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I.

INTRODUCCIÓN

Los microorganismos del género Salmonella son bacilos, Gram negativos,
anaerobios facultativos, pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Su
tamaño oscila de 0,3 a 1 um x 1,0 a 6,0 um. Son móviles debido a la presencia
de flagelos perítricos, a excepción deS. gallinarum y S. pullorum(Linder 1995).
Poseen un metabolismo oxidativo y fermentativo. Producen ácido y a menudo
gas durante la fermentación de la glucosa u otros hidratos de Carbono, son
catalasa positivos (salvo raras excepciones) y oxidasas negativos. Se
multiplican bien en medios ordinarios. Las colonias son al cabo de 18 a 24
horas de 2 a 3 um de diámetro salvo algunos serotipos que producen colonias
enanas (Linder 1995). Entre otras características bioquímicas se cuentan
reducción de nitratos a nitritos, utilizan citrato como única fuente de Carbono,
producen H2S, son ureasas negativos, no des-aminan Fenilalanina, y son
tetrationato reductasas (Linder 1995). Para que su crecimiento sea óptimo,
Salmonella necesita de un pH entre 6,6 y 8,2, las temperaturas más bajas a las
que se ha señalado su existencia de crecimiento son de 5,3 a 6,2 grados
centígrados, son incapaces de tolerar elevadas concentraciones de sal.
Salmonellaes destruida a las temperaturas de pasteurización de la leche
(Linder 1995). Estos microorganismos que se hallan ampliamente distribuidos
en la naturaleza, se encuentran en el tracto gastrointestinal de los mamíferos
domésticos y salvajes, los reptiles, las aves y los insectos. Se trata de
comensales eficaces y también patógenos que producen un espectro de
enfermedades en el hombre y los animales. Algunos serotipos de Salmonella,
tales como S.typhi, S.paratyphiy S.sendai, están muy adaptados a su huésped
y no tienen otros huéspedes naturales conocidos.

2

II. OBJETIVO GENERAL

Determinar el tipo de salmonella que se encuentra en la muestra de
pescado.

Emplear en el laboratorio de microbiología los diferentes procesos para
la determinación de salmonella en la muestra.

III. REVISION BIBLIOGRAFICA

3.1 TAXONOMIA
Actualmente se describen dos especies: S. entericay S. bongori, donde la
primera a su vez se subdivide en seis subespecies: enterica, salamae,
arizonae,

diarizonea,

houtenae

e indica; Salmonella entericasubespecie

enterica representa 99% de los serotipos aislados, siendo estos

últimos

determinados por los antígenos somáticos (O), flagelares (H) y capsulares o
de superficie (Vi). Es así como se describen mas de 2500
serovares

de

enterica serotipo

este

género (Ejemplo:

enteritidis o

su

Salmonella

serotipos

o

enterica subespecie

abreviatura científicamente

aceptada,

Salmonella enteritidis).
La salmonelosis se presenta en términos generales, dentro de dos
espectros clínicos: el primero, la fiebre entérica más conocida como fiebre
tifoidea, caracterizada por ser un cuadro febril sistémico cuyos agentes
etiológicos son S. typhi y S. paratyphi, donde el hombre se comporta como
único huésped; y el segundo, la gastroenteritis, caracterizada por síntomas
como dolor abdominal, malestar general, vómito, diarrea y en algunos casos
fiebre, frecuentemente relacionado

a

previo

consumo

de

alimentos

contaminados de origen animal, es importante tener en cuenta que en los
pacientes adultos inmunocomprometidos con infección por Salmonella no
tifoidea, existe mayor mortalidad relacionada con bacteriemia recurrente.
Los serotipos de Salmonella más representativos a nivel mundial son S.
enteritidis y S.typhimurium (24,1% y 6,6% de los brotes atribuidos a estos
serovares respectivamente); ubicándose

