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Manual de Coleta,

Acondicionamento e
Transporte de Amostras

Manual de Coleta,
Acondicionamento e
Transporte de Amostras

Governador do Estado do Cear


Cid Ferreira Gomes
Secretrio da Sade
Raimundo Jos Arruda Bastos
Secretrio Adjunto da Sade
Haroldo Jorge de Carvalho Pontes
Secretria Executiva da Sade
Rosa Moraes Pessoa Fernandes
Superintendente de Apoio a Gesto da Rede de Unidades da SESA
Lineu Juc
Diretor do Laboratrio Central de Sade Pblica
Ricardo Carvalho de Azevedo e S
Coordenadora da Rede de Laboratrios Regionais e Locais
Izabel Letcia Cavalcante Ramalho
Coordenadora da Qualidade e Biossegurana
Elza Gadelha Lima
Chefe da Diviso Biologia Mdica
Jos Napoleo Monte da Cruz
Chefe da Diviso Apoio Tcnico / Microbiologia
Maria Iracema de Aguiar Patrcio
Chefe da Diviso de Produtos
Maria Alice Ribeiro Passos
Chefe da Diviso Administrativo-financeira
Lauro Santos Neto

Manual de Coleta,
Acondicionamento e
Transporte de Amostras

Ficha cartogrfica
Cear. Secretaria de Sade. Laboratrio Central de Sade Pblica.
Manual de coleta, acondicionamento e transporte de amostras para exames laboratoriais/
(organizado por) Elza Gadelha Lima. (et al.) 2. ed. Fortaleza: SESA, 2013.

SUMRIO
APRESENTAO ...........................................................................................................................08
MDULO I
Orientaes para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas para realizao de
exames laboratoriais de interesse da Vigilncia Epidemiolgica.
1.
2.
3.
4.
5.

Orientaes Gerais para o encaminhamento de amostras biolgicas .......................................11


Preenchimento do Cadastro do Paciente (GAL) .....................................................................13
Causas pr-analticas de variaes dos resultados de exames laboratoriais ..............................13
Instrues importantes que devem ser passadas ao paciente ....................................................17
Orientaes de biossegurana para as atividades de coleta, acondicionamento e transporte de
amostras .................................................................................................................................28
6. Critrios Gerais de Aceitao e Rejeio de Amostras ............................................................36
7. Procedimentos realizados no LACEN-CE ...............................................................................37
8. Investigao do Teste de paternidade ......................................................................................49
9. Referncias Bibliogrficas ......................................................................................................51
10. Anexos ...................................................................................................................................53
.
MDULO II
Orientaes especficas para coleta, acondicionamento e transporte de amostras para exames
microbiolgicos.
1. Coleta de material para exames microbiolgicos .....................................................................62
2. Orientaes de biossegurana .................................................................................................63
3. Amostras no recomendadas para exames microbiolgicos, por fornecerem resultados
questionveis ..........................................................................................................................63
4. Critrios de rejeio de amostras clnicas enviadas ao laboratrio de microbiologia ................63
5. Modelo de requisio de anlise microbiolgica e identificao de amostras...........................64
6. Transporte das amostras..........................................................................................................65
7. Exames microbiolgicos realizados no LACEN-CE................................................................66
8. Referncias Bibliogrficas ..................................................................................................... 103
9. Anexos .................................................................................................................................. 106
MDULO III
Orientaes para coleta, acondicionamento e transporte de amostras para anlises laboratoriais de
produtos de interesse da Vigilncia Sanitria e Ambiental.
1.
2.
3.
4.

Consideraes Gerais............................................................................................................. 108


Modalidades de Anlises ....................................................................................................... 108
Definies ............................................................................................................................. 109
Tipos de Amostras ................................................................................................................. 110

5. Tamanho das Amostras .......................................................................................................... 111


6. Consideraes Especficas ..................................................................................................... 112
7. Solo ....................................................................................................................................... 120
8. Produtos ................................................................................................................................ 121
9. Critrios de Aceitao e Rejeio das Amostras de gua e produtos ....................................... 123
10. Boletim de anlise ou laudo analtico ..................................................................................... 124
11. Entrega de Amostras no LACEN ........................................................................................... 125
12. Prazo de Entrega dos Laudos ................................................................................................. 125
13. Referncias Bibliogrficas ..................................................................................................... 126
14. Anexos .................................................................................................................................. 129

APRESENTAO

A inscrio do direito sade como preceito constitucional, embora condio necessria, no


por si s, suficiente para a concretizao desse direito. A organizao de um sistema de sade universal,
igualitrio e de qualidade constitui - se em um processo de construo marcado por contradies,
continuidades e rupturas, fruto do trabalho de pessoas e instituies comprometidas com polticas
pblicas orientadas para o bem estar da populao.

Os Laboratrios Centrais de Sade Pblica (LACEN) possuem uma funo estratgica para os
sistemas de Vigilncia Sade (Vigilncia Sanitria, Ambiental e Epidemiolgica), assim como, para a
sade pblica.

A portaria ministerial n. 2.031/GM de 23/09/2004 que Dispe sobre a organizao do Sistema


Nacional de Laboratrios de Sade Pblica - SISLAB confere aos Laboratrios de Referencia Estadual,
em seu art.12 dentre outras, a competncia de Coordenar a Rede Estadual de Laboratrios Pblicos e
Privados que realizam anlise de interesse em sade pblica.

O LACEN-CE o laboratrio de referncia do Estado do Cear, atuando no diagnstico das


doenas de notificao compulsria alm de outros agravos de maior complexidade diagnstica de
interesse da sade pblica. O papel de referncia se deve existncia de atividades de pesquisa e ao
domnio de procedimentos de alta complexidade. Isto proporciona suporte rede pblica, fornecendo
diagnsticos diferenciais e elevando a capacidade do SUS para detectar e acompanhar a ocorrncia de
doenas infecciosas.

O Manual de coleta, acondicionamento e transporte de amostras para exames laboratoriais, que


ora colocamos disposio dos tcnicos envolvidos nesta atividade, expressa o compromisso social
desta Instituio para a melhoria da qualidade dos servios laboratoriais ofertados, com benefcio das
condies de sade e de vida da populao brasileira.
RICARDO CARVALHO DE AZEVEDO E S
Diretor do LACEN-CE

MDULO I
ORIENTAES PARA COLETA, ACONDICIONAMENTO E TRANSPORTE DE
AMOSTRAS BIOLGICAS PARA REALIZAO DE EXAMES LABORATORIAIS DE
INTERESSE DA VIGILNCIA EPIDEMIOLGICA.

EXAMES LABORATORIAIS PARA O DIAGNSTICO DE DOENAS DE NOTIFICAO


COMPULSRIA E OUTROS AGRAVOS DE INTERESSE DA SADE PBLICA.

O LACEN-CE o laboratrio de referncia estadual, atuando no diagnstico das doenas de


notificao compulsria alm de outros agravos de maior complexidade diagnstica de interesse da
sade pblica. Realiza tambm anlises fiscais de produtos e o controle da qualidade da gua para
consumo humano, tendo assim funo estratgica para o Sistema de Vigilncia em Sade.
O laboratrio busca a excelncia de seus servios por meio da implantao de um Sistema de
Gesto da Qualidade e Biossegurana, segundo os requisitos ABNT NBR ISO/IEC N. 17025:2005
Requisitos gerais para competncia de Laboratrios de Ensaio e Calibrao, ABNT NBR NM ISO
15189:2008 Laboratrios de Anlises Clnicas Requisitos especiais de qualidade e competncia,
RDC/ANVISA N. 11, de 16 de fevereiro de 2012 - Regulamento Tcnico que dispe sobre o
funcionamento de laboratrios analticos que realizam anlises em produtos sujeitos Vigilncia
Sanitria, RDC/ANVISA N. 302, de 13 de outubro de 2005 - Regulamento Tcnico para
funcionamento de Laboratrios Clnicos, suas atualizaes ou documentos legais que venham a
substitu-las, para atender as necessidades e expectativas dos clientes.
A poltica e os procedimentos relativos s aes de Biossegurana esto em conformidade, mas
no se restringem s Diretrizes Gerais para o Trabalho em Conteno com Agentes Biolgicos do
Ministrio da Sade e a Portaria do Ministrio da Sade N 3.204, de 20 de outubro de 2010 - Norma
Tcnica de Biossegurana para Laboratrios de Sade Pblica, ou outra (s) que vier (em) substitu-la
(s) e s demais legislaes especficas vigentes.
Para a melhoria contnua de suas atividades, faz-se necessrio que todas as fases do processo de
realizao de exames, sejam realizadas com a qualidade requerida, assim sendo, estamos
disponibilizando esse Manual com o objetivo de dar orientaes para a melhoria da qualidade da fase
pr-analtica (coleta, acondicionamento e transporte das amostras), fator indispensvel realizao de
ensaios confiveis e fidedignos.

ELZA GADELHA LIMA


Coordenadora da Qualidade e Biossegurana do LACEN-CE
10

FASE PR-ANALTICA PARA EXAMES DE SANGUE

A fase imediatamente anterior coleta de sangue para exames laboratoriais de grande importncia
para todas as pessoas envolvidas no atendimento aos pacientes, com a finalidade de se prevenir a
ocorrncia de enganos, que podem comprometer os resultados.

importante a identificao positiva do paciente e dos tubos nos quais ser colocado o sangue. Devese estabelecer um vnculo seguro e indissolvel entre o paciente e o material colhido para que, no final,
seja garantida a rastreabilidade de todo o processo.

1. ORIENTAES GERAIS PARA O ENCAMINHAMENTO DE AMOSTRAS BIOLGICAS

1.1 SOLICITAO DE EXAMES


A solicitao para realizao de exames no LACEN-CE se d de trs formas:

1.1.1. Coleta de amostras no LACEN-CE


Atravs de solicitao/requisio, assinada e carimbada pelo mdico, (com exceo de Dengue, cuja
solicitao no obrigatria), e preenchimento das Fichas Epidemiolgicas (Anexo A) e/ou as
Formulrio de Encaminhamento de Amostras (Anexo A).

1.1.2. Horrio de Coleta de amostras:


O Atendimento na recepo do LACEN-CE para a coleta de amostras biolgicas ocorre das 07h:
00min. s 15h:00min. de segunda sexta-feira.

1.1.3. Atendimento s Unidades de Sade dos municpios com encaminhamento de material


biolgico via transporte prprio.
Os profissionais das Unidades de Sade (Capital e Interior), responsveis pela entrega das amostras
devem ser cadastrados no LACEN-CE e so atendidos por ordem de chegada;

11

Toda amostra biolgica deve ser encaminhada ao LACEN-CE acompanhada da solicitao mdica,
(com nome completo e legvel do paciente), especificando o tipo de exame (exemplo: HBsAg e no
apenas hepatites virais) ou Ficha do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL (Anexo C)
assinada pelo mdico ou enfermeiro requisitante, bem como acompanhado da Ficha Epidemiolgica,
quando se tratar de suspeita de doenas de notificao compulsria e o Formulrio de Encaminhamento
de Amostras (Anexo B);

1.1.4. Entrega do Material Biolgico


A amostra deve estar acondicionada em recipiente apropriado e de forma adequada, conforme item
4.1.4.4. deste Manual.
As amostras de soro devem ser enviadas obrigatoriamente em tubo de ensaio vedado com tampa de
borracha ou com tampa de plstico rosqueada, com etiqueta contendo o nome completo e legvel.

ATENO: No sero recebidas amostras em tubos de penicilina, pois no possuem vedao


adequada, causando derramamento quando do transporte. Antes do recebimento devem ser
conferidos os seguintes itens:

Requisio/Solicitao do mdico ou Ficha do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL;


Nome completo do paciente no frasco ou tubo contendo a amostra;
Nome do paciente no formulrio padronizado para encaminhamento de amostras.

Observaes:
As solicitaes de exames da Carga Viral, linfcitos CD4/CD8 e Genotipagem para HIV e para
Hepatite C (coleta no LACEN-CE), devem vir acompanhados da Autorizao de Procedimentos
de Alta Complexidade - APAC (Anexo A), sendo um para cada amostra, devidamente
preenchida, ressaltando-se o Nmero do Carto Nacional de Sade CNS.

1.1.5. Entrega dos resultados


Os resultados cadastrados no GAL sero disponibilizados on-line e podero ser impressos na unidade
solicitante. Os resultados no cadastrados no GAL sero entregues de acordo com os prazos de entrega
12

descritos neste Manual, aos mesmos profissionais cadastrados no LACEN-CE que fazem a entrega das
amostras. No sero informados resultados por telefone.

1.1.6. Atendimento coletivo em caso de surtos


O material encaminhado por meio da Vigilncia Epidemiolgica, para realizao de ensaios para
elucidao de casos suspeitos de doenas de notificao compulsria e outros agravos de interesse da
sade pblica e devem ser acompanhadas da respectiva Ficha Epidemiolgica (Anexo A) e/ou
Formulrio de Encaminhamento de Amostras (Anexo B).

02. PREENCHIMENTO DO CADASTRO DO PACIENTE (GAL)

As amostras provenientes das unidades da Rede Estadual e Municipal de Sade para realizao de
exames na Diviso de Biologia Mdica ingressam no LACEN atravs do setor de coleta e do setor de
recebimento de amostras e so cadastradas atravs do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL.

Para pacientes que so atendidos no LACEN-CE, o cadastro realizado no prprio laboratrio. Para as
amostras provenientes de outras unidades, os cadastros so realizados na prpria unidade responsvel
pelo envio.

Os dados necessrios esto descritos na Ficha do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL


(Anexo C)

03. CAUSAS PR-ANALTICAS DE VARIAES DOS RESULTADOS DE EXAMES


LABORATORIAIS:

3.1. VARIAO CRONOBIOLGICA


Corresponde s alteraes cclicas da concentrao de um determinado parmetro em funo do tempo.
O ciclo de variao pode ser dirio, mensal, sazonal, anual, etc. Por exemplo, nas concentraes do
ferro e do cortisol no soro, as coletas realizadas tarde fornecem resultados at 50% mais baixos do
que os obtidos nas amostras coletadas pela manh. A concentrao de aldosterona cerca de 100%
mais elevada na fase pr - ovulatria do que na fase folicular.
13

A melhor condio para coleta de sangue para realizao de exames de rotina o perodo da manh,
embora no exista contraindicao formal de coleta no perodo da tarde, salvo aqueles parmetros que
sofrem modificaes significativas no decorrer do dia (ex.: cortisol, TSH, etc.). Recomenda-se que
exista uma indicao do horrio em que foi realizada a coleta, evitando interpretao equvoca do
resultado.

3.2. GNERO
Alm das diferenas hormonais especficas e caractersticas de cada sexo, outros parmetros
sanguneos e urinrios se apresentam em concentraes significativamente distintas entre homens e
mulheres, em decorrncia das diferenas metablicas e outros fatores.

3.3. IDADE
Alguns parmetros bioqumicos possuem concentrao srica dependente da idade do indivduo. Esta
dependncia resultante de diversos fatores, como maturidade funcional dos rgos e sistemas,
contedo hdrico e massa corporal.

3.4. POSIO
Mudana rpida na postura corporal pode causar variaes na concentrao de alguns componentes
sricos.

3.5. ATIVIDADE FSICA


A coleta de amostras deve ser feita com o paciente em condies basais, mais facilmente reprodutveis
e padronizveis. O efeito da atividade fsica sobre alguns componentes sanguneos, em geral
transitrio e decorre da mobilizao de gua e outras substncias entre os diferentes compartimentos
corporais, das variaes nas necessidades energticas do metabolismo e da eventual modificao
fisiolgica que atividade fsica condiciona. O esforo fsico pode causar aumento da atividade srica de
algumas enzimas (creatinoquinase, aldolase e aspartato aminotransferase), que pode persistir por 12 ou
24 horas.

14

3.6. JEJUM
O perodo de jejum habitual para a coleta de sangue de rotina de 8 horas, podendo ser reduzido h 4
horas, para a maioria dos exames. Em crianas na primeira infncia ou lactentes, pode ser de uma ou
duas horas apenas. Os estados ps-prandiais, em geral, causam turbidez no soro, o que pode interferir
em algumas metodologias.

3.7. DIETA
A dieta a que o indivduo est submetido, mesmo respeitado o perodo regulamentar de jejum, pode
interferir na concentrao de alguns componentes, na dependncia das caractersticas orgnicas do
prprio paciente.

3.8. USO DE FRMACOS E DROGAS DE ABUSO


Podem causar variaes nos resultados de exames laboratoriais, seja pelo prprio efeito fisiolgico in
vivo (induo e inibio enzimticas), ou por interferncia analtica in vitro (reaes cruzadas). Ex. O
lcool e o fumo. Mesmo o consumo espordico de etanol pode causar alteraes significativas e
imediatas na concentrao plasmtica de glicose, de cido lctico e de triglicrides, o fumo causa
elevao na concentrao da hemoglobina, no nmero de leuccitos e de hemcias e no volume
corpuscular mdio; reduo na concentrao de HDL-colesterol e elevao de outras substncias como
adrenalina, aldosterona, antgeno carcioembrinico e cortisol.

3.9. APLICAO DO TORNIQUETE


Se o torniquete for utilizado por mais de 2 minutos, pode haver um aumento da presso intravascular na
veia, ocorrendo alteraes metablicas, tais como glicose anaerbica, que eleva a concentrao de
lactato, com reduo do pH.

Figura 01: Aplicao do Torniquete


15

3.10. PROCEDIMENTOS DIAGNSTICOS


A administrao de contrastes para exames radiolgicos ou tomogrficos, eletroneuromiografia e/ou
teraputicos como cirurgias, hemodilise, transfuso sangunea, devem ser lembrados como outras
causas de variaes dos resultados laboratoriais.

3.11. INFUSO DE FRMACOS


Deve se aguardar pelo menos 01 hora aps a infuso, para se realizar a coleta.

3.12. GEL SEPARADOR


Funciona como um acelerador da coagulao, podendo eventualmente, liberar partculas que interferem
com eletrodos seletivos e membranas de dilise e podem causar variaes do volume da amostra e
interferir em determinadas dosagens.

Figura 02: Tubos de coleta com Gel Separador


3.13. HEMLISE
Se for de intensidade significativa causa aumento na atividade plasmtica de algumas enzimas e nas
dosagens de potssio, magnsio e fosfato e pode ser responsvel por resultados falsamente reduzidos de
insulina.

Figura 03: Amostras com diferentes graus de hemlise


16

3.14. LIPEMIA
Pode interferir na realizao de exames que usam metodologias calorimtricas ou turbidimtricas.

Figura 04: Amostras com diferentes graus de lipemia

04. INSTRUES IMPORTANTES QUE DEVEM SER PASSADAS AO PACIENTE


A suspenso de medicamentos somente pode ser autorizada pelo mdico do paciente. O laboratrio
deve anotar o horrio da ltima dose e registrar esta informao no laudo;
A ingesto de pequena quantidade de gua, antes da coleta, no quebra o jejum;
O fumo e o caf no so permitidos antes da coleta, pois podem interferir na exatido dos
resultados;

Ateno: O procedimento de coleta realizado de maneira correta, a identificao adequada e


observncia quanto ao horrio de coleta, so etapas fundamentais para garantia da qualidade e
confiabilidade dos resultados.

4.1. COLETA DE SANGUE

4.1.1. Equipamentos e material de segurana necessrio


Equipamentos de Proteo Individual: jaleco, mscara, culos, luvas descartveis;
Algodo hidrfilo;
lcool iodado a 1% ou lcool etlico a 70%;
Agulha e seringa descartvel;
Sistema vcuo: suporte, tubo e agulha descartvel;
Tubos de ensaio com tampa;
17

Etiquetas para identificao de amostras;


Caneta;
Recipiente com a boca larga, com paredes rgidas e tampa para o descarte de material
perfurocortantes - resduo tipo E RDC N 306/04;
Estantes para tubos

4.1.2. Procedimentos que devem ser observados para o incio da coleta de sangue

Locais de escolha para a puno da veia:


As veias baslica mediana e a ceflica so as mais utilizadas, sendo que, a baslica mediana a
melhor opo, pois a ceflica mais propensa formao de hematomas (Fig. 05);
No dorso da mo, o arco venoso dorsal o mais recomendado por ser mais calibroso (Fig. 06).

Figura 05

Figura 06

reas a serem evitadas:


Locais com cicatrizes de queimadura;
reas com hematoma;
Membro superior prximo ao local onde foi realizado mastectomia, cateterismo ou qualquer outro
procedimento cirrgico.

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Tcnicas para evidenciao da veia:

Pedir para o paciente abaixar o brao e fazer movimentos suaves de abrir e fechar a mo;

Massagear delicadamente o brao do paciente (do punho para o cotovelo);

Fixao das veias com os dedos nos casos de flacidez.

Uso adequado do torniquete:


Posicionar o brao do paciente, inclinando-o para baixo partir da altura do ombro;
Posicionar o torniquete com o lao para cima, a fim de evitar a contaminao da rea de puno;
Usar o torniquete por no mximo dois minutos;
Aplicar o torniquete cerca de 8 cm acima do local da puno para evitar contaminao do local;
Ao garrotear, pedir ao paciente para fechar a mo para evidenciar a veia;
No aperte intensamente o torniquete, pois o fluxo arterial no deve ser interrompido.
Ateno: No aplicar o procedimento de bater na veia com dois dedos, isto pode provocar
hemlise e alterar os resultados analticos.

Posio do paciente:
Paciente sentado: de maneira confortvel, numa cadeira prpria para coleta de sangue. O brao
deve estar apoiado firmemente no descanso e o cotovelo no deve ser dobrado;
Paciente acomodado em leito: solicitar ao paciente que se coloque em posio confortvel, colocar
um travesseiro embaixo do brao do qual ser coletada a amostra.

Antissepsia e higienizao das mos:

Sabonete lquido comum ou bactericida;

Papel toalha absorvente.

Observao: Antes de iniciar qualquer exame no laboratrio, retirar anis, pulseiras, relgio e
quaisquer adereos das mos e braos.
4.1.3. Esquema para lavagem de mos (Figura 07)
Abrir a torneira com a mo no dominante (para destro, usar a mo esquerda; para o canhoto,
direita);
Molhar as mos, sem encostar-se a pia ou lavatrio;
19

Ensaboar as mos, friccionando-as por aproximadamente 15 a 30 segundos, atingindo: palma das


mos; dorso das mos; espaos interdigitais; polegar; articulaes; unhas e extremidades; dedos e
punhos;
Enxaguar as mos, tirando o sabo com bastante gua corrente;
Enxugar com papel absorvente;
Fechar a torneira utilizando o papel absorvente ou os cotovelos;
Calar as luvas e executar o trabalho de rotina no laboratrio;
Quando terminar os exames, retirar as luvas com cuidado pelo avesso e colocar na lixeira de pedal
para material infectante;
Tornar a lavar as mos, de acordo com as instrues acima.

