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FACULTAD

DE
CIENCIAS EXACTAS
Y NATURALES

Estudio preliminar de microorganismos presentes en la fuente hidrotermal
del Centro Recreacional San Vicente, Santa Rosa de Cabal y sitios aledaños,
perteneciente al Macizo Volcánico Parque De Los Nevados de la cordillera
Sur Occidental de Colombia.

Catalina Rios, Santiago Arango Otalvaro, Oscar Taíman, Andrés Camilo Betancurt Barco.

Resumen
Se presentan los resultados del trabajo de campo dirigido al reconocimiento de los
microorganismos presentes en las fuentes termales y en los tapetes bacterianos del
escenario natural, ecoturístico y lugar de esparcimiento familiar Termales de San Vicente
en Santa Rosa de Cabal para resaltar la importancia de realizar estudios dirigidos a
contribuir al conocimiento de los microorganismos presentes en los biofilm y fuentes
termales que son continuamente frecuentadas por el ser humano. Evaluando la presencia de
coliformes específicamente E. coli para determinar si hay contaminación y su origen. Los
resultados del estudio mostraron la presencia de algas filamentosas en todas las fuentes
hídricas analizadas, pseudomonas en las fuentes lodosas a los cuales se les realizo una
prueba de diversidad con el índice de Simpson y además de hallarse microfauna como
rotíferos; asimismo confirmando coliformes en todas las fuentes termales y la ausencia de
E. coli en las piscinas.

Palabras Clave: Aguas termales, microorganismos, bacterias, coliformes, Escherichia coli,
biodiversidad.

1

Abstract The results of fieldwork led to the recognition of microorganisms in hot springs and natural bacterial mats. ecotourism and place of family recreation Thermal San Vicente in Santa Rosa de Cabal scenario are presented to highlight the importance of studies aimed at contributing to the knowledge of microorganisms in the biofilm and hot springs that are constantly frequented by humans. Introducción La actividad volcánica ha jugado un papel importante en la formación de lagos y lagunas en varias regiones del mundo. The study results showed the presence of filamentous algae in all water sources analyzed. como es el caso de los cuerpos de agua en áreas de actividad volcánica o tectónica localizados a lo largo de la Cordillera de los Andes. coli specifically to determine if contamination and its origin. coli in the pools. pseudomonas in the muddy sources that I were made a test diversity index and Simpson besides being microfauna as rotifers. 1. Evaluating the presence of coliforms and E. como las aguas termales de San Vicente que hace parte de esta cadena volcánica en la Cordillera Sur 2 . also confirmed coliform in all the hot springs and the absence of E.

por reacciones químicas entre cuerpos ya existentes en el agua sobre los minerales de los terrenos atravesados o también sobre otros compuestos del agua misma. que otorgan propiedades que contribuyen a disminuir molestias físicas.. lo que indirectamente es la mejor prueba de la estrecha relación entre las agua termales y la geología del país. y. como son las sales de los metales ligeros y oxidables. etc. como el cloruro sódico.Occidental colombiana. Salazar. las investigaciones biológicas con aguas termales de origen volcánico son escasas. Naundorf. tercer lugar. porque en los terrones sedimentarios las aguas encuentran generalmente muchas sustancias fácilmente solubles. de la temperatura y la presión existente en la zona donde ha tenido lugar la mineralización original: en segundo. sale alcalinas y alcalino terreas que en ellos se encuentra en condiciones muy apropiadas para su redisolución y movilización. La composición química de las aguas termales está íntimamente ligada a la constitución geológica de la región en que brotan. La mineralización de las aguas termales dependen de tres factores: en primer lugar. Por simple disolución de sustancias directamente solubles en el aguas. el sulfato sódico. Además se han desarrollado investigaciones acerca de la diversidad microbiana en ambientes extremos con el fin de determinar cuáles son las características particulares que les permite sobrevivir a dichas condiciones y comprender el 3 . y esto permite muchas veces prever la naturaleza de las aguas que se encuentran en ellas. San Miguel (1956) Las aguas termales han sido utilizadas en gran medida en el campo medicinal debido a su alta temperatura y minerales presentes. La mineralización de las aguas termales puede producirse por distintas maneras. et al (2011). En Colombia. de la composición de las sustancias minerales que en ella se encuentra. el sulfato cálcico. de los gases disueltos que modificar el pH y el rH de las aguas.