así

como

el

principal

bongori son habitantes del ambiente y se asocian con animales de sangre fría. se les designa por su fórmula Antigénica. Salmonella Enteritidis.como Salmonella entericasubesp. Esta tradición ha quedado restringida a aquellas cepas pertenecientes a la subespecie enterica.9%) dentro del espectro de las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA). lo que las diferencia de otras subespecies como . donde las aves cumplen un papel protagónico. A fin de enfatizar que los serotipos no corresponden a especies o subespecies distintas no se los escribe con letra itálica y sus nombres comienzan con mayúscula.3 microorganismo bacteriano implicado (46.Abortusovis). Entérica serovar Enteridis. por ejemplo. Sin embargo. En un principio. del origen geográfico donde el serotipo fue aislado por primera vez (Salmonella Montevideo). así.2 NOMENCLATURA La nomenclatura recomendada por el Centro Colaborador O.bongori. o el del proceso infeccioso donde se aisló (S. es aceptable desde el punto de vista científico emplear una nomenclatura simplificada. mientras que las demás subespecies y también S.12: gm:. Salmonella enterica subespecie enterica agrupa a la mayoría de las bacterias de este género que se asocian con animales de sangre caliente y con el hombre. gracias a su extraordinaria capacidad de colonización y adaptación a diversos hospederos animales. Cuando se trata de aislamientos correspondientes a las demás subespecies. sorbitol y otros carbohidratos. Utilizan habitualmente citrato como única fuente de carbono pero no malonato. Fermentan glucosa con producción de gas y también manitol. (empleada por el Centro Nacional de Salmonella) consiste en denominar una cepa con fórmula antigénica 9. se utilizaron nombres representativos. por ejemplo. seguido del Staphylococcus aureus. al igual que para S. dado que la controversia aún no ha sido resuelta. esta denominación es utilizada en muchas publicaciones y en los informes clínicos de los laboratorios de Microbiología médica.M. pero no lactosa ni sacarosa. La mayoría de las bacterias incluidas en la subespecie entérica presentan un conjunto de características metabólicas comunes. 3.S.

como S. con reacción negativa de Voges-Proskauer. se registran diecisiete millones de casos anuales. Las Salmonellosis humanas pueden clasificarse en dos grandes grupos: por un lado. otros serovars sí son específicos. La duración y entidad de esta enfermedad es variable.Typhi que no utiliza citrato ni descarboxila ornitina y es débil productor de ácido sulfhídrico. siendo capaces de producir enfermedades con diversas características en distintas especies animales y en el hombre. se ha constatado un aumento en el número de brotes denunciados. que provocan diarrea.4 EPIDEMIOLOGIA La Fiebre Tifoidea.T. la OMS estima que. la más grave de las Salmonellosis.3 PATOGENIA Salmonella presenta diferencias en cuanto a la especificidad del hospedero. y son ureasa y fenilalanina desaminasa negativas. que causan habitualmente síndromes tifoídicos con presencia de bacterias en la sangre. y en recipiente cerrado. vómitos y fiebre. 3.Gallinarum para las aves o S.E. Su fermentación es de tipo ácido mixta. año en que se implementó el programa V.Typhi en el caso del hombre. Dentro de la misma subespecie existen diferencias bioquímicas. mientras algunos serovars no tienen una estricta adaptación a un huésped. Si bien resulta difícil conocer su real impacto. Son capaces de sobrevivir durante muchos años en substratos simples manteniéndolas en lugar oscuro a temperatura ambiente.A (vigilancia de las enfermedades transmitidas por los alimentos). y las debidas a serotipos ubicuos. Desde 1995. anualmente. Son en general productoras de ácido sulfhídrico. 3. el Departamento de Vigilancia . S. por ejemplo. con unas seiscientas mil muertes. pudiendo ocasionalmente causar enfermedades generalizadas.4 arizonae. las debidas a serotipos estrictamente humanos. dependiendo del estado general del huésped. continúa siendo un problema mayor en muchos países en vías de desarrollo. descarboxilan orinitina y lisina.