4.1.3.1 Observaes importantes


No enxugar as mos com toalha de tecido;
No usar sabonete em barra;
Colocar as luvas com cuidado, para evitar que se rasguem, devem ficar bem aderidas pele para
evitar a perda da sensibilidade nas mos.

20

Figura 07

4.1.4 Tcnica de Coleta de Sangue

4.1.4.1. Coleta de sangue venoso com seringa e agulha descartveis

Verificar se a cabine de coleta est limpa e guarnecida com o material necessrio para iniciar as
coletas;

Solicitar ao paciente que diga seu nome completo para confirmao do pedido mdico e etiquetas;
Conferir e ordenar todo material a ser usado no paciente (tubos, gaze, torniquete, etc.). Esta
identificao deve ser feita na frente do paciente;
Inform-lo sobre o procedimento;
Abrir o lacre da agulha de coleta mltipla de sangue a vcuo em frente ao paciente;
Higienizar as mos e calar as luvas;
Caso use o torniquete, pedir para que o paciente abra e feche a mo, afroux-lo e esperar 2 minutos
para us-lo novamente;
Realizar a antissepsia, do local da puno:
Usar gaze com lcool etlico 70%, comercialmente preparado;
Limpar o local com movimento circular do centro para a periferia;
Permitir a secagem da rea por 30 segundos;
No assoprar, no abanar e no colocar nada no local;
No tocar novamente na regio aps a antissepsia
Garrotear o brao do paciente;
Retirar a proteo da agulha hipodrmica;
Fazer a puno num ngulo oblquo de 30, com o bisel da agulha voltado para cima. Se necessrio,
para melhor visualizar a veia, esticar a pele com a outra mo (longe do local onde foi feita a
antissepsia);
Quando o sangue comear a fluir dentro da seringa, desgarrotear o brao do paciente e pedir para
que abra a mo;
Aspirar devagar o volume necessrio de acordo com a quantidade de sangue requerida na etiqueta
dos tubos. Aspirar o sangue evitando bolhas e espuma, e com agilidade, pois o processo de
coagulao do organismo do paciente j foi ativado no momento da puno;
Retirar a agulha da veia do paciente;
21

Ter cuidado com a agulha para evitar acidentes com perfurocortantes, descart-la em recipiente
adequado, sem a utilizao das mos;
Exercer presso no local, de 1a 2 minutos, evitando a formao de hematomas e sangramentos;
Orientar o paciente para que no dobre o brao, no carregue peso ou bolsa a tiracolo no mesmo
lado da puno, por no mnimo 1 hora;
Abrir a tampa do 1 tubo, deixar que o sangue escorra pela sua parede, devagar para evitar
hemlise;
Fechar o tubo e homogeneizar, invertendo-o suavemente de 5 a 10 vezes de acordo com o tubo
utilizado;
Abrir a tampa do 2 tubo, e assim sucessivamente at o ltimo tubo. No esquecer de fazer o
processo tubo a tubo, para evitar a troca de tampa dos tubos;
Ao final, descartar a seringa e agulha em recipiente apropriado para materiais perfurocortantes;
Verificar se existe alguma pendncia, certificar-se das condies gerais do paciente e liber-lo;
Colocar as amostras em local adequado ou encaminha-las imediatamente para processamento.

4.1.4.2. Coletas de sangue venoso a vcuo


Verificar se a cabine de coleta est limpa e guarnecida com o material necessrio para iniciar as
coletas;
Solicitar ao paciente que diga seu nome completo para confirmao do pedido mdico e etiquetas;
Conferir e ordenar todo material a ser usado no paciente (tubos, gaze, torniquete, etc.). Esta
identificao deve ser feita na frente do paciente;
Inform-lo sobre o procedimento;
Abrir o lacre da agulha de coleta mltipla de sangue a vcuo em frente ao paciente;
Higienizar as mos e calar as luvas;
Caso use o torniquete, pedir para que o paciente abra e feche a mo, afroux-lo e esperar 2 minutos
para us-lo novamente;
Fazer a antissepsia (conforme item 4.1.4.1);
Garrotear o brao do paciente;
Retirar a proteo que cobre a agulha de coleta mltipla de sangue a vcuo;

22

Fazer a puno num ngulo oblquo de 30, com o bisel da agulha voltado para cima. Se necessrio,
para melhor visualizar a veia, esticar a pele com a outra mo (longe do local onde foi feita a
antissepsia);
Quando o sangue comear a fluir dentro do tubo, desgarrotear o brao do paciente e pedir para que
abra a mo;
Realizar a troca de tubos sucessivamente;
Homogeneizar imediatamente aps a retirada de cada tubo, invertendo-o suavemente de cinco a dez
vezes;
Aps a retirada do ultimo tubo, remover a agulha e fazer compresso no local da puno, com
algodo ou gaze seca;
Exercer presso no local, de 1 a 2 minutos, evitando a formao de hematomas e sangramentos;
Descartar a agulha aps a retirada do brao do paciente, em recipiente para materiais
perfurocortantes;
Orientar o paciente para que no dobre o brao, no carregue peso ou bolsa a tiracolo no mesmo
lado da puno, por no mnimo 1 hora;
Verificar se existe alguma pendncia, certificar-se das condies gerais do paciente e liber-lo;
Colocar as amostras em local adequado ou encaminh-las imediatamente para processamento.

23

Figura 8: Tcnica de Coleta de Sangue Vcuo

4.1.4.3. Orientaes para Coleta fora do LACEN-CE

Para a coleta de sangue o paciente deve estar, preferencialmente, em jejum;

A quantidade de sangue coletada varia de acordo com o nmero de exames a serem realizados (em
mdia 5,0 ml sangue para se obter mais ou menos 2,0 ml de soro);

Se a coleta for realizada com seringa, retirar a agulha ao transferir o sangue para tubos de ensaio
para evitar a hemlise. Os tubos devem estar obrigatoriamente, limpos, secos e estreis, com
capacidade entre 05 e 10 ml. Coletores do tipo Vacutainer j vm prontos para o uso;

O sangue deve ficar em repouso para retrao do cogulo, preste ateno nessas dicas:
O intervalo de tempo de retrao indicado pelo fabricante do tubo deve ser respeitado antes da
centrifugao, para evitar a presena de fibrina.

24

Figura 9: Amostra com fibrina aps centrifugao

A relao tempo/coagulao pode variar conforme o fabricante do tubo, se o tubo possui gel
separador e acelerador do cogulo. Consulte o fornecedor.
prtica em alguns laboratrios a troca constante do fornecedor de tubos. Essa conduta dificulta a
padronizao da coleta e do tempo de retrao.
Uma vez coletada a amostra e as inverses do tubo realizadas conforme indica o fabricante,
posicione o tubo em p numa estante e no mexa mais at finalizar a retrao. De outra forma, voc
est interferindo na retrao e pode induzir hemlise.
Pacientes que tem algum distrbio na produo de protenas, suas amostras podem interferir na
formao da barreira de gel, causando mudanas na densidade do soro de forma que parte deste vai
ficar abaixo do gel depois da centrifugao. Pode tambm impedir o movimento do gel separador.
Pacientes portadores de mieloma mltiplo, a barreira de gel pode se misturar ao soro e s clulas
sanguneas, porque a imunoglobulina inibe os trs estgios de formao da fibrina. O gel no se
move.

Centrifugar a 5.000 rpm por 5 minutos, obtendo-se assim o soro que ser separado;

O soro deve ser lmpido e isento de hemlise;

A quantidade deve variar entre 01 a 03 ml, conforme o nmero de exames;

Colocar o soro em frascos limpos, secos e estreis, bem fechados. Os frascos com soro a serem
enviados, devem ser conservados em congelador, se o tempo for superior a 02 (dois) dias; se for
inferior a 02 (dois) dias podem ser conservados em geladeira (2 a 8 C);

O envio do material ao LACEN deve ser feito no prazo de at 06 horas, no caso de CD4/CD8 e
Carga viral;

O frasco com soro deve estar devidamente etiquetado com o nome completo do paciente, idade,
data da coleta, unidade de procedncia;

As requisies/solicitaes mdicas devem ser preenchidas observando os dados abaixo:


25

a. Nome completo do paciente;


b. Idade;
c. Sexo;
d. Unidade de Procedncia e Clula Regional de Sade;
e. Exames solicitados;
f. Nome do mdico e CRM;
g. Qualquer outro dado que seja de interesse, relacionado com o exame e diagnstico pedido;
No caso de exames de CD4 e CD8 e carga viral, enviar o formulrio para autorizao de
Procedimento de Alta Complexidade APAC e o N do Carto Nacional de Sade

Figura 10: Carto Nacional de Sade


No caso de exames para o diagnstico de Doenas de Notificao Compulsria, preencher todos os
dados da Ficha Epidemiolgica correspondente (Anexo A).

26

4.1.4.4. Acondicionamento das amostras para transporte

Figura 11 - Caixa para Acondicionamento e Transporte


Comunicar o envio das amostras ao destinatrio, com a data e o horrio de chegada, previstos;
Acondicionar os tubos com as amostras em uma estante, dentro de um saco plstico, transparente,
bem vedado;
Colocar o saco com amostras em caixa trmicas para transporte, as quais devem ser de material
rgido, lavvel, impermevel, com tampa, cantos e bordas arredondados e devidamente
identificados, contento gelo reciclvel;
Caso voc no disponha de gelo reciclvel, colocar cubos de gelo dentro de um saco plstico bem
vedado evitando o vazamento da gua, e descongelamento do gelo;
A quantidade de gelo utilizada deve corresponder a, no mnimo, 1/3 do volume da embalagem;
Colocar em um envelope protegido com um saco plstico, as informaes devidamente conferidas
relativas amostra;
Prender com fita adesiva, esse envelope na parte interna da tampa da caixa trmica;
Colar, na parte externa da tampa, uma etiqueta com o nome da instituio destinatria, endereo,
nome do responsvel pelo recebimento, nome da instituio remetente, endereo, telefone, horrio
de envio e validade da embalagem.
Colocar uma etiqueta com o smbolo de Risco biolgico.

Validade: O prazo de validade da embalagem depende do tipo de gelo utilizado:


27

Gelo reciclvel: at 30 horas de validade.


Gelo comum acondicionado em saco plstico: at 15 horas de validade.

Temperatura: As amostras devem ser acondicionados temperatura de 2 a 8C. Embora varie de


acordo com diferentes analitos, para a maioria recomendada a temperatura de chegada das amostras
entre 14 e 26 C. Altas temperaturas no transporte e centrifugao aceleram a deteriorao dos
constituintes sanguneos e em temperatura abaixo de 0 C podem causar hemlise.

Posicionamento dos tubos: em posio vertical, para evitar derramamento da amostra.

05. ORIENTAES DE BIOSSEGURANA PARA AS ATIVIDADES DE COLETA,


ACONDICIONAMENTO E TRANSPORTE DE AMOSTRAS.

Usar os Equipamentos de Proteo Individual - EPI e Equipamentos de Proteo Coletiva EPC,


necessrios, sempre, ao manipular material biolgico;

5.1 EQUIPAMENTOS DE PROTEO INDIVIDUAL - EPI

So roupas ou equipamentos utilizados para proteger o trabalhador, do contato com agentes


infecciosos, txicos, corrosivos, calor excessivo e outros perigos, bem como o seu experimento ou
produto. Portaria. 32/4-NR-6-MT 08/06/78.

Jaleco: uso em todos os tipos de procedimentos, com as seguintes caractersticas: manga longa com
elstico no punho, comprimento mnimo na altura dos joelhos, abertura frontal e de tecido
preferencialmente de algodo ou tecido no inflamvel; (Figura 12)

28

Figura 12
Luvas: para coleta, manuseio e acondicionamento de materiais biolgicos; pode ser de
procedimento ou cirrgica, em ltex; (Figura 13)

Figura 13
culos de proteo: usar em situaes de risco de formao de aerossis, salpicos de material
contaminado ou quebras de vidraria; (Figura 14)

Figura 14

29

Mscara de Proteo Respiratria e Facial: usar em situaes de risco de formao de aerossis e


salpicos de material potencialmente contaminado. (Figura 15)

Figura 15

5.2. EQUIPAMENTOS DE PROTEO COLETIVA EPC

So equipamentos que possibilitam a proteo do trabalhador, do meio ambiente e do produto ou


pesquisa desenvolvida.
Dispositivos de pipetagem nunca usar a boca para pipetar, porque alm do risco de aspirao,
torna mais fcil a inalao de aerossis. Utilizar um dos vrios tipos de bulbos, pra ou pipetadores
(Figura 16).

30

Figura 16 - Modelos de Dispositivos de Pipetagem


Cabines de Segurana Biolgica CSB So usadas como barreira primria para evitar fuga de
aerossis, dando proteo ao manipulador, ao meio ambiente e amostra ou procedimento (Figura
17)

Figura 17
Kit para limpeza (saco para autoclave, p, escova, balde, etiquetas, protetores de sapatos) em casos
de derramamentos e quebras de materiais contaminados; (Figura 18)
31

Figura 18
Kit de Primeiros Socorros. (Figura 19)

Figura 19

5.3. DESCARTE DE MATERIAIS CONTAMINADOS E PERFUROCORTANTES


Agulhas, seringas, tubos quebrados, tubos contendo sangue ou soro devem ser desprezados em
recipientes de paredes rgidas com tampa (latas de leite em p ou similares podem ser utilizadas) e
sinalizadas como INFECTANTE ou em caixas coletoras prprias para material infectante,
conforme Figura 20.

32

Figura 20 - Modelo de caixa coletora de materiais perfurocortantes infectantes.


Papis, luvas, gaze, algodo e outros devem ser recolhidos em lixeiras com tampa, de preferncia
com pedal, contendo saco para lixo especfico para material infectante (cor branca leitosa).
Nota:
1. Se no houver no municpio coleta de lixo especial para este tipo de resduo, este dever ser
autoclavado antes do descarte em lixo comum.
2. Todo resduo gerado por materiais altamente contaminantes como as culturas, amostras da
tuberculose e outros devem ser autoclavados em sacos prprios para autoclave, antes do descarte
(Figura 21).
3. Para a autoclavao, o saco deve ser preenchido somente at dois teros da sua capacidade e
recomenda-se abri-lo dentro da autoclave para melhor penetrao do vapor no seu contedo.

Figura 21 - Saco de autoclave com material contaminante


33

5.4. BOAS PRTICAS DE BIOSSEGURANA


O uso das luvas no substitui o ato de lavar as mos, que deve ser feito aps cada manipulao com
as amostras;
Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patognica;
proibido comer, beber, fumar e aplicar cosmticos nas reas de trabalho;
Uso de roupas de proteo no interior do laboratrio, no sendo permitida a circulao com as
mesmas em reas externas;
Cuidado para evitar a formao de aerossis - uso incorreto de centrfugas, homogeneizadores,
agitadores, agitao, flambagem de alas de platina;
No permitida a entrada de pessoas estranhas no laboratrio;
As bancadas do laboratrio devem ser impermeveis e resistentes a cidos, solventes e calor;
A Limpeza da bancada de trabalho deve ser feita com lcool a 70% no incio e no trmino das
atividades ou sempre que houver necessidade;
Quando houver derramamento de material biolgico, limpar imediatamente com soluo de
hipoclorito a 2% em preparao diria.

Notas:
1. Se no houver lcool 70% pronto, realizar o preparo a partir do lcool 96 (lcool comercial), na
proporo de 73 ml do lcool para 27 ml de gua;
2. No uso de gua sanitria a 2%, observar sempre o prazo de validade e no manter a embalagem
aberta ou com furo na tampa, porque o hipoclorito evapora e, em diluies menores, perde sua
funo desinfetante.
No deve ser feito o recapeamento de agulhas;
Todo e qualquer acidente dentro do laboratrio deve ser notificado ao chefe imediato.
No manuseie maanetas, telefones, puxadores de armrios, usando luvas;
Os sapatos devem ser fechados, no sendo permitido o uso de sandlias dentro da rea hospitalar e
laboratorial.
No manusear amostras em trnsito;
34

No contaminar a superfcie externa do frasco de coleta e verificar se o mesmo est firmemente


vedado. Caso ocorram respingos ou contaminao na parte externa do frasco, proceder
descontaminao com lcool a 70% ou outra soluo descontaminante disponvel;
No contaminar a requisio mdica que acompanha o material;
Identificar claramente a amostra coletada, com todos os dados necessrios. Colocar a identificao
no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre o rtulo;
Em caso de derramamento de material orgnico, proceder da seguinte maneira:
1. Isolar a rea sinalizar;
2. Usar equipamento de proteo individual (EPI);
3. Cobrir o derramamento com material absorvente, por exemplo: toalha de papel;
4. Verter, desinfetante sobre o material absorvente e nas bordas do derramamento;
5. Ateno com a formao de respingos;
6. Verificar e observar as concentraes indicadas e o tempo de contato;
7. Aguardar trinta minutos;
8. Iniciar a limpeza;
9. Cuidado com sapatos e roupas, retir-los aps a limpeza;
10. Todos os materiais e equipamentos utilizados na limpeza devero ser autoclavados aps o uso;
11. Nunca pegar os cacos de vidro com as mos;
12. A limpeza dever ser efetuada mecanicamente com pina, escova autoclavvel, p metlica ou
de outro material autoclavvel;
13. Os cacos de vidro devem ser descartados em recipiente especfico para perfurocortantes.

Figura 22 Derramamento de amostras biolgicas


35

06. CRITRIOS GERAIS DE ACEITAO E REJEIO DE AMOSTRAS BIOLGICAS

As amostras sem condies de realizao de exames sero devolvidas mediante justificativa por escrito
de acordo com os critrios de rejeio abaixo:
Acondicionamento inadequado;
Amostra com identificao ilegvel;
Amostra com identificao inadequada;
Amostra contaminada;
Amostra em temperatura inadequada;
Amostra hemolisada*;
Amostra imprpria para anlise solicitada;
Amostra insuficiente;
Amostra no correspondente indicada;
Amostra sem identificao;
Amostra derramada;
Amostra sem requisio;
Cadastro incorreto da amostra;
Coleta inadequada;
Identificao do paciente diferente da amostra e requisio;
Preenchimento inadequado da requisio/Ficha epidemiolgica;
Recipiente quebrado no transporte;
Recipiente sem amostra;
Requisio ilegvel;
Requisio imprpria;
Requisio recebida sem amostra;
Requisio sem identificao do profissional responsvel;
Chegada da amostra aps o horrio de recebimento (at 15h00min horas).
Outros especficos dos ensaios.
36

*A hemlise causa mais frequente de rejeio de amostras de sangue. Ela pode aparecer na obteno
da amostra:
Punes repetidas;
Uso prolongado de torniquete;
Veias finas ou frgeis;
Inadequado processamento de separao e estocagem da amostra;
Cateter parcialmente obstrudo;
Dimetro da agulha inadequado;
Contaminao de lcool de pele para a amostra;
Exposio da amostra a temperaturas extremas;
Centrifugao a alta velocidade;
Hemoglobina extracelular superior a 0,3g/L;
Transporte inadequado.
07. PROCEDIMENTOS REALIZADOS NO LACEN-CE

7.1. CITOMEGALOVRUS - SOROLOGIA IgM E IgG


Mtodo: Quimiluminescncia
Material: 1,0ml de soro
Perodo da Coleta: Suspeita clnica
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas.
Critrios de Rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.2. DENGUE
a) Exame: Deteco de Antgenos NS1.
Mtodo: ELISA
Material: 2,0 mL de soro
Perodo da Coleta: Coletar at o 5 dia do incio dos sintomas, de preferncia, at o 3 dia. Preencher
corretamente a Ficha de Encaminhamento de amostras.
37

Preparo do paciente: No necessrio jejum


Critrios de rejeio de amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

b) Exame: Deteco de anticorpos contra o vrus da dengue


Mtodo: ELISA
Material: 2,0 mL de soro
Perodo da Coleta: Aps o 5 dia do incio dos sintomas. Preencher corretamente a Ficha de
Encaminhamento de amostras.
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

c) Exame: Isolamento Viral


Mtodo: Cultura de Clulas
Material: 2,0 mL de soro
Perodo da Coleta: Coletar at o 5 dia do incio dos sintomas, de preferncia, at o 3 dia. Preencher
corretamente a Ficha de Encaminhamento de amostras. Conservar amostra refrigerada (2 8 C). No
congelar. Enviar imediatamente para o LACEN.
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.3. DOENA DE CHAGAS


Mtodos: Enzimaimunoensaio ELISA
Imunofluorescncia Indireta
Hemaglutinao
Material: 2,0ml de soro
Perodo da Coleta: 10 dias aps o incio dos sintomas suspeitos
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
38

Prazo de Entrega: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.4. HEPATITE A - Anti-HVA Total e anti-HVA IgM


Mtodo: Quimiluminescncia
Material: 2,0 ml de soro
Perodo da Coleta: Suspeita clnica
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.5. HEPATITE B - HbsAg, HbeAg , Anti- HBs, Anti-HBc total, anti-HBC IgM, anti-Hbe
Mtodo: Quimiluminescncia
Eletroquimioluminescncia
Material: 2,0 ml de soro
Perodo da Coleta: Suspeita clnica
Preparo do paciente: Jejum de 4 horas.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.6. HBV - DNA (quantitativo)


Mtodo: PCR em tempo real
Material: 2 amostras de 5 mL de sangue total coletado com EDTA
Perodo da Coleta: Monitoramento do tratamento. Preencher corretamente a Ficha Epidemiolgica
Preparo do paciente: No necessrio jejum
Critrios de rejeio de amostras: Amostras coletadas com o anticoagulante citrato ou fluoreto.
Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.7. HEPATITE C anti HCV


Mtodo: Quimiluminescncia
Eletroquimioluminescncia
Material: 2,0 ml de soro
39

Perodo da Coleta: Suspeita clnica. Preencher corretamente a Ficha Epidemiolgica.


