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UNIVERSIDAD DE PANAM

FACULTAD DE MEDICINA
Curso de Introduccin a la Biotecnologa

TERAPIA GNICA UTILIZANDO VECTORES VIRALES Y NO VIRALES

GRUPO # 1

Integrantes:
- Pinzn, Armando 4-764-88
- Snchez, Ismael

8-858-606

- Zeng, Julio

8-868-704

- Zheng, Antonio

8-866-935

MED-3

6,2

Profesora: Sara Ahumada Ruiz, MSc, PhD.

20 de octubre de 2014

INTRODUCCIN

La Terapia Gnica fue desarrollada a partir de la curiosidad del ser humano en la bsqueda
incesante de respuestas a las inquietudes de los fenmenos naturales incomprendidos y
muchas veces desconocidos.
El descubrimiento de la etructura del ADN permiti, de manera exponencial, la produccin de
conocimientos imprecedentes sobre el funcionamiento del cuerpo y mecanismos moleculares
de enfermedades antes inexplicables. Esto ampli las limitaciones en el rea cientfico,
permitiendo desarrollar nuevas tcnicas y procedimientos para el estudio del ADN y de
molculas funcionales en organismos vivos.
El desarrollo de nuevas tcnicas y procedimientos moleculares dio paso a estudios en
microorganismos, tanto patgenos como no patgenos, y resultado de stos estudios se ve
el potencial de utilizarlos para el beneficio de la humanidad. sta es la base de la Terapia
Gnica, donde se utilizan microorganismos no virulentos para transferir genes teraputicos a
clulas que producen protenas con funcin anormal, llevando la teraputica mdica a un
nuevo nivel.
En el siguiente trabajo describiremos detalladamente la Terapia Gnica, sus componentes,
aplicaciones e implicaciones ticas de la misma.

OBJETIVOS GENERALES

Describir y explicar de forma detallada la Terapia Gnica, sus componentes y


aplicaciones en la teraputica mdica

Reconocer la importancia de la Terapia Gnica en la actualidad

OBJETIVOS ESPECFICOS

Explicar la utilidad de la Terapia Gnica y de los procesos involucrados

Describir y explicar los principales vectores, tanto virales y no virales que implica la
Terapia Gnica

Identificar la importancia y aplicaciones de la Terapia Gnica en el mbito de la


medicina

Desarrollar las implicaciones ticas de este procedimiento a nivel mundial

Mencionar algunas proyecciones a fututo de la Terapia Gnica en el tratamiento de las


enfermedades

TERAPIA GNICA UTILIZANDO VECTORES VIRALES Y NO VIRALES


Resea histrica
La terapia gnica es una nueva forma de tratamiento que dio sus primeros pasos hacia el
final del siglo XX. A partir del descubrimiento de la estructura del ADN por Watson y Crick en
1963, fueron muchos los esfuerzos realizados por lograr procedimientos que permitieran su
manipulacin.
El desarrollo de la tecnologa del ADN permiti obtener grandes avances en el campo del
diagnstico mdico, cuyo paradigma probablemente sea la tcnica de la reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR). Pero simultneamente surgi la posibilidad de su aplicacin en
teraputica, y as, en 1990, un paciente con una inmunodeficiencia grave recibi por primera
vez clulas modificadas genticamente. Desde entonces y a lo largo de la pasada dcada,
miles de pacientes con muy diversas enfermedades han participado en ensayos clnicos con
productos de terapia gnica en todo el mundo. Pero no fue hasta el ao 2000 cuando una
serie de pacientes obtuvieron un beneficio objetivo e indudable tras una forma de terapia
gnica.
Desde entonces, los resultados en el tratamiento de muchas otras enfermedades han sido
indudablemente prometedores. Resulta, por lo tanto, difcil pensar que el desarrollo de
productos y procedimientos cada vez ms refinados y slidamente diseados no haga de la
terapia gnica una parte habitual del arsenal teraputico para muchas enfermedades.
Qu es la terapia gnica?
La terapia gnica consiste en el empleo de material gentico con intencin de obtener un
beneficio teraputico. Para ello, el material gentico debe transferirse a las clulas elegidas
con objeto de que ejerza all la funcin deseada.
La variedad en las clulas diana y en el material gentico que se ha de transferir configuran
las distintas estrategias de terapia gnica. Aunque la transferencia gnica a clulas
germinales es posible, su aplicacin clnica presenta graves obstculos prcticos y ticos,
por lo que el trmino de terapia gnica se aplica con carcter general a la modificacin
gentica de las clulas somticas.
Partes de una Terapia Gnica
Una Terapia Gnica consiste bsicamente en las siguientes partes:

