amortiguador contiene 3 componentes:

Azul de bromofenol, cylen xyanol, naranja de acridina, etc): Es un colorante


azulado que permite la visualizacin del frente de corrida, para poder seguir la
migracin del DNA con fragmentos aproximadamente de 300 bp
Sucrosa o glicerol, lo cual da peso a la muestra para que el DNA se precipite al
fondo de los pozos de siembra

3. Por qu el bromuro de etidio es un reactivo mutagnico?


Es un compuesto que crea un potencial efecto carcinognico, teratognico, con capacidad
de cambiar el marco de lectura de los genes, causando mutaciones genticas y
recombinaciones cromosmicas
4. A que se le denomina topoismeros?
Se le denomina topoisomeros las distintas formas fsicas que puede adoptar el DNA
5. En la prctica se pudieron observar topoismeros?
Si pudieron observarse topoisomeros en carril de DNA sin enzimas de restriccin o
(endonucleasas)
6. Qu peso molecular tienen los topoismeros?
Su peso molecular o tmao se miden en pares de bases, dependiendo de su conformacin.
Sin restriccin su tamao aparenta ser mayor a 6.2 kb ya que se encuentra sin estar
empacado, mientras que con una conformacin sper enrollada su tamao aparente de
6.2 kb es menor en el gel de corrida de electroforesis y se observa con un mayor
corrimiento.

7. Qu tipo de extremos producen las enzimas utilizadas en la prctica, romos o cohesivos?


Fueron cohesivos ya que estas dos enzimas utilizadas en la prctica (EcoR 1 y Ndel)
realizan este tipo de enlaces no simtricos de DNA.

8. Cuntos fragmentos de DNA o restriccin se obtuvieron al utilizar las dos enzimas NdeI y
BamH1?
Se obtuvieron 2 fragmentos debido a que el plsmido es circular y al actuar las 2 enzimas
de restriccin tenemos estos 2 cortes
9. Cuntos fragmentos se obtuvieron al utilizar slo una de las enzimas de restriccin?
Por qu?
Dos fragmentos, pues cada enzima de restriccin realiza solo un corte al plsmido
10. Cul fue el peso molecular del DNA liberado y del plsmido o vector?
No se aisl nada de plsmido
11. Cules son las aplicaciones de rutina de las enzimas de restriccin?

Desarrollo de DNA recombinante y biotecnologa


Mecanismos de regulacin y expresin gnica
Mapeo y cartografa de genes
Diagnstico de enfermedades genticas con cambio en la secuencia del DNA
Desarrollo de protenas recombinantes