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INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DEL SUR

DEL ESTADO DE YUCATÁN
Organismo Público Descentralizado del Gobierno del Estado de Yucatán

INFORME TÉCNICO DE RESIDENCIA PROFESIONAL
“DITERPENOS SEMISINTÉTICOS ACTIVOS CONTRA CEPAS
MULTIDROGORRESISTENTES (MDR) Y CON RESISTENCIA EXTENDIDA
(XDR) DE Mycobacterium tuberculosis”

ANGEL DE JESÚS DZUL BEH
101T0031

INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL;
UNIDAD MÉDICA DE ALTA ESPECIALIDAD
HOSPITAL DE ESPECIALIDADES DEL CENTRO MÉDICO NACIONAL
“IGNACIO GARCÍA TELLEZ”

“UNIDAD DE INVESTIGACIÓN MÉDICA YUCATÁN”

ASESOR INTERNO: MC. JACINTO ALBERTO LOEZA PERAZA
ASESOR EXTERNO: DRA. GLORIA MARÍA MOLINA SALINAS

OXKUTZCAB, YUCATÁN, MÉXICO

DICIEMBRE DE 2014

Agradecimientos
2

3 .

..14 4.........8 2......GENERAL:...........14 3..............................................................................2 TRATAMIENTO DE TB..........................1 AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE AZORELLANOS Y MULINANOS MAYORITARIOS.............................................................. 17 4 .................2.........OBJETIVOS..............1...12 3.........5 1........................................................1 TUBERCULOSIS..........................................................14 3.....................................................................4 1........................... INTRODUCCIÓN.............................6 1..................................JUSTIFICACIÓN............OBJETIVOS ESPECÍFICOS...............4 PRODUCTOS NATURALES................. PRIORIZARLOS.....................CONTENIDO 1......................PROCEDIMENTO Y DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS............................4.........4 1.......17 5.................................................................7 1.............................15 5............................3 TB XDR Y MDR........................PROBLEMAS A RESOLVER......2 GENERO APIACEAE...

adinamia. 1995). M. se presenta con signos respiratorios como tos seca o productiva. dolor torácico y síntomas generales: anorexia. Existen otras especies como M. bovis y M.1 tuberculosis La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecto-contagiosa causada principalmente causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis (Mtb). las cuales producen en el hombre síntomas clínicos similares a los de la tuberculosis pulmonar (TBP)(Nolte FS y B Metchock. amplificada por micrografía por barrido electrónico. Fig. fortuitun. sudoración nocturna. además de Mtb se sabe de la existencia de M. expectoración con o sin hemoptisis. afecta mayormente al pulmón. avium. INTRODUCCIÓN 1. xenopi y M. intracellulare. pérdida de peso y a veces fiebre prolongada. Mycobacterium tuberculosis.1. M. M. kansasin. 1. africamun como agentes etiológicos de esta enfermedad. Bacteria que causa la tuberculosis pulmonar. Crédito: NIAID (flickr) 5 . astenia.

999 casos nuevos. prevalencia y mortalidad. Además reportó en 2011 para TB pulmonar una tasa de incidencia de 14. etambutol. y una prevalencia de la co-infección TB-VIH de 6. ya que afecta sobre todo a la población económicamente activa y principalmente a varones. es decir que los daños que estos pueden causar a nuestro cuerpo son relativamente aceptables. Los compuestos de primera línea los cuales combinan eficacia con un grado aceptable de toxicidad.2 Tratamiento de TB Desde hace varios años hasta la actualidad. En el año de 1995 la Organización Mundial de la Salud declara esta enfermedad como una emergencia global. esta categoría incluye a la isoniazida. 2012) 1.Actualmente la TB es un importante problema de salud pública por su amplia distribución. 2). los cuales estaban entre 8 millones de nuevos casos y 3 millones de muertes por año (WHO Report. 2002). estreptomicina y priazinamida (fig. La mayor parte de los 6 . Hasta el 2002 sabía que un tercio de la población mundial estaba infectada con Mtb.6 millones de casos nuevos y 1. En 2012 la OMS informa 8.000 habitantes. mientras que nuestra Secretaría de Salud (SS) registró 15. rifampicina.2% (WHO Report.5 casos por 100.3 millones de muertes por TB a nivel mundial. los medicamentos para tratar la TB se dividen en dos grupos o categorías.

pero se ha observado que puede ser una alternativa para el tratamiento. 2. 1997. amikacina. Estructura química de la a) rifampicina. ácido pamnosalicilico. la desventaja es que el grado de toxicidad que estos presentan es muy alto(Mandel GL y WA Petri. estos fármacos no están diseñados específicamente para TBP. a veces se necesita recurrir a fármacos de segunda línea adicionales. Iseman MD. 1993.pacientes con TBP tratados con estos medicamentos presentan resultados satisfactorios. de esta manera el tratamiento se inicia con cinco o seis productos de esta categoría como ofloxacina. Debido la aparición de resistencia microbiana o por factores propios de paciente como infección por VIH o algún tipo de adicción. cicloserina. kanamicina y capreomicina. WHO 1997). 7 . Fármacos de primera línea contra la TBP. coprofloxacina. a) b) c) Fig. etionamida. b) estreptomicina e c) isoniazida.