Material gentico
Vectores de transferencia
Clulas diana
Mtodo de transferencia
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A. Material gentico
El material gentico que puede emplearse es de muy diversa naturaleza. Los genes
naturales son porciones de ADN que codifican para protenas naturales que tienen un
efecto biolgico conocido, y se utilizan en la terapia gnica de complementacin y de
induccin.
La terapia de complementacin se utiliza en la ausencia de una protena o la elaboracin
de una protena anormal que contribuyen sustancialmente a la fisiopatologa de la
enfermedad, por lo que la transferencia de los genes correspondientes puede restaurar
en la clula la produccin de la protena. Tiene su principal campo de aplicacin en las
enfermedades monognicas y polignicas, como la hemofilia y el cncer respectivamente,
en el que es frecuente hallar protenas alteradas, como la p53.
La terapia de induccin pretende que en la clula se ejerza una funcin biolgica nueva,
como puede ser la produccin de una citocina, la expresin de un antgeno o la activacin
de un profrmaco en una clula tumoral.
Los genes quimricos se disean en el laboratorio y, en general, pretenden interferir en
funciones celulares que participan en la enfermedad. Para lograr esta interferencia se
pueden disear genes que fabriquen diferentes molculas. Los anticuerpos de cadena
simple son capaces de reconocer especficamente un antgeno y unirse a l, pero que
quedan retenidos dentro de la clula y all ejercen una funcin de bloqueo del antgeno
que reconocen. Las protenas dominantes mutadas son molculas similares a protenas
reguladoras, que conservan la capacidad de unin al ADN, por lo que compiten con las
protenas no mutadas, pero carecen del efecto regulador y as interfieren en la funcin de
aquellas.
Otros tipos de material gentico no requieren sntesis proteica para ejercer su accin
teraputica. Entre ellos estn los ribozimas y las molculas antisentido y seuelo que
comparten su capacidad para interferir en la expresin de genes celulares. Los ribozimas
son pequeas molculas de ARN de secuencia complementaria a la de otros ARN diana
a los que se unen especficamente, pero con actividad cataltica que les permite destruir
este ARN al que se unen. Las molculas antisentido son oligonucletidos que, por ser
complementarios, se unen a secuencias especficas de ADN o ARN y bloquean su
expresin. Y las molculas seuelo son molculas de ADN que secuestran, por unin
especfica, las protenas reguladoras e impiden su efecto biolgico.

B. Vectores de Transferencia
Los vectores van a contener los elementos que queramos introducir al paciente, que no van a
ser slo los genes funcionales, sino tambin elementos necesarios para su expresin y
regulacin, como pueden ser promotores, potenciadores o secuencias especficas que
permitan su control bajo ciertas condiciones.
La gran diversidad de situaciones en las que podra aplicarse la terapia gnica hace
imposible la existencia de un solo tipo de vector adecuado. Podemos distinguir dos
categoras principales en vectores usados en terapia gnica: virales y no virales.
1. VECTORES VIRALES
Los vectores virales fueron los primeros en ser utilizados, dada su alta eficacia como
vehculos de cidos nucleicos. Los virus estn compuestos por un ADN un ARN rodeado
de una cpside proteica y, en algunos casos, una envuelta lipoproteica. El ciclo biolgico de
los virus pasa por la introduccin del genoma viral en determinados tipos celulares,
habitualmente por la presencia de receptores en la membrana de las clulas. Para poder
utilizar un virus como vector en terapia gnica, es preciso insertar el cido nucleico
teraputico en el genoma viral, y conseguir al mismo tiempo que el virus no se replique y por
tanto no sea patognico. Por esto, los virus utilizados en terapia gnica se denominan virus
recombinantes y defectivos (carecen de alguna funcin necesaria para su propio ciclo
replicativo).
a) Vectores retrovirales
Los vectores retrovirales utilizados en terapia gnica estn derivados de los oncovirus
murinos del tipo C, especialmente los que son anfitrpicos (que pueden infectar tanto clulas
murinas como humanas).
Caractersticas
Los retrovirus son virus ARN que tienen una envuelta fosfolipdica, con glicoprotenas que
determinan el tropismo del virus al ser reconocidas por receptores celulares especficos.
Dentro de esta envuelta hay una cpside proteica de estructura icosadrica que contiene 2
copias del genoma viral, la transcriptasa inversa (RT), y la integrasa. El genoma de un
retrovirus es una molcula de ARN de polaridad positiva en la que se distinguen 3 tipos de
genes: genes gag (codifican las protenas de la cpside), genes pol (codifican las enzimas
para el ciclo viral, como la proteasa y la integrasa) y genes env (codifican las glicoprotenas
de la envuelta).

