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INTRODUCCION

III MARCO TEORICO

TECNICA DE ENRREQUESIMIENTO DEL CULTIVO
Para mejorar las posiblidades de aislar algunos tipos de bacterias pocos
frcuentes fisiológicamente como puede proceder de la siembra en placa, al
enrrequecimiento del cultivo este método para aislar m.o fue introducido por los
eminentes bacteriólogos beijrinca….,
TECNICA DE DISOLUCIONES EN SERIE
Si el organismo q se trata de aislar en un cultivo mixto se encuentra en mayor
numero que los demás organismos la mezcla, puede ser posile obtenerlo en
cultivo puro después de efectuar una serie de disoluciones en tubos de medio
apropiado. La disoluciones mas avanzadas de la muestra solo contendrán una
especie
Técnica de aislamiento de una sola celua
En este procediento se utiliza asociado al microscopio, un instrumento especial
micromanipulador que permite tomar un solo organismo de una prepraracion de
gota en gotapendiente. Mediante en micromanipulador, el operador puede
digerir dentro de la gota pendiente el movimiento de un micropipeta(un tubito
sumamente pequeño).

AISLAMIENTO DE CULTIVO PUROS POR LA TECNICA DE
ENRREQUECIEMIENTO
El estudio de los microorganismos en estos hábitats exige que se conozcan los
microorganismos específicos presentes. Para lograr esto es necesario aplicar
técnicas que ayuden a desenmarañar las poblaciones mixtas y complejas de
microorganismos, o cultivos mixtos, y obtener cultivos puros de especies
distintas y separadas. Un cultivo puro está formado de poblaciones de células
derivadas de una sola célula.
El estudio de los microorganismos requiere la utilización de una serie de
técnicas que permitan su aislamiento y su crecimiento bajo condiciones
controladas. A continuación vamos a hacer un breve repaso de las principales
técnicas que se emplean en el estudio de los microorganismos.

Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas unas de otras.  Técnica de la placa vertida: El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución (adelgazamiento) de la muestra en tubos con agar fundido y enfriado. Los intervalos en que se hace la resiembra varían con el tipo de microorganismos. lo que significa que lo que se ha aprendido para un cultivo puede no ser aplicable para otro. es procurar un ambiente de cultivo diseñado que pueda favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no sea adecuado para las demás. Se deben determinar tres cosas antes de manejarlo: el medio de cultivo apropiado para usarlo con cada cultivo. la temperatura propia para mantener los cultivos. MÉTODOS DE PPRESERVACIÓN: No todas las especies responden de manera similar.  Técnica del enriquecimiento del cultivo: Para mejorar las posibilidades de aislamiento de algunos tipos fisiológicos poco frecuentes de bacterias. Este aparato permite al operador controlar una micropipeta o microcánula (aguja muy fina) dentro de una gota pendiente de tal manera que se pueda tomar una sola célula y pasarla a un medio de cultivo. Se necesita hacer diluciones en más de un tubo para obtener colonias bien aisladas.  Técnica de aislamiento de una sola cálula: Para poder obtener un solo microorganismo de una preparación en gota suspendida.MÉTODOS PARA AISLAR UN CULTIVO PURO Técnica de siembra por estrías en placa y técnica de siembra por difusión en placa: Se pasa una porción de la muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en el medio ya sea por estrías o por difusión. se necesita el micromanipulador. Las técnicas en uso son:  Resiembra periódica a medios frescos: Los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los que han sido cultivados mediante pasos periódicos a medios frescos. y el tiempo que se necesita para hacer las resiembras. . El principio de esto. Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeñas cantidades. los procedimientos de siembra en placa deberán de estar precedidos del desarrollo de las bacterias en un cultivo de enriquecimiento.

 Preservación de cultivos con una capa de aceite mineral: Muchas bacterias se preservan bien cubriendo el agar en que están creciendo con aceite mineral estéril. MEDIOS DE CULTIVO. En este procedimiento las células se secan rápidamente.  Almacenamiento a temperaturas muy bajas: En este procedimiento las células se congelan con un agente protector (glicerol o dimetil sulfóxido).04 2.5cm del pico del agar inclinado.2.0 g g g g mL Ajuste el pH a 7. Algunas especies se han conservado durante 15 o 20 años.  Preservación de cultivos por secado rápido en congelación (Liofilización): Es el procedimiento más eficaz para la preservación de cultivos por más de 20 años. y una vez que se terminó el secado cada frasco se sella bajo condiciones de vacío.0 0. Dispense en tubos 9 mL por tubo. Esterilice a 121°C (15 libras de presión) por 15 minutos. mientras son congeladas. . Los frascos se conectan inmediatamente a una línea de alto vacío.- PRUEBA DE HUGH Y LEIFSON Esta prueba realiza para la determinación del metabolismo oxidativo o fermentativo de los carbohidratos MEDIO DE CULTIVO Medio base de Hugh y Leifson Triptona Extracto de levadura Púrpura de Bromocresol Agar Agua destilada 1. mediante las siguientes etapas: la suspensión de células se pone en pequeños frascos que se sumergen en una mezcla de hielo seco y alcohol (-78ºC).0 10. Los especimenes congelados se guardan en refrigeradores con nitrógeno líquido. El aceite deberá cubrir más o menos 1.0 1000.