El tratamiento de TB una notable MDR es de 50 a 200 veces más costoso y duradero. 2012).9%). y más aun con las de resistencia extendida (XDR) a fármacos de segunda línea. El panorama de la TB se agrava con la presencia de cepas multidrogorresistentes (MDR) que son resistentes al menos a isoniazida (I) y rifampicina (R) los dos fármacos de primera línea más eficaces. Chiapas y Chihuahua (7.1. Las cepas MDR y XDR conservan infectocontagiosaidad.8-17.000 de casos de TB que fueron MDR distribuidos en 92 países incluyendo México En este mismo año la SS informa 472 casos de TBP resistentes al menos a un fármaco. La OMS estima en 2012 un total de 450. Se ha identificado casos de TBP XDR en el área metropolitana de Monterrey. recientes informa 472 casos de TBP Reportes científicos MDR en nuevo león. 8 .3 TB XDR y MDR La prescripción inadecuada. Sinaloa. y aún más para XDR. uso prolongado y efectos adversos de los fármacos han favorecido la aparición de cepas resistentes. falta de adherencia. esto es resistentes a I+R (MDR) y además al menos a una fluoroquinolona y un fármaco inyectable (WHO.

4. Chile presenta una gran diversidad de estas que han sido 9 .4 Productos naturales Los productos naturales son reconocidos como una fuente importante de nuevos y mejores tratamientos para diferentes enfermedades. con menos efectos adversos y especialmente resulta imperante que sean eficaces para tratar la TB MDR y XDR. Cerca del 50% de los fármacos aprobados por Federal Drug Administration de EEUU son o se basan en productos naturales en su mayoría obtenidos de plantas (21) (22) 1. La duración y el costo del tratamiento de enfermos de TB MDR y XDR son considerablemente mayores que los de los pacientes portadores de cepas sensibles y en numerosos casos de TB resistentes a fármacos el desenlace es mortal.El aislamiento de cepas de Mtb MDR y XDR de pacientes con TB en nuestro país está documentado.2 Genero Apiaceae De la gran variedad de plantas medicinales utilizadas hoy en día. 1. Existe la necesidad de búsqueda y desarrollo de nuevos agentes anti-TB con estructuras novedosas y mecanismos de acción diferentes a los fármacos asequibles. incluyéndose a la TB.

y como esta actúa malestares. existen especies de este mismo género que son venenosas. y con entre el las organismo. Azorella compacta (Phillippi 1891) y Apium panul (Bertero ex DC. sin embargo. de acuerdo a la composición química que estas presentan. familia que era conocida con el nombre umbelíferas. es necesario que las plantas sean objeto de estudio para determinar su composición química. y son de usos común en la personas. 1993). por tanto. que se encuentran en el país. favorecido por barrera natural la cordillera de los andes . cuando aún en la población esta tiene una alta demanda.) Gill et Hook 1830. Algunas especies de la familia de las Apiaceae son usadas como plantas medicinales. sin embargo.) Reiche 1899.producto de los diferentes climas presentes en aéreas geográficas. hasta que Lindey en 1836 fue el primer autor en dar un nombre alternativo de Apiaceae(Arenas et. recursos hay escasa que se información entrega de la a las variedad de plantas medicinales. y han sido centro de 10 . plantas para el empleadas tratamiento como de medicinales podemos mencionar algunos representantes de la familia de las Apiaceae. tiene una riqueza vegetal muy variada. sus propiedades medicinales son conocidas popularmente. al. Entre las especies con propiedades medicinales podemos encontrar a Laretia acaulis (Cav. con los limitados investigaciones.

