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Bioinf& ' & 3 &&&&&&&& & &

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Engenharia&Gentica&
Exerccios&

Bioinformtica&'&3&
2012/2013&
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1&parte:&Construo&de&um&mutante&condicional&para&estudo&de&genes&
envolvidos&na&resistncia&aos&antibiticos&beta&lactmicos&em&S.aureus.&
&
1.1.&Localizao&da&regio&promotora&do&gene&escolhido.&
&
1.2.&Estratgia&de&substituio&do&promotor&nativo&do&gene&no&cromossoma&&
por&um&promotor&indutvel.&
&

&
2& parte& '& Construo& de& um& mutantes& duplo& & em& genes& com&
funo&redundante,&identificados&&no&genoma&de&S.(aureus&
&
2.1.&&Identificao&do&2&gene&com&funo&redundante.&&
&
2.2.&&Construo&de&um&mutante&duplo.&
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EG&&Construo&de&Mutantes&condicionais&e&mutantes&duplos&&Bioinformtica&'&3&

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&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&Bioinf&
Bioinf& ' & 3 &
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1& parte:& Construo& de& um& mutante& condicional& para& estudo& de& genes&
envolvidos&na&resistncia&aos&antibiticos&em&S.aureus.&
&&
&
Dos! 7! genes! da! biblioteca! de! mutantes! de! transposio,! identificados! no! exerccio! Bioif! 2,!
escolha!um!que!lhe!parea!adequado!para!a!construo!de!mutante!condicional,!ou!seja,!o!
gene!a!ser!controlado!por!um!promotor!indutvel.!Tenha!em!considerao!a!vizinhana!do!
gene!(se!faz!parte!ou!no!de!um!opero)!na!sua!escolha.!
&

1.1.&Localizao&da&regio&promotora&do&gene&escolhido&
&
Com! a! ajuda! da! sequencia! proteica! referente! ao! gene! em! causa,! localize! na! sequncia! de!
DNA!o!codo!de!inciao,!o!codo!de!terminao,!a!zona!promotora!e!o!rbs.!
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1.2.&Estratgia&de&substituio&do&promotor&nativo&do&gene&no&cromossoma&&
por&um&promotor&indutvel.&

&
Desenhe!a!estratgia!para!construir!o!mutante!indutvel!para!o!gene!que!escolheu!em!1.1.&
!
a.&!defina!a!regio!a!clonar,!no!esquecendo!que!o!rbs!!importante!para!que!haja!
traduo.!
&
b.& & Desenhe! os! primers! que! utilizaria! para! amplificar! o! fragmento! a! clonar! em!
pMGP1!
!
c.! como! seleciona! o! transformantes! e! como! pode! confirmar! se! a! induo! esta! a!
funcionar.!
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EG&&Construo&de&Mutantes&condicionais&e&mutantes&duplos&&Bioinformtica&'&3&

Bioinf& ' & 3 &&&&&&&& & &

2& parte& '& Construo& de& Mutantes& duplos& & em& genes& com& funo&
redundante,&identificados&&no&genoma&de&S.(aureus&
&
2.1.&&Identificao&do&2&gene&com&funo&redundante&&
&
Na!mesma!biblioteca!de!mutantes!de!transposio!(Tn551)!construda!!em!S.#aureus#(estirpe!
COL),! foram! identificados! alguns! mutantes! em! que! a! reduo! da! resistncia! aos! betaQ
lactmicos! era! apenas! residual.! Uma! vez! identificados! os! genes! desses! mutantes! de!
insero,! concluiuQse! que! havia! outros! genes! com! funes! redundantes! no! genoma! de! S.#
aureus,!o!que!explicaria!o!fentipo!dos!mutantes.!
!
SegueQse!a!sequencia!da!regio!de!insero!do!Tn551!de!um!destes!mutantes!(a!vermelho!
esta!a!sequncia!do!transposio):!
!!
cacttaagagaattgaatataaaaaataaataggccttgaaacattggtttagtgggaatttgtaccccttatcgatacaaa
ttcccactaagcgctcgggaccccctacaggttgtaattccccttcagcacgtacacgaataccatcttcttgatagtccaatt
caacgcccatttcttctagtttatagactaaactcgccatatgttctttgattgcaccacgtacaaaaatatcaccacgcgtta
tagcaccagcgattagtaatgtgcctgcttcaattctatctggaatgatagcatgttctacaccatgtaatgattctacaccat
tgattgtaattgtgtctgtaccagcaccagtaattctaccacccatttcattaatgtagtttgctaaatcgacaatttcaggttc
tttagctgcattttcaattaaagtcttacccttagctaatgatgctgccataataatattttgtgttgctcctacacttggaaaat
ctaaatgaattgatgtaccttttaatccatctttagcattagcataaatattaccattttcaagatgaatttctgcgcctaaagc
ttcaaaacctttaatgtgttgctcaatcggtctacttccaattgcacaaccaccaggcaatgcaacaatagcatgtcctagtc
ttgctaaaagagg!
!

a.& Identifique! o! gene! que! foi! interrompido! pelo! transposo! utilizando! as! bases! de! dados!
disponveis!e!faa!um!esquema!do!local!de!insero!do!transposo.!
&
b.&Com!a!ajuda!da!sequencia!proteica!referente!ao!gene!em!causa,!localize!na!sequncia!de!
DNA!o!codo!de!inciao,!o!codo!de!terminao,!a!zona!promotora!e!o!rbs.!
&
c.& Procure! no! genoma! de! S.# aureus! COL! um! potencial! gene! cuja! protena! tenha! funes!
redudantes.!
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2.2.&&Construo&de&um&mutante&duplo&

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5.!Desenhe!uma!estratgia!para!construir!um!mutante!duplo!para!os!estes!dois!genes!com!
funes!redudantes.!!Tenha!em!ateno!que!a!funo!destes!genes!pode!ser!essencial!para!
a!clula.!
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Tem!a!sua!disposio!os!plasmdeos!pMGP2!e!pMAD!.!

EG&&Construo&de&Mutantes&condicionais&e&mutantes&duplos&&Bioinformtica&'&3&

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Bioinf& ' & 3 &

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