constatándose en dicho lapso un predominio de brotes de origen bacteriano. 3. siendo Salmonella sp. se contamina el huevo. huevos (porque este sale por el mismo conducto de las heces y como la salmonella es una enobacteria. la existencia de subregistros anteriores. pero es interesante observar que este aumento del número de brotes estudiado podría explicarse teniendo en cuenta los siguientes factores: la obligatoriedad de la denuncia. especialmente en carne. es un buen vehículo de transmisión.5 PROFILAXIS La prevención de Salmonella como contaminante de alimentos implica asear eficazmente las superficies de contacto con los alimentos. el aumento en la notoriedad de los brotes (circunstancia que sensibiliza al público y estimula la consulta médica frente a una gastroenteritis). Su tiempo de supervivencia en alimentos a temperatura ambiente es de varios días llegando incluso a los límites siguientes:  mantequilla: hasta 10 semanas  leche: hasta 6 meses  chocolate: varios meses . El agente más frecuentemente aislado. Cualquier alimento cocinado de manera imperfecta o no cocinado. de la mayoría de aquéllos. Nos extenderemos más sobre esto en los capítulos referidos a estudio de brotes. por eso es importante tener prácticas de higiene en la manipulación) y leche. aves.5 Epidemiológica del Ministerio de Salud Pública estudió cinco brotes en el año 1995 y cuarenta y un brotes en el año 1999. La comida que contenga huevos crudos debe ser cocinada adecuadamente o congelada antes de consumirla. reflejado en el incremento del serotipo Enteritidis. El alcohol ha sido efectivo como agente desinfectante tópico en su contra. así como el cloro. Este serovar ha desplazado a SalmonellaTyphimurium como causa más frecuente de infección esporádica o de brotes de enfermedad de origen alimentario. probablemente exista aumento real en los brotes. responsable en los últimos años. Además de lo anotado.

5.6 Existen métodos destinados a evitar la proliferación de este género en los alimentos. un tipo de fiebre entérica como la descrita). así como Salmonella typhi y para-typhi. . 3.El cuadro sistémico descrito se puede acompañar de un exantema macular (roséola tifoidea) en tórax y abdomen (que cede de forma espontánea en pocos días) así como de alteraciones del nivel de consciencia en la fiebre tifoidea (que aparecen sobre todo al inicio de la segunda semana). que producen la fiebre tifoidea (en definitiva. destruir la bacteria en los alimentos mediante cocción. por ejemplo. la salmonela puede quedarse acantonada en el aparato digestivo. cefalea.1 Fiebre entérica Son clínica sistémica predomina sobre la digestiva: sudor blanquecino (que suele ser el signo más precoz). lo que tiene gran transcendencia a nivel epidemiológico. en caso de que exista colelitiasis. y desde ahí pasan al torrente circulatorio. a este grupo pertenece la Yersinia enterocolitica (que puede producir dolor en fosa ilíaca derecha y odinofagia). dolor abdominal. evitar la contaminación cruzada durante la manipulación. La pauta de elección para el portador crónico es el tratamiento prolongado con fluoroquinolonas (ciprofloxacino). leucopenia sineosinofilia. puede llegar a ser necesaria la colecistectomía. sobre todo en la vesícula biliar y más frecuentemente en mujeres con colelitiasis. Puede existir perforación intestinal en un 5% de los casos. Además. El diagnóstico en general de las diarreas bacterianas se realiza mediante coprocultivo. lo que da lugar al cuadro sistémico. así crea portadores crónicos que eliminan bacterias continuamente por las heces. y almacenar los alimentos a baja o alta temperatura para evitar que aquella prolifere. Se debe a bacterias que penetran la mucosa intestinal intacta (por eso producen escasa clínica a nivel digestivo). complicación que se deberá sospechar en presencia de dolor abdominal brusco y rápida elevación del recuento leucocitario. esplenomegalia y bradicardia relativa (según temperatura corporal). alcanzan las placas de Peyer de la submucosa y ganglios linfáticos peridigestivos.