Mecanismo
Un sistema retroviral para terapia gentica necesita de dos componentes: el vector de
expresin, el cual lleva el gen teraputico y la clula empaquetadora. El vector retroviral est
desprovisto de genes virales, dejando espacio para llevar el gen teraputico. En el vector se
conservan las secuencias de nucletidos que sirven de seales para empaquetar la partcula
viral y para lograr la insercin dentro del genoma celular. Este material gentico es
introducido dentro de la clula empaquetadora, la cual produce las protenas virales
necesarias para la formacin de una partcula viral. El vector viral es producido y liberado al
sobrenadante del cultivo celular. Este sobrenadante es utilizado para infectar las clulas o el
tejido objetivo. Una vez que la clula objetivo es infectada, el material gentico viral se
integra al genoma celular. La ausencia de genes virales asegura que no haya produccin de
partculas virales. Luego de ser integrado, el gen teraputico se expresa utilizando las
enzimas de la clula hospedera.
Es importante sealar que el nucleoide de un oncovirus es incapaz de atravesar la
membrana nuclear, por lo que es necesario que la clula sufra al menos una mitosis para
que el genoma viral entre en contacto con el genoma de la clula husped.
Ventajas
Son vectores con buena infectividad, un tropismo amplio.
Su capacidad integrativa les permite alcanzar, en teora, una duracin muy larga de la
expresin incluso en clulas que estn dividindose activamente
Desventajas
Por las limitaciones propias del tamao del genoma viral, el ADN teraputico no puede
ser mayor a 7-8 kb
Muy lbiles, lo que dificulta su purificacin
Son inactivados en el torrente sanguneo por el sistema del complemento, por lo que
su principal uso es en terapia gnica ex vivo
Los promotores virales suelen silenciarse por metilacin, por lo que la expresin no es
tan prolongada como cabra esperar
b) Lentivirus
Caractersticas
Los lentivirus son retrovirus no oncognicos que producen trastornos multiorgnicos
caracterizados por largos tiempos de incubacin e infeccin persistente. Recientemente se
han desarrollado vectores retrovirales basados en lentivirus, aprovechando la circunstancia
de que el HIV-1 es uno de los virus mejor estudiados.

Mecanismo
El genoma de este virus contiene algunos genes (tat y rev, por ejemplo) que no estn
presentes en los oncoretrovirus y que son esenciales para la expresin de los genes virales.
Algunas de las protenas virales tienen seales de localizacin nuclear y facilitan la entrada
del virus por los poros nucleares, de ah la capacidad que tienen estos virus de infectar
clulas que no estn en divisin.
Ventajas
Los lentivirus son capaces de infectar a todo tipo de clulas, tanto quiescentes como
en divisin

No inmunognicos

Desventajas

La mayora de los vectores lentivirales que se emplean hoy da proceden del VIH,
pudiendo producirse infecciones por recombinacin. Adems, su integracin es al azar,
por lo que puede ocasionar mutaciones por recombinacin.

Utilidad

Su principal aplicacin est en la transferencia de genes a clulas del sistema


nervioso in vivo, y a progenitores hematopoyticos ex vivo, siendo esta ltima una
propiedad especialmente interesante por su inmenso potencial teraputico, y porque
estas clulas son prcticamente intransfectables por otros medios.

c) Vectores adenovirales
Caractersticas
Los adenovirus son virus de ADN de doble hebra de aproximadamente 35 kb de tamao, que
producen infecciones del tracto respiratorio, y tienen tropismo por los epitelios respiratorio,
gastrointestinal, y de la crnea.
Se conocen gran cantidad de serotipos de adenovirus humanos, pero los ms utilizados en
terapia gnica han sido los serotipos 2 y 5.
La nucleocpside de un adenovirus consta de una cpside icosadrica que est compuesta
por 720 protenas hexona y 60 protenas pentona. De las pentonas parte la protena de la
fibra (una protena trimrica) que termina en una protena botn (knob) mediante la cual el
adenovirus se une a receptores celulares especficos.

Mecanismo
El ciclo replicativo de un adenovirus es ms sencillo que el de los retrovirus. El adenovirus se
une a un receptor de membrana especfico denominado CAR (Coxackie Adenovirus
Receptor) mediante el botn de la fibra, y a continuacin la pentona se une por un motivo
RGD (arginina-glicina-asprtico) a integrinas cercanas para despus ser internalizado por
endocitosis. La propia cpside adenoviral es capaz de desestabilizar el endosoma, que se
rompe y libera las partculas virales al citoplasma. Las nucleocpsides llegan a la membrana
nuclear y son capaces de introducir el genoma viral a travs de los poros nucleares.
Para generar adenovirus recombinantes defectivos (es decir, que lleven el ADN teraputico
pero no puedan replicarse) se sigue una estrategia similar a la que veamos para los
retrovirus: substituir algn gen viral(los genes de las protenas tempranas E1a, E1b, E2 y E3,
esenciales para la replicacin viral) por el gen teraputico. Lo ms habitual es delecionar el
genoma viral en la regin E1, para lo que necesitaremos una clula empaquetadora que
exprese de manera estable los genes contenidos en esa regin. La lnea celular ms
utilizada como clula empaquetadora para construir adenovirus recombinantes se denomina
clula 293. La ltima generacin de vectores adenovirales consiste en los llamados
adenovirus gutless (vacos), en los que todo el genoma viral ha sido delecionado y por tanto
tienen una capacidad terica en torno a las 30 kb de ADN exgeno. Para producirlos hay que
aportar en trans todas las funciones adenovirales necesarias, mediante plsmidos helper
por estrategias que utilizan el sistema Cre/loxP.
Ventajas