fumarolas y manantiales terrestres. adaptados para sobrevivir y reproducirse a altas temperaturas (60 a 110°C) y a bajas concentraciones de oxigeno (Edwards et al. caracterizados por tener propiedades físicas (pH. Las bacterias existen en la naturaleza en dos formas: en estado de libre flotación o planctónicas. los cuales representan el 99% de todas las bacterias (Sanclement et al. han sido aislados en fuentes termales marinas.1998). o formando colonias de microorganismos sésiles conocidos como biofilm. Los microorganismos termófilos se encuentran en diferentes hábitats. temperatura y concentración mineral) y químicas que han condicionado la diversidad de microorganismos anaerobios y autóctonos de cada tipo de fuente termal distribuidas en el mundo (Rubiano 2006. 1990). debido a que los tapetes protegen a las bacterias frente a fluctuaciones medioambientales de humedad. temperatura y pH. Los estudios ecológicos realizados sobre la microbiota de manantiales termales ha cambiado la visión de la biodiversidad microbiana y de su composición. volcánicas. estructura y función en diferentes manantiales calientes (Ward et al. 2005). al igual que concentrando nutrientes y facilitando la eliminación de desechos (Nazar 2007).papel que desempeñan en su hábitat natural. Los tapetes microbianos o biofilm. representan entonces una antigua estrategia de supervivencia procariota. Las bacterias capaces de conformar un biofilm son varias. en las cuales están incluidas tanto gram negativas como 4 . aéreas.) reflejando la facultad de estos organismos para adaptarse a ambientes extremos (Stetter 1999). los cuales han sido considerados como manifestaciones de la actividad geológica. las cuales constituyen el 1%. por lo tanto han tomado gran importancia en las aplicaciones de procesos industriales y biotecnológicos debido a que las enzimas producidas son estables a altas temperaturas las cuales resisten los fuertes procesos (Haki & Rakshit 2003).

Considerando lo anterior y con el fin de aportar nueva información. Materiales y Métodos.. termales San Vicente se encuentra ubicado en la cordillera sur occidental en el departamento de Risaralda piso bioclimático constituye un área de 400 hectáreas aproximadamente. con un dosel superior formado por arboles muy grandes. lugar caracterizado por sus fuente hidrotermales carbonatadas y pH alcalino cercano 9.gram positivas al igual que bacterias patógenas y no patógenas (Diemond & Miranda 2007). se encuentra a una altura de 2300 msnm con una temperatura entre los 14° y 15°C. que en la mayoría de los casos es la palma de cera del Quindío y otros árboles de estatura mediana con una altura entre los 5 a 10 mts. en las siguientes coordenadas geográficas 4° 51’’ 2’n y 75°32’’01’. Área de estudio El trabajo de campo se llevó a cabo en Noviembre 2014. este es uno de los lugares más húmedos de la cordillera central con unos 3500 mL de lluvia anual contra 2200 mL de Manizales. ya que en Colombia la mayoría de las fuentes minerales se encuentran distribuidos en la región andina y atlántica asociadas al cordón o 5 . rodeado por un bosque muy húmedo montano alto. que forman la parte media del bosque y en el suelo una vegetación rastrera. es pertinente resaltar la importancia de realizar estudios dirigidos a contribuir al conocimiento de los microorganismos presentes en los biofilm y fuentes termales que son continuamente frecuentadas por el ser humano.

