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Liebermann–Burchard test

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The Liebermann–Burchard or acetic anhydride test is used for the detection of
cholesterol. The formation of a green or green-blue colour after a few minutes is
positive.
Lieberman–Burchard is a reagent used in a colourimetric test to detect cholesterol,
which gives a deep green colour. This colour begins as a purplish, pink colour and
progresses through to a light green then very dark green colour. The colour is due to the
hydroxyl group (-OH) of cholesterol reacting with the reagents and increasing the
conjugation of the un-saturation in the adjacent fused ring. Since this test uses acetic
anhydride and sulfuric acid as reagents, caution must be exercised so as not to receive
severe burns.
Method : Dissolve one or two crystals of cholesterol in dry chloroform in a dry test
tube. Add several drops of acetic anhydride and then 2 drops of conc.H2SO4 and mix
carefully. After the reaction finished, the concentration of cholesterol can be measured
using spectrophotometry.

References[edit]

Campbell, Mary K. & Shawn O. Farrell. Biochemistry. (4th ed.). Singapore:
Thomson Asia Pte Ltd. (2005).
http://www.clinchem.org/cgi/reprint/20/7/794.pdf

http://alquimiafacil.blogspot.com/2012/03/guia-para-complementar-la-10ma.html

Guía Para complementar la 10 ma. Práctica de Lab. Bioquímica
I,PRACTICA No. 10: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN
DE ESTEROIDES .

FOLLETO PARA COMPLEMENTAR EL APRENDIZAJE DE BIOQUIMICA I

AREA: CIENCIAS DE LA SALUD

Por ejemplo se calcula que en un hombre de 80 kilos. MED195. Rodríguez C. A los médicos por lo general les gusta ver el colesterol total menor a 200mg/dL . . hay unos 240 gramos de colesterol. Práctica de Lab.ASIGNATURA: laboratorio de Bioquímica I. Daniel E. y el HDL (colesterol alto ) superior a 40..A. el límite elevado del nivel “casi óptimo” . que quiere decir bilis. (Farmacéutico). Guía Para complementar la 10 ma. por ser el componente más abundante de los cálculos biliares). Poseen la estructurara del ciclopentanoperhidrofunantreno. M. con un LDL (colesterol malo) inferior a 130 . su nombre procede del griego (chole. Bioquímica I Dr. Esteroides Los esteroides se encuentran asociados a las grasas. I. El colesterol es el esteroide de origen animal mas conocido y uno de los mas estudiados. 10: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ESTEROIDES . Objetivos: reconocer y diferenciar los esteroides colesterol y ergosterol . PRACTICA No. Está presente normalmente en los tejidos.

4. una entre C7C8 en el anillo B. los compuestos saturados no desarrollan color.1972. vitamina D. El ergosterol es un esteroide de origen vegetal.Las plantas contienen una variedad de esteroles. p. . y la otra en la cadena lateral entre C22-C23.(Asbun . El ergosterol también se diferencia del colesterol por llevar un grupo metilo extra en posición 2. glucósidos cardiacos y los ácidos biliares”.como consecuencia de la apertura del anillo B. Difiere del colesterol por tener en su estructura dos doble ligaduras adicionales. “Otros esteroides de gran importancia bioquímica son las hormonas sexuales. para esto se lleva a cabo una reacción química que desarrolle color. esto es de manera cuantitativa. 168) Los esteroides se pueden analizar por medios fotométricos. ya que por irradiación con luz ultravioleta adquiere propiedades antiraquíticas . hormonas de la corteza suprarrenal . las dan todos los esteroides que lleven uno o mas dobles enlaces en el anillo A o B. Estas reacciones no son específicas. Esta sustancia es considerada como una pro-vitamina.

sólo los compuestos que dan la reacción positiva son aquellos que tienen dos dobles enlaces conjugados. El ergosterol . se desarrolla un color rojo-purpura .116 g de colesterol y se disuelven en cloroformo . Esta reacción consiste en tratar la muestra de solución clorofórmica de un esteroide con una solución de ácido tricloroacético.003 M: se pesan 0.BUCHARD: en esta reacción se trata una muestra de esteroide en cloroformo con anhídrido acético y ácido sulfúrico. .por ejemplo. posee dos dobles enlaces conjugados en el anillo B. . Reactivos -Solución de colesterol 0. el desarrollo de un color rojo que cambia a azul pálido indica una reacción positiva.REACCION DE ROSENHEIM: se utiliza para diferenciar al ergosterol del colesterol.cantidad suficiente para completar 100mL. se desarrolla un color purpura que pasa a azul verdoso y se estabiliza en verde.Reacciones de los esteroides: -REACCION DE LIEBERMAN.REACCION DE SALKOWSKI: cuando se trata la muestra de solución clorofórmica de un esteroide.

