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Gentica na Escola ISSN: 1980-3540

MATERIAIS DIDTICOS

O Jogo da Resposta
ao Dano no DNA

Dano no DNA uma alterao


qumica da estrutura do DNA,
como por exemplo, quebras em
uma das fitas do DNA (causados
por oxidao ou colapso da
forquilha de replicao) ou
dmeros de pirimidina causados
por luz UV (ligao covalente
entre bases adjacentes que
distorce a dupla-hlice). Uma
leso pode ser reconhecida e
reparada. Mas, em determinadas
situaes, ela pode gerar uma
mutao, ou seja, uma alterao
na informao gentica.
A Luz ultravioleta (UV)
subdividida didaticamente
em trs faixas de acordo com
o comprimento de onda: UVA
(320-400 nm); UVB (280-320
nm) e UVC (100-280 nm). A
camada de oznio na atmosfera
terrestre absorve toda luz UVC
e grande parte de luz UVB e,
assim, o que atinge a superfcie
terrestre UVA e uma parte da
luz UVB. A poro UVB induz
principalmente dmeros de
pirimidina no DNA enquanto a
toxicidade de UVA vem de danos
por oxidao.

Tumorignese um processo
de mltiplos passos, em que a
progresso depende em uma
acumulao sequencial de
mutaes em uma mesma clula.
Essas mutaes resultam em
perda da homeostase tecidual
j que as clulas transformadas
adquirem vantagens seletivas
pelo aumento da taxa de
proliferao, diminuio da
induo de morte celular, alm
da criao de um microambiente
propenso ao crescimento.

jogo Resposta ao dano no DNA uma proposta


de atividade facilitadora do aprendizado que integra
conhecimentos de ciclo celular, danos no DNA, mutagnese
e cncer. O jogo prope que o estudante de ensino superior
se coloque na posio de uma clula com danos no DNA
gerados por luz ultravioleta do sol e que reflita sobre as
possibilidades existentes para evitar que se transforme em
uma clula tumoral.

DNA uma molcula instvel naturalmente. Diversos agentes qumicos e


fsicos podem interagir com essa molcula e
modificar sua estrutura, gerando danos no
DNA o que ameaa a estabilidade genmica. A luz ultravioleta (UV), por ser parte
integrante da radiao solar, o agente fsico
capaz de lesionar o DNA a que estamos mais
expostos e por esse motivo o maior fator de
risco para cncer de pele. Porm, para que o
processo de tumorignese acontea, necessrio que os danos no DNA sejam convertidos em mutaes. Para que isso acontea, a fase do ciclo celular em que a clula
se encontra fundamental. Para fixar uma
mutao pontual necessria a replicao
do DNA (fase S). Aberraes cromossmicas ocorrero caso quebras no DNA sejam
religadas em local inadequado e aneuploidias
ocorrero caso as quebras persistam at a

mitose e os cromossomos no sejam separados adequadamente. Devido a essa ameaa, a


evoluo selecionou vias enzimticas capazes
de reparar de DNA, especficas para cada
tipo de leso.
Porm, a resposta ao dano no DNA vai muito alm da maquinaria de reparo. Existe uma
sinalizao que desencadeia uma resposta
instantnea atravs de modificaes ps-traducionais (fosforilao, ubiquitinao, metilao etc.) em protenas j existentes, alterando sua funo ou localizao celular. Uma
segunda resposta, um pouco mais demorada,
envolve modulao da expresso gnica com
aumento ou diminuio da transcrio ou estabilidade do RNAm alvos. Essas respostas
culminam em paradas no ciclo celular (checkpoint) evitando catstrofe na replicao
ou na mitose alm de mecanismos de to-

Mutao a alterao da
informao gentica atravs
de mudana na sequncia
de nucleotdeos. Podem
ser causadas apenas pela
substituio de uma base
(Mutao pontual), pela insero
ou deleo de bases ou ainda
aberraes cromossmicas como
translocaes cromossmicas
gerando aneuploidias.

Leonardo Carmo de Andrade-Lima


Ps-graduando do Departamento de Microbiologia do
Instituto de Cincias Biomdicas, Universidade de So Paulo
Correspondncia - leolima11@gmail.com