Taxonomía de la Azorella compacta (Phill 1891) 11 .aspx? EspecieId=242&Version1 Figura 3: Laretia acaulis.florachilena. principalmente Mulinum y sudamericanos. Taxonomía de la Laretia acaulis (Cav) Gillies & Hook.mma.gob. Fuente: Darian Stark – INIA.cl/especies. http://www. Tabla II.cl/CNMWeb/Web/WebCiudadana/ficha_indepen. 1830 Clasificación: División Magnoliophyta Clase Magnoliopsida Orden Apiales Familia Apiaceae Género Laretia Especie Laretia acualis (Cav) Gillies& Hook 1830 Fuente: http://especies. Tabla I.php? id=2243.investigaciones Azorella para son verificar géneros su propiedades. característicos de la estepa patagónica y de regiones elevadas de los Andes australes.

htm Recientemente se reportó que la evaluación de diterpenos tipo azorellanos y mulinanos naturales y sus derivados semisintéticos contra dos cepas de MTb H37Rv sensible (a los 12 . al. 1999.florachilena.chileflora.com/Florachilena/FloraGerman/HighResPages/GH2013.php?id=465 Figura 4: Estructura química de los compuestos. Fuente:http://www. 1891) Fuente: http://www.Clasificación : División Clase Orden Familia Género Especie Magnoliophyta Magnoliopsida Apiales Apiaceae Azorella Azorella Compacta (PHILL. Muñoz et. Figura 5: Foto de Azorella compacta.cl/especies.

estos resultados coinciden con lo reportado por otros autores para derivados lipofílicos de distintas entidades químicas activas sobre cepas MDR y XDR. y un blanco potencial para la obtención de nuevos derivados de azorellanos y mulinanos. respectivamente. con cadenas el fin de modificar la lipoficidad de los productos y la expresión de su actividad frente a cepas MDR y XDR de Mtb en modelos in vitro e in vivo.JUSTIFICACIÓN 13 .5 µg/mL para ésteres npropil y n-butil contra las cepas sensible y MDR. en este proyecto se pretende llevar a cabo la preparación de nuevos derivados semisintéticos de azorellanos hidrocarbonadas a y los mulinanos. Por otro lado también encontraron que el incremento de la lipoficidad del sustituyente en una serie de derivados de oxadiazoles. Con base a lo anterior. 2. favorece su actividad frente a cepas MDR in vitro y su eficacia in vivo..cinco fármacos de primera línea) y CIBIN 99 un aislado MDR resistente a estos. diterpenos incorporando naturales. permitió identificar un grupo carboxilo C20 de los diterpenos como importante en la expresión de actividad con valores de CMI de 25 y 12.

mayormente a hombres. Recientemente azorellanos y mulinanos se reportó naturales. El incremento de nuevas cepas resistentes a fármacos conduce a la compuestos crudos o necesidad con de actividad compuestos búsqueda antiTB. de aquí nos basa que los productos naturales son una excelente alternativa. que la y evaluación sus de derivados 14 . lo cual lo hace una alternativa de tratamiento de enfermedades de la salud. puros y/o Como aislados de síntesis pueden de ser plantas. nuevos extractos que en los últimos años se han reportado una amplia variedad de ellas con actividad antibacteriana y antiTB. éstas no han sido estudiadas en su totalidad. mucho menos han sido utilizadas en las instituciones de salud pública. En nuestro país se han registrado desde 1990 entre 13 y 16 mil nuevos casos de TBP por año. Siendo además la segunda causa de muerte por enfermedad infectocontagiosa después del VIH. A pesar de que en nuestro país existe gran conocimiento sobre medicina tradicional así como de plantas medicinales.La TB es un importante problema de la Salud Pública por su amplia distribución. prevalencia y mortalidad que afecta a toda la población.

sustituyente en una serie de derivados de favorece su actividad frente a cepas MDR in vitro y su eficacia in vivo. 15 . y un blanco potencial para la obtención de nuevos derivados de azorellanos y mulinanos más potentes. permitió identificar al grupo carboxilo C20 de los diterpenos como importante en la expresión de la actividad anti-TB MDR. en este proyecto se pretende llevar a cabo la preparación de nuevos derivados semisintéticos de azorellanos hidrocarbonadas a y mulinanos. los diterpenos incorporando naturales. Con base en lo anterior.semisintéticos contra dos cepas de Mtb H37Rv (sensible a todos los fármacos de primera línea) y CIBIN 99 un aislado MDR resistente a éstos. Por otro lado se encontró que el incremento de la lipoficidad del oxadiazoles. que favorecerá a los derechohabientes enfermos de TB resistente a fármacos de primera y segunda línea. con el propósito de obtener productos semisinteticos con potencial para su desarrollo como medicamento para el tratamiento de pacientes con TB causada por cepas MDR y XDR de Mtb. con cadenas el fin de modificar la lipoficidad de los productos y la expresión de su actividad frente a cepas MDR y XDR de Mtb en modelos in vitro e in vivo.