Preparo do paciente: Jejum de 4 horas.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.8. HEPATITE C (QUANTITATIVO) CARGA VIRAL


Mtodo: PCR em tempo real
Material: 2 amostras de 5 mL de sangue total coletado com EDTA e 1 amostra de soro.
Perodo da Coleta: Suspeita clnica e monitoramento do tratamento. Preencher corretamente a
Ficha Epidemiolgica
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de amostras: Amostras coletadas com o anticoagulante citrato ou fluoreto.
Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.9. HEPATITE C (QUALITATIVO)


Mtodo: PCR em tempo real.
Material: 2 amostras de 5 mL de sangue total coletado com EDTA e 1 amostra de soro.
Perodo da Coleta: Suspeita clnica e monitoramento do tratamento. Preencher corretamente a
Ficha Epidemiolgica
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de amostras: Amostras coletadas com o anticoagulante citrato ou fluoreto.
Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.10. HEPATITE C (GENOTIPAGEM)


Mtodo: LIPA
Material: 2 amostras de 5 mL de sangue total coletado com EDTA e 1 amostra de soro.
Perodo da Coleta: Suspeita clnica e monitoramento do tratamento. Preencher corretamente a
Ficha Epidemiolgica
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de amostras: Amostras coletadas com o anticoagulante citrato ou fluoreto.
40

Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.11. HIV
a) Exame: Pesquisa de anticorpos contra o vrus HIV-1 e HIV-2
Mtodos: Quimiluminescncia;
Imuno Blot
Imuno Blot Rpido
Material: 2,0 ml de soro.
Fase da Coleta: Suspeita clnica. O teste de Imuno Blot rpido realizado aps teste de triagem (
Ensaio imunolgico quimioluminescente ) com resultado soro reagente.
Preparo do paciente: Jejum de 4 h.
Critrios de rejeio de amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.
b) Exame: Contagem de linfcitos CD4+ CD8+
Mtodo: Citometria de Fluxo.
Material: 5,0 ml de sangue colhido com EDTA. Homogeneizar a amostra, por inverso, para evitar a
formao de cogulos. No utilizar homogeneizador mecnico.
Preparo do paciente: no necessrio jejum ou qualquer preparo especial do paciente para a
realizao do exame, entretanto, o jejum recomendvel, como forma de padronizao da coleta e
diminuio de variveis de erro. Em caso onde o jejum no for possvel, deve-se evitar a coleta aps a
ingesto de alimentos gordurosos nas ltimas 03 horas.
Critrios de Rejeio de Amostras: Amostras de sangue total que apresente cogulos, microcogulos,
lipemia ou hemlise acentuada ou que no foi coletada com o anticoagulante EDTA; Amostras
acondicionadas em baixas temperaturas. O transporte dever ser feito em Temperatura Ambiente (entre
20C e 25C); Amostras coletadas aps um perodo de 6 horas.
Prazo de entrega dos resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

Ateno: No teste de CD4, utiliza-se o sangue total, que nunca deve ser colocado em geladeira ou
congelador. O correto manter sempre o sangue em temperatura ambiente (entre 20C e 25C).
41

As amostras devem chegar ao laboratrio de execuo do exame em, no mximo, 6 horas aps a
coleta. No sero recebidas amostras para realizao de exames s sextas-feiras.

c) Quantificao de RNA do HIV-1 (CARGA VIRAL)


Mtodo: Tempo Real
Material: 5,0 ml de sangue colhido com EDTA. Separar o plasma e enviar imediatamente ao
laboratrio de execuo do exame.
Preparo do paciente: no necessrio jejum ou qualquer preparo especial do paciente para a
realizao do exame, entretanto, o jejum recomendvel, como forma de padronizao da coleta e
diminuio de variveis de erro. Em caso onde o jejum no for possvel, deve - se evitar a coleta aps a
ingesto de alimentos gordurosos nas ltimas 03 horas.
Critrios de Rejeio de Amostras: Amostras sem separao aps 4 horas de coleta; Amostra
refrigerada antes da separao; Volume de plasma inferior a 1000L ou 1,0 mL.
Prazo de entrega dos resultados: 15 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

Ateno: No sero recebidas amostras para realizao de exames s sextas-feiras

d) Exame: GENOTIPAGEM PARA HIV


Mtodo: TRUGENE
Material: 02 amostras de 5 ml de sangue total coletado com EDTA.
Preparo do paciente: recomendvel jejum de 8 h.
Procedimentos a serem observados na hora da coleta:

Rotular 02 tubos contendo anticoagulante, com o nome completo do paciente, acompanhados das
fichas de encaminhamento de amostras biolgicas com os dados do paciente e a data da coleta;

Coletar 5 ml de sangue total em um tubo com anticoagulante EDTA;

Inverter o tubo por 08 10 minutos, para misturar;

Colher 02 tubos com EDTA para cada paciente;

Centrifugar a 2.500 rpm em temperatura ambiente (15-25 C) / 15 minutos;

Transferir o plasma para os tubos de Eppendorf e armazen-los a temperatura de 65 a 80 C, at a


utilizao, ou no mximo de seis meses;
42

Transportar os tubos com plasma de 2 8 C, para entrega de 24 horas ou igual ou superior a 70


C, em gelo seco;

No congelar e descongelar o plasma por mais de 02 vezes.

Critrios de Rejeio de amostras: Soro fortemente hemolisado.


Prazo de entrega dos resultados: 30 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

Observao: Preencher corretamente os formulrios. Ver Anexo D e E.


Observaes: o plasma deve ser separado do sangue total at 30 minutos aps a coleta (escrever
no formulrio o dia e a hora da coleta).

7.12. LEISHMANIOSE VISCERAL (HUMANA)


Mtodos: Imunofluorescncia Indireta
Teste rpido imunocromatogrfico.
Material: 1,0 ml de soro.
Perodo da coleta: Suspeita clnica
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de Entrega dos resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.13. LEISHMANIOSE VISCERAL (CANINA)


Mtodos: Enzimaimunoensaio- ELISA
Material: 1,0 ml de soro.
Perodo da coleta: Coletado aps teste de triagem positivo (Teste Imunocromatogrfico Rpido Dual
Path Platform(DPP)).
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado.
Prazo de Entrega dos resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.14. LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA


Mtodos: Pesquisa do parasita no esfregao aps colorao
Material: Linfa da leso
Perodo da coleta: Imediatamente aps o aparecimento da leso.
43

Critrios de rejeio de Amostras: Uso de medicamentos no local da leso.


Prazo de Entrega dos Resultados: 7 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.15. MALRIA
Mtodos: Gota espessa e esfregao
Material: Sangue colhido da polpa digital (Enviar 2 lminas de gota espessa e 1 lmina de esfregao)
Perodo da coleta: Suspeita clnica
Critrios de rejeio de Amostras: Lmina quebrada e mal corada.
Prazo de Entrega dos Resultados: 07 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.16. PESTE
Mtodo: Hemoaglutinao Passiva
Material: 1 mL de soro humano ou animal
Perodo da Coleta: Humano: Imediatamente aps detectar a suspeita. Animais: Inqurito canino e
felino nas zonas pestgenas ou de busca ativa de casos. Roedores: busca ativa de roedores silvestres e
domsticos.
Preparo do Paciente: No necessrio jejum.
Critrios de Rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de Entrega dos Resultados: 15 dias corridos aps a chegada do material biolgico no LACEN
ou aps confirmao do laboratrio de referncia.

Observao: Em casos de peste pneumnica, o paciente deve sofrer isolamento estrito por 48 horas
aps o incio do tratamento. As pessoas que lidam com estes pacientes, devem usar mscara de
proteo respiratria - PFF1 ou N95, culos de proteo e jaleco.
Observao: Os EPIs e o material contaminado devero ser incinerados.

7.17. POLIOMIELITE (ENTEROVRUS)


Mtodo: Isolamento e Identificao do Vrus
Material: Fezes

44

Perodo da Coleta: No incio da doena, coletar 2 amostras de fezes com intervalo de (vinte e quatro)
24 horas

entre a 1 e a 2 amostras, em condies de esterilidade. Preencher corretamente a Ficha

epidemiolgica.

Observao: Exame enviado para a FIOCRUZ

7.18. ROTAVRUS
Mtodo: ELISA
Material: Fezes in natura. Coletar em coletores universais com tampa rosqueada, seco (sem meio de
transporte), identificar com o nome completo e acondicionar em saco plstico. Conservar em geladeira.
Transportar sob refrigerao em caixa trmica com gelo reciclvel.
Perodo da Coleta: Coletar logo aps o incio dos sintomas.
Critrios de Rejeio de Amostras: Amostras enviadas em meio de transportes.
Prazo de Entrega dos Resultados: 5 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.19. RUBOLA - SOROLOGIA IgM E IgG


Mtodo: ELISA
Material: 1,0 ml de soro.
Perodo da Coleta: A norma do Plano de Controle da Rubola, coletar uma amostra de sangue para o
exame sorolgico para deteco de anticorpos especficos, ao primeiro contato com o paciente. Esta
norma se aplica em todos os casos suspeitos de rubola (exceto em surtos / epidemia).
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Critrios de Rejeio de Amostras: No aplicvel.
Prazo de Entrega dos Resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico
no LACEN.
Recomendao: Preencher corretamente o Formulrio de Encaminhamento de Amostras de Casos
Suspeitos de Sarampo/Rubola e Sndrome de Rubola Congnita (SRC) para o Laboratrio (Anexo
A).

45

7.20. SARAMPO - SOROLOGIA IgM e IgG


Mtodo: ELISA
Material: 1,0 ml de soro.
Preparo do paciente: No necessrio jejum.
Perodo da coleta: Suspeita clnica. A amostra de sangue de caso suspeito deve ser colhida, sempre
que possvel, no primeiro contato com o do paciente. So consideradas oportunas as amostras
coletadas entre o 1 e o 28 dia do aparecimento do exantema. As coletadas aps o 28 dia so
consideradas tardias, mas devem, mesmo assim, ser aproveitadas e encaminhadas ao laboratrio para
realizao da pesquisa de IgM.
Critrios de rejeio de Amostras: No Aplicvel.
Prazo de Entrega: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.
Recomendaes: preencher corretamente as fichas epidemiolgicas e/ou o Formulrio de
Encaminhamento de amostras de Casos Suspeitos de Sarampo / Rubola e Sndrome de Rubola
Congnita ( SRC ) para o Laboratrio (Anexo A e B).

7.21. SFILIS - FTA-ABS


Mtodo: Imunofluorescncia indireta
Material: 2,0 ml de soro
Perodo da Coleta: Suspeita clnica.
Preparo do paciente: Jejum de 4 h.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de Entrega dos Resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.22. SFILIS - VDRL QUALITATIVO E QUANTITATIVO


Mtodo: Aglutinao
Material: 2,0 ml de soro
Perodo da Coleta: Suspeita clnica.
Preparo do paciente: Jejum de 4 h.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de Entrega dos Resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

46

7.23. TESTE DE TRIAGEM NEONATAL


a) Dosagem da Fenilalanina - PKU (Doena: Fenilcetonria)
b) Dosagem de TSH NEONATAL (Doena: Hipotireoidismo Congnito)
c) Pesquisa de hemoglobinopatias
Mtodo:
a) Enzimtico-colorimtrico
b) ELISA
c) Cromatografia liquida de alta eficincia - HPLC

Material: Sangue em papel filtro


Condio: Colher a amostra em papel filtro especial fornecido pelo laboratrio.
Deixar secar a temperatura ambiente, longe do sol, durante mais ou menos 3 horas. S colocar na
geladeira aps secagem completa, quando as amostras de sangue mudam da colorao vermelho - vivo,
para marrom - avermelhado. Envolver individualmente cada carto de coleta, em saco plstico ou
papel laminado para evitar molhar as amostras e ressecar o material.
Coleta: Limpar o calcanhar do recm-nato com lcool, esperar secar, puncionar, deixar o sangue fluir
at se formar uma gota bem espessa , embeber o carto at que o sangue traspasse o carto e
seja visto do outro lado , preencher todos os crculos . (ver Manual de Triagem Neonatal do Ministrio
da Sade (http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/triagem_neonatal.pdf))
Temperatura de transporte: Temperatura ambiente
Preparo do paciente: O teste s pode ser realizado depois que o recmnascido houver se alimentado
e tenha pelo menos 48 horas de vida. Amostras colhidas em um prazo inferior a este podem fornecer
resultados imprecisos devido ao fato do recm nascido no ter recebido alimentao completa e seu
metabolismo no estar totalmente normalizado. O perodo ideal para coleta do 3 ao 30 dia de vida.

Interferentes: uso de anticoagulantes, utilizar secador ou estufa para secar as amostras, colocar as
amostras no freezer ou em locais midos , deixar o material secar perto de janelas onde o
sol esteja batendo, colocar as amostras no envelope antes que estejam secas ou esquec-las por
vrios dias em altas temperaturas ou temperatura ambiente elevada.
Critrios de Rejeio de Amostras: Coleta inadequada, amostra ressecada, material insuficiente,
material com aspecto de diluio e material com fungos.
47

Prazo de entrega dos resultados: 10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.24. TOXOPLASMOSE - SOROLOGIA IgM e IgG


Mtodo: Quimiluminescncia
Material: 1,0 ml de soro
Perodo da coleta: Suspeita clnica
Preparo do paciente: Jejum de 4 h.
Critrios de rejeio de Amostras: Soro fortemente hemolisado ou lipmico.
Prazo de entrega dos Resultados: 05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.25. VRUS RESPIRATRIOS


Mtodo: Imunofluorescncia
Material: Secreo nasofarngea
Condio: Coletar o material em 3 swabs que sero inseridos um na orofaringe e os dois outros, um
em cada narina e coloc-los em um nico tubo contendo o MEM (Meio de transporte viral). Identificar
com nome completo do paciente de forma legvel e com caneta resistente a gua. As amostras devero
ser colocadas em caixas (trmicas) de paredes rgidas, que mantenham a temperatura adequada de
refrigerao (4 a 8C) at a chegada ao LACEN no prazo mximo de 24 horas. Para encaminhamento
posterior, manter em freezer a -20C e utilizar gelo seco para transporte. As amostras devem ser
encaminhadas com ficha epidemiolgica devidamente preenchida.
Perodo da Coleta: Coletar at o 5 dia do incio dos sintomas, de preferncia, at o 3 dia. Preencher
corretamente a Ficha de Encaminhamento de amostras. Enviar imediatamente para o LACEN.
Critrios de Rejeio de Amostras: Amostras enviadas em meio de transporte que no seja o MEM.
Prazo de entrega dos resultados: 05dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.26. INFLUENZA A H1N1


Mtodo: RT-PCR em tempo real
Material: Secreo nasofarngea
Condio: Idem ao anterior (7.2.4)
Perodo da Coleta: Coletar at o 5 dia do incio dos sintomas, de preferncia, at o 3 dia. Preencher
corretamente a Ficha de Encaminhamento de amostras. Enviar imediatamente para o LACEN.
48

Critrios de Rejeio de Amostras: Amostras enviadas em meio de transporte que no seja o MEM.
Prazo de entrega dos resultados: 05dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.
OBS.: Para encaminhamento posterior, manter em freezer a -20C e utilizar gelo seco para transporte.

7.27. RAIVA
Mtodo: Imunofluorescncia direta
Isolamento Viral
Material:
Humano: Ant-morten - Impresso da crnea, raspado da mucosa lingual (swab), biopsia de pele da
nuca.
Post-mortem Sistema nervoso central SNC conservados em freezer a 20C.
Animal: Post-mortem Fragmentos de hipocampo, cerebelo, medula e crtex cerebral de animais
suspeitos. Animais silvestres inteiros, para posterior identificao.
Condio: As amostras devem ser acondicionadas em coletores universais ou sacos plsticos duplo
identificados individualmente. Conservar congelado quando a demora for superior a 24 horas ou
refrigerado, at esse perodo. Deve acompanhar ficha epidemiolgica.
Perodo da Coleta: Humano: Suspeita clnica. Preencher corretamente a Ficha de Encaminhamento
de amostras. Enviar imediatamente para o LACEN.
Critrios de Rejeio de Amostras: Amostra completamente autolisadas*, amostra conservada em
lcool ou formol, amostra com peso inferior a 0,5g, amostras constituda por outro tecido que no o
especificado no item material, cabea ou animal inteiro (exceto sagui e morcego).
Prazo de entrega dos resultados: Para humano, co e gato: 21 dias corridos aps a chegada do
material no LACEN. Para animais silvestres: 40 dias corridos aps a chegada do material biolgico no
LACEN.
* A autlise a destruio do tecido por suas prprias enzimas, levando decomposio do mesmo.

08. INVESTIGAO DO TESTE DE PATERNIDADE

8.1. Procedimento para ter acesso ao Teste de Paternidade (DNA) realizado no LACEN
O interessado deve procurar as Varas de famlia no Frum, Comarcas de sua regio ou defensorias
pblicas.
49

O Juiz, Promotor ou Defensor Pblico solicita ao LACEN-CE a realizao do Teste de Paternidade


(DNA);
O LACEN agenda a coleta e comunica aos solicitantes, para que sejam intimados os envolvidos a
comparecerem ao LACEN na data agendada;
O Teste de Paternidade (DNA) realizado no LACEN e o resultado enviado para o local de
origem da solicitao que dar cincia aos interessados.

8.2. INVESTIGAO DE PATERNIDADE (ORIENTAES DE COLETA)


Mtodo: Anlise de DNA para Investigao de Paternidade (STR)
Material: Sangue ou saliva
Interferentes: o paciente deve informar na ficha de cadastro se recebeu sangue nos ltimos trs meses
ou se realizou transplante de medula ssea.
Prazo de Entrega dos Resultados: 60 dias aps a coleta do Material Biolgico. Em poca de mutires
o tempo pode se estender para 90 dias.

50

9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Assistncia Sade. Programa Nacional de
Controle de Doenas Sexualmente Transmissveis/Aids. Manual para controle das doenas
sexualmente transmissveis. Braslia, DF, 1993.

BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Oswaldo Cruz. Biossegurana em Laboratrios de Sade


Pblica. Braslia, DF, 2001.
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Polticas de Sade. Coordenao Nacional de DST e
Aids. Carga Viral. Braslia, DF, 1999.

BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Nacional de Sade. Guia de Vigilncia Epidemiolgica. 5.


ed. Braslia, DF, 2002. Vol. I e II.

PARAN. Secretaria de Estado da Sade. Laboratrio Central de Sade Pblica. Manual de coleta de
amostras biolgicas. Curitiba, 1996.

BRASIL.Ministrio da Sade - Tcnicas para Coleta de Sangue, 1997.Recomendaes da


Sociedade Brasileira de Patologia Clnica / Medicina Laboratorial para Coleta de Sangue Venoso
1 edio outubro/2005

BRASIL.Ministrio da Sade.Departamento de Vigilncia Epidemiolgica. Biossegurana em


laboratrios biomdicos e de microbiologia.Secretaria de Vigilncia em Sade 3.ed em portugus
rev. e atual.Braslia, DF, 2006.

CORREA, J. A. Programa Nacional de Controle de Qualidade PNCQ. Garantia da Qualidade no


Laboratrio Clnico, Rio de Janeiro, 2008.

SANTA CATARINA. Secretaria de Estado da Sade. Laboratrio Central de Sade Pblica. Manual
de orientaes para coleta, preparo e transporte de material biolgico, 2005.

51

Recomendaes de Sociedade Brasileira de Patologia Clnica/Medicina Laboratorial para coleta


de sangue venoso. 1.ed/ elaborado pelo Comit de Coleta de Sangue da SPPC/ML e BD Diagnostics
Preanalytical Systems.So Paulo. 2005 76p.

52

10. ANEXOS

ANEXO A

Requisies e Fichas epidemiolgicas (Fichas de Notificao)

Para que o LACEN realize os seus exames com a qualidade requerida, importante que as requisies,
fichas epidemiolgicas (quando aplicvel) e os formulrios de Autorizao de Procedimentos de Alta
Complexidade - APAC estejam preenchidos corretamente, sem rasuras, com as condies e dados a
seguir:

a) Com letra bem legvel: os dados da requisio e/ou ficha epidemiolgica so registrados no
computador ou em livros de registros. Se no forem perfeitamente legveis, podem levar a trocas de
nomes, exames ou envio para locais trocados;

b) Com nome, endereo e cidade da instituio: para que o LACEN possa enviar o resultado para o
local de origem necessrio que estes dados estejam na requisio ou na ficha;

c) Nome do paciente completo: a quantidade de exames muito grande e o nmero de homnimos


(nomes iguais) bastante comum, por isso, quanto mais dados maior a segurana. O nome completo
para todos os exames facilita na hora de pesquisar o resultado.

d) Data de nascimento, idade e sexo: alm de serem mais dados relacionados com o paciente, o que
diminui a margem de erros, so dados importantes para a Vigilncia Epidemiolgica;

e) Nome e carimbo do solicitante: o resultado enviado para quem solicitou o exame, logo necessrio
que seja legvel na requisio;

f) Descrio do material coletado - soro, sangue, lquor (Lquido Cfalo Raquidiano LCR), medula
ssea, lavado brnquico, fezes, urina, secrees, raspado de pele e outros;
53

g) Exame (s) solicitado (s): a descrio do (s) exame (s) solicitado (s) deve ser bem legvel. O material
deve ser adequado ao exame a que se destina;

h) Datas:
Da requisio;
Do incio dos sintomas quando aplicvel. Este dado significativamente importante na anlise do
resultado do exame (Exemplos: Dengue e Leptospirose);
Da coleta quando necessrio (Exemplos: CD4/CD8, PCR, Carga Viral, Dengue, Leptospirose);
i) Telefone para contato;
j) Dados epidemiolgicos quando aplicvel:
Nas requisies para HIV, no deixar de citar a forma de transmisso (sexual, sangunea, perinatal, e
outras);
Nas requisies para CD4/CD8, Carga Viral, HCV Qualitativo, HCV Quantitativo e HCV
Genotipagem, preencher completamente os espaos de informaes sobre o paciente; sobre os dados
laboratoriais e clnicos (motivo pelo qual o exame est sendo solicitado, n de vezes que fez os
referidos exames, resultados anteriores, estgio clnico e se est em tratamento) e dados sobre o mdico
solicitante, alm do N do Carto Nacional de Sade, pois sem ele no se pode liberar o resultado;
Para os casos suspeitos de dengue e doenas exantemticas (sarampo e rubola), no se esquecer de
enviar as fichas epidemiolgicas juntamente com as requisies.
Nmero da notificao (Vigilncia Epidemiolgica).
Notas Importantes:
Os dados que os laboratrios fornecem para as Vigilncias Epidemiolgicas so de suma importncia
na tomada de aes de Sade Pblica, tanto municipais quanto estaduais e principalmente federais,
portanto necessrio que os dados sejam completos, legveis e corretos.

As fichas de notificao necessrias para os exames no LACEN esto disponveis na INTERNET,


no Sistema de Informao de Notificao de Agravos SINAN (Qualquer site de pesquisa
localiza o SINAN).

54

AUTORIZAO DE PROCEDIMENTOS DE ALTA COMPLEXIDADE APAC


Os recursos financeiros referentes realizao de exames considerados de alto custo, tais como
Contagem de Linfcitos T CD4/CD8, Testes de Quantificao de Carga Viral, HCV Qualitativo,
HCV Quantitativo e Genotipagem s sero repassados pelo Ministrio da Sade, se os laudos mdicos
e formulrios de APAC estiverem preenchidos completamente e sem rasuras, incluindo o N do Carto
Nacional de Sade. Portanto, o exame s pode ser realizado mediante o preenchimento destes
documentos.

55

56

57

ANEXO B
Formulrio de Encaminhamento de Amostras

57

ANEXO C
Ficha do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL

58

ANEXO D
Formulrio para solicitao de exame de Genotipagem

59

ANEXO E
Parecer do Mdico de Referncia em Genotipagem

60

MDULO II
ORIENTAES ESPECFICAS PARA COLETA, ACONDICIONAMENTO E
TRANSPORTE DE AMOSTRAS PARA EXAMES MICROBIOLGICOS.