Infectan gran variedad de clulas

Relativamente estables

Fciles de purificar y concentrar

Son eficaces tanto sobre clulas que no estn en division como sobre clulas en
divisin.

Los niveles in vivo de fabricacin de protena a partir de un gen exgeno son muy
elevados.

El material gentico viral no se integra al genoma de la clula hospedera y se


mantiene episomal. Esto hace que el riesgo de producir mutagnesis por insercin sea
prcticamente nulo.

Desventajas

Baja especificidad celular, complicando la infeccin selectiva de clulas en


procedimientos in vivo.

Como el genoma del vector no se integra en el genoma de la clula husped, la


duracin de la expresin en clulas en divisin es limitada.

Toxicidad que producen a dosis altas, y la fuerte respuesta inmune celular y humoral
que sigue a su administracin, con la consiguiente disminucin de eficacia teraputica.

d) Vectores Virales Adenoasociados


Caractersticas
Son virus asociados a adenovirus que infectan al hombre pero no son patgenos, y no
pueden replicarse en ausencia de un virus coinfectante, por ejemplo adenovirus. Son virus
ADN sin envuelta que necesitan de funciones helper para completar su ciclo replicativo
completo. Estas funciones helper las aporta un adenovirus o un herpesvirus que sobreinfecta
las mismas clulas que previamente haban sido infectadas por un dependovirus. El genoma
de un virus adenoasociado es un ADN monocatenario con un tamao de 4,8 kb y una
estructura muy simple, con dos regiones codificantes: cap, que codifica las tres protenas de
la cpside, y rep, que codifica 4 protenas necesarias para la replicacin viral.
La infeccin por un virus adenoasociado comienza por la unin del virus a receptores
celulares y su entrada en la clula. El genoma viral es capaz de entrar en el ncleo incluso
en clulas que no se dividen, y una vez all se convierte a doble hebra y se integra en un
locus especfico localizado en el brazo largo del cromosoma 19 humano (banda 19q13).
Ventajas

Alta infectividad

Alta integracin en el genoma de la clula husped

Muy baja toxicidad y ausencia de respuesta inmune celular frente a las protenas
virales.
Desventajas
La especificidad de la integracin en un locus concreto se pierde en los virus

adenoasociados recombinantes, En consecuencia, la integracin se realiza al azar,


como en el caso de los retrovirus.

Limitacin del tamao de DNA recombinante que podemos usar, que es muy poco,
dado el tamao del virus
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Utilidad

Pueden transducir clulas mitticas o clulas en divisin, y estn especialmente


indicados en aplicaciones in vivo en las que se requiere una expresin prolongada del
gen teraputico.

Su tropismo por clulas epiteliales los hace bastante verstiles. Estn siendo
utilizados para el desarrollo de terapia gentica para las dos enfermedades
pulmonares hereditarias ms frecuentes, la fibrosis qustica y la deficiencia de antitripsina.

Adems, utilizando a los hepatocitos como clulas hospederas, se estn ensayando


vectores de adenovirus para el tratamiento de las deficiencias de factores de
coagulacin y de enzimas responsables del metabolismo de lpidos y carbohidratos.

e) Otros vectores virales


Los virus del herpes simplex (HSV)
Caractersticas
Los HSV son virus envueltos con un genoma lineal de 152 kb de ADN bicatenario, en el que
se han identificado ms de 80 genes.
Mecanismo
El virus se une a glicosaminoglucanos celulares y a receptores celulares. Tras la entrada en
la clula, el virus avanza por transporte retrgrado y llega al ncleo, penetrando por los poros
nucleares. Despus de entrar en el ncleo se expresan los genes inmediatos tempranos
necesarios para la sntesis de ADN viral y genes tardos (protenas estructurales). El gen
inmediato temprano (ICP4) es absolutamente necesario para la replicacin viral, por lo que
basta eliminarlo del genoma para obtener virus defectivos.
Para la construccin de un vector basado en el HSV se han utilizado dos estrategias:
- La primera estrategia consiste en eliminar las secuencias de genes que expresan las
protenas tempranas (ICPO, ICP4, ICP22 y ICP27), haciendo un vector deficiente para
replicarse. Genes de hasta 15 kb pueden ser transducidos por un vector de HSV.
- La segunda estrategia consiste en construir un "mini-HSV", con las mnimas secuencias
necesarias para la formacin de la partcula viral y la infeccin de la neurona. Requieren de
algunas protenas para la formacin de la partcula viral y la infeccin de la neurona a travs
de una clula empaquetadora.