.GENERAL: 16 .1..3.OBJETIVOS 3.

6. ésteres. Evaluar la semisintéticos actividad sobre anti-TB cepas de in vitro sensibles. 3.. Evaluar la toxicidad de los derivados semisintéticos con mayor actividad anti-TB in vitro sobre cultivos de líneas celulares de mamífero. producidos por especies de los géneros Azorella y Mulinum. Correlacionar la actividad anti-TB in vitro lipofilicidad de los diterpenos semisinteticos.Preparar diterpenos semisintéticos con distintos grados de lipofilicidad y evaluar su actividad anti-TB contra cepas MDR y XDR de M.PROBLEMAS A RESOLVER. Aislar suficientes cantidades de los azorellanos y mulinanos mayoritarios.OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1. 5. 3. 2. por ejemplo: éteres.2. PRIORIZARLOS 17 . con la tuberculosis. 4. 4. tuberculosis in vitro e in vivo. amidas y aminas con cadenas de diferentes números de átomos de carbono.. de los derivados resistentes de M. Evaluar la actividad anti-TB in vivo de los derivados semisintéticos con mayor actividad anti-TB in vitro y menor toxicidad. Preparar diferentes derivados semisintéticos de azorellanos y mulinanos.

para el desarrollo experimental. La duración y el costo del tratamiento de enfermos con TB resistente a fármacos es considerablemente mayor que los de los pacientes portadores causada de por cepas cepas sensibles y resistentes a en numerosos fármacos el casos de TB desenlace es mortal. isoniazida. tuberculosis. etambutol y priazinamida. Por lo cual se utilizará la cepa H37Rv de M.El aislamiento de cepas de M. 2001). tuberculosis que no responden a fármacos disponibles es cada día más frecuente. rifampicina. en especial las plantas (Rates S. el cual es el modelo universal para estos trabajos. Una fuente con gran potencial son los productos naturales. 18 . la cual es sensible a todos los medicamentos de primera línea: estreptomicina. Fabricant DS y NR Farnsworth. con menos efectos adversos y especialmente resulta imperante que sean eficaces para tratar la TB resistente. Existe la necesidad de la búsqueda y desarrollo de nuevos agentes anti-TB con estructuras novedosas y mecanismos de acción diferentes a los fármacos asequibles. 2001.

Tomando en cuenta que los compuestos purificados de los productos naturales antimicrobiana y los anti-TB cuales son muy pueden poseer diferentes en actividad cuanto a estructura y modelos de acción frente a los medicamentos que actualmente se conocen. 19 .PROCEDIMENTO Y DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS 5. se pretende realizar este proyecto con la finalidad de obtener nuevos y mejores compuestos que podrían se activos frente a estas cepas XDR y MDR.1 Aislamiento y purificación de azorellanos y mulinanos mayoritarios.. 5.

La eliminación del 20 .Los extractos de azorellanos y mulinanos se obtuvieron por el método de percolación en frío de las partes aéreas de la planta seca (Mulinum crassifolium. el cual se añadió hasta cubrir todo el material molido. yareta y/o A. El material vegetal a extraer se colocó en un percolador de vidrio también conocido comúnmente como “pera”. Después de este proceso se procedió a añadir el disolvente. A. madrepórica) utilizando como disolvente n-hexano. El material vegetal se dejó macerar por una semana. cabe la pena distinguir que dentro del percolador se lo colocó una cama de algodón para poder recuperar los extractos con la menor cantidad de residuos sólidos. El procedimiento se describe a continuación: Se tomó el material vegetal colectado. Se cortó en pedazos pequeños (mm). Azorella compacta. no sin realizar un monitoreo todos los días de una mayor intensidad en el color del extracto. Al Este extracto extracto crudo. Al final de la semana se abría la válvula del percolador y se colectaba el procedimiento se extracto en llevó cabo a colectado se le conoce como matraces por Erlenmeyer. triplicado. el percolador se cubrió con papel metálico y una placa de vidrio para evitar su evaporación. y por consecuencia una eficiente extracción. después previamente lavado y seco.

7. a) b) Fig.disolvente se llevó a cabo a presión reducida con ayuda de un rotavapor. b) Azorella compacta. 21 . 6 Material vegetal colectado a) Mulinum crassifolium. Preparación del material vegetal (a) y maceración del material vegetal mediante percolación en frío con n-hexano (b). a) b) Fig.

Fig. Extracto crudo de Mulinum crassifolium. 8. Azorella compacta 22 .