61

01. COLETA DE MATERIAL PARA EXAMES MICROBIOLGICOS

1.1 Instrues gerais


A coleta ou transporte de material uma das etapas de maior importncia no isolamento de
microrganismos responsveis por doenas infecciosas. A coleta ou transporte inadequado pode
ocasionar falha no isolamento do agente etiolgico e favorecer o desenvolvimento da flora
contaminante, podendo conduzir a uma terapia incorreta. Portanto, procedimentos adequados de coleta
devem ser adotados para evitar o isolamento de um falso agente etiolgico, resultando numa
orientao inadequada. A considerao dos seguintes tpicos ajudar a obter o mximo de informaes
diagnsticas:

Coletar amostras antes da administrao da antibioticoterapia, sempre que possvel;

Instruir claramente o paciente sobre o procedimento;

Obter material evitando contaminao com flora normal do paciente;

Observar a antissepsia na coleta de todos os materiais clnicos;

Coletar do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de ser isolado;

Usar recipientes adequados e enviar imediatamente ao laboratrio. Se isto no for possvel,


colocar o material em meio de transporte e temperatura adequada;

Considerar o estgio da doena na escolha do material. Patgenos entricos, causadores de


diarreia, esto presentes em maior quantidade e so facilmente isolados durante a fase aguda ou
diarreica do processo infeccioso intestinal. Na suspeita de febre tifoide a fase da doena ir
determinar o melhor local de coleta (sangue/fezes);

Quantidade suficiente de material deve ser coletada para permitir uma completa anlise
microbiolgica. Caso a quantidade seja pequena, priorize os exames;

O pedido do exame deve ser devidamente identificado e acompanhado de requisio mdica,


onde deve constar: nome completo do paciente, idade, sexo, procedncia, tipo de amostra, data da
coleta, condies do paciente (doente, manipulador, contato ou portador), indicao do uso de
antibiticos, assinatura e carimbo do mdico e Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas
(Anexo A).

62

02. ORIENTAES DE BIOSSEGURANA


Ver MDULO I, item 5 deste Manual

03. AMOSTRAS NO RECOMENDADAS PARA EXAMES MICROBIOLGICOS, POR


FORNECEREM RESULTADOS QUESTIONVEIS

AMOSTRAS

COMENTRIOS

Swab de amostras de queimaduras

Processar bipsia ou aspirado

Swab de lcera de decbito

Processar bipsia ou aspirado

Swab de abscesso periretal

Processar bipsia ou aspirado

Swab de leso de gangrena

Processar bipsia ou aspirado

Swab de leso periodontal

Processar bipsia ou aspirado

Swab de lcera varicosa

Processar bipsia ou aspirado

Vmito

No processar

Material de colostomia

No processar

Ponta de cateter de foley

No processar

Aspirado gstrico de recm-nascido

No processar

04.

CRITRIOS

DE

REJEIO

DE

AMOSTRAS

CLNICAS

ENVIADAS

AO

LABORTRIO DE MICROBIOLOGIA

O recebimento criterioso das amostras clinicas pelo laboratrio de microbiologia, garantem uma melhor
correlao clnico-laboratorial. Consideraes que devem se utilizadas para rejeio das amostras:

4.1. ERROS DE IDENTIFICAO


Discrepncia entre a identificao da amostra e o pedido do mdico;
Falta de identificao da amostra;
Origem da amostra ou tipo de amostra no identificada;
Teste a ser realizado no identificado.

4.2. AMOSTRAS INADEQUADAS

Material clnico recebido em soluo de fixao (formalina);


63

Ponta de cateter de Foley;

Urinas coletadas h mais de 24 horas que ficaram guardadas na geladeira;

Frascos no estreis;

Swab seco;

Mais de uma amostra de urina, fezes, escarro e feridas colhidas no mesmo dia e da mesma origem;

Swab nico com mltiplas requisies de testes microbiolgicos;

Culturas para anaerbios recebidas em condies inapropriadas.

Observaes importantes: amostras com as caractersticas acima descritas so inadequadas e


demandam um contato prvio com o mdico solicitante para melhores esclarecimentos.

05. MODELO DE REQUISIO DE ANLISE MICROBIOLGICA E IDENTIFICAO DE


AMOSTRAS

Todas as amostras devero ser identificadas e acompanhadas de requisio mdica devidamente


preenchida com letra legvel, com os itens abaixo:

Requisio mdica:

a) Nome do paciente
b) Idade
c) Endereo
d) Leito
e) Mdico requisitante (nome legvel e carimbo)
f) Tipo de amostra
g) Exames solicitados
h) Data e hora da coleta
i) Incio dos primeiros sintomas
j) Doena de base suspeita clnica e se em uso de antibitico (a suspeita de fungos deve ser anotada
no pedido de exame).

64

Etiqueta da amostra:

a) Nome completo do paciente


b) Localizao do paciente (leito)
c) Tipo e topografia da amostra (Materiais identificados como: secreo ou pus devero ser
acompanhados da localizao topogrfica)

Observao: A anotao da hora da coleta um dado extremamente importante para controle da


qualidade e anlise da viabilidade da amostra.

06. TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratrio com a finalidade de:

Assegurar a sobrevivncia e isolamento do microrganismo, pois o laboratrio de microbiologia


trabalha em funo da viabilidade dos microrganismos;

Evitar o contato prolongado dos microrganismos com anestsicos utilizados durante a coleta, pois
os mesmos podero exercer ao bactericida;

Evitar erros de interpretao nas culturas quantitativas (urina);


Consultar o laboratrio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte;
Material colhido com swab deve ser processado imediatamente ou imerso em meio de transporte.
O swab conservado em meio de transporte mantido, geralmente, em temperatura ambiente at o
momento do processamento. No ultrapassar o tempo indicado pelo laboratrio (em geral, 8
horas).

Meio de transporte serve para manter a viabilidade das bactrias, porm sem permitir a
multiplicao. Exemplos de meios especiais: Stuart, Amies, Cary Blair.

Material em que h suspeita da presena de bactrias mais sensveis s variaes de temperatura ou


de umidade como: Neisseria meningitides, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae e
Streptococcus pneumoniae devem ser coletados no prprio meio de cultura. No refrigerar e enviar
imediatamente ao Laboratrio de Microbiologia.

65

Material naturalmente rico em flora microbiana (fezes e escarro) ou obtido de stios de difcil
descontaminao (urina, secrees de orofaringe, leses superficiais) deve ser transportado com os
cuidados necessrios manuteno da proporo da flora original. Se o material for mantido
temperatura ambiente por perodo superior a 30 minutos, pode ocorrer multiplicao bacteriana
(microbiota endgena) e, conseqentemente, prejudicar o isolamento do agente infeccioso.
Material clnico proveniente de stios estreis (sangue, lquor, lquido asctico, sinovial, etc.) deve
ser colhido e semeado diretamente em meios de cultura, transportado temperatura ambiente ao
laboratrio e colocado em estufa entre 35 a 37C. Na impossibilidade deste procedimento, coletar
o material em frasco esterilizado e conserv-lo temperatura ambiente, at o momento do
processamento.

07. EXAMES MICROBIOLGICOS REALIZADOS NO LACEN

7.1 URINOCULTURA

7.1.1 poca da coleta:


A urina deve ser coleta na fase aguda da doena.

7.1.2 Tcnica de coleta:


a) Coleta em coletor estril universal
Realizar asseio dos rgos genitais externos usando gua e sabo neutro. Retirar completamente o
sabo. Nas mulheres, recomenda-se lavar e secar a regio genital de frente para trs. Nos homens,
retrair bem o prepcio a fim de obter limpeza adequada do meato (canal) urinrio. Enxugar com toalha
limpa.
Aps o asseio, desprezar o primeiro jato e coletar o jato mdio no recipiente.

b) Crianas que necessitam uso do coletor


Fazer o asseio da genitlia com gua e sabo neutro. Retirar completamente o sabo. Enxugar bem
com uma toalha limpa.
Retirar a proteo da parte adesiva do coletor de urina e aderir na regio da genitlia externa da
criana, de modo a ficar bem adaptado para que no haja vazamentos.
66

Recomenda-se trocar o coletor a cada 30 minutos, at que a criana urine. Repetir a higienizao
sempre que for necessrio trocar o coletor.

7.1.3 Transporte e Conservao:


A amostra deve ser enviada imediatamente para o laboratrio aps a coleta, no perodo mximo de 1
hora. Caso no seja possvel, conservar a amostra na geladeira e envi-la em caixa de transporte com
gelo, no ultrapassando 24 horas.

a) Pacientes em uso de cateter com sistema de drenagem fechada:


Colher a urina puncionando-se o cateter na proximidade da juno com o tubo de drenagem. No
colher a urina da bolsa coletora. No pedido laboratorial dever constar que o paciente est cateterizado.

b) Puno supra pbica:


Indicada em casos duvidosos de infeco urinria, em recm-nascido ou crianas pequenas, quando h
contraindicao de cateterizao ou suspeita de infeco por bactrias anaerbias ou fungos.

7.1.4 Critrios de rejeio de amostras:


Amostras coletadas a mais de 4 horas sem refrigerao.

7.1.5 Prazo de Entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.2 COPROCULTURA

7.2.1 Coleta e transporte de amostras para pesquisa de agentes causadores de gastroenterites:


Salmonella spp; Shigella spp; alguns sorotipos de Escherichia coli, Aeromonas Spp e Vibrio
cholerae.

As fezes devem ser colhidas antes da administrao de antibiticos ao paciente;

importante o preenchimento completo da Ficha Epidemiolgica e Ficha de Encaminhamento do


material ao laboratrio, pois possuem dados essenciais para anlise do material.

67

a) Coleta de SWAB retal

Para a coleta de amostras atravs de swab retal, o swab dever se umedecido em soluo
fisiolgica, gua destilada esterilizada ou no prprio meio de Cary Blair;

Este swab umedecido ser introduzido na ampola retal do paciente (05 cm), comprimindo-o com
movimentos rotatrios, em seguida introduzir o swab no meio de Cary Blair, ou no tubo contendo o
meio de enriquecimento gua Peptonada Alcalina; quebre a extremidade superior do swab e feche
bem a tampa rosqueada do tubo e mantenha o tubo na posio vertical para no derramar e evitar
contaminao;

Todo material coletado dever ser previamente identificado e mantido temperatura ambiente at o
momento de transport-lo ao laboratrio;

O material dever ser transportado temperatura ambiente;

O meio de transporte Cary Blair permite a sobrevivncia dos Vibries por at quatro semanas.
Entretanto, recomenda-se que o material coletado seja encaminhado ao laboratrio o mais breve
possvel, porque pesquisa-se tambm outras enterobactrias patognicas que podero perder a
viabilidade aps a coleta, sendo assim, se demorar mais de uma semana para ser encaminhado ao
laboratrio, recomenda-se manter sob refrigerao;

Quando utilizar a gua Peptonada Alcalina, que um meio de enriquecimento para o Vibrio
cholerae, e no um meio de conservao, o material dever ser transportado temperatura ambiente
e ser processado at 8 horas aps a coleta. Amostras coletadas em gua Peptonada Alcalina,
devero ter a indicao da hora da coleta;

Todas as amostras devero ser encaminhadas ao laboratrio com o mximo de informaes


disponveis. Estas informaes devem constar da ficha de exames laboratoriais para vigilncia
epidemiolgica.

b) Coleta de Swab Fecal

Coletar as fezes em frascos de boca larga e limpos e esterilizados ou bem lavados e secos. No
utilizar substncias qumicas na desinfeco destes frascos. Evite a coleta de fezes contidas na
superfcie da cama, cho e roupa dos pacientes;

Colocar o swab no frasco contendo fezes e, realizando movimentos circulares, embeber o swab com
matria fecal;

68

Colocar o swab em tubo contendo o meio de transporte Cary Blair ou gua Peptonada Alcalina.
Quebre a extremidade superior do swab e mantenha os tubos bem fechados;

Se utilizar a gua Peptonada Alcalina, os tubos devero ser mantidos em posio vertical,
identificar as amostras e seguir as instrues quanto conservao e transporte de swab retal.

c) Coleta da amostra em papel de filtro

Na impossibilidade de dispor do meio de transporte, coletar as fezes em frasco com boca larga,
limpos e esterilizados ou bem lavados e secos. No utilizar substncias qumicas;

Com auxlio de uma pina pegue uma tira de papel de filtro (xarope/ mata borro) com 2,5 x 10,0
cm (previamente esterilizado em autoclave) e embeba 2/3 desta fita com o material fecal;

Colocar as tiras em saco plstico de primeiro uso e fechar hermeticamente;

Identificar o material e encaminhar ao laboratrio acompanhado da ficha epidemiolgica;

Este material dever ser encaminhado ao laboratrio o mais breve possvel, pois os vibries
permanecero viveis enquanto o material estiver mido;

O transporte segue as mesmas recomendaes anteriores.

d) Coleta de amostras in natura

Coletar as fezes (23 ml ou 35g se forem slidas) em frascos de boca larga e limpos. No utilizar
substncias qumicas na limpeza;

Identificar a amostra e encaminhar ao laboratrio dentro de duas horas aps a coleta, se mantido
temperatura ambiente e at cinco horas se mantido sob refrigerao.

Observao: Quando o envio de material for superior a 10 amostras, comunicar previamente ao


laboratrio.

e) Portadores / Manipuladores:

Devero ser coletadas 03 amostras com intervalo de 48 horas, conforme orientaes descritas
acima.

Observao: em caso de isolamento de bactrias patognicas, repetir a coleta aps 5 dias do trmino
da antibioticoterapia.
69

7.2.2 Instrues de coleta e transporte de amostras fecais

INSTRUMENTO

Swab retal

MTODO

TRANSPORTE

VIABILIDADE

Introduzir o swab no esfncter anal

Cary-Blair: 24-72 h

(+/-2cm),

em temperatura ambiente

aplicando-se

movimentos giratrios para que

Cary- Blair

haja absoro do material, em

e 04 a 07 dias
sob refrigerao

seguida colocar no meio Cary


Blair
Retirar 02 a 03 g. de fezes do
Swab fecal

coletor, com o swab e introduzi-lo

Cary-Blair: 24-72hs
Cary - Blair

no meio de Cary Blair.

em temperatura
ambiente e 4 a 7 dias
sob refrigerao

INSTRUMENTO

MTODO

TRANSPORTE

Coletar 03 a 05 g. de fezes. No

Recipientes de boca

utilizar substncias qumicas na


Fezes in natura

VIABILIDADE

larga, limpos e/ou

At 2 horas em

Coleta. Evitar coletar amostras

esterilizados

temperatura ambiente

fecais de roupas, superfcies de

(coletores).

cama. Cho e etc.

Observao: Esta instruo acompanha o meio de transporte Cary Blair quando solicitado.

Nota: Para diagnstico de tuberculose intestinal, o material indicado a bipsia.

7.2.3. Critrios de Rejeio de Amostras:

Fezes slidas e/ ou formadas.

Fezes que estejam mal acondicionadas.

Fezes coletadas a mais de 2 horas

70

7.2.4. Prazo de entrega dos resultados


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.3. HEMOCULTURA

7.3.1. Material Clnico: Sangue por puno venosa (evitar coletar via cateter)

7.3.2. Nmero de amostras: 02 a 03 amostras


Adulto: 08 a 10 mL de sangue em cada puno (frasco adulto)
Crianas: 1 a 6 anos de idade 1mL a 3 mL de sangue (francos peditrico)
Recm-Nascido: At 1,5 mL de sangue (frasco peditrico)

7.3.3. Intervalo de coleta

Dever existir um intervalo de 15 a 20 minutos entre as coletas, intercalando os stios da puno


(exemplo: brao direito, brao esquerdo).

7.3.4. Coleta de Amostra

Realizar a coleta antes da ascenso da temperatura (evitar o pico febril);

Pacientes com febre constante, fazer a coleta em qualquer horrio;

Pacientes em uso de terapia antimicrobiana, utilizar frascos com inibidor de antibiticos e colher
antes dose do antibitico.

7.3.5. Procedimento para coleta

Garrotear o brao do paciente e selecionar uma veia adequada;

Limpar o local da puno com algodo ou gaze estril contendo lcool a 70%;

Afrouxar o garrote temporariamente;

Aplicar uma soluo de clorexidina alcolica a 0,5% ou soluo de iodo (povidina-iodo a 10%);

Deixar agir por 1 min, at secar. Evitar tocar no local da puno;

Preparar o frasco de hemocultura. Limpar a tampa com lcool a 70% e deixar secar;

71

No usar soluo de iodo, pois danifica a rolha. Remover a tampa plstica do frasco e colocar sobre
a rolha uma gaze ou algodo embebido com lcool a 70%. Mantenha o algodo sobre o frasco at o
momento da puno;

Apertar o garrote;

Colher a amostra, com seringa e agulha descartveis, e transferir para frasco, sem trocar a agulha;

Homogeneizar o frasco por inverso;

Remover o iodo residual do brao utilizando lcool a 70%;

Identificar o frasco com o nome do paciente, data, hora da coleta e nmero da amostra;

Selecionar um stio diferente para prxima puno

7.3.6. Transporte das amostras


As amostras devem ser enviadas ao laboratrio, temperatura ambiente, no prazo de 2 horas aps a
coleta.

7.3.7. Prazo de entrega dos resultados:


10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.3.8. Critrios de Rejeio de Amostras:

Demora no transporte ao laboratrio;

Amostras transportadas sob refrigerao;

Volume de sangue inadequado;

Amostras em frasco de hemocultura quebrado;

Amostras de sangue semeadas em frascos de hemocultura vencidos;

Amostras sem identificao ou identificao ilegvel.

7.4. PESQUISA DO BACILO DIFTRICO

Identificar a presena de C.diphtheriae em casos suspeitos e comunicantes de um caso de difteria

72

7.4.1. Materiais

TIPO

QUANTIDADE

Swabs descartveis com haste metlica para nasofaringe

01

Swabs descartveis com haste plstica para garganta

01

Tubo com meio de cultura (meio PAI)

02

Mscara e luva descartvel

01 de cada

Saco plstico para descarte de material


Fita crepe

01
Identificao e acondicionamento dos
tubos

Etiqueta para identificao dos tubos

02

7.4.2. Meio de Transporte (Meio de PAI)


Os meios com condies de uso de apresentar as seguintes caractersticas:

Cor: amarelo plido

Consistncia: firme

Sem reas liquefeitas ou ressecadas.

7.4.3. Armazenamento

Os meios de cultura (PAI) devem ser armazenados em sacos plsticos fechados para evitar entrada
de umidade no algodo e, consequente contaminao;

Dever ser observada a data fabricao do meio, para controle do vencimento que de trs meses;

Deve ser conservado em geladeira, temperatura de 4 a 8C, evitando a sua colocao na porta da
geladeira;

Os swabs devem ser conservados temperatura ambiente.

7.4.4. Procedimento para coleta de amostra:


Nasofaringe e garganta

Esclarecer o paciente sobre o procedimento;

Identificar os tubos com N (nasofaringe) e G (garganta);

Lavar as mos, colocar luvas e mscaras segundo as normas de biossegurana;


73

Para nasofaringe: introduzir o swab de haste metlica na narina do paciente at encontrar


resistncia na parede posterior da nasofaringe e realizar movimentos rotatrios (Fig. 01). Usar o
mesmo swab para as duas narinas;
Para a garganta: Fazer a coleta passando o swab de haste plstica pelas amdalas, vula e toda a
parede da garganta. Na coleta em doentes, o swab deve ser passado, cuidadosamente, apenas
ao redor das leses para que no haja deslocamento da placa (pseudomembrana). (Fig.02);
Aps a coleta, proceder a semeadura no meio de PAI imediatamente.

7.4.5. Semeadura
Passar o swab em toda extenso (superfcie) do tubo, apenas uma vez, girando-os nos dedos e em
zig-zag, comeando na base at o pice do meio de cultura. Deve-se ter o cuidado de no furar ou
quebrar o swab, no movimento da semeadura. Desprezar o swab aps semeadura.

7.4.6. Identificao dos tubos


Aps a semeadura, prender os dois tubos com fita crepe e identific-los com os seguintes dados:
74

Nome do paciente

Idade

Data e hora da coleta

Anexar a solicitao do exame (ficha de investigao epidemiolgica), devidamente preenchida.

7.4.7. Encaminhamento da amostra


Os meios devidamente semeados e identificados devero ser encaminhados ao LACEN,
imediatamente, em temperatura ambiente.
Caso o envio imediato no seja possvel, poder ser conservado em estufa bacteriolgica
(36C), at o prazo mximo de 24 horas, sendo encaminhado em temperatura ambiente ao
LACEN.

7.4.8. Conservao da amostra at o envio:


Aps a coleta, a amostra dever ser encaminhada imediatamente ao LACEN, temperatura
ambiente.
Caso no isso no seja possvel, a amostra poder ser mantida em estufa a 35-37 C por no
mximo 24 horas.

7.4.9. Forma de acondicionamento para transporte:


O tubo com meio de transporte dever ser acondicionado em caixa para transporte de amostras
biolgicas de forma que esteja protegido de quebra acidental;
A amostra dever ser encaminhada temperatura ambiente.

7.4.10 Critrios de rejeio de amostras:


Amostra enviada em swab sem meio de transporte especfico;
Amostras coletadas em meio de transporte com prazo de validade expirado;
Amostra apresentando vazamento devido quebra do tubo ou rolha aberta;
Amostra sem identificao ou com identificao ilegvel;
Falta de correlao entre a identificao da ficha de investigao e/ou Formulrio de
Encaminhamento de Amostras de Difteria e a identificao da amostra.

75

7.4.11. Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.5. PESQUISA DE Bordetella pertussis

Identificar a presena da Bordetella pertussis em casos suspeitos e comunicantes de um caso de


coqueluche.

a) Materiais

Materiais

Quantidade

Swab descartvel, ultrafino, com haste flexvel, estril e alginatado.