las cuales posteriormente fueron depositadas en frascos estériles con un poco de agua del termal para conservarlas hasta su posterior análisis microscópico en el laboratorio. cortes cuidadosos con navaja para evitar alterar o macerar las muestras. además se registró la temperatura del sauna. Pruebas bacteriológicas: Se tomaron muestras de agua en recipientes estériles de las diferentes piscinas del ecosistema termal. incluyendo agua del grifo y agua del rio Campo alegre y se registró la temperatura de cada una de ellas. Análisis cualitativo de coliformes: 1.falla del pacifico (Rubiano 2006) estos ecosistemas por lo general son ácidos por los altos niveles de azufre elemental y sulfuro. Las muestras se conservaron en frio hasta que fueron analizadas en el laboratorio. Allí se realizó un recuento viable de mesófilos y análisis de coliformes. Prueba presuntiva: En dos tubos con caldo lactosado se sembró 0. 2 y principal.1 ml y 1 ml respectivamente de la muestra a estudiar y se encubaron a 37°C por 24 hs. PROCEDIMIENTO Recolección de tapetes microbianos o biofilm: Se tomaron cortes de los tapetes microbianos de la superficie de la pared de rocas dentro de los saunas cercanos a las piscinas 1. 6 .

5°C.2. Además se puede mostrar que en algunos agares es incontable el número de formación de colonias por unidad (UFC) demostrando la cantidad de bacterias formadas en estas aguas. En la tabla 1 se presentan los resultados correspondientes al análisis de presencia de coliformes en los agares EMB y Centrimide. en los cuales se evidencia que todas las muestras analizadas las contienen. obteniendo la muestra del desagüe de la piscina de burbujas positiva para esta enterobacteria. Adicionalmente. se tomaron dos muestra para sembrar en caldo Brila (2 tubos). sembrando 0. Prueba confirmativa: Se realiza para identificar si hay presencia de Coliformes (Escherichia coli). Si se observa crecimiento del microorganismo en los tubos son de origen animal y humano respectivamente. El siguiente tubo a una temperatura de 45. 3.37°C. Resultados. coli en el agar EMB. las muestras fueron sometidas a una prueba confirmativa para determinar si las coliformes halladas correspondían a Escherichia coli. 7 .1 ml de la muestra en el agar EMB. También se hizo una siembra en el agar sabouraud para saber si había presencia de hongo y/o saprofitos. Prueba doble confirmativa: De obtenerse colonias de E. un tubo fue llevado a la incubadora a una temperatura de 36 .

coli que se encuentra en el agar EMB GRUPO G1-M1 G1-M1 G1-M1 G1-M5 G1-M5 G1-M5 G1-M4 G1-M4 G1-M4 G1-M3 G1-M3 G1-M3 G1-M2 G1-M2 G1-M2 G2-M1 G2-M1 G2-M1 G2-M2 G2-M2 G2-M2 G2-M3 G2-M3 G2-M3 G2-M4 G2-M4 G2-M4 G2-M5 G2-M5 G2-M5 G3-M1 G3-M1 G3-M1 G3-M2 G3-M2 G3-M2 G3-M3 G3-M3 AMBIENTE AGUA NACIMIENTO AGUA NACIMIENTO AGUA NACIMIENTO RÍO RÍO RÍO PISCINA PRINCIPAL PISCINA PRINCIPAL PISCINA PRINCIPAL PISCINA ALGAS PISCINA ALGAS PISCINA ALGAS PISCINA BURBUJAS PISCINA BURBUJAS PISCINA BURBUJAS POZOS DEL AMOR POZOS DEL AMOR POZOS DEL AMOR SPA DE HUESPEDES SPA DE HUESPEDES SPA DE HUESPEDES PISCINA DE ALGAS 1 PISCINA DE ALGAS 1 PISCINA DE ALGAS 1 PISCINA PRINCIPAL PISCINA PRINCIPAL PISCINA PRINCIPAL NACIMIENTO NACIMIENTO NACIMIENTO POZOS DEL AMOR POZOS DEL AMOR POZOS DEL AMOR PSICINA DE LAS BURBUJAS PSICINA DE LAS BURBUJAS PSICINA DE LAS BURBUJAS SPA DE HUESPEDES SPA DE HUESPEDES AGAR EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD UFC 174 8 incontable 640 656 4520 508 incontable 320 230 128 175 384 41 incontable 80 160 288 544 377 864 incontable 512 135 1160 540 incontable 127 89 50 20 14 66 600 74 120 incontable 37 2 Verde metálico 8 .Tabla1: análisis de presencia coliformes. específicamente E.