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Ventajas

Gran capacidad porque permiten acomodar hasta 50 kb de ADN exgeno.

Desventajas

Los sistemas de vectores basados en HSV necesitan de mayores pruebas de


seguridad, pues la patofisiologa de la infeccin viral no est esclarecida.

Utilidad

Que tienen un marcado tropismo neuronal y por eso se emplean fundamentalmente


para la transferencia de genes al sistema nervioso.
2. VECTORES NO VIRALES

Representan un intento de imitar las funciones de los virus como vehculos de transferencia
gnica mediante sistemas sintticos, de forma que en principio son vectores mucho ms
seguros desde el punto de vista de su peligrosidad biolgica y su patogenicidad.
La principal limitacin de este tipo de vectores es que su eficacia in vivo es mucho menor que
la de los vectores virales. Esto se debe a la inestabilidad propia de sistemas sintticos
complejos y a las diferentes barreras que han de superar.
Los vectores no virales entran en las clulas por endocitosis, de manera que quedan
expuestos al ataque de las enzimas lisosomales. Para evitar esto, se intenta incluir en estos
vectores algn tipo de molcula que altere el pH del endosoma y consiga romperlo antes de
su fusin con los lisosomas y liberar as el complejo intacto al citoplasma. Una vez en el
citoplasma, estos complejos han de ser lo suficientemente estables como para llegar hasta el
ncleo, pues si el cido nucleico se libera muy pronto ser degradado por nucleasas
citoplasmticas. Pero si son demasiado estables, el cido nucleico no conseguir liberarse y
por tanto no podr entrar en el ncleo de la clula.
La inclusin en estos complejos de alguna molcula capaz de dirigirlos al ncleo celular
servira para acelerar su trnsito citoplasmtico. Por tanto, otro componente habitual en los
vectores no virales son las molculas con seales de localizacin nuclear que adems
permitan la entrada del cido nucleico a travs del complejo del poro nuclear, pues de lo
contrario slo sern capaces de ser efectivos en clulas que estn en mitosis.
Actualmente, los vectores no-virales ms utilizados son los siguientes:

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a) Plsmidos
ste es el mtodo ms simple de la transfeccin no viral. Consiste en la aplicacin localizada
de, por ejemplo, un plsmido con ADN desnudo. Varios de estos ensayos dieron resultados
exitosos. Sin embargo, la expresin ha sido muy baja en comparacin con otros mtodos de
transformacin. Adems de los ensayos con plsmidos, se han realizado ensayos con
productos de PCR, y se ha obtenido un xito similar o superior. Este logro, sin embargo, no
supera a otros mtodos, lo que ha llevado a una investigacin con mtodos ms eficientes de
transformacin, tales como la electroporacin, la sonicacin, o el uso de la biobalstica.
b) Oligonucletidos
Tiene como objetivo la inactivacin de los genes implicados en el proceso de la enfermedad.
Los mecanismos de estos vectores son la de oligonucletidos de secuencia antisentido y los
oligonucletidos de seuelo, descritos con anterioridad. Adems, oligonucletidos de ADN
monocatenario han sido utilizados para dirigir el cambio de un nica base dentro de la
secuencia de un gen mutante. Al igual que los mtodos de ADN desnudo, requieren de
tcnicas de transformacin para introducirse en la clula.
c) Cromosomas humanos artificiales
La creacin de Cromosomas Humanos Artificiales (HACs) estables es una de las
posibilidades que se baraja en la actualidad como una de las formas de introducir ADN
permanentemente en clulas somticas para el tratamiento de enfermedades mediante el
uso de la terapia gnica. Presentan una elevada estabilidad, adems de permitir introducir
grandes cantidades de informacin gentica.
d) Mtodos Fisicos
Los mtodos fsicos aumentan la permeabilidad de la membrana celular. Ejemplos de stos
tenemos:
- Biobalstica. Es el mtodo ms utilizado para transformar las clulas vegetales. Consiste en
propulsar los genes de inters dentro de las clulas con la ayuda de un can de ADN, con
lo cual se modifica el ADN de las clulas
Se utilizan microesferas de metal cubiertas de ADN (bolas de oro o tungsteno de un micrn
de dimetro). Se proyectan a enorme velocidad sobre las clulas que deben modificarse
con el fin de cruzar su pared. Estas bolas se retrasarn progresivamente cruzando las
distintas capas celulares. Algunas de las clulas alcanzadas van entonces a integrar
espontneamente los genes que se disparan en su genoma.