01

Tubo com meio de cultura (transporte) para coqueluche: Regan Lowe

01

(RJ) (com meio + antibitico cefalexina)


Mscara descartvel

01

Luvas descartveis

01 par

Etiqueta para identificao

01

Meio de Transporte para Coqueluche - Meio de Regan (RL)

O Meio de transporte para a secreo nasofarngea o Agar carvo suplementado com 10% de sangue
desfibrilinado (estril) de carneiro ou cavalo, (Regan-Lowe) e cefalexina (40 ug/mL).

b) Armazenamento
O meio para coqueluche (RL) dever ser armazenado em geladeira, em temperatura de 4 a 8C, os
swabs devem ser armazenados em temperatura ambiente, em local seco.

c) Procedimento de coleta
Observar as condies do meio de transporte, inclusive a data de validade;
A coleta do material deve ser feita, preferencialmente, quando o paciente apresentar os
primeiros sintomas (fase catarral da doena);
76

A coleta dever ser feita antes de o paciente utilizar antibitico. O limite mximo de utilizao
de antibiticos, para realizao do exame, de 3 dias;
Retirar da geladeira, os tubos dos meios de cultura, 30 minutos antes da coleta, deixando na
temperatura ambiente;
Introduzir o swab em uma narina do paciente, at encontrar resistncia na parede posterior da
nasofaringe e realizar movimentos rotatrios (Figura 1);
Aps a coleta, estriar o swab na superfcie do meio e a seguir introduzi-lo na base do meio de
cultura, com antibitico, permanecendo dentro do tubo.

d) Identificao dos tubos


Nome do paciente identificando se doente ou comunicante;
Idade;
Data e hora da coleta;
Anotar se o material do caso suspeito ou do comunicante;
Anexar solicitao do exame a ficha de investigao epidemiolgica, devidamente preenchida.

e) Encaminhamento da amostra
Os meios devidamente semeados e identificados devero ser encaminhados ao LACEN,
imediatamente, em temperatura ambiente.
Caso o envio imediato no seja possvel, poder ser conservado em estufa bacteriolgica
(36C), at o prazo mximo de 24 horas, sendo encaminhado em temperatura ambiente ao
LACEN.

Observao: O setor de bacteriologia do LACEN dever ser avisado com antecedncia sobre o envio
das amostras, para que seja possvel adotar as providncias necessrias realizao do exame.

f) Prazo de entrega dos resultados:


15 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

77

7.6. CULTURA E BACTERIOSCOPIA DO LIQUOR


A coleta deve ser feita de preferncia antes de iniciar o tratamento com antimicrobianos;
Para cada amostra de liquido cefalorraquidiano LCR devem ser realizados os exames
bacterioscpico e de cultura, ambos indispensveis, pois, alm de determinarem a natureza da
infeco, so de grande importncia para a orientao teraputica;
O ideal semear LCR no momento da puno. Para tal deve-se faz-lo diretamente sobre o
meio de cultura adequado, gotejando 05 a 10 gotas LCR, de preferncia diretamente da agulha
que se encontra introduzida no local da puno;
O LCR deve ser semeado em tubo inclinado ou placa contendo Agar chocolate adicionado de
fatores V e X (V = NAD; nicotinamida adenina dinucleotdeos + X poro M da hemoglobina);
No havendo condies de semeadura no momento da puno coletar 1 a 2 ml de LCR em
frasco esterilizado, bem vedado com tampa estril de borracha ou rosca;
Manter o frasco com o lquor bem vedado para evitar vazamentos e conservar em estufa a 35
37C, at o envio ao laboratrio, o que deve ser feito no menor espao de tempo possvel (1 a 3
horas). O material dever ser semeado imediatamente aps chegar ao laboratrio. O transporte
do material dever ser feito em caixa isotrmica;
O meio de cultura semeado dever ser enviado ao laboratrio imediatamente, no excedendo o
prazo de 3 horas. Caso no seja possvel, mant-lo em estufa a temperatura de 35 37C, em
atmosfera de CO2 (lata com vela acesa e algodo umedecido) ou na Jarra de CO2 apropriada, at
o envio ao laboratrio, o que deve ser feito em temperatura ambiente e no prazo mximo de 18
horas aps a coleta e semeio. Jamais refrigere a amostra.

7.6.1. Prazo de entrega dos resultados:


07 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.7. Reao de Polimerase em Cadeia em Tempo Real PCR-TR

a) Material: Liquido cefalorraquidiano (lquor) ou Soro


Coletar ou separar em frasco estril, com tampa de borracha 01 a 02 ml de LCR ou soro;
78

Manter o frasco, com o LCR ou soro, na temperatura de 4 C ou congelar at seu

encaminhamento ao laboratrio, que deve ocorrer at o perodo mximo de uma semana aps a
coleta. Transportar em caixa isotrmica sob refrigerao.

b) Critrios de rejeio de amostras:


Amostras sem formulrio de identificao ou com identificao ilegvel;
Amostras mal acondicionadas;
Amostra apresentando vazamento devido quebra do tubo ou rolha aberta;

Obs. Amostras com quantidade de volume insuficiente sero processadas, entretanto, o laudo poder
no expressar o resultado correto, nesse caso uma observao referente ao volume inadequado recebido
para a anlise constar no laudo.

c) Prazo de entrega dos resultados:


15 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.8. CULTURA DE AMOSTRAS DO TRATO RESPIRATRIO SUPERIOR

a) Material clnico: secreo de orofaringe e nasal, puno de seios maxilares, raspado de leso da
boca, tonsilas, entre outros.

b) poca da coleta: fase aguda da doena e antes do uso de antimicrobianos.

Secreo de Orofaringe
Solicitar ao paciente que engula a saliva e emita o som AAA, para elevar a vula e ajudar a
reduzir o refluxo da nusea;
Com auxlio de um abaixador de lngua e boa iluminao, introduzir um swab estril e
friccion-lo sobre a faringe posterior e amdalas, com moderada presso, procurando colher nas
reas onde existem pontos de pus e as hiperemiadas adjacentes aos pontos ou placas, deve-se
evitar tocar na lngua, vula, dentes e saliva.
79

Rolar o swab imediatamente em uma pequena rea de Agar Sangue (AS) e estriar com auxlio
de uma ala bacteriolgica em trs direes prximas uma da outra para obter colnias isoladas,
em seguida colocar estufa a 37;
Se no for possvel semear imediatamente, introduzir o swab logo aps a coleta no meio de
transporte especfico (Stuart). No refrigerar a amostra e encaminhar o mais breve ao
laboratrio, no prazo de 24 horas;

Observaes: O meio de Stuart deve ser conservado na geladeira e tem validade de aproximadamente
03 meses.

Secreo de Nasofaringe
Solicitar ao paciente que retire o excesso de secreo nasal, com auxlio de um leno de papel;
Coletar a amostra introduzindo um swab estril de haste flexvel aproximadamente 01cm dentro
das narinas, fazendo movimentos giratrios delicados para evitar rompimentos de vasos
sanguneos;
Aps coletada a amostra proceder como para secreo de orofaringe sobre semeio, transporte e
conservao;

Puno de Seio Maxilar


O procedimento realizado pelo mdico assistente e o material deve ser encaminhado em
seringa, sem agulha, com vedao apropriada ou em tubo estril.

Portadores / Contatos
Seguir a mesma tcnica de secreo de orofaringe e nasofaringe.

c) Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

80

7.9. CULTURA DE AMOSTRAS DO TRATO RESPIRATRIO INFERIOR

a) Material clnico: cultura de escarro, cultura de lavado, cultura de lavado bronco alveolar (LBA),
cultura de aspirado brnquico, aspirado traqueal, cultura de escovado brnquico.

Escarro
Orientar o paciente da importncia da coleta do escarro e no da saliva. As amostras de saliva
so imprprias para anlises bacteriolgicas, pois no representam o processo infeccioso;
Colher de preferncia, a primeira amostra da manh, orientando o paciente para escovar os
dentes, somente com gua (no utilizar creme dental) e enxaguar vrias vezes a boca com gua,
inclusive com gargarejo para remover a flora bacteriana superficial e colher amostra obtida de
tosse profunda;
Respirar fundo, vrias vezes e tossir profundamente, recolhendo a amostra em um frasco de
boca larga. Se o material for escasso, coletar a amostra depois de nebulizao;
Encaminhar imediatamente ao laboratrio a temperatura ambiente dentro de 2 horas aps a
coleta. Para perodo maiores, refrigerar (2 a 8 C) a amostra.

Observao: Na suspeita de infeco por Micobactrias ou Fungos, coletar pelo menos trs amostras,
em dias consecutivos (somente uma amostra por dia).

Nota: Em casos de pacientes com dificuldade para escarrar, esta amostra poder ser induzida por
inalao ou ser realizada coleta por aspirao transtraqueal. No caso de coleta de escarro induzida, o
laboratrio dever ser informado e os critrios para aceitao das amostras no devem ser aplicados.

Aspirado traqueal
A coleta deste material obtida principalmente de pacientes internados em unidades de terapia
intensiva e em uso de aparelhos de respirao mecnica;
Apesar de ser solicitado frequentemente por alguns clnicos, no recomendado para cultura,
devido dificuldade de avaliao do patgeno principal, o resultado pode refletir colonizao
local, sendo a interpretao clnica complicada;

81

Nos casos a serem coletados, colher em tubo estril e enviar imediatamente ao laboratrio no
prazo de 2 horas. Para perodos maiores manter a amostra sob refrigerao (2 a 8C).

Lavado bronco alveolar


Utilizado para obteno do agente etiolgico das pneumonias associadas ventilao mecnica
e em pacientes imunodeprimidos, sendo considerado o mtodo mais fidedigno para investigao
microbiolgica do trato respiratrio inferior;
O material dever ser obtido antes das bipsias e de escovados para se evitar excesso de sangue;
Procedimento realizado por equipe mdica especializada;
Nesse procedimento so injetados aproximadamente 100 ml de soluo fisiolgica estril
utilizando o canal do broncoscpio. Aps 03 a 05 minutos, recuperado, por aspirao, um
volume de no mnimo 40% do volume injetado;
Esta coleta pode ser feita em dois ou mais frasco estril, importante que se anote nos frascos a
ordem da obteno das amostras;
O tempo de transporte da amostra essencial devendo estar em torno de 30 minutos, sendo o
mximo aceitvel de 1-2 horas.

Escovado brnquico
O material obtido e, geralmente a prpria escova so enviados para anlise no laboratrio.
A amostra deve ser colocada em tubo contendo 1 ml de soluo fisiolgica estril e
encaminhada imediatamente aps a coleta para o laboratrio;

Observao: Amostras de escovado, lavado brnquico e lavado bronco-alveolar enviar


imediatamente para o laboratrio em temperatura ambiente, para perodos maiores refrigerar ( 2 a 8C )
a amostra.

b) Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

82

7.10. CULTURA DE SECREES EM GERAL

a) Material de feridas, furnculos e abscessos:


Coletar na fase aguda da doena e antes da antibioticoterapia;
Limpar a superfcie da leso com gua e sabo ou soluo fisiolgica, para evitar contaminao
com germes saprfitos;
Pressionar a leso com auxlio de gaze estril e coletar a amostra com dois swab estreis,
procurando coletar maior quantidade possvel da secreo;
Utilizar um swab para fazer esfregao em lmina (Gram) e outro para cultura;
Se a leso for fechada, fazer assepsia da pele e puncionar o material com seringa estril.

b) Secreo de Ouvido
Fazer a limpeza externa com algodo embebido em soluo fisiolgica estril;
Coletar o material em profundidade com dois swab estreis;
Utilizar um swab para cultura e o outro fazer esfregao em lmina (Gram).

c) Secreo Conjuntival, Secreo de Canal Lacrimal, Raspado Palpebral, Raspado de Crnea,


Cultura de Crnea, Cultura de Humor Vtreo.
Solicitar que seja especificado o local da coleta;
Coletar o material de preferncia na fase aguda da doena;
Informar se o paciente est fazendo uso de antibitico oral ou tpico;
aconselhvel que determinadas coletas sejam realizadas pelo mdico oftalmologista;
O material dever ser coleta em quantidade suficiente, sempre evitando contaminao com
fluidos adjacentes, secrees ou microbiota da pele;

d) Coleta
Fazer assepsia com swab ou gaze estril umedecido em salina, para retirar o material em
excesso;
O material dever ser coletado com dois swabs estreis, sendo que um deles utilizado para fazer
um esfregao em lmina (Gram) e o outro enviado para cultura;

83

O material coletado poder ser semeado imediatamente em 02 placas de cultura: Agar sangue e
Agar Mac Conkey;
No sendo possvel semear imediatamente colocar o swab em meio de transporte Stuart e enviar
ao laboratrio temperatura ambiente, no prazo mximo de 24 horas.

Observao: Nos casos de suspeita de gonorria semear imediatamente o material em Agar


Chocolate.

e) Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.11 EXAMES MICROBIOLGICOS EM FLUIDOS ORGNICOS ESTREIS


7.11.1 Lquidos: Pleural, Peritoneal, Asctico, Sinovial, e outros (Dilise, Pericrdio e Medula
ssea)
Diversos so os lquidos corporais que podem ser recebidos para realizao de exames
microbiolgicos;
Proceder antissepsia no stio da puno com lcool 70% e com soluo de iodo, que dever
ser removida aps o procedimento, com lcool 70% para evitar queimadura ou reao alrgica;
Coletar por procedimentos mdicos, obter a amostra atravs de puno per cutnea ou cirrgica.
Quanto maior o volume da amostra maior a probabilidade de isolamento do agente etiolgico, j
que o nmero de organismos presentes causadores de infeco pode ser muito baixo;
O lquido coletado deve ser encaminhado em tubo seco e estril ou inoculado diretamente em
frascos de hemocultura;
Transportar imediatamente ao laboratrio temperatura ambiente (20 a 25 C), no mximo at
02 horas aps a coleta, sendo que a orientao do tipo de cultura (aerbia, anaerbia, fungos,
micobactrias e etc.) dever estar especificada no pedido mdico;
O material colhido e inoculado diretamente em frascos de hemocultura deve ser transportado
temperatura ambiente (20 a 25 C) at 12 horas aps a coleta.

84

7.11.2. Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

Nota: No caso do material coletado ser bolsa de dilise; homogeneizar vrias vezes a amostra contida
na bolsa, fazer uma assepsia prvia no local que ser aspirado. Puncionar a bolsa de preferncia em
local prximo cnula de sada e transferir um volume mnimo de 20 ml para dois frascos de
hemocultura. importante realizar apenas uma puno na bolsa para reduzir o risco de contaminao
durante a manipulao.

7.12. CULTURA EM PONTA DE CATETER


Cateteres so importantes fontes de bacteremia e fungemia, como tambm causadores de
complicaes infecciosas no local da insero;
Tipos de cateteres nos quais possvel realizar a cultura: cateter central, perifrico, arterial,
Swan-Ganz e Hickman.
Fazer uma rigorosa antissepsia da pele ao redor do cateter com lcool 70%,
Remover o cateter e, assepticamente, cortar 05 cm da parte mais distal, ou seja, a que est mais
profundamente introduzida na pele. No usar tesouras embebidas em solues antisspticas;
Colocar o pedao de cateter de forma assptica num frasco estril, sem meio de cultura e
transportar imediatamente ao laboratrio evitando sua excessiva secagem;
A ponta de cateter pode ser tambm semeada diretamente na placa com meio de cultura Agar
sangue, nesse caso colocar a placa na estufa at ser enviada para o laboratrio;
A presena de um nmero maior ou igual a 15 colnias de um nico tipo de bactria sugere que
a ponta de cateter pode estar sendo fonte de infeco-cultura semiquantitativa (Mtodo de
Maki).

Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

85

7.13. CULTURA DE PELE (ABSCESSOS E EXSUDATOS) E BIPSIAS

A pele uma regio bastante exposta sofrendo frequentemente riscos de infeco e envolve grande
diversidade de microrganismos, essas infeces podem ser causadas por um nico microrganismo ou
ser polimicrobiana;

a) Material Clnico
Amostras de exsudatos de leso:
Superficial;
Profunda;
Operatria

Bipsia:

O material representativo aquele obtido das margens e da profundidade da leso e no


somente da parte purulenta ou exsudato superficial;

O termo secreo ou secreo de ferida no adequado e sim a descrio do stio anatmico


especfico da infeco;

Nas culturas de leses, de extrema importncia diferenciar no momento da coleta, se de


ferida superficial ou profunda;

Realizar antissepsia prvia da regio a ser coletada;

No encaminhar somente pus (no amostra representativa da leso). Coletar raspado das
margens e base da leso.

b) Coleta

Leso aberta
No recomendada cultura de leses secas ou crostas;
Descontaminar as margens e a superfcie da leso com soluo fisiolgica, lcool a 70%,
soluo aquosa de clorexidina a 2%, dependendo do tipo de leso;
86

Proceder nova limpeza com soluo fisiolgica estril;


Coletar o material purulento localizado na parte mais profunda da leso utilizando, de
preferncia, seringa e agulha. Se no for possvel a coleta por puno, utilizar swab com meio
de transporte;

Leso fechada
Abscesso fechado o local ideal para a coleta;
No usar swab;
Fazer antissepsia com produto adequado;
Aspirar o exsudato com agulha ou seringa;

Ferida de queimadura
Coleta deve ser realizada aps desbridamento e descontaminao da leso. A coleta de
fragmento de tecido (bipsia) a tcnica mais indicada para a cultura. Caso no seja possvel,
coletar com swab estril e com meio de transporte;
Amostra de superfcie da leso normalmente representa colonizao.

Pstula e Vescula
Selecionar uma pstula intacta. Fazer antissepsia com produto adequado e puncionar. Se a leso
for seca, com crosta, sem vescula ou pstula evidente, remover o material superficial aps
antissepsia e passar firmemente o swab estril sobre a leso.

Bipsia
Enviar em frasco estril. No devem ser aceitas amostras em formol.

Observao: Quando for solicitado a bacterioscopia juntamente com a cultura, recomendado coletar
dois swabs. Um dos swabs deve ser utilizado imediatamente aps a coleta para confeccionar uma
lmina para colorao pelo mtodo de Gram e o outro deve ser colocado em meio de transporte.

c) Transporte
Swab sem meio de transporte imediatamente aps a coleta;
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Swab com meio de transporte - em temperatura ambiente (20 a 25 ) at 24 horas aps a coleta;
Aspirado (agulha e seringa) - em temperatura ambiente (20 a 25) at 2 horas ou injetar a
amostra em frasco com meio de cultura apropriado;
Bipsia em temperatura ambiente (20 a 25) at 2 horas aps a coleta.

d) Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.14. CULTURA PARA GONOCOCO

a) Amostras
Paciente do sexo masculino: Secreo uretral ou 1 jato urinrio;
Paciente do sexo feminina - Secreo endocervical, uretral ou secreo do fundo do saco
vaginal - Crianas e mulheres histerectomizadas;
Oftalmia gonoccica: Secreo anal e secreo orofarngea;
Outras amostras: Secreo anal e secreo orofarngea.

b) Tipos de swab
Secreo uretral: Algodo alginatado haste de alumnio;
Secreo do endocrvice: ocular, anal e orofarngea. Algodo alginatado haste plstica.

c) Tcnica para coleta de secreo masculina

Orientaes importantes
A coleta de amostra de secreo uretral deve ser feita, de preferncia, pela manh, antes de o
paciente urinar.
Caso no seja possvel esperar pelo menos 03 horas, aps a ltima mico.
O paciente no deve estar em uso de antibitico, caso esteja, a coleta s realizada sete dias aps
o trmino do tratamento. Jamais coletar secreo emergente.

88

Procedimento para coleta


Solicite ao paciente para retrair o prepcio;
Limpe a secreo emergente com gaze estril;
Introduza o swab alginatado, cerca de 02 cm, no canal uretral, atravessando a fossa navicular;
Gire o swab, delicadamente, cerca de 08 a 10 vezes, para absorver a secreo;
Retire o swab; faa um esfregao fino e homogneo em lmina, e inocule a amostra em meio de
cultura apropriado.

d) Tcnicas para coleta de secreo feminina

Orientaes importantes
A coleta da secreo feminina deve ser feita aps 03 horas da ltima mico;
A paciente no deve estar sob o efeito de tratamento com antibitico. Caso esteja, a coleta s
dever ser realizada 07 dias aps o trmino do tratamento;
No utilizar espculo lubrificado; utilize gua morna para facilitar a introduo especulo;
Jamais utilize ala bacteriolgica para fazer a coleta.

Procedimento para coleta


Introduza o espculo;
Limpe, com gaze estril; a secreo do fundo do saco vaginal e a que recobre o colo do tero;
Introduza o swab alginatado ou com carvo, cerca de 01 cm no canal endocervical, girando-o,
delicadamente, de 08 a 10 vezes, para absorver a secreo. Cuidado para no tocar as paredes
vaginais;
Retire o swab, sem tocar as paredes vaginais;
Inocule o material, imediatamente, em meio de cultura apropriado.

e) Tcnica para coleta de secreo ocular.


Limpe a secreo externa do olho, com gaze estril;
Afaste plpebra e limpe a secreo acumulada nos cantos do olho;
Colete material dentro da conjuntiva, com auxlio do swab;
Inocule o material, imediatamente, em meio de cultura apropriado.
89

f) Tcnica para coleta de secreo anal


Introduza o swab alginatado no reto, cerca de 2 cm;
Faa movimentos circulares junto parede retal, raspando o material das criptas, por 30
segundos, para absorver a secreo;
Repita o procedimento com novo swab, caso o swab toque as fezes;
Inocule o material, imediatamente, em meio de cultura apropriado.

g) Preparo de amostra:
Bacterioscopia
Utilize lminas limpas, desengorduradas e novas, e siga os procedimentos abaixo:
Identifique corretamente as lminas;
Prepare sempre duas lminas para cada teste, sendo uma de reserva para caso de acidentes ou
resultado insatisfatrio da coleta;
Gire o swab, delicadamente, sobre a superfcie central da lmina; obedea a margem da lmina;
Deixe o esfregao secar em temperatura ambiente;
Jamais fixe o esfregao em chama; o fixador est no corante;
Core, pelo mtodo de Gram, ou envie ao Laboratrio, envolvida em papel alumnio.

h) Semeadura e armazenamento
Procedimento
Semeie em meio Thayer-Martin modificado;
Assegure-se de que o meio est em condies adequadas de uso e temperatura ambiente;
Faa no meio, uma estria em forma de Z. Gire o swab, delicadamente, sobre o meio, at
completar a estria;
Estrie novamente no sentido inverso do Z, com uma ala bacteriolgica estril e resfriada;
Coloque as placas em posio de cultura (com a tampa para baixo), dentro da lata;
Coloque, no fundo da lata, um chumao grande de algodo embebido em gua, para garantir a
umidade;
Utilize o sistema da vela para obter uma atmosfera entre 3% e 7% de CO2;
Feche hermeticamente a lata, vedando-a com fita crepe ou esparadrapo;
90

Inocule, em estufa, a 35 C entre 24 e 48 horas, e envie para o Laboratrio.

Observao: As placas de Thayer-Martin devem ser guardadas em sacos plsticos, bem vedados, e
conservados sob refrigerao. Devem ser utilizadas em mdia, at 10 dias, aps 10 dias, aps seu
preparo. Depois desse perodo, a atividade dos antibiticos pode diminuir. Alm disso, o meio sofre um
processo de desidratao tornando-se inadequado para o uso.

i)Transporte de amostra:
Procedimento para encaminhamento
As lminas, para bacterioscopia, pela tcnica de Gram, devem ser transportadas em temperatura
ambiente; certifique-se de que as duas lminas esto corretamente identificadas e embaladas em
papel alumnio;
As placas de Thayer-Martin devem ser enviadas ao Laboratrio, dentro da lata vedada, com
tenso de CO2 e umidade, no mesmo dia da coleta ou aps 24 horas de incubao. Jamais
refrigere a amostra.

j) Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.15.