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lerncia ao dano na fase S (sntese transleso) e maior eficincia de reparo. Como
ltima estncia, uma sinalizao de dano
mais persistente pode levar senescncia ou
apoptose, evitando tumorignese.
No Curso de Difuso intitulado Respostas
aos danos no DNA Implicaes em envelhecimento e cncer, oferecido para graduandos da rea de sade (Cincias Biolgicas,
Biomdicas, Farmcia e Bioqumica, Medicina, Biotecnologia), realizado no Instituto de
Cincias Biomdicas da Universidade de So
Paulo foi criada, como parte da disciplina,
uma atividade ldica que busca integrar conhecimentos de ciclo celular, danos no DNA,
mutagnese e cncer, s vezes tratados como
tpicos no relacionados. A atividade enfatiza a diferena entre dano no DNA e mutao, alm de fazer com que o aluno reflita na
melhor resposta celular - dependendo de que
fase do ciclo celular ela se encontra - frente
possibilidade de acumular mutaes e sofrer
transformao.
O jogo oferece uma oportunidade inovadora
de integrar e discutir conceitos apresentados
em aulas tericas previamente ministradas
com a temtica de Mutaes e Reparo de
DNA para alunos de graduao de disciplinas como Biologia Molecular, por exemplo.

COMPONENTES DO JOGO
Projetor multimdia (Data show) para
apresentao em PowerPoint para apresentao das Regras do Jogo (quadros 2 e
3) e da Dinmica do Jogo (quadros 4 a 7).
A referida apresentao pode ser obtida
neste link.
110 cartes de danos no
DNA causado por UV
94 cartes de
Mutao
46 cartes de Dupla-quebra no DNA
Todos os cartes devem ser previamente
impressos a partir do anexo 1 e recortados para uso em aula.

PLANEJANDO A ATIVIDADE
A atividade deve ser realizada com um grupo
de, no mximo 20 estudantes (ou 20 duplas),
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divididos em 3 filas indianas de frente para o


projetor. Cada estudante representa uma clula irradiada com luz solar e inicia o jogo em
uma das fases da interfase (G1, S ou G2). A
proporo das fases entre os estudantes deve
ser de 2:2:1, respectivamente (8 em G1; 8
em S e 4 em G2).
O objetivo do jogo que a clula (estudante)
no acumule mutaes e no se transforme
em um tumor. O jogo contm 110 telas com
aes para progresso no ciclo celular (Fig.
1) projetadas em PowerPoint e inicia-se com
o primeiro aluno da fila G1 escolhendo qualquer ao correspondente sua fase no ciclo
celular. Se o participante progredir no ciclo
celular, ele se dirigir ao final de sua nova fila
(no caso, fase S) e esperar a vez de escolher
uma nova ao. Ento, ser a vez do prximo
estudante da fila, escolhendo sua ao. Caso,
aps a ao, ele no consiga passar para a
prxima fase do ciclo, ir para o fim da fila
e esperar a vez. A sequncia de escolha de
2 participantes na fila G1, seguidos por 2 na
fila S e 1 na fila G2, ento, a escolha retorna
fila G1.

REGRAS DO JOGO
1. Cada participante (ou dupla) uma clula progredindo no ciclo celular.
2. O objetivo do jogo progredir no ciclo
celular e no virar tumor.
3. Transforma-se em tumor quando 5 mutaes so acumuladas.
4. Todas as clulas comeam o jogo com 5
leses causadas por luz UV solar.
5. As leses causadas por luz UV solar
podem ser transformadas em leses de
dupla-quebra no DNA (isso acontece
devido persistncia do bloqueio da forquilha de replicao).
6. Em cada rodada, o participante da vez
escolhe uma ao para lidar com o problema dos danos no DNA e prosseguir
no ciclo. As opes variam entre ativar
diferentes vias de reparo de DNA, modular a resposta ao dano no DNA, induzir morte celular por apoptose ou
simplesmente prosseguir para a prxima
fase do ciclo sem nenhuma resposta celular. Assim, o participante na fase G1

Sntese Transleso - Danos


causados por luz UV promovem
grandes distores na estrutura
do DNA e promovem um
bloqueio fsico das maquinarias
de replicao do DNA. Porm,
se a forquilha de replicao
persistir bloqueada pelos
dmeros de pirimidina, poder
ocorrer o colapso e a converso
em duplas-quebras no DNA.
Como forma de evitar esse
bloqueio desastroso e continuar
a replicao, as clulas podem
recrutar polimerases alternativas
mais propensas a erros, mas
com capacidade de replicar um
dano no DNA. A consequncia,
entretanto, uma maior chance
de mutagnese.

pode escolher: Reparo por exciso de


Nucleotdeos (NER), carto 1; ou NER
carto 5; ou Ativao de checkpoint, car-

to 2, e assim por diante. Na fase S, surge tambm a opo de Sntese transleso


e Remodelamento de Cromatina.

7. Para remover cada tipo de leso deve-se


escolher a ao apropriada, incluindo a
via de reparo correta. Assim, para quem
tem leso de dupla-quebra no DNA,
de nada adianta escolher a via de reparo por exciso de nucleotdeos (NER),
por