Se incuba a 35°C hasta por 14 días. es utilizado para el aislamiento de especies . también conocido como Agar SS. por eso en este caso el glúcido añadido al medio base es la glucosa PROCEDIMIENTO Para cada microorganismo a identificar. En uno de los dos tubos se cubre la superficie con parafina estérilpara crear condiciones de anaerobiosis.se inoculan por punción dos tubos de medio. MEDIO SIN INOCULAR METABOLISMO FERMENTATIVO METABOLISMO OXIDATIVO AGAR SS USO El Agar Salmonella Shigella .Agregue la solución de glucosa al 10% esterilizada por filtración En el caso de los cocos gram positivos su forma de metabolizar la glucosa es una característica importante para su identificación.

En este medio las sales biliares No.de Salmonella y Shigella a partir de muestras clínicas y de alimentos. Incubar las placas a 35-37 °C durante 24 a 48 horas y examinar el crecimiento.. EXPLICACION El Agar Salmonella Shigela es una modificación del Agar Desoxicolato y Citrato descrito por Leifson. mientras que permiten el crecimiento de Salmonella spp. 3. Ewing y Bruner encontraron que el Agar SS tiene la ventaja de que puede ser utilizado con inóculos grandes de muestras clínicas en las que se pretende poner de manifiesto la presencia de especies de Salmonella y Shigella caudill reporta resultados muy satisfactorios con el uso del Agar SS para el aislamiento de Shigella hormaeche y col. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Procedimiento: 1. Las . el rojo neutro y el verde brillante actúan como indicadores de pH y el agar es agregado como agente solidificante. FORMULA Método: Suspender 60 g del medio en un litro de agua purificada. son inhibidas en este medio por lo que es recomendable utilizar medios adicionales. Sembrar las muestras por el método de la estría para obtener colonias aisladas. 2. No esterilizar en autoclave. Algunas cepas de Siguella spp. El Agar Salmonella Shigella tiene un desempeño superior a otros medios para el aislamiento de especies de Salmonella y Shigella. Recolectar las muestras en contenedores estériles o con hisopos estériles transportados en un medio de transporte. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas Petri estériles. 3 y el verde brillante actúan como inhibidores de bacilos Gram positivos. usaron el Agar SS junto con otros medios para el aislamiento de Shigella como el agente causal de diarreas infantiles. La lactosa proporciona la fuente de carbohidratos. Las enterobacterias pueden ser diferenciadas en base a su capacidad de fermentar la lactosa . El tiosulfato de sodio y el citrato férico permiten la detección de la producción de H2S. de la mayoría de bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp.

carbono.com/resource.pdf El Agar XLD fue desarrollado por Taylor para incrementar la eficiencia en el aislamiento e identificación de patógenos entéricos.com. vitaminas y cofactores.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Agar_XLD. Coli produce colonias de color rosa a rojo y pueden presentar una zona de precipitado.especies de Salmonella y Shigella son no fermentadoras de la lactosa y forman colonias incoloras en el Agar SS. E.mcd. especialmente del género Shigella y Providencia. Los coloformes son parcialmente inhibidos. Este medio presenta la ventaja de facilitar el crecimiento de gérmenes exigentes ya que otros medios contienen inhibidores excesivamente tóxicos. lactosa y sacarosa son los carbohidratos fermentables. Pueden crecer produciendo colonias con centros de color gris o negro debido a la producción de H2 S. El Agar XLD está incluido en la USP para los métodos de límite microbiano y las pruebas de “presencia-ausencia de Salmonella” En este medio el extracto de levadura provee la fuente de nitrógeno.pdf Uso El Agar XLD (por sus siglas Xilosa. Desoxicolato) es utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram negativos. AGAR XLD http://www.aspx?IDX=8783 . Citrobacter y Proteus spp. Los patógenos son diferenciados no sólo de los no patógenos fermentadores de lactosa. Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido presentando colonias incoloras. El rojo de fenol actúa como indicador. particularmente de Shigella. Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de hidrógeno desarrollan colonias con centro obscuro. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es adicionado como agente solidificante.ucv. La xilosa. http://www. Las colonias de Enterobacter aerogenes son cremosas de color rosa. Lisina. sino también de varios no patógenos no fermentadores de la lactosa o sacarosa.mx/pdfs/AGAR%20XLD. http://www.bd. El tiosulfato de sodio y el citrato férrico son adicionados para ver la producción de H2S.

.pdf  http://www. . .com.p df  http://www.mx/pdfs/AGAR%20XLD.doschivos. Zaragoza.JR.com/trabajos/biologia/65. microbiologia de los alimentos ”manual de laboratorio” editorial acribia .s.htm  “Microbiología de alimentos y sus procesos de elaboración “. 1972.com.info/pdf/19_Microorganismos_interes_y_estudio.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/leifson. YOUSEF 2006.bioygeo.mcd. España AHMED. Cultivos puros y caracteres de crecimiento.pdf  http://www. John T. EDITORIAL ACRRIBIA.mx/pdfs/AGAR%20SALMONELLA%20SHIGELLA.ucv.mcd. SINSKEY.   ANTHONY J. NICKERSON.pdf   http://www.a Zaragoza España MICHAEL J PELCZAR.REVISION BIBLIOGRAFICA  http://www. E.