CEPAS

BACTERIANAS

PARA

PESQUISA DE KPC (Cepas produtoras

de

Carbapenemases)
Enviar as placas com repiques recentes (24 horas de incubao), vedar com fita crepe, acondicionar em
caixa de transporte de amostras biolgicas e encaminhar a temperatura ambiente juntamente com o
formulrio de encaminhamento com as informaes;
Nome do paciente;
Idade;
Tipo amostra;
Resultado do antibiograma;
Procedncia;
Doena de base
91

Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.16. SOROLOGIA PARA LEPTOSPIROSE

Deteco de anticorpos IgM anti-leptospira por meio ensaio imunoenzimtico para diagnstico da
leptospirose humana

Protocolo de coleta para sorologia:


A sorologia para leptospirose dever ser coletada a partir do 7 dia dos primeiros sintomas;
Enviar a amostra sob refrigerao.
Enviar o mais rpido possvel ao Laboratrio central com ficha de identificao.

Prazo de entrega dos resultados:


05 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN

7.17. SOROLOGIA PARA FEBRE MACULOSA


Teste de fluorescncia indireta (IFA) para anticorpos IgG anti-Rickettsia rickettsii.

Protocolo de coleta para sorologia:


As amostras devem ser pareadas para demonstrar a soroconverso ou aumento significativo de
ttulos. Logo, a primeira coleta deve ser feita com 07 aps o incio dos sintomas e a segunda
coleta aps 14 dias do incio dos sintomas.
Enviar a amostra sob refrigerao.
Enviar o mais rpido possvel ao Laboratrio central com ficha de identificao.
No usar amostras excessivamente lipmicas.

Prazo de entrega dos resultados:


10 dias teis aps a chegada do material biolgico no LACEN.

92

Observao: Quando a amostra enviada para o laboratrio de referncia este prazo ser estendido.

TEMPO CRTICO E MEIOS DE TRANSPORTE PARA AMOSTRAS DE CULTURA E


EXAME BACTERIOLGICO
AMOSTRAS

TEMPO CRTICO

MEIOS DE TRANSPORTES

Secrees genitais
para pesquisa de Clamdia

Imediatamente ou congelada 20 C

Embalada

em

papel

absorvente

ou

papel

alumnio, e transportar em isopor com gelo.


Secreo naso-farngea para
pesquisa de Coqueluche

Imediatamente ou aps 24 h de Meio de REGAN LOWE, temperatura ambiente.


incubao 36 C

Secreo oro-farngea para


pesquisa de Difteria

Imediatamente ou aps 24 h de Meio de PAI, temperatura ambiente.


incubao 36 C
Imediatamente

Escarro
Ferida cirrgica e tecidos

ou

conservada

em Frasco estril, temperatura ambiente.

temperatura de 2 a 8 C
30 minutos ou at 12 horas (meio de Meio
transporte)

Fludos orgnicos

de

transporte

STUART,

temperatura

ambiente.

30 minutos, sendo o mximo aceitvel Tubo seco estril, temperatura ambiente.


de 1 a 2 horas.

Secreo uretral para


pesquisa de Gonococo

Meio

de

THAYER

MARTIN,

temperatura

Imediatamente ou aps 24 h de ambiente.


incubao em lata com CO2 e umidade

Hemocultura (sangue)

Frascos com meio de cultura para rotina manual


30 minutos, sendo o mximo aceitvel ou
de 1 a 2 horas.

Lavado bronco alveolar

Automatizada: temperatura ambiente.

30 minutos, sendo o mximo aceitvel Frasco estril, temperatura ambiente.


de 1 a 2 horas.

Meningite

Aps 24-48 horas de incubao 36 C

Meio de cultura, temperatura ambiente.

Imediatamente

Isopor com gelo

Imediatamente ou em at 24 horas

Meio de STUART, temperatura ambiente.

Secreo urogenital para


pesquisa de Micoplasmas
urogenitais
Secreo Orofarngea

93

Ponta de cateter

30 minutos, sendo mximo aceitvel de Tubo seco estril, temperatura ambiente.


1 a 2 horas.

Urina

Imediatamente

ou

conservada

em Frasco estril, isopor com gelo.

temperatura de 2 a 8 C

Observao: importante observar o tempo crtico para cada amostra, para a melhoria da qualidade do
diagnstico.

7.18 BACILOSCOPIA, CULTURA, IDENTIFICAO E TESTE DE SENSIBILIDADE PARA


Micobacterium tuberculosis

7.18.1 Condies gerais


A amostra deve ser recebida em qualquer horrio de funcionamento do laboratrio, observando os
seguintes itens:
a) transporte e acondicionamento corretos;
b) acompanhada da requisio, devidamente preenchida;
c) amostra insuficiente ou inadequada ser devolvida acompanhada do formulrio de Amostra No
Conforme Critrios de Rejeio para Amostra no Conforme em duas vias, a 1 via deve ser enviada
ao solicitante/unidade de sade e a 2 via, deve ficar arquivada com a requisio dos exames.

7.18.2. Orientaes especficas de coleta e transporte


Escarro:

Uma boa amostra de escarro a que provm da rvore brnquica, obtida aps esforo de tosse, e no a
que se obtm da faringe ou por aspirao de secrees nasais nem tampouco, a que contm somente
saliva. O volume de 05 a 10 ml o ideal.
Ao despertar pela manh, o paciente deve lavar bem a boca, inspirar profundamente, deter por um
instante o ar nos pulmes e lan-lo fora pelo esforo da tosse. Deve repetir a operao at obter trs
eliminaes de escarro, evitando que escorra pela parede externa do pote As amostras devem ser
colhidas em local aberto, de preferncia ao ar livre ou em sala bem ventilada;

94

Nota: devem ser coletadas duas amostras de escarro de cada paciente, para aumentar as chances de se
obter um resultado positivo. Essas amostras devem ser coletadas de acordo com o seguinte esquema:

1 amostra coletada quando sintomtico respiratrio procura o atendimento na unidade de sade, para
aproveitar a presena dele e garantir a realizao do exame laboratorial. No necessrio est em
jejum;
2 amostra coletada, na manh do dia seguinte, assim que o paciente despertar. Essa amostra,, em
geral, tem uma quantidade maior de bacilos porque composta da secreo acumulada na rvore
brnquica por toda a noite.

Observao: Se o envio ao laboratrio for realizado no mximo em 24 horas, as amostras de escarro


podero ficar em temperatura ambiente, protegidas da luz solar.

Coleta de outros materiais

Lavado gstrico
A obteno desse espcime requer hospitalizao, pois colhido logo que o paciente acorda, antes
mesmo de se levantar e comer. Adicionar carbonato de sdio 1mg/1ml de lavado para neutralizar o
suco gstrico. Esse mtodo indicado para criana, pois essas deglutem o escarro. Deve-se colher pelo
menos duas amostras em dias consecutivos, em recipiente limpo.

Urina
Colhe-se toda a urina da primeira mico da manh em frasco limpo, aps higiene ntima com gua.
Utiliza-se um nmero mnimo de trs e no mximo de seis amostras colhidas em dias consecutivos;

Lquidos asspticos
Recomenda-se que o material seja enviado imediatamente ao laboratrio para que a semeadura seja
feita para se obter maior positividade;

95

Pus
Coletado assepticamente de abscessos no drenados com uma agulha estril em seringa.Aps a coleta,
retirar a agulha com uma pina e passar o material para um frasco estril;

Coleta com swab

Este deve ser umedecido em salina ou gua estril antes da coleta. Aps a coleta, deve permanecer em
um frasco estril com salina suficiente para mant-lo mido at o procedimento do exame.

Transporte das amostras

Devem-se considerar trs condies importantes: manter sob refrigerao, proteger da luz solar, e
acondicionar de forma adequada para que no haja risco de derramamento; Colocar os potes com as
tampas bem fechadas e voltadas para cima dentro de um saco plstico e depois dentro da caixa de
transporte (figura 5). Proceder como em 7.16.3 itens e, f, g, h, i, j. Se o transporte exceder 24 horas
enviar sob refrigerao.

Nota: No so mais utilizadas as fezes para diagnstico da tuberculose intestinal. Neste caso indicada
a bipsia.

7.18.3 Envio de culturas do Mycobacterium tuberculosis para o LACEN


a) O tubo com a cultura do M. tuberculosis deve ter tampa rosquevel, prova de vazamento;
b) Para o transporte, este tubo deve ser envolvido com papel absorvente, ou papel bolha em quantidade
suficiente para absorver o material e protege-lo em caso de acidente;
c) O tubo embalado deve ser colocado dentro de um recipiente de paredes rgidas, a prova de
vazamentos e inquebrvel (pode ser uma lata de leite em p com tampa) contendo etiqueta com as
caractersticas da amostra (Figuras 3);
d) Este recipiente deve ser colocado dentro de outra embalagem, podendo ser uma caixa de papelo,
isopor ou polietileno, que deve conter o rtulo de material infectante ou de risco biolgico (Figura 3)
juntamente com o nome, telefone e endereo da pessoa que deve ser avisada em caso de acidente com a
(s) cultura(s)
96

Figura 03 - Modelo do frasco com parede rgida

Figura 04- Papel polibolha

e) Completar o espao da caixa com papel amassado ou polibolha, (Figura 4) para evitar o movimento
do recipiente contendo a amostra;
f) Colocar as requisies correspondentes, devidamente preenchidas, dentro de um saco plstico;
g) Vedar bem o saco e fix-lo na parte interna da tampa da caixa;
h) Fechar e vedar bem a caixa;
i) Identificar com destinatrio, remetente;
j) Enviar ao laboratrio.
Nota:
Este transporte realizado em temperatura ambiente.
As orientaes acima servem para qualquer tipo de cultura que deva ser encaminhada ao LACEN.

Figura 05 - Modelo de caixa de transporte de amostras


97

7.18.4. Prazo de entrega dos resultados:


40 a 60 dias aps a chegada do material biolgico no LACEN.

7.19 EXAMES MICOLGICOS


Micologia a cincia especializada em estudar fungos e as enfermidades causadas por eles, tanto no
homem como em animais.
Existem diversas circunstncias que favorecem as infeces fngicas; dentre elas podemos ressaltar a
utilizao de teraputicas imunossupressoras e o aparecimento da AIDS.
O diagnstico de uma infeco fngica tem por base a combinao de dados clnicos e laboratoriais,
incluindo:
Demonstrao do fungo no material examinado pela microscopia e cultura;
Deteco de antgenos e metablitos de fungos, nos lquidos corpreos ou tecidos.

a) Procedimento de coleta:
Escamas de pele
Material coletado com auxlio de cureta dermatolgica, lmina de bisturi ou lmina de
microscopia;
Raspar vigorosamente as bordas de todas as leses cutneas;
Acondicionamento poder ser feito em placa de petri ou entre 2 lminas, identificadas e vedadas
nas extremidades
Enviar temperatura ambiente.

Plos e Cabelos
Material coletado com auxlio de pina flambada, onde os pelos tonsurados so arrancados ou
com auxlio de lmina de microscpio, fazer um raspado na rea de rarefao de pelos
(alopecia);
Acondicionamento poder ser feito em placa de petri ou entre lminas identificadas e vedadas
nas extremidades;
98

Enviar temperatura ambiente.

Unhas
Fazer uma assepsia com lcool a 70% e logo aps realizar o raspado;
Material coletado com auxlio de cureta dermatolgica ou com lmina de microscpio;
Despreza-se a hiperceratose na parte mais distal e atingir a regio adentro da matriz ungueal
(borda proximal e lateral da unha);
Acondicionamento poder ser feito em placa de petri ou entre lminas identificadas e vedadas
nas extremidades;
Enviar temperatura ambiente.

Mucosas: orifcios naturais e secrees diversas


Material com auxlio de swab estril, no mnimo em 02 para cada leso encontrada ( um para o
exame direto e outra para cultura);
Caso o material no possa ser enviado imediatamente para o laboratrio deve ser colocado em
salina e mantido sob refrigerao por at 24 horas (enviar sob refrigerao) ou semeado em
meio de cultura (Agar Saboroud e Agar Mycobiotic), e identificado;
Quando semeado em meio de cultura, enviar temperatura ambiente.

Conjuntiva e Crnea
Secreo conjuntiva coletada com auxlio de swab, porm o material da crnea coletado por
um oftalmologista;, mediante procedimento cirrgico;
Aps a coleta o material dever se semeado o mais rapidamente para evitar dessecao e perda
da amostra;
(Caso no seja possvel, deve ser conservado em salina e sob refrigerao por at 24 horas
(enviar sob refrigerao)) ou semeado em meio de cultura (Agar Saboroud e Agar Mycobiotic),
e identificado;
Quando semeado em meio de cultura, enviar temperatura ambiente.
99

Bipsia de Tecido ou rgos


Material coletado por profissional mdico habilitado;
A regio dever ser abordada de forma assptica
Material dever ser processado imediatamente ou conservado em salina estril, em temperatura
ambiente por 24 horas, ou semeado em meio de cultura (Agar Saboroud e Agar Mycobiotic,
Agar BHI com sangue a 5%), e identificado;
No acondicionar sob refrigerao, principalmente em caso de suspeita de zigomicose;
Este material o de escolha para diagnostico das micoses subcutneas e profundas;
Enviar em temperatura ambiente. No pode ser refrigerado.

Sangue Perifrico
Segue o mesmo procedimento de coleta de hemocultura, coleta-se 5 a 10 ml de sangue
perifrico;
De acordo com as recomendaes do fabricante dos meios.
Este material poder ser inoculado em frascos contendo BHI para hemocultura bacteriana, ou
semear diretamente 01 ml do sangue nos tubos com meio de cultura (Agar Sabouraud e Agar
Mycobiotic) e identificado;
Enviar todos os meios de cultura em temperatura ambiente.

Medula ssea
Segue as mesmas medidas de assepsia preconizada para sangue perifrico;
Dever ser coletado por profissional mdico;
O volume de 01 ml suficiente para semeadura nos meios de cultura (Agar Sabouraud e Agar
Mycobiotic) e identificando;
Enviar em temperatura ambiente.

100

Lquido cefalorraquidiano
Material coletado por profissional mdico habilitado, obedecendo a tcnica de puno lombar,
coletando-se de 03 ml a 05 ml, os quais devem ser condicionados em tudo estril e
temperatura ambiente;
Em virtude da natureza do material, no se recomenda nenhum tipo de estocagem da amostra,
devendo ser encaminhada o mais urgente possvel para procedimento laboratorial ou semeadas
em meio de cultura (Agar Sabouraud), e identificada;
Enviar em temperatura ambiente.

Urina
Material coletado em frasco estril, aps cuidadosa degermao da regio urinria;
Coleta-se, ento, entre 10 ml a 20 ml do jato intermedirio;
Amostra coletada por sonda vesical implantada no momento da coleta, ou ainda coletada pr
puno supra pbica tem se mostrado melhor espcime clnico; nestes casos pode-se coletar
volume bastante reduzido (3 ml a 5 ml);
No se deve utilizar urina armazenada em frasco ou bolsa tipo coletor ligado a uma sonda
vesical de sistema aberto ou fechado;
Enviar a amostra imediatamente ou dever ser semeada aps centrifugao no Agar Sabourraud
e Agar Mycobiotic, e identificada;
Enviar em temperatura ambiente;

Fezes
Material coletado em frasco estril ou swab retal profundo;
Por causa da heterogeneidade microbiana das fezes e da competio pelos substratos orgnicos,
no se aconselha armazenamento, devendo este material ser processado num perodo mximo
de 02 horas;
Caso no seja possvel, acondicionar as fezes em meio de transporte Cary-Blair e identificadas,
ou semeadas em meio de cultura (Agar Sabouraud e Agar Myconiotic);
101

Enviar todos os meios de cultura e o meio de transporte em temperatura ambiente.

Escarro
O Material deve ser coletado por expectorao espontnea, em recipientes estreis e
descartveis;
Esta amostra dever ser coletada aps rigorosa higiene bucal para evitar contaminao da
microbiota da cavidade oral com patgenos oportunistas, tais como Cndida sp.
Outros materiais como: aspirado traqueobrnquico, lavado brnquico e lavado bronco-alveolar
so os melhores espcimes clnicos;
O tempo de processamento das amostras no deve ser superior a 02 horas;
Caso no seja possvel, semear a amostra em meio de cultura (Agar Sabouraud e Agar
Mycobiotic) e identificadas;
No se recomenda refrigerar a amostra, enviar em temperatura ambiente.

Prazo de entrega dos resultados:


At 30 dias aps a chegada do material biolgico no LACEN.

102

8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Aes Bsicas de Sade. Diviso Nacional de
Laboratrios de Sade Pblica. Normas tcnicas para o diagnstico das meningites bacterianas.
Braslia, DF; Centro de Documentao do Ministrio da Sade, 1986.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Aes Bsicas de Sade. Diviso Nacional de
Laboratrios de Sade Pblica. Normas, mtodos e tcnicas para o diagnstico laboratorial de
febre tifide. Braslia, DF, 1986.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Aes Bsicas de Sade. Diviso Nacional de
Laboratrios de Sade Pblica. Normas, mtodos e tcnicas para isolamento e diagnstico das
enterobactrias. Braslia, DF, 1985.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Assistncia Sade. Programa Nacional de


Controle de Doenas Sexualmente Transmissveis/Aids. Manual para controle das doenas
sexualmente transmissveis. Braslia, DF, 1993.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria Nacional de Assistncia Sade. Programa Nacional de


Controle de Doenas Sexualmente Transmissveis/Aids. Manual de procedimentos bsicos em
microbiologia clnica para o controle da infeco hospitalar. Braslia, DF, 2001.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Polticas de Sade. Coordenao Nacional de DST e


Aids. Tcnica para coleta de secrees. 2. ed. Braslia, DF, 1997.

BRASIL. Ministrio da Sade/Fundao Nacional de Sade/Centro de Referncia Professor Hlio


Fraga Manual de Baciloscopia da Tuberculose, 1 edio, Rio de Janeiro, 1998, 48 p: il.

BRASIL. Ministrio da Sade/Secretaria de Polticas de Sade/Coordenao Nacional de Doenas


Sexualmente Transmissveis e Aids Tuberculose Diagnstico Laboratorial Baciloscopia. I. Srie
TELELAB. 2001. 72 p.: il.
103

BRASIL, Ministrio da Sade, Fundao Nacional de Sade. Guia de Vigilncia Epidemiolgica,


Cap.4.

BRASIL, Ministrio da Sade. Normas tcnicas para diagnstico das meningites bacterianas.
Braslia, Grfica Brasiliano, 1986.49 p.

BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Polticas de Sade. Departamento de Ateno Bsica.


Guia de baciloscopia de hansenase. Braslia, DF, 1993.

BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Nacional de Sade. Coordenao de Controle de Zoonoses e


Animais Peonhentos. Manual de Leptospirose. Braslia, DF, 1995.

BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Nacional de Sade. Guia de Vigilncia Epidemiolgica. 5.


ed. Braslia, DF, 2002. vol I e II.

EVANS, E.C.V.; RICHARDSON, M.D. Medical Mycology: A Practical Aproach. Oxford: Press,
1989.

FERREIRA, E.M.; CARNEIRO, J. C. O.; SILVA, G. A. C; CAVALCANTE, W. B. Coleta de


material para exame microbiolgico. Mdulo Especial V. Laboratrio de Microbiologia da Unidade
de Patologia Clnica. Ncleo de Controle de Infeco Hospitalar. HRT, Reviso 2008

LACAZ, C. da Silva; PORTO, E. M; COSTA, J.E. Micologia Mdica. So Paulo: Sarvier, 1991.

OPLUSTIL, C. P. et al. Procedimentos bsicos em Microbiologia Clnica. 2. ed. Ver. E ampl. So


Paulo: Sarvier, 2004.

OPUSTIL, C.P.; ZOCCOLI.C.M.; TOBAUTI, N.R.; Procedimentos bsicos em microbiologia


clnica.2.ed. So Paulo: Sorvier,2004.304 p.

104

PILONETTO, M., PILONETTO, D. Manual de procedimentos laboratoriais em microbiologia.


Pinhais. Microscience, 1998.

SO PAULO (ESTADO). Secretaria de Estado da Sade. Coordenao dos Institutos de Pesquisa.


Instituto Adolfo Lutz. Centro de Vigilncia Epidemiolgica Prof. Alexandre Vranjac. Treinamento
para coleta de secreo nasofaringe para cultura no diagnstico laboratorial da coqueluche. So
Paulo, [2000].

SO PAULO (ESTADO). Secretaria de Estado da Sade. Coordenao dos Institutos de Pesquisa.


Instituto Adolfo Lutz. Centro de Vigilncia Epidemiolgica Prof. Alexandre Vranjac. Treinamento de
difteria. So Paulo, [2000].

SIDRIN, J.J.C.; MORREIRA, J.L.B.; Fundamentos clnicos e laboratoriais da micologia mdica.


Rio de Janeiro; Guanabara-Koogan, 1999. p.10-12.

105

9.ANEXOS
ANEXO A

Ficha do Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL


106

MDULO III
ORIENTAES PARA COLETA, ACONDICIONAMENTO E TRANSPORTE
DE AMOSTRAS PARA ANLISES LABORATORIAIS DE PRODUTOS DE
INTERESSE DA VIGILNCIA SANITRIA E AMBIENTAL.

107

01. CONSIDERAES GERAIS

O presente Manual tem como objetivo, orientar, estabelecer e divulgar as Normas de Procedimentos
para coleta, quantidade ideal, acondicionamento, transporte e embalagem para encaminhamento das
amostras ao LACEN/CE, de acordo com as disposies da legislao em vigor e com a finalidade de se
obter resultados confiveis.

02. MODALIDADES DE ANLISES

As modalidades de anlises realizadas no LACEN/CE so:

2.1. Anlise Fiscal


aquela efetuada em substncias e produtos em carter de rotina, para apurao de fraude de infrao
sanitria, identificao de contaminantes ambientais ou verificao de ocorrncia de desvio quanto a
qualidade, segurana e eficcia dos produtos, substncias ou matrias primas.
Para realizao da anlise fiscal, a amostra deve ser colhida pelo rgo da Vigilncia Sanitria, sendo
dividida em 03 partes, tornada inviolvel, para que se assegurem as caractersticas de conservao e
autenticidade. Uma delas ser entregue ao detentor ou responsvel a fim de servir como contraprova, e
as outras duas, junto com o Termo de Coleta (TC) sero entregues ao Laboratrio, uma para realizao
das anlises e a outra para servir de amostra testemunho.
Cada invlucro dever conter quantidades iguais de unidades do mesmo lote, data de fabricao e/ou
data de validade, suficientes para a realizao das anlises. O prazo para resultado de anlise de 30
(trinta) dias, a contar da data de recebimento da amostra.