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- Elestroporacin. La electroporacin o electropermeabilizacin consiste en provocar un


aumento significativo de la conductividad elctrica y la permeabilidad de la membrana
plasmtica celular mediante un campo elctrico aplicado externamente. Cuando el voltaje
que atraviesa una membrana plasmtica excede su rigidez dielctrica se forman poros. Si la
fuerza del campo elctrico aplicado o la duracin de la exposicin al mismo se eligen
apropiadamente, los poros formados por el pulso elctrico se sellan tras un corto perodo,
durante el cual los compuestos extracelulares tienen la oportunidad de entrar a la clula.
Sin embargo, una exposicin excesiva de clulas vivas a campos elctricos puede causar
apoptosis o necrosis.
Se utiliza habitualmente como sistema de liberacin transdrmica en mesoterapia sin
agujas. Tambin tiene uso en la transformacin de bacterias, levaduras y protoplastos
vegetales con la insercin de plsmidos.
- Sonoporacin. Aplicacin de ondas sonoras para aumentar permeabilidad de la mebrana
celular.
e) Mtodos qumicos
- Complejo DNA-Liposomas
Los liposomas son lpidos que contienen un ADN plasmdico en el que se encuentra el gen
teraputico con todas las seales de secuencia necesarias para su expresin en el destino
celular de eleccin. Existen dos tipos de liposomas:

Liposomas catinicos: Se encuentran cargados positivamente por lo que


interaccionan con la carga negativa del DNA. Las ventajas de los liposomas es
que protegen de la degradacin al gen insertado hasta su llegada al ncleo. La
talla del DNA introducido en ellos no tiene lmite.
Como desventaja presentan una eficacia baja en la transferencia, cierto grado de
toxicidad celular y pueden ser inhibidos por componentes sricos.
Se usa en el tratamiento de la fibrosis qustica.

Liposomas Aninicos: No son de mucha utilidad por la carga negativa que presenta
el ADN, esto hace que se repele la unin.

- Transferencia de Genes mediante Receptores:


En este caso al ADN a insertar se le adiciona un ligando (molculas reconocidas por
receptores especficos) y se protege para evitar su degradacin por el lisosoma celular. Se
emplea en el tratamiento de la hipercolesterolemia.

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- Transferencia con Fosfato de Calcio:


Se basa en la precipitacin del DNA exgeno y los iones de calcio, provocando que la clula,
mediante endocitosis, introduzca el DNA en su interior.
La eficacia de transfeccin puede llegar al 10% de las clulas, aunque suele ser transitoria.
No es una tcnica que provoque toxicidad en las clulas pero la expresin del gen insertado
es muy pequea.
nicamente se usa en cultivos celulares, y por lo tanto su aplicacin es "ex vivo".
C. Clulas Diana
Las clulas diana se seleccionan en funcin del tipo de tejido en el que deba expresarse el
gen introducido, y deben ser adems clulas con una vida media larga. Igualmente, se debe
tener en cuenta si la diana celular es una clula en divisin o quiescente.
En funcin de estas consideraciones, las clulas diana ideales seran las clulas madre,
puesto que la insercin de un gen en ellas producira un efecto a largo plazo. Debido a la
experiencia en transplante de mdula sea, una de las dianas celulares ms trabajadas son
las clulas madre hematopoyticas. La terapia gnica en estas clulas es tcnicamente
posible y es un tejido muy adecuado para la transferencia ex vivo.
Otras dianas celulares con las que se ha trabajado son:

Linfocitos: son clulas de larga vida media y fcil acceso (sangre perifrica).
Constituyen un blanco para terapias ex vivo de melanomas e inmunodeficiencias.

Epitelio respiratorio: son clulas de divisin muy lenta y en ellas no es posible la


transferencia ex vivo, pero s su transformacin mediante adenovirus y lipoplexes.

Hepatocitos: su transformacin en posible tanto ex vivo (es factible cultivar las clulas
y transplantarlas por la circulacin portal) como in vivo (se estn desarrollando
receptores proteicos especficos de hepatocitos).

Fibroblastos drmicos: son clulas de fcil acceso y cultivo, y pueden transformarse


tanto ex vivo como in vivo, pero suelen tener efectos transitorios.

Clulas musculares: pueden transformarse mediante inyeccin in vivo de ADN y


tambin mediante adenovirus, pero con un xito muy limitado en este ltimo caso.