algas cianofíceas. etc. Los microorganismos hallados corresponden a las muestras tomadas de los tapetes de la piscina de lodo y su respectivo desagüe. ESTRUCTURA (BIOFILM) LUGAR Tº Sauna 1 44°C Sauna 2 44°C Desagüe piscina 36°C lodoterapia Y MICROORGANISMOS MICROORGANISMOS algas septadas. pseudomonas. diatomeas. entre los cuales se identifican rotíferos (Figura 3). en ellos se observó la evidente estratificación (Figura 1) y los microorganismos presentes. 9 . algas no septadas. algas cianofíceas. algas no septadas Algas septadas. entre las cuales se encuentran algas septadas y no septadas (Figura 2). pseudomonas. algas no septadas algas septadas.G3-M3 G3-M4 G3-M4 G3-M4 G3-M5 G3-M5 G3-M5 SPA DE HUESPEDES NACIMIENTO NACIMIENTO NACIMIENTO RÍO RÍO RÍO CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE EMB SABOREAUD CENTRIMIDE incontable 568 3 169 3 327 48 En la tabla 2 contiene los resultados de las muestras obtenidas de los biofilm. obteniéndose que los tapetes microbianos están conformados por algas filamentosas (éstas pueden ser coenogonium). Tabla 2: Microorganismos obtenidos en el biofilm y su estructura.

rotíferos.Piscina 40°C lodoterapia Sauna 3 44°C Piscina de 42°C algas Nacimiento de agua 58°C termal Pseudomonas.p. Osillatorias s. Algas filamentosas.p. Algas cianofíceas. Rotífero 10 . Bacillurioficeas algas septadas. Figura 2. Estratificación del Biofilm. Cloroficeas. algas no septadas algas septadas.p. algas no septadas Figura 1.. Gomphonemas s.. Diatomeas. algas no septadas algas septadas. Clodophoras s..p.p. Figura 3.. Naviculas s. Fragillarias s.

por lo tanto la biodiversidad del ecosistema estudiado (Aguas termales de San Vicente) es bajo. Como el resultado fue tan bajo (0. 5 y 6) se muestran los microorganismos con su correspondiente Phylum que se presentaron en este barrido en las distintas piscinas. Además en la tabla 4 se muestran aquellos microorganismo que se podía observar en las aguas termales. en la Tabla 3 y las Figuras (4.Todo esto se realizó con un barrido en el microscopio en zigzag. Tabla 3. contando los microrganismos presentados en cada cuadro mostrado. Microorganismo y su correspondiente Phylum Microorganismo Fragillaria Navicula sps Closterium aciculare Cosmarium contractum Ankistrodesmus acicularis Gloeocystis gigas Kirchneriella lunaris Monoraphidium Oocystis sp Anabaena sp Occillatoria Chrooccucus turgidus Trachelomonas sp Diatomea Dactylococcopsis acicularis Phylum bacillariophyta bacillariophyta charophyta charophyta chlorophyta chlorophyta chlorophyta chlorophyta chlorophyta cianobacteria cianobacteria cianophyta euglenophycota heterokontophyta Negibacteria 11 .94) y el tope en el índice de Simpson es de 5. a los cuales se les realizo una prueba de diversidad con el índice de Simpson que se muestra en la Tabla 5 con su respectiva ecuación. esto se interpreta en qué. algunos de estos se repetían en las diferentes aguas analizadas. a mayor valor del índice indica una mayor biodiversidad del ecosistema.

Figura 4 Primera muestra de la especie Chrooccucus turgidus Figura 5 Segunda muestra de la especie Chrooccucus turgidus Figura 6 Varios microorganismos encontrados con poco zoom (10x) 12 .