2.1.1. Anlise Fiscal de Contraprova (Percia de contraprova)


aquela efetuada na amostra que ficou em poder do detentor, quando ocorrer discordncia do resultado
da anlise fiscal.
A Vigilncia Sanitria notifica o detentor, que tem um prazo de 10 (dez) dias para se defender e
requerer a percia de contraprova. A empresa indica um perito para acompanhar a anlise, que ser

108

realizada com a mesma metodologia analtica da anlise fiscal, salvo se houver concordncia dos
peritos quanto adoo de outra metodologia.
Na anlise de contraprova, o responsvel pela empresa dever apresentar os seguintes documentos:
Cpia da notificao empresa pela vigilncia;
Carta do fabricante solicitando Vigilncia a percia de contraprova;
Ofcio da Vigilncia ao LACEN agendando a data da percia de contraprova;
Cpia da carteira do conselho do responsvel tcnico pela empresa;
Pagamento de taxa, prevista em lei, atravs de DAE, retirado do site da Fazenda Estadual.

Preencher com o cdigo 6050 taxa de sade. O valor da taxa expresso em UFIR, variando de acordo
com o produto: alimento- MIC: 46,3644 UFIR/FQ: 66,6313 UFIR medicamento MIC: 36,7526
UFIR / FQ: 26,8105 UFIR / por ensaio.
O laudo da percia de contraprova ser entregue Vigilncia Sanitria junto com a ata do
procedimento.

2.1.2. Anlise Fiscal de Desempate (Amostra Testemunho)


Esta anlise um desdobramento da percia de contraprova, e se d quando h discordncia entre os
resultados da anlise fiscal e da percia de contraprova. O Laboratrio Oficial poder requerer uma
nova anlise pericial na segunda amostra que est em seu poder.

2.2. Anlise de Orientao / Surto


No prevista na Legislao, realizada pelo Laboratrio, em comum acordo com os rgos fiscais em
produtos cuja natureza ou forma de coleta ou finalidade da anlise, no permita a realizao da anlise
fiscal.
03. DEFINIES
3.1. Termo de Coleta (TC)
Instrumento legal que subsidia os agentes de Vigilncia Sanitria, quando da apreenso de amostras de
produtos a serem submetidas a anlise fiscal.
109

3.2. Ficha de Coleta


Documento que espelha dados relativos amostra de gua, que sero submetidas anlise.

3.3. Boletim de Anlise ou Laudo Analtico


Documento oficial do LACEN que expressa os resultados finais relativos a anlise de uma determinada
amostra.

3.4. Requerente
a entidade que solicita a anlise.

3.5. Detentor
a entidade responsvel legal pela amostra colhida pela Vigilncia Sanitria, que servir de
contraprova se necessrio.
04. TIPOS DE AMOSTRAS

4.1. Amostra para anlise fiscal


a alquota ou frao do produto (lote ou partida), apreendida pela Vigilncia Sanitria ou Vigilncia
Ambiental, em invlucro inviolvel e rotulado, acompanhada do Termo de Coleta (TC) ou Ficha de
Coleta (FC).
4.1.1. Amostra Testemunho para anlise fiscal
a alquota do produto de um mesmo lote ou partida, apreendida pela Vigilncia Sanitria, em
invlucro inviolvel e rotulado, acompanhada do mesmo TC da amostra para anlise fiscal e de
contraprova, que fica em poder do LACEN, para em caso de discordncia entre os resultados da anlise
fiscal e percia de contraprova, servir de desempate.
4.1.2. Amostra de Contraprova para anlise fiscal
a alquota do produto de um mesmo lote ou partida, apreendida pela Vigilncia Sanitria, em
invlucro inviolvel e rotulado, acompanhada do mesmo TC da amostra para anlise fiscal e de
testemunho, que fica em poder do detentor, destinada a execuo da percia de contraprova.
110

4.2. Amostra nica


Quando a quantidade ou natureza da amostra no permitir sua coleta em triplicata para realizao da
anlise fiscal, a coleta se dar em apenas um invlucro, que ser enviado ao Laboratrio Oficial pela
Vigilncia Sanitria, que notificar o representante legal da empresa para comparecer anlise, em data
marcada em comum acordo com o LACEN. Na ausncia do perito da empresa, 02 (duas) testemunhas
assinaro a ata, que ser enviada VISA, junto com o Laudo analtico.

4.3. Amostra para elucidao de surtos de Doenas Transmitidas por Alimentos (DTA)
aquela efetuada em amostras que apresentem indcios de surtos de DTA, por denncias ou outra
fonte. O Laboratrio deve orientar quanto a coleta, transporte e conservao da amostra a ser
pesquisada. O Boletim Epidemiolgico deve acompanhar a amostra para que as anlises sejam
direcionadas pelos sintomas apresentados. O Laudo da anlise dever ser emitido em 3 (trs) vias, uma
para a Vigilncia Sanitria, uma para a Vigilncia Epidemiolgica e uma para ser arquivada no
processo da amostra.

05. TAMANHO DAS AMOSTRAS


A quantidade de amostras apreendidas e remetidas ao Laboratrio depende da natureza do
produto, dos tipos de anlises a serem realizadas e do objetivo da coleta;
Para as anlises fiscais, as Legislaes estabelecem que a coleta seja feita em quantidade
suficiente ou representativa do estoque existente, dividida em 03 (trs) partes distintas
(triplicata);
Caso a quantidade ou natureza da amostra no permita a coleta em triplicata, realizar coleta de
amostra nica e encaminhar ao Laboratrio. Nesse caso, a Vigilncia Sanitria solicitar a
presena de um perito da empresa para acompanhar a anlise, que se tornar em anlise fiscal;
Baseado nestas disposies, o LACEN consolidou as tabelas em anexo, com as quantidades de
unidades por lote, para cada invlucro da triplicata, necessrio para a realizao dos testes
microbiolgicos, fsico-qumicos e microscpicos, previstos nas respectivas metodologias.

111

5.1. EMBALAGEM E ENVIO DAS AMOSTRAS


As amostras devero ser enviadas ao Laboratrio em suas embalagens originais, fechadas e
ntegras, sem sinais de violao e de deteriorao do produto. Devem ser do mesmo lote, data
de fabricao e/ou data de validade e acompanhadas do TC, onde devem ser descritos o motivo
da anlise, as condies de conservao, armazenamento no ponto de coleta e outras, quando
pertinentes;
As amostras perecveis, obrigatoriamente, devero ser acondicionadas em recipientes
isotrmicos com gelo.

06. CONSIDERAES ESPECFICAS

6.1. GUA
A coleta de amostras para anlise microbiolgica deve sempre anteceder a coleta para qualquer outro
tipo de anlise, a fim de evitar o risco de contaminao. As informaes do responsvel pela coleta e as
tcnicas adequadas empregadas na amostragem so de vital importncia para a realizao da anlise.
Cada amostra coletada deve ser identificada e acompanhada da Ficha de Coleta contendo as
informaes que a caracterize.
Vrias pores de gua coletadas no mesmo momento e local, em frascos diferentes, constituem a
mesma amostra. A pessoa responsvel pela coleta deve ser capacitada, uma vez que o procedimento
adequado de grande importncia para o resultado e interpretao das anlises realizadas.

6.2. Definies teis:

Potabilidade: a anlise efetuada em amostras de gua visando verificar se a mesma est adequada ao
consumo humano.
Balneabilidade: a anlise efetuada para verificar a qualidade da gua para recreao de contato
primrio.
Contato primrio: quando existir o contato direto do usurio com os corpos de gua como, por
exemplo, as atividades de natao, esqui aqutico e mergulho (Res. CONAMA n 274, 29/11/2000).

112

6.3. Responsabilidade pela coleta e envio das amostras


As amostras so colhidas e enviadas ao Laboratrio pela autoridade sanitria, seguindo as seguintes
orientaes:
A amostra para anlise microbiolgica deve ser transportada em frasco estril fornecido
pelo LACEN. A amostra para anlise fsico-qumica deve ser transportada em garrafas de
polietileno fornecidas pelo LACEN.
Depois de colhida, a amostra deve chegar ao Laboratrio observando o seguinte espao de
tempo:
01 (uma) hora depois de colhida, temperatura ambiente;
At 23 (vinte e trs) horas depois de colhida, devem ser acondicionadas baixa temperatura
(at 10 oC ), e enviadas imediatamente ao Laboratrio, pois em at 24 (vinte e quatro)
horas estas amostras devem ter suas anlises iniciadas;

OBSERVAO: para que seja mantida baixa temperatura, o frasco com a amostra de gua dever
estar acondicionado em saco plstico e colocado dentro de isopor com baterias de gelo.

6.4. Identificao/Ficha de coleta


O frasco deve vir identificado e acompanhado da Ficha de Coleta, (ver Anexo A), em cujo verso esto
as orientaes de preenchimento.

6.5. Frascos de Coleta


Para Anlise Microbiolgica

Os frascos para anlise microbiolgica so estreis, fornecidos pelo Laboratrio, com prazo de
validade de 03 (trs) meses. No sendo usado neste perodo deve retornar ao Laboratrio para
nova esterilizao;

Pesquisa de Coliformes totais e fecais: frascos esterilizados com capacidade de 100 a 200 mL,
contendo Tiossulfato de sdio;

113

Pesquisa de Bacterifagos fecais (Hepatite A): frascos esterilizados com capacidade para 500
mL;

Pesquisa bacteriolgica de Vibrio cholerae: frascos esterilizados com capacidade para 1.000
mL e/ou Swab de Moore;

Pesquisa de Salmonella typhi (febre tifide): frascos esterilizados com capacidade para 1.000
mL;

Ensaios microbiolgicos de gua para hemodilise: frascos esterilizados com capacidade de


200 mL;

Pesquisa de Burkolderia pseudomallei: frascos esterilizados com capacidade para 300 mL.

Para Anlise Fsico-qumica


Anlise Fsico-qumica: garrafa de vidro ou plstico com capacidade para 600 mL, lavada com
gua limpa, de preferncia com a prpria gua a ser colhida, 2 a 3 vezes;
Ensaios Fsico-qumicos de gua para hemodilise: frasco de plstico com capacidade de
1.000 mL, contendo soluo de cido ntrico.
6.6. Tcnicas de Coleta
a) gua Tratada
Verificar o ponto de coleta que recebe gua diretamente do sistema de distribuio, sem passar por
caixas ou cisternas;
Lavar as mos com gua e sabo;
Abrir a torneira e deixar a gua escorrer durante 2 (dois) minutos;

Remover a tampa do frasco junto com o papel protetor (no jogue o papel fora);

114

Segurar o frasco verticalmente prximo base e efetuar o enchimento, deixando um espao livre.
Fechar o frasco imediatamente aps a coleta, fixando bem o papel protetor ao redor do gargalo;

Identificar a amostra no frasco e na ficha de coleta com o mesmo nmero, com caneta esferogrfica,
para evitar a troca de amostras.

b) gua superficial (cisterna, rio e aude).


Identificar o frasco de acordo com a ficha de coleta, para evitar troca de amostras;
Lavar as mos com gua e sabo;
Retirar a tampa do frasco com o papel envoltrio (no jogar fora o mesmo porque tem a finalidade
de evitar a contaminao da gua)
Com uma das mos, segurar o frasco pela base, mergulhando-o rapidamente com a boca para baixo
cerca de 15 a 30 cm abaixo da superfcie da gua, para evitar a introduo de contaminantes
superficiais;
Direcionar o frasco, de modo que a boca fique em sentido contrrio a correnteza e inclinado a 60
para baixo. Se o corpo de gua for esttico dever ser criada uma corrente artificial, atravs da
movimentao do frasco na direo horizontal (sempre para frente);
Aps a retirada do frasco da gua, desprezar uma pequena poro da amostra, deixando um espao
vazio para permitir uma boa homogeneizao da amostra antes do incio da anlise;

115

Fechar o frasco imediatamente, fixando o papel protetor ao redor do gargalo e identificar


adequadamente a amostra no frasco e na ficha de coleta;

Em relao quantidade de amostra a ser colhida:


Aude: colher de trs (3) a quatro (4) pontos cruzados (dependendo do dimetro e vazo do mesmo);
Rio: colher em pontos equidistantes ao longo do percurso do mesmo.
Observaes para guas superficiais (rio, aude, lagoa):
Quando as amostras de gua forem coletadas diretamente de um corpo de gua receptor, selecionar
pontos de amostragem bem representativos da amostra de gua a ser examinada, evitando-se a coleta
de amostras em reas estagnadas ou em locais prximos margem;
Em pequenos cursos dgua a coleta deve ser a montante (prximo nascente) e a jusante (prximo
desembocadura);

Em grandes cursos dgua, considerar as distncias requeridas para a mistura adequada dos
lanamentos de poluentes no rio;
Na dvida quanto coleta da mistura no sentido lateral (de uma margem a outra), do ponto ajusante
da fonte poluidora, fazer a coleta em pontos mltiplos do eixo transversal do rio.

116

c) gua subterrnea (cacimba ou poo)


Identificar a amostra no frasco de acordo com a ficha de coleta para evitar troca da mesma;
Lavar as mos com gua e sabo;

Poos freticos com bomba de recalque:


Bombear a gua durante 5 minutos;
Fazer as determinaes de campo (residual de cloro e pH).
Poos freticos sem bomba de recalque:
Coletar amostra diretamente do poo, utilizando equipamentos adequados e esterilizados (balde de
inox especifico para esse fim), sem retirar amostras da camada superficial da gua, evitando a
contaminao com a espuma ou com o material das paredes do poo.
Nota: Na falta desse material, amarrar um cordo limpo no gargalo do frasco e prender a um
contrapeso. Descer cuidadosamente o frasco mais ou menos 30 cm, sem tocar nas paredes da
cacimba ou poo para encher (deixar acima da metade) do mesmo;
Retirar a tampa do frasco com o papel envoltrio (no jogar fora o mesmo porque tem a finalidade
de evitar a contaminao da gua);
Recolher e tampar corretamente o frasco, com o cuidado de no tocar suas bordas e a parte interna
da tampa com os dedos, conservando o papel de proteo que envolve a mesma.

117

Swab ambiental ou de Moore


Identificar a amostra no saco plstico para evitar troca do mesmo;
Lavar as mos com gua e sabo;
Desenrolar o swab e amarrar o cordo em arbustos, rvores ou cercas, longe dos curiosos;

o
Deixar os swabs por trs (3) dias ou setenta e duas horas (72 h);
Aps o prazo, colher em sacos plsticos individuais de primeiro uso.
Em relao quantidade de swabs colocados:
Aude: colocar de trs (3) a quatro (4) swabs em pontos cruzados (dependendo do dimetro e vazo do
mesmo);
Rio: Colocar os swabs em pontos eqidistantes ao longo do percurso do rio e prximo ao ponto
ajusante de fonte poluidora.

d) gua de Hemodilise
Nas unidades de hemodilise devem ser coletadas quatro amostras para anlise microbiolgica:

gua de abastecimento: gua proveniente da rede pblica ou poo artesiano;

118

gua tratada para dilise: gua utilizada no preparo da soluo dialtica e na limpeza e
desinfeco da mquina de hemodilise e dos dializadores. Coletar no ponto mais prximo da
mquina de hemodilise e no reuso (reprocessamento do dialisador), portanto duas amostras;

Soluo dialtica: gua tratada mais o concentrado de sais. Esta amostra deve ser coletada ao
final da sesso de hemodilise.

Identificar a amostra no frasco de acordo com a ficha de coleta, para evitar troca da mesma;
Lavar as mos com gua e sabo;
Retirar a tampa do frasco com o papel protetor (no jogar fora o mesmo porque tem a finalidade de
evitar a contaminao da gua);
Depois que a gua escorrer da torneira o tempo necessrio (1 a 2 min.), encher o frasco com
(deixar acima da metade) de gua e tampar corretamente, com o cuidado de no tocar suas bordas e
a parte interna da tampa com os dedos, conservando o papel de proteo que envolve a mesma.
e) gua de Fonte
Identificar a amostra no frasco para evitar troca da mesma;
Lavar as mos com gua e sabo;
Retirar a tampa do frasco com o papel protetor (no jogar fora o mesmo porque tem a finalidade de
evitar contaminao da gua);
Depois que a gua escorrer da torneira o tempo necessrio (1 a 2 min.) para a coluna de gua da
canalizao, encher o frasco com (um pouco acima da metade) de gua e tampar corretamente,
com o cuidado de no tocar suas bordas e a parte interna da tampa com os dedos, conservando o
papel de proteo que envolve a mesma;
Caso a gua da fonte no tenha canalizao, proceder da mesma forma para coleta de gua de
cacimba ou poo.
6.7. Transporte e Acondicionamento das amostras
As amostras devem ser coletadas, acondicionadas, transportadas e manipuladas no menor tempo
possvel, antes do exame, de maneira a manter suas caractersticas, permanecendo assim inalterados
seus constituintes e suas propriedades;

119

O gelo destinado refrigerao dever ser acondicionado em embalagem ntegra, de maneira que evite
o contato direto entre a amostra e o mesmo.

07. SOLO (PESQUISA DE Burkolderia pseudomallei)


7.1. Medidas de proteo durante a coleta de campo
Algumas medidas que visam proteo e integridade da equipe de coleta e das amostras devem ser
adotadas, como:
Considerar o material coletado como altamente perigoso.
Tamponar qualquer ferida com atadura a prova dgua.
Utilizar equipamentos de proteo individual (EPI) luvas, botas, macaces, mscaras, touca, etc.,
adequados atividade.
Levar o material e utenslios de coleta duplicados.
Colocar as amostras em caixas que no vazem gua;
Abrir o isopor lentamente, para evitar a produo de aerossis.
Limpar o material de coleta com gua sanitria e lcool, para evitar contaminao cruzada entre as
coletas.
Ao retornar, lavar os sapatos e os pneus do carro com gua sanitria ou etanol (70%).
Lavar as roupas utilizadas no campo, em separado.

7.2. Tcnica de Coleta


Cavar uma vala com profundidade de 30 cm., retirando pores de 10cm, 20cm e 30cm at 1 Kg;
Medir a temperatura e pH do solo em campo;
Identificar o solo (arenoso ou argiloso);
Colocar a amostra em sacos autoclavveis ou de primeiro uso;
Rotular e identificar a amostra. Informar a ocorrncia ou no de chuva nas ltimas 24 horas;
A cada coleta, limpar com toalha de papel e borrifar com lcool 70%, todo o equipamento
utilizado.
120

7.3. Material para coleta


Sacos plsticos estreis com lacre.
Pisseta com lcool a 70%;
EPI, p, balde.
08. PRODUTOS
8.1. Condies Gerais

Todos os produtos enviados ao LACEN so verificados visualmente pela sala de amostra, assim
como a sua documentao pertinente, com o fim de avali-las quanto aos critrios de aceitabilidade
entendidos como:

Quantidade amostral - Ver Anexos C, D,E e F.

Inviolabilidade, autenticidade e integridade dos invlucros;

Condies de conservao adequada do produto, conforme orientao do fabricante;

Correspondncia do material recebido com a documentao que a acompanha, termo de coleta


e/ou outros documentos que devam acompanhar a amostra, segundo modalidade de
anlise/produto/programa.

Todas as amostras enviadas ao LACEN, envolvendo surtos, para anlise fora do horrio de
expediente, finais de semana, ou dias de impedimento da sala de amostra, sero recebidas por um
responsvel designado pela mesma, que dever proceder de acordo com os seguintes cuidados:

Amostra(s) acondicionada(s) em caixa trmica, que a princpio necessita(m) de refrigerao,


dever (ao) ser armazenada(s) em geladeira, em local previamente estabelecido, at que o
tcnico de sobreaviso seja contatado para comparecer ao Laboratrio e proceder as anlises.;

Amostra (s) acondicionada(s) em caixa (s) de papelo, invlucro (s) plstico (s), ou similar (es)
que, a princpio no necessita(m) ficar sob refrigerao, dever (ao) ser guardada (s) na
recepo do LACEN, em temperatura ambiente, at que o tcnico de sobreaviso seja contatado
para comparecer ao Laboratrio e proceder as anlises.

O LACEN no atende anlises requeridas por solicitante privado, pessoa fsica. Podero ainda ser
excetuadas explicitamente pelo Laboratrio as anlises requeridas por rgos pblicos com a
121

devida autorizao da direo, com a finalidade de dar cumprimento a exigncias legais com
motivos de elevado risco sade dos usurios;

Amostras correspondentes a estudos interlaboratoriais, teste de proficincia ou anlises especiais


sero cadastradas de acordo com a modalidade respectiva.

8.2. Alimentos envolvidos em surtos Doenas transmitidas por Alimentos - DTA


Para elucidao de surtos de DTA, importante que a amostra seja constituda do alimento que foi
efetivamente consumido pelos afetados. A amostra significativa em qualquer quantidade, j que no
se constitui em amostra com fins de anlise fiscal e o estabelecimento de quantidade mnima passa a ser
relativo.
A distribuio de microrganismos em lotes ou pores individualizadas no alimento no homognea,
alm disso, as condies de acondicionamento, conservao, transporte e manuseio podem variar de
unidade para unidade da amostra e interferir na presena e/ou manifestao do agente. Para avaliao
da qualidade de alimento, esto estabelecidas quantidades mnimas, representativas ou no. No que se
refere s amostras relacionadas com DTA, nem sempre possvel cumprir com as orientaes.
Na impossibilidade de se coletar uma determinada quantidade de alimentos, existem algumas
alternativas:
Coletar algum (ns) produto(s) envolvido(s) no preparo do alimento(s). Se slido, em sacos
plsticos esterilizados ou de primeiro uso, ou em vidros esterilizados;
Examinar utenslios (panela, conchas, colher etc.) utilizados no preparo dos alimentos, caso no
tenham sido lavados. Recolher esse material em sacos plsticos esterilizados ou de primeiro uso;
Em determinadas situaes, exemplo suspeita de botulismo, na ausncia de restos do alimento
efetivamente consumido, a mostra coletada pode ser a prpria embalagem vazia. A toxina pode estar
presente nas paredes internas e ser retirada para anlise por enxaguadura. Outra unidade do mesmo lote
pode no apresentar a toxina botulnica.

A coleta da gua para consumo humano, ofertada no local de produo do alimento suspeito, dever ser
efetuada para observar se os padres fsico-qumicos e microbiolgicos esto adequados, de acordo
com a legislao sanitria vigente.
122

A sistematizao da coleta no tarefa fcil e para que o laboratrio obtenha resultados confiveis,
alguns procedimentos devem ser seguidos, conforme o quadro a seguir.