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D. Mtodos de Transferencia
La transferencia de material gentico a las clulas diana puede hacerse dentro o fuera del
organismo. Segn el modo de hacer llegar el vector a las clulas diana, es ya clsica la
distincin entre terapia gnica ex vivo y terapia gnica in vivo.
En el primer caso, la administracin del vector se realiza fuera del individuo: se obtiene
una biopsia del rgano de inters, se expanden las clulas mediante cultivo celular y se
ponen en contacto con el vector mientras estn siendo cultivadas. Esto hace posible
seleccionar las clulas que hayan sido modificadas genticamente y re- introducirlas en el
paciente.
En la administracin in vivo, el vector teraputico se administra directamente al individuo
enfermo por cualquiera de las vas habituales (intramuscular, oral, intravenosa, intraportal,
subcutnea), escogiendo aquella que nos permita alcanzar la mxima eficacia teraputica.
Tipos de terapia gnica
Existen, en teora, dos tipos de terapia gnica: la Terapia Gnica de Clulas Somticas y la
Terapia Gnica de Clulas Germinales, aunque slo la primera est siendo desarrollada
actualmente.
La Terapia Gnica Somtica busca introducir los genes a las clulas somticas (esto es,
todas las clulas del organismo que no son gametos o sus precursores), y as eliminar las
consecuencias clnicas de una enfermedad gentica heredada o adquirida. Las generaciones
futuras no son afectadas porque el gen insertado no pasa a ellas.
La Terapia Gnica Germinal slo existe como posibilidad, pues no se cuenta con la
tecnologa necesaria para llevarla a cabo. Adems ha sido proscrita por la comunidad
cientfica y por organismos internacionales por sus implicaciones ticas. La terapia gnica
germinal tratara las clulas del embrin temprano, los vulos, los espermatozoides o sus
precursores. Cualquier gen introducido en estas clulas estara presente no slo en el
individuo, sino que sera transmitido a su descendencia.
Aplicacin de la Terapia Gnica en algunas Enfermedades
Actualmente, se ha ampliado el nmero de afecciones a ser tratadas mediante TG.
Entre las aplicaciones clnicas podemos mencionar:

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o Inmunodeficiencia combinada grave


En esta patologa se ha descrito un defecto en el gen que codifica una parte de un receptor
celular que enva las seales a los progenitores de las clulas T y NK. Sin este gen las
clulas no se desarrollan, no crecen y tampoco proliferan, lo que hace que los pacientes se
encuentren indefensos frente a la ms leve infeccin, vindose abocados a vivir en el interior
de una burbuja estril (nios burbuja) a la espera de un trasplante de mdula sea.
La correccin gnica de un pequeo nmero de clulas permite recuperar toda su fuerza y
repoblar toda la parte del rgano que falla. En 1990, se aprob en Estados Unidos el primer
ensayo clnico de terapia gnica. Se trataba de introducir el gen que codifica para la enzima
adenosina desaminasa en nios que presentaban una inmunodeficiencia combinada grave.
Un ao despus, se autoriz en Italia, y en 1995 los dos grupos de investigacin publicaban
los resultados poniendo de manifiesto la eficacia de TG ex vivo en los nios burbuja.
A principios del ao 2000, investigadores franceses pusieron a punto con xito un mtodo de
TG que trata la inmunodeficiencia combinada grave X-1 en el hombre.
o Distrofia muscular Duchenne
En un avance significativo hacia un tratamiento para la distrofia muscular de Duchenne
(DMD), investigadores han usado TG para proteger msculos respiratorios vitales en ratones
con la enfermedad, debido a que la mayor causa de muerte en la DMD es el deterioro del
diafragma. La nueva investigacin ha demostrado por primera vez cmo el diafragma puede
ser rescatado por medio de la inyeccin intravenosa con el gen de la distrofina, que es
defectuoso en las personas con DMD. Despus del tratamiento, el msculo del diafragma del
ratn mostr una expresin estable del gen de la distrofina durante seis meses.
o Enfermedades neurodegenerativas
Se han realizado tambin aproximaciones de TG en el tratamiento de la enfermedad de
Alzheimer en humanos. En cultivos primarios de neuronas piramidales de hipocampo de rata
se ha sobreexpresado la protena calbindina D28K, obtenindose altos rendimientos.
Esta protena es capaz de unirse al ion calcio modulando sus concentraciones
citoplasmticas. La sobreexpresin de esta protena confiri proteccin a los cultivos frente a
estmulos citotxicos como el fragmento 25-35 del pptido betaamiloide. Tambin se ha
analizado a pacientes en las primeras etapas de la enfermedad, con la implantacin de
clulas cutneas a las que previamente se les ha introducido el gen del factor de crecimiento
neurolgico (NGF) que ha mostrado resultados positivos en el deterioro cerebral en monos
viejos.