Salmonella paratyphi A multiplica en el tracto gastrointestinal de los seres humanos. La bacteria Salmonella paratyphi A es-host especializado. para que crezca bien y causa la enfermedad sólo en los seres humanos. diarrea. También son gram negativas.6 Salmonella paratyphi A Salmonella paratyphi A causa fiebre entérica en los seres humanos. y luego penetra en la mucosa intestinal y se transfiere a través de la linfa y la sangre a los tejidos más profundos tales como el hígado y el bazo donde sobrevive en los macrófagos. La enfermedad tiene un curso prolongado de 3 a 4 semanas. lo que significa que carecen de la pared celular extra que las bacterias gram positivas tienen.7 3. Generalmente.6. enterica. La mayoría de las cepas de Salmonella pertenecen a la especie S.1 Habitad La salmonela paratyphi es una cepa de la bacteria de la salmonela. . y dolor abdominal. la enfermedad se asemeja mucho a la fiebre tifoidea. que es causada por el serotipo relacionado Salmonella Typhi. los humanos adquieren Salmonella paratyphi A por la ingestión de agua o de los alimentos que han sido contaminados por el contacto fecal con los humanos. Ésta es aerobia (necesita oxígeno para vivir) y las bacterias tienen forma de varilla. y el paciente es a menudo gravemente enfermo con síntomas que incluyen fiebre. tanto domésticos y salvajes. que se subdivide en muchos serovares sobre la base de los antígenos en su superficie. 3. mientras que la mayoría de las cepas de Salmonella pueden crecer en el intestino de muchos animales. a menos que se utiliza la terapia con antibióticos. El período de incubación es de 7 a 14 días. uno de estos serotipos es paratyphi A. Hay más de 200 cepas de la bacteria de la salmonela. tres de los cuales están bajo la clasificación de la salmonela paratyphi.

. habitualmente. Preenriquecimiento en medio liquido no selectivo Se utiliza en muestras donde el número de Salmonella es muy bajo o las células pueden no estar viables. 1. el pH de la APT es básico. Juven y col. 3. 2.  Se pesaron 25 g de piel de pescado para determinar la salmonella. Preenriquecimiento en medio liquido no selectivo. 4. Se utiliza el agua peptonada tamponada (APT) con gran capacidad de tampón y sin un azúcar fermentable. Prueba bioquímica de cepas sospechosas. varias etapas: 1.  Preparamos el caldo nutritivo (CALDO LACTOSADO) y llevamos a la incubadora por 24 horas. suprime el crecimiento de muchas otras bacterias intestinales promoviendo el crecimiento de Salmonella. el caldo universal UB y el medio M9 son otros caldos utilizados. Enriquecimiento en medios liquidos selectivos.8 AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE SALMONELLA Dentro de la sistemática analítica para el aislamiento e identificación de bacterias del genero salmonella se utilizan. Aislamiento diferencial sobre medios solidos selectivos. en planta de sacrificio es muy útil debido a los proceso de desinfección a los que son sometidas las carcasas. en 1984 describieron que el APT y M9 son mejores que el medio CL.

sales. Enriquecimiento en medios liquidos selectivos Se caracteriza por suprimir la microflora competitiva y promover el enriquecimiento selectivo de Salmonella. El caldo TTO a partir del tiosulfato presente en el medio se forma tetrationato al añadir el yodo. la concentración de malaquita y cloruro de magnesio son bajas para promover el crecimiento de Salmonella. En el mercado se comercializan gran variedad de caldos de enriquecimiento pero son el caldo RappaportVassiliadis (RVS). Por el contrario el caldo SC inhibe el crecimiento de coliformes intestinales y enterococcus. que inhibe el crecimiento de coliformes y otras bacterias intestinales. Caldo Tetrationato (TTO) y el caldo Selenito (SC) los más utilizados. lactosa. la cepa se agrega en el caldo de enriquecimiento selectivo. 2. El caldo RVS fue propuesto por Vassiliadis. es una modificación del mismo propuesta por Rappaport. Después de inocular la muestra a partir del caldo de preenriquecimiento (APT). El material sólido se inocula directamente en el caldo. Se incuba 24 horas a 37º C o a 34º . El medio contiene: peptona o triptona. principalmente en las primeras 6 a 12 horas de incubación. el material líquido se debe mezclar en una relación 1:1 con caldo a doble concentración. Este caldo es muy selectivo especialmente a 41°C por 24 horas.9  Después de 24 horas de ser incubado se muestra el caldo nutritivo contenido con la muestra.

se le agrega 1 ml de la muestra. .  10 ml de caldo Rappaport-Vassiliadis (RVS).10  Caldo Rappaport-Vassiliadis (RVS) color azul y Caldo Tetrationato (TTO) color blanco.