8.3. Coleta, conservao, acondicionamento e transporte de amostras para elucidao de surto de


DTA ver anexo B
Observaes
1. Todas as amostras devem ser devidamente rotuladas e identificadas, acondicionadas em recipientes
apropriados e acompanhadas de Termo de Coleta de Amostras e Formulrio de Inqurito Coletivo de
Surto de Doena Transmitida por Alimentos;
2. O responsvel pela coleta dever comunicar ao laboratrio, o mais rpido possvel, sobre o envio das
amostras para anlise;
3. A utilizao do gelo seco requer precaues especficas, tais como: manipulao com proteo,
veculo de transporte com ventilao adequada, embalagem no hermtica, etiqueta com a seguinte
indicao: contedo conservado com gelo seco.
09. CRITRIOS DE ACEITAO E REJEIO DAS AMOSTRAS DE GUA E PRODUTOS
9.1. gua / Solo
Quantidade Insuficiente;
Acondicionamento Inadequado;
Tempo de Coleta superior s 24 horas;
Ultrapassando o horrio estabelecido pelo LACEN: at s 16h00min h de 2 a 5 feira e at
14h00min h na 6 feira;
Frasco com amostra sem identificao;
Amostra sem a ficha de coleta;
9.2. Produtos

Quantidade insuficiente para a anlise;

Acondicionamento Inadequado;

Termo de coleta preenchido de forma incorreta e ilegvel;

123

Observao: No caso de rejeio da amostra, preencher a ficha (Anexo G) com o motivo da devoluo
do produto.

10. BOLETIM DE ANLISE OU LAUDO ANALTICO

Informaes sobre os itens pertinentes ao Laudo analtico:


Anlise: tipo de anlise requerida (Fiscal, Contraprova, Orientao, Surto);
Programa: caso o produto faa parte de um programa, especificar (Ex: VIGIGUA);
Nome do produto: nome do produto segundo consta no seu rtulo;
Marca: marca do produto segundo consta no seu rtulo;
N do protocolo: nmero emitido pelo LACEN para controle de amostras;
Quantidade recebida: quantidade total da amostra recebida pelo laboratrio;
Data da coleta: data em que a amostra foi coletada;
Data de fabricao: anotar a data constante no rtulo do produto;
Validade: idem ao item anterior;
Lote: identificao completa do lote ao qual corresponde a amostra;
Termo de apreenso ou coleta da amostra: nmero do termo de coleta da amostra;
Registro: nmero de registro do Ministrio da Sade. Quando no consta este nmero, anotar N/C
(nada consta);
Importador/Distribuidor: quando se tratar de produto importado, anotar nome do importador ou
distribuidor segundo consta no rtulo do produto;
Logradouro: endereo legal do importador ou distribuidor segundo consta na rotulagem;
Pas: pas sede do importador ou distribuidor;
Telefone: telefone da sede do importador ou distribuidor;
CNPJ: Cadastro Nacional de Pessoa Jurdica do importador ou distribuidor;
Local de coleta: o local onde foi efetuada a coleta da amostra;
Fabricante: nome do fabricante, segundo consta no rtulo;
124

Logradouro: endereo legal do fabricante segundo consta na rotulagem encaminhada;


Pas: pas sede do fabricante;
Telefone: telefone da sede do fabricante (se disponvel);
Requerente: rgo ou instituio que solicitou a anlise;
Pessoa de contato: pessoa formalmente representante do rgo requerente, a quem ser encaminhado o
boletim analtico;
Documento: identificao do documento que encaminha a amostra para anlise;
Data de entrega: data em que a amostra deu entrada no laboratrio, segundo consta no protocolo
institucional;
Descrio da amostra: descrever sucintamente o material recebido;
Unidades analticas selecionadas: laboratrios designados para realizao da anlise.

11. ENTREGA DE AMOSTRAS NO LACEN


Amostras de gua: de 2 (segunda-feira) a 5 (quinta-feira) das 07h00minh s 16h00minh, 6
(sexta-feira) e vspera de feriados de 07h00minh as 14h00minh.
Amostras de produtos: de 2 (segunda) a 6 (sexta-feira) das 07h00minh s 16h00minh;
As amostras devero conter: nmero de identificao, acompanhadas de fichas de coletas (gua),
termo de coleta (produtos) devidamente preenchida, isto , todas as informaes devero estar
completas.
As amostras de surto devem vir acompanhadas da Ficha Epidemiolgica.

12. PRAZO DE ENTREGA DOS LAUDOS.


Amostras de gua: prazo mximo de 05 (cinco) dias;
Amostras de produtos: prazo mximo de 30 (trinta) dias;
Telefones para informaes: fone: (85) 3101.1507 ou Fone/Fax 3101. 1513/1514.

125

13. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ASHOWN, L.R.; DUFFY, V.A & DOUGLAS, R.A.- Melioidosis. Medical Journal of Australia,
1:314-316, 1980.

AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION - Standard Methods for the Examination of


Water and Wastewater, 19 th, ed. Baltimoree, Maryland, USA, APHA, AWWA, WEF, 1995.

BRASIL. Ministrio da Sade. Manual integrado de preveno e controle de doenas transmitidas


por alimentos Gerncia Tcnica de Vigilncia Epidemiolgica das Doenas de Transmisso Hdrica
e Alimentar/MS DF 2000.

BRASIL. Ministrio da Sade. Clera, Manual de diagnstico laboratorial CNPC/MS DF


1992.

BRASIL. Fundao Oswaldo Cruz. Manual de coleta de amostras de produtos sujeitos Vigilncia
Sanitria - INCQS/FIOCRUZ RJ 1998.

BRASIL. Ministrio da sade. Fundao nacional de Sade / Comisso nacional de Preveno da


Clera. Manual Integrado de preveno e controle da Clera. 1ed. - Braslia: Fundao nacional de
sade, 1994.

BRASIL. Lei 5.991, de 17 de dezembro de 1973. Dispe sobre o controle sanitrio do comrcio de
drogas, medicamentos, insumos farmacuticos e correlatos, e d outras providncias. Dirio Oficial
[da Repblica Federativa do Brasil], Braslia. 18 dez.1973.

BRASIL. Decreto n.74.170, de 10 de junho de 1974. Regulamenta a Lei n. 5.991, de 17 de dezembro


de 1973, que dispe sobre o controle sanitrio do comrcio de drogas, Medicamentos, insumos
farmacuticos e correlatos. Dirio Oficial [da Repblica Federativa do Brasil], Braslia.

BRASIL. Decreto-Lei n.986, de 21 de outubro de 1969. Institui normas bsicas sobre alimentos.
Dirio Oficial [da Repblica Federativa do Brasil], Braslia.

126

BRASIL. Lei n. 6360, de 23 de setembro de 1976. Dispe sobre vigilncia sanitria a que ficam
sujeitos os medicamentos, as drogas, os insumos farmacuticos e correlatos, Cosmticos, saneantes e
outros produtos, e d outras providncias. Dirio Oficial [da Repblica Federativa do Brasil],
Braslia. 24 set. 1976.

BRASIL. Decreto n. 79.094 de 05 de janeiro de 1977. Regulamenta a Lei n. 6360 de 23 de setembro


de 1976, que submete ao sistema de vigilncia sanitria os medicamentos, insumos farmacuticos,
drogas, correlatos, cosmticos, produtos de higiene, saneantes e outros. Dirio Oficial [da Repblica
Federativa do Brasil], Braslia. 5 jan. 1977.

BRASIL. Lei n. 6437, de 20 de agosto de 1977. Configura infraes legislao sanitria federal,
estabelece as sanes respectivas, e d outras providncias. Dirio Oficial [ da Repblica Federativa
do Brasil ] , Braslia.

FORMAO e Organizao de Processos Referentes s Amostras de Produtos do INCQS. In:


MANUAL da Qualidade. Rio de Janeiro: INCQS/FIOCRUZ. Seo 10 (65.3500.005).

GIANOTO, N., BILATTO, M.A., Secretaria de Estado da Sade do Paran. Manual de tcnicas de
coleta e transporte de material clnico e meio ambiente para o diagnstico laboratorial, 1 ed.,
2005, Paran.

HOWARD, K., AND INGLIS, T. J. J. Novel Selective Medium for Isolation Of Burkholderia
pseudomallei. Journal of Clinical Microbiology, 3312-3316, 2003.

HARRISON, T. R.; BRAUNWALD, E.; FAUNCU. A. S. et al. Medicina Interna. McGraw Hill. 15
ed. v.1, p.1022.

MORAIS, G., et al., Secretaria de Sade do Estado da Bahia. Laboratrio Central Professor Gonalo
Moniz. Manual de coleta, acondicionamento e transporte de amostras para exames laboratoriais,
2 ed., 2007.

SANCHEZ.P.S. Manual de atualizao em tcnicas para o controle microbiolgico de guas


minerais, So Paulo 1999.

127

SO PAULO. Secretaria de Estado da Sade de So Paulo/Instituto Adopho Lutz. Manual de


diagnstico laboratorial de agentes patognicos de doenas veiculadas por alimentos.

UTILIZAO do Sistema de Gerenciamento de Amostras no Laboratrio de Controle da Qualidade,


In: MANUAL da Qualidade: Rio de Janeiro: INCQS/FIOCRUZ. Seo 10 (65.1130.003).

128

14. ANEXOS
ANEXO A

Solicitao de Anlise de Amostra Ambiental de gua

129

CONT. ANEXO A

130

ANEXO B
Orientaes de Coleta, conservao, acondicionamento e transporte de amostras para
elucidao de surto de Doenas Transmitidas por Alimentos - DTA
AMOSTRAS

MTODO DE COLETA

Alimentos
slidos
e Coletar, com o auxlio de utenslios
semisslidos / pastosos adequados, pores de diferentes partes do
prontos para consumo
alimento (superfcie, centro e laterais).
Mantendo a poro de seus componentes
quando for o caso, observando cuidados de
assepsia.
Transferir a poro para
recipientes apropriados.

Alimentos
bebidas

lquidos

Alimentos
em
matrias-primas
ingredientes.

CONDIES DE
TRANSPORTE
Em caixas isotrmicas, com gelo
reciclvel. No congelar e no usar
gelo seco. Transportar ao laboratrio
o mais rpido possvel.

ou Revolver ou agitar. Tomar a amostra de uma

das seguintes formas: com um utenslio


esterilizado, tomar cerca de 200 mL da
amostra e transferir assepticamente para um
recipiente esterilizado, ou colocar um tubo
largo esterilizado dentro do lquido e cobrir a
abertura superior com um dedo ou palma da
mo. Transferir o lquido para o recipiente
esterilizado.
Idem
geral, Coletar observando cuidados de assepsia e Produtos perecveis refrigerados
e proteo da embalagem original.
devem
ser
conservados
e
transportados em caixas isotrmicas
com gelo embalado para manter a
temperatura de 0C a 4C. No
devem ser congelados. Amostras
perecveis, mas no refrigeradas,
(acima de 10C), devem ser
resfriadas (0C a 4C). Amostras
congeladas em sua origem devem
ser mantidas com uso de gelo seco.
Amostras
no
perecveis,
j
embaladas ou secas devem ser
enviadas em temperatura ambiente.

131

ANEXO C
Tabela de Quantidade de Amostras de Medicamentos
AMOSTRAS

DFQ

DM

Endotoxina

TOTAL*

bacteriana
AEROSSIS (mais de 50 mL)

10

10

AEROSSIS (menos de 50 mL)

20

20

AMPOLAS (menos de 0,5 mL)

20

80**

106

AMPOLAS (entre 5 e 10 mL)

20

80**

106

AMPOLAS (entre 10 e 100 mL)

10

80**

96

AMPOLAS (mais de 100 mL)

40**

52

COLRIOS (entre 5 e 10mL)

12

80**

98

COMPRIMIDOS

100

100

CREMES (mais de 5g)

15

10

25

Drgeas/cpsulas

100

100

ELIXIR (mais de 10 mL)

12

ELIXIR (menos de 10 mL)

10

16

EMULSO (mais de 10 mL)

12

EMULSO (menos de 10 mL)

12

10

16

GEL (mais de 5 mL)

12

10

22

GRNULOS / PS

12

10

22

MATRIA-PRIMA (g)

50

60

110

PASTAS (mais de 5g)

20

10

30

POMADAS (mais de 5g)

20

10

30

POMADAS (menos de 5g)

20

10

30

POMADAS OFTLMICAS

10

22

38

SOLUO ANTISSPTICA (mais de 100 mL)

10

SOLUO ANTISSPTICA (menos de 100 mL)

14

132

SOLUO INJETVEL acima de 100 mL

10

40**

50

SOLUO INJETVEL at 100 mL

10

40**

50

SOLUO concentrada para hemodilise

SOLUO TPICA (mais de 10 mL)

14

SOLUO TPICA (menos de 10 mL)

10

18

SUPOSITRIOS/VULOS

30

15

45

SUSPENSO (mais de 10 mL)

10

10

20

SUSPENSO (menos de 10 mL)

12

10

22

TINTURA (mais de 10 mL)

12

TINTURA (menos de 10 mL)

10

16

UNGUENTO (mais de 5g)

12

10

22

XAROPE (mais de 10 mL)

12

XAROPE (menos de 10 mL)

12

10

22

(*) Referncia: FARMACOPIA BRASILEIRA


(**) Conforme Farmacopia Brasileira, quantidade mnima de amostras a serem testadas no Teste de Esterilidade :
20 amostras para volumes de menos de 10 a 100 mL / 10 amostras para volumes de 100 e acima de 500 mL.

133

ANEXO D - Tabela de quantidade de amostras de cosmticos


QUANTIDADE MNIMA POR INVLUCRO
PRODUTO

FSICO-QUMICO

MICROBIOLGICO

TOTAL*

Sabonetes

Produtos de higiene dos cabelos e couro cabeludo

Produtos para higiene dental e bucal

Produtos desodorantes e/ou antitranspirantes

Produtos para barbear com ou sem espuma

Produtos para o ps barbear

Produtos para lbios

Produtos para rea dos olhos

Produtos anti-solares

Produtos para bronzear

Produtos para tingimento de cabelos

Produtos para clarear os cabelos

Produtos para clarear os pelos do corpo

Produtos para ondular os cabelos

Produtos para alisar os cabelos

Neutralizantes capilares

Produtos para modelar e assentar cabelos

Produtos de higiene bucal

Produtos correlatos de higiene

Ps-corporais

Cremes de beleza

Mscaras faciais

leos

Produtos para cuidados dos cabelos/couro cabeludo

Depilatrios

Produtos para unhas e cutculas

Repelentes

( * ) O total acima se refere a quantidade de amostras por invlucro.

134

ANEXO E - Tabela de quantidade de amostras de saneantes e domissanitrios.


QUANTIDADE MNIMA POR INVLUCRO
PRODUTO

APRESENTAO

FSICO-QUMICO

MICROBIOLGICO

TOTAL( * )

Lquida

500 mL

500 mL

Slida

500 g

500 g

Lquida

1.000 mL

3.000 mL

4.000 mL

Aerossol

1.000 mL

2.500 mL

3.500 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Lquida

1.000 mL

4.000 mL

5.000 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Lquida

1.000 mL

4.000 mL

5.000 mL

Aerossol

1.000 mL

2.000 mL

3.000 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Lquida

1.000 mL

2.500 mL

3.500 mL

Aerossol

1.000 mL

2.000 mL

3.000 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

SANEANTE para lactrios

Lquida

1.000 mL

2.500 mL

3.500 mL

SANEANTE para piscinas

Lquida

1.000 mL

1.000 mL

2.000 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Lquida

1.000 mL

500 mL

1.500 mL

Aerossol

1.000 mL

500 mL

1.500 mL

Slida

500 g

200 g

700 g

Lquida

1.000 mL

500 mL

1.500 mL

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Slida

1.000 g

500 g

1.500 g

Lquida

1.000 mL

500 mL

1.500 mL

ESTERILIZANTE

Lquida

1.000 mL

4.000 mL

5.000 mL

SABO/SAPONCEO

Lquida

1.000 mL

1.000 mL

Slida

1.000 g

1.000 g

CERAS

DESINFETANTES DE USO
GERAL

SANEANTE HOSPITALAR
para artigos esterilizantes

SANEANTE HOSPITALAR
para superfcies lisas

SANEANTE para
indstria alimentcia

DESODORIZANTE

DETERGENTE e
congneres com amnia

DETERGENTE em p
domstico e profissional
DETERGENTE lquido
domstico e profissional

( * ) o total acima se refere quantidade de amostras por invlucro.

135

ANEXO F
Tabela mnima de amostras de alimentos
PRODUTO

QUANTIDADE POR
INVLUCRO

TEMPERATURA DE
TRANSPORTE

3 embalagens

Ambiente

gua de coco

2 embalagens de 100 mL

De acordo com o fabricante

gua mineral

2 embalagens 1.500mL ou

Achocolatado (embalagem UHT)

4 embalagens 500 mL ou

Ambiente

1 galo de 10L ou 20L


Aguardente / cachaa

2 embalagens de 500 mL

Ambiente

Alimentos enlatados

2 embalagens

Ambiente

Alimentos infantis (papinhas)

3 embalagens

Ambiente

Alimentos infantis a base de cereais

2 embalagens

Ambiente

2 embalagens

De acordo com o fabricante

Alimentos para menores de 3 anos com soro

1 embalagem comercial

Ambiente

Alimentos para prtica de atividade fsica

1 embalagem comercial

Ambiente

Amendoim (gro)

2 embalagens de 500 g ou
1 embalagem 1 Kg.

Ambiente

Amendoim (derivados: paoca, p de moleque, etc.)

300g embalagem comercial

Ambiente

1 embalagem 1 Kg.

Ambiente

200g

Ambiente

150g embalagem comercial

Ambiente

3 embalagens

Ambiente

2 unidades em embalagem
comercial

Ambiente

3 embalagens de 200g

Ambiente

Biscoito com recheio

250g embalagem comercial

Ambiente

Caf torrado e modo

3 embalagens de 250g ou

Ambiente

Ex: Mucilon, Farinha lctea, Sucrilhos, etc.


Alimentos infantis a base de leite
Ex: Danoninho, Ninho Soleil, etc.

Arroz
Balas / pirulitos
Batata palha
Bebida lctea (embalagem UHT)
Bebida lctea (em p)
Biscoito (polvilho, cream cracker, gua e sal)

2 embalagens de 500g ou

136

1 embalagem 1 Kg.
Camaro seco

200 g

Ambiente

2 embalagens 1 Kg.

Ambiente

125 g

Ambiente

1 embalagem ou 500g

Ambiente

1 embalagem

Ambiente/Refrigerado

1 embalagem de 500g

Ambiente

3 embalagens

Ambiente

Condimentos / especiarias

125g

Ambiente

Creme de leite esterilizado

3 embalagens

Ambiente

Doces de confeitaria e bolos

250g

Refrigerado

Doce de fruta em calda ( granel)

500g

Ambiente

Doce de fruta em calda (embalagem comercialmente


estril)

2 embalagens

Ambiente

Doce de fruta em barra ou pasta

2 embalagens

Ambiente

Enlatados e conservas

3 embalagens

Ambiente

1.000g

Ambiente

2 embalagens

Ambiente

1.000g

Ambiente

7 unidades em embalagem
comercial

Congelado

500g em embalagem
comercial

Resfriado

250g

Refrigerado

Gelia de frutas

2 embalagens

Ambiente

Gelo em cubo ou escamas

1 embalagem

Congelado

Hambrguer

1 embalagem

Congelado

250g ou 3 embalagens UHT

Refrigerado

Canjiquinha (quirera)
Ch
Carne dessecada
Charque embalado
Chocolate, bombons
Cogumelo em conserva

Farinha de mandioca/trigo/milho/fub

Farinha de trigo/Farinha de milho (enriquecida com


ferro)
Feijo
Frango congelado (no temperado) (1)
Frango resfriado (em pedaos) (1)
Frutas e legumes

Iogurte

137

Leite em p integral

2 embalagens de 250g

Ambiente

Leite integral (UHT)

3 embalagens de 1L

Ambiente

250g

Refrigerado

4 litros

Refrigerado

Leite fermentado
Leite pasteurizado (1)
Lingia fresca (1)
Manteiga e margarinas

2 amostras em embalagem De acordo com o fabricante


comercial
250g

Refrigerado

2 amostras em embalagem
comercial

Resfriado

1 Kg

Ambiente

250g em embalagem
comercial

Congelado

2 embalagens de 250g

Ambiente

2 embalagens de 1.000g

Ambiente

2 embalagens

Ambiente

250g

Ambiente

1 embalagem

Ambiente

1 cartela ou 12 unidades

Ambiente

Palmito em conserva

3 embalagens

Ambiente

Po de forma light/diet

2 embalagens

Ambiente

Po de queijo congelado

2 embalagens

Congelado

Po e produtos de panificao

250g

Ambiente

Peixe congelado ou resfriado

1embalagem comercial

Congelado/Resfriado

150g em embalagem
comercial

Ambiente

1embalagem comercial

Congelado

250g

Ambiente

250g ou 5 embalagens de
25g

Ambiente

500g

Congelado

Massa fresca (1)


Macarro com ovos (normal/colorida)
Massas/salgados congelados
Mel de abelhas
Milho em gro e milho de pipoca
Mistura de cereais (granola)
Mistura para sopas, caldos, molhos e misturas em p
para sobremesas
leos vegetais/azeite de oliva
Ovo

Pipoca doce
Pizza congelada
P para preparo de bebidas
P para sobremesas para dietas com restrio de
acar (diet). Ex: gelatina, pudim, flan, etc.
Polpa de morango congelada

138

Prato pronto congelado (feijoada, strogonoff)

1embalagem

Congelado

Preparado para produtos de panificao (melhorador)

200g

De acordo com o fabricante

Produtos crneos (lingia defumada, hambrguer ou


almondega congelados)

2 embalagens

Ambiente/Congelado

Produtos lcteos (queijo prato, parmeso, mussarela)

2 embalagens

De acordo com o fabricante

2 unidades em embalagem
comercial

Refrigerado

5 embalagens

Ambiente

2 embalagens de 250g

Ambiente

2 unidades em embalagem
comercial

Ambiente

2 embalagens

Ambiente

2 unidades em embalagem
comercial

Refrigerado

1 embalagem

Ambiente

150g em embalagem
comercial

Ambiente

Soja (gro, extrato, farelo)

1 Kg

Ambiente

Sorvetes/picol

200g

Congelado

500 mL

Ambiente/Refrigerado

250g

Ambiente

2 embalagens de 250g

Ambiente

Queijo minas/ricota (1)


Queijo ralado
Razes, tubrculos minimamente processados
(cenoura, nabo, beterraba, batata, mandioca)
Rapadura
Refrigerante (normal/light/diet)
Requeijo (pote)
Sal iodado
Salgadinho de milho

Sucos e nectares de frutas


Tempero (especiarias)
Vegetais folhosos minimamente processados (agrio,
couve, taioba, salsa, cebolinha)

(1) produtos a serem coletados como amostra nica, ver tem 1.3

139

ANEXO G
Formulrio de Rejeio de Amostras

140

141