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o Otras patologas como la enfermedad de Parkinson, en la que la relacin con los


factores genticos es menos clara, representan un mayor desafo. En esta enfermedad, la
TG ha sido llamada el tercer paso, tras la terapia sustitutiva con la levodopa y los
implantes de clulas dopaminrgicas.
As, las clulas hiperactivas del ncleo subtalmico son consideradas como clulas diana
para la insercin del gen de la descarboxilasa glutmica cida (GAD), responsable de la
produccin del neurotransmisor inhibitorio GABA, obtenindose como resultado un
funcionamiento ms normal de la actividad de la red cerebral. Tambin se han realizado
aproximaciones de TG ex vivo, con trasplantes de clulas capaces de producir dopamina o
de secretar factores de crecimiento o neurotrofinas (BDNF, GDNF) que actan como agentes
neurotrficos, activando rutas de supervivencia celular en las neuronas afectadas.
Limitaciones ticas de la Terapia Gnica
stas estn relacionadas en gran parte con la posibilidad del desarrollo de la terapia de
clulas germinales, la cual ha originado grandes controversias, ya que al transmitirse los
cambios efectuados en ellas a las siguientes generaciones se afecta el patrimonio gentico
de la especie humana, y un error de juicio y/o tecnolgico pudiera tener muy malas e
imprevisibles consecuencias. Por este motivo, este tipo de terapia ha sido totalmente
proscrita por diferentes organismos internacionales (OMS, UNESCO y Consejo de Europa,
entre otros).
Como ante toda novedad, la terapia gnica tiene partidarios entusiastas que, tal vez de una
manera poco realista, ven en ella poco menos que el control de las enfermedades, y, por otro
lado, grandes detractores. En todo caso, si se llegan a superar todos las dificultades
tcnicas, la TG puede redefinir la prctica de la medicina el prximo siglo, considerando
sobre todo que desde hace slo unos 8 aos es que se tienen los primeros protocolos.
Aunque hasta la fecha no se haya curado por completo a ningn paciente con este tipo de
terapia, las perspectivas son atrayentes y vale la pena seguir explorndola como posibilidad,
pero dentro de lmites ticos.
Concebida en un principio para tratar enfermedades metablicas raras, en la actualidad se
espera que la terapia gnica pueda incidir en la cura de enfermedades como el cncer, la
enfermedad coronaria y otras que hemos mencionado. No se puede dudar que sea un nuevo
y largo camino a recorrer, que seguramente traiga muchas satisfacciones a la prctica de la
medicina, probablemente en un futuro no muy lejano.

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CONCLUSIN
La terapia gnica est cambiando a la humanidad. Cientificos de todo el mundo investigan
nuevas tcnicas y estrategias para elevar el nivel teraputico de la Terapia Gnica
La Terapia Gnica permite desarrollar protocolos para tratar las enfermedades genticas y
as disminuir la mortalidad que causa
Es costoso y los beneficiaros inmediatos son la industria farmacutica y los enfermos
Actualmente se utilizan como vectores para llevar los genes a las clulas afectadas, a
virus modificados de la familia de los retrovirus (incluye lentivirus) y los adenovirus,
tambin los adenoasociados. Si bien los virus que intervienen en esta terapia, estn
atenuados y no deberan producir ningn tipo de reaccin en el paciente. Los retrovirus
presentan una eficacia alta de trasferencia gnica y tienen la ventaja de que integran el
ADN transferido en los cromosomas de la clula tratada por lo que ofrecen estabilidad a
largo plazo. Sin embargo, presentan algunos inconvenientes de importancia. Los ms
destacados son que la integracin del ADN trasferido en los cromosomas de la clula se
realiza al azar por lo que podra interferir el funcionamiento de un gen sano. Por su parte
los adenovirus, virus que en estado natural provocan resfriados comunes, tienen como
principales ventajas que tambin presentan una eficacia alta de transferencia gnica,
pueden transportar genes grandes, de hasta 35 kb, y pueden infectar clulas que no se
dividan. Adems, son aptos para realizar terapia in vivo, ya que pueden transferirse
directamente a los tejidos del paciente.
Los principales inconvenientes en el uso de vectores virales radican en que no integran el
ADN en los cromosomas por lo que su efecto no es duradero, ya que los genes se pierden
cuando las clulas se dividen. Otro problema es que suelen provocar una importante
respuesta inflamatoria e inmunolgica. Adems, esta respuesta inmunitaria reduce la
eficacia de la terapia, al eliminar una buena parte de los virus que se usan para la
transfeccin.
La terapia genica a traves de vectores no virales es la mas segura y casi sin riesgo alguno
para el paciente, sin embargo, es debil en la penetracion del material genetico a la celula.
Creemos que un futuro esto se podra mejorar y asi llevar esta terapia a ser de mayor uso y
con menores riesgos para las personas.

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BIBLIOGRAFA

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genetic disease. En: Thompson & Thompson. Genetics in medicine. 5th edition.
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http://www.fihu-diagnostico.org.pe/revista/numeros/2000/novdic00/323-328.html

Video sobre Terapia Gnica; Youtube: http://www.youtube.com/watch?v=LMZ8MKPdJOE

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