se le agrega 1 ml de la muestra  Luego se lo lleva a la incubadora por 24 horas. Los caracteres mas utilizados son la incapacidad de fermentar la lactosa y la producción de acido sulfhídrico. y diferenciación mediante la adición de sustancias que caracterizan visualmente las colonias de Salmonella frente a otros microorganismos. Aislamiento diferencial sobre medios solidos selectivos. Los medios de agar sólido deben ser juzgados no solo por su capacidad para permitir el crecimiento de Salmonella. . Esta metodología se desarrolla en medios selectivos sólidos basados en el principio de la selectividad por medio de una sustancia inhibidora de otras enterobacterias.  La muestra de pescado se desecha. pues al presentarse falsos positivos el tiempo de análisis de las muestras se incrementaría y la eficacia de la prueba disminuiría. 3.11  10 ml de Caldo Tetrationato (TTO). sino por la facilidad de diferenciar visualmente a este microorganismo de otras bacterias.

citrato de hierro amoniacal. peptona. La degradación de la lactosa a ácido provoca el viraje del indicador rojo neutro a rojo. lactosa y sacarosa produce acidez que hace virar elindicador al amarillo. El medio contiene: extracto de carne. citrato de hierro amoniacal. verde brillante. alta concentración de tiosulfato y el citrato inhiben la microflora competitiva. Las colonias de Salmonella son trasparentes con centro negro. El tiosulfato y la sal de hierro ponen en evidencia la producciónde sulfhídrico. sacarosa. rojo neutro. sales. El desoxicolato inhibe bacterias grampositivas.  Agar S.S Medio selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de materia fecal. La producción de ácido sulfhídrico ocurre en condiciones alcalinas produciendo colonias con centro negro. decarboxilación de lisina y producción de sulfhídrico. bilis de buey. rojo fenol. Las colonias de Salmonellas se observan trasparentes. lisina. La degradación de xilosa. tiosulfato. el medio presentara un viraje del medio a amarillo. xilosa. alimentos y animales. El tiosulfato y la sal de hierro ponen en evidencia la formación de sulfuro de hierro. puede eliminarse por filtración. desoxicolato. en condiciones ácidas la precipitación negra se inhibe. lactosa. La diferenciación de Salmonella/Shigella de otras enterobacterias se basa en tres reacciones: fermentación de xilosa.12  Agar XLD La selectividad de este medio es de moderada a alta. El medio contiene: extracto de levadura. lactosa. . La lisina diferencia Salmonella de los fermentadores de xilosa no patógenos. tiosulfato. La presencia de verde brillante. El precipitado que ocasionalmente presenta el medio no perjudica su rendimiento. ocasionalmente con centro negro. La decarboxilación de la lisina a cadaverina se visualiza por la presencia de un color rojo púrpura por aumento del pH. La lactosa y la sacarosa en exceso evitan que los coliformes lisina positiva reviertan la condición alcalina de los microorganismos consumidores rápidos de xilosa/lisina.

S . luego se gira ésta 180 º y se continúa realizando otra estría de la misma manera.  Despues de 24 horas de incubación en Agar XLD se observó el aislamiento de la bacteria salmonella más que en el Agar S.  Luego se hace la transferencia por estría central. Esta división evita el obstáculo del borde de la placa.13  El inóculo del Caldo Rappaport-Vassiliadis (RVS) y Caldo Tetrationato (TTO) se toma agitando suavemente el asa dentro del mismo. Se levanta la tapa lo suficiente como para permitir la introducción del asa con la carga de microorganismos. iniciándose la estría en el borde del medio más alejado del operador y se la extiende hasta llegar al centro de la placa. quedando la muestra adherida por tensión superficial en el extremo del filamento del asa de siembra. Flamee la boca del tubo antes de taparlo y colóquelo en el soporte necesario.

14 4. Sólo . provocando una alcalinización del medio. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Prueba bioquímica de cepas sospechosas Se utilizan para el diagnóstico presuntivo de Salmonella:  Citrato de Simmons Determina si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo.