A uno se le agrega 2 miL de Solución de colesterol 0.Seguidamente transcurrido ese tiempo.calidad reactivo. Cada vez que cambia la longitud de onda se lleva la escala a 100 % T con el blanco.003 M. Empezando en 380 mμ. luego en 20 mμ . -Ácido tricloroacético.119 g de ergosterol (recientemente recristalizado de etanol) en cloroformo . -Anhídrido acético . y 10 gotas de Anhídrido acético .003 M y al otro 2 miL de Solución de ergosterol 0. Se le agrega a cada tubo 6 miL de cloroformo . Se deja reposar en la obscuridad durante una hora .003 M:se disuelven 0. hasta llegar a 680 mμ.calidad reactivo. se completa el volumen a 100mL. se mide la densidad óptica en el espectrofotómetro. Se anotan los valores obtenidos y se traza una curva de absorción para cada uno de los compuestos . indicando la densidad óptica sobre el eje de las ordenadas y la longitud de onda ensobre el eje de las . Se usa cloroformo como blanco. Se mezcla bien y se adiciona 2 gotas de ácido sulfúrico.-Solución de ergosterol 0. Experimento I :Técnica : Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos .calidad reactivo. luego 400 mμ. -H2SO4 concentrado.

en tanto que el ergosterol presentara una marcada curva de absorción.cada vez que se cambia la longitud de onda se lleva la escala a 100% T con el blanco.003 M y al otro 2 miL de Solución de ergosterol 0.Después de 30 minutos se mide la densidad óptica de cada una de las soluciones Empezando en 380 mμ .abscisas.A uno se le agrega 2 miL de Solución de colesterol 0. 6 miL de cloroformo y se mezclan bien . se usa cloroformo como blanco . se toman lecturas sucesivas incrementando la longitud de onda en 20mu hasta llegar a los 680 mμ. anotando la densidad óptica sobre el eje de las ordenadas y la longitud de onda sobre el eje de las abscisas . El colesterol al dar una reacción negativa carecerá de de curva de absorción en la frecuencia señalada . Se observara que el colesterol y el ergosterol tienen curvas de absorción similares. Con los datos obtenidos se construye una curva de absorción para el colesterol y otra para el ergosterol. Experimento II REACCION DE ROSENHEIM: Técnica : Se toman dos tubos de ensayo bien limpios y secos . Experimento III: .003 M. Se le agrega a cada tubo 2 miL de solución de Ácido tricloroacético.

Obtención del colesterol de cálculos biliares.BUCHARD para esteroides insaturados. Mezclar 5 gotas de cloroformo con 4 gotas de anhídrido acético y 1 gota de ácido sulfúrico. hablar con las estudiantes de enfermería). La solución se filtra en caliente . se secan y se pesan . observar los cambios de color en 5 minutos. utilizando dos hojas de papel filtro. Los cristales se recogen por succión .un poco de esta mezcla y juntarla con 1-2 mg de colesterol. se puede conseguir en el laboratorio de tecnología farmacéutica). Al filtrado se le añaden 20 miL de metanol . se calienta hasta disolución y se deja enfriar. se vuelve a calentar y filtrar en caliente .el filtrado se destila a la mitad de volumen y se deja enfriar recogiéndose una segunda cosecha. Hacer la prueba de LIEBERMAN. . Si el filtrado esta muy oscuro . En un matraz erlenmeyer de 100 miL se colocan 4 g de cálculos biliares pulverizados y se revuelven con 40 miL de acetona .1 g de carbón activado (norita. mientras se calienta la suspensión en bañoo de María. en un embudo previamente calentado.se vuelve a calentar hasta ebullición y se le va añadiendo agua hasta turbidez. hasta disolución del colesterol.( se pueden obtener éstos en un hospital. Tomar con un capilar . se le decolora con 0.

Santiago-Iacobucci. ED Kapelius. 235-237. Santo Domingo.Observar y apuntar________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ _______. Ph. Bioquímica experimental. Alberto. Bioquímica experimental. . Págs. Cuaderno de trabajo. 1-Asbun Wady. ED universitaria _UASD. 40-43. (2006). Santo Domingo R. Argentina (1964). 4-Celsi. Págs.Franklin y Monzó Antonio. 2-Brito.(1972).D. 3-Casanova.D.D.. José.D. Santo Domingo R.(1972). Buenos Aires.D. 1-Asbun Wady. Química elemental moderna orgánica. BIBLIOGRAFIA. Elementos de Química Orgánica.(1979). Santo Domingo R.Química Orgánica. Ph.

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