Índice de Simpson Microorganismos sp A B C D E F G H I N° de Individuos 15 24 12 22 32 20 17 3 8 13 . Microorganismos reconocidos en las diferentes piscinas termales Microorganismos Aphanizomenon Anabaena sp Ankistrodesmus acicularis Aphanizomenon Chrooccucus turgidus Closterium aciculare Cosmarium contractum Dactylococcopsis acicularis Diatomea Fragillaria Gloeocystis gigas Kirchneriella lunaris Monoraphidium Navicula sps Occillatoria Oocystis sp Trachelomonas sp Turco Nacimiento Piscina de algas 1 Turco2 Turco Principal + + - Lodoterapia - Total 0 15 + + + - + + + + - + + 24 12 22 32 - + - - + - 20 + + + - + + - + + - + + + + + + - + + + + - 17 3 8 5 1 14 1 35 4 1 Tabla 5.Tabla 4.

bacterias fototróficas anoxigénicas en las capas anteriores y hasta donde pueden penetrar rayos luminosos y finalmente (en las capas inferiores) presentan bacterias quimioorganotrofas.J K L M N O P Total: 5 1 14 1 35 4 1 214 ( ) ( ) ( ) 1/D= 1/ 1. et al (2003). con una especial abundancia de sulfato reductoras. es decir. En la mayoría las fuentes hídricas analizadas se determinó la presencia de coliformes. Por lo tanto.055 = 0. se hace 14 . Madigan. durante el baño y desplazamiento de las personas de un lugar a otro pueden dispersar estos organismos y aumentado la posibilidad de contaminación. lo cual puede explicarse por la manipulación y contacto antropogenico.94 Discusión. Los Tapetes bacterianos o Biofilm están conformados por comunidades microbianas estratificadas que normalmente corresponden a cianobacterias ubicadas en la parte superior del tapete.

heces. lo cual lleva a concluir que su presencia está asociada a contaminaciones por materia fecal humana. Pseudomonas aeruginosa y Legionella. sumergiéndolo completamente y dándole la vuelta en sentido contrario a la corriente (río) o desplazándolo horizontalmente en la dirección de la boca del frasco 15 . procurando no remover el fondo y evitando los remansos o zonas de estancamiento. Para tomar una muestra del agua de un lago o de un río se sujetará el frasco por el fondo en posición invertida. La muestra se tomará lo más lejos posible de la orilla. ya que en ríos o cursos de agua será preciso considerar diversos factores. vegetales). resaltando que las fuentes que tienen temperaturas superiores a 40ºC no favorecen la supervivencia de este. Escherichia coli. Clostridium perfringens. (2000) La presencia de E. Rodés. considerados contaminantes pero que coexisten con los anteriores. B. siendo los mayor interés sanitario Salmonella.indispensable realizar controles periódicos que permitan identificar posibles contaminaciones microbiológicas o químicas. distancia a la orilla. Rosa & Mosso (2010) Hay que tener en cuenta que estos estudios fueron hechos con las mínimas condiciones requeridas. asimismo las temperaturas que oscilan entre los 36°C y la composición del hábitat proporciona características óptimas para el crecimiento y desarrollo de este microorganismo mesófilos. procedentes de otro habitas (suelo. con los registros poco exactos ya que hubo un margen de error que no se consideró. etc. como la forma de tomar las muestras del agua a estudiar. coli fue evidente en la muestra correspondiente a las que se les tomo a la piscina de burbujas. tales como: profundidad. Por otro lado también pueden encontrarse en ellas microrganismos aloctonos. caudal. adaptándose a las condiciones adversas.

great bretain. W. Microbiology of extreme environments. teniendo en cuenta los resultado obtenidos para darle margen de duda del control sanitario que se lleva a cabo en este sitio. Clive Edwards. M. R. C. Ya que no se tomó las medidas necesarias se pudo a ver contaminado el agua por contacto externo o del propio recolector. Es por ello que es recomendable hacer otro muestreo tanto para asegurar los resultados como posibles como para tomar las medidas que no se tomaron con anterioridad. C. Gilmore. 251. Igledew.G.c. D. (1990). Impresión. Referencias San Miguel de la Cámara (1956) Geoquímica de las aguas termales. 16 .(lago). Buckingham. Jennings. D.Gadd.H & Kroll. J. Laboratorio de la Calidad de Agua (2011). Con el presente trabajo se quiere mostrar que las aguas termales de San Vicente necesita un mejor control de calidad de agua. y una mejor supervisión del lugar para evitar contaminantes por microorganismos que pueden llegar a ser patógenos. Primera edición ed. y perjudiciales para las personas que van a este sitio como un relajante o un medicinal espacio. Fry. Madrid Edwards.

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