Luego del consumo de la glucosa el microorganismo comienza a utilizar peptonas y se produce el catabolismo de las peptonas con producción de amoníaco que alcaliniza el medio dando un color rojo. Cuando la capa profunda es ácida (amarilla) se ha producido degradación anaeróbica de la glucosa.15 las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que.  Agar Triple Azúcar-Hierro (TSI) Este medio determina si un microorganismo utiliza de hidratos de carbono en su metabolismo. junto con la eliminación del citrato (ácido). Luego de 18-24 hs. La Fermentación de la glucosa solamente (alcalino/ácido) se observa cuando el medio se torna alcalino (rojo).1% y la lactosa y sacarosa al 1%. generará una cambio de pH a básico que será aparente por un cambio de color del indicador de pH. Después de incubación. de incubación es . contiene glucosa al 0. otros todos los azucares. La fermentación se produce aeróbicamente (en el pico de flauta) y anaeróbicamente (profundidad). de verde a azul. 18-24 horas. Algunas especies de Salmonella fermentan solo la glucosa.

lo obtienen de las peptonas. . Como son incapaces de obtener sus nutrientes de los hidratos de carbono. Los anaeróbicos no presenta producción de gas. Cuando no hay fermentación de lactosa. aún no se han consumido y todavía existiendo una condición ácida (amarilla). sacarosa ni glucosa (alcalino/alcalino) se trata por lo general de bacilos gramnegativos no entéricos.16 degradada anaeróbicamente la glucosa. pero se forman productos terminales ácidos. La Fermentación de glucosa. burbujas en el medio y desplazamiento del medio. De acuerdo a la producción de gas se clasifican los microorganismos en aeróbicos con producción de CO2 y H2. lactosa y sacarosa (ácido/ácido) se observan debido a que las dos últimas están en una proporción 10 veces mayor que la glucosa en el medio. pueden presentarse en forma de una sola burbuja. en un período de 18-24 horas la concentración de la lactosa y sacarosa . Cuando las peptonas son degradadas liberan amoníaco y alcalinizan el medio.

aumenta a causa de las aminas provenientes de la decarboxilación oxidativa de los aminoácidos en la región del medio expuesta al aire. encargada de la hidrólisis de la urea. Inicialmente la superficie inclinada se torna roja porque la reacción alcalina. . cuando esta enzima esta presente se libera amonio y se produce un cambio de color amarillo a fucsia en el medio. que resulta de la dispersión de pequeñas cantidades de urea. La Salmonella es ureasa negativa.17  Urea Este medio indica si los microorganismos poseen la enzima ureasa.

Un microorganismo que produce sulfuro de hidrógeno puede mostrar ennegrecimiento en SIM pero no en TSI por la presencia de sacarosa en este último. La utilización de la sacarosa puede suprimir los mecanismos enzimáticos responsables de la producción del sulfuro de hidrógeno.18  Sulfuro de Hidrogeno-Indol-Motilidad (SIM) Es un medio que se usa para determinar la formación de sulfuro de hidrógeno. . la producción de indol y la movilidad en el diagnóstico de Enterobacterias.

19  Rojo de Metilo y Voges Pros-kawer (RM-VP) En esta prueba de rojo de metilo la reacción es positiva indica que el microorganismo realiza una fermentación de la glucosa por la vía ácido-mixta. . Y Voges-Proskauer es negativa porque no determina la formación de acetil metil carbonil.

20 CEPARIO .

Aislamiento diferencial sobre medios solidos selectivos y Prueba bioquímica de cepas sospechosas. RECOMENDACIONES  Aplicar bacteriológicos para determinar la calidad microbiológica de la carne de pescado frente a la Salmonella y otras microorganismos contaminantes.21 IV. V. Enriquecimiento en medios liquidos selectivos. CONCLUSIONES Concluimos que se empleo bien las etapas de identificación de la salmonella mediante Preenriquecimiento en medio liquido no selectivo. .  Elaborar las etapas de determinación de salmonella en ambientes muy adecuados para no contaminar la bacteria de otros posibles microorganismos. Gracias a este método de aislamiento identificamos la salmonella paratyphi A que se encuentra presente en la carne de pescado.

edu.slideshare.javeriana.34/hevila/MedicasUIS/2011/vol24/no1/3.co/biblos/tesis/ciencias/tesis291.pdf .pdf  http://www.net/egrandam/aislamiento-de-salmonella  http://132.22 IV BIBLIOGRAFIA  http://genome.9.edu/genomes/detail/salmonella-enterica-serovarparatyphi-a/  http://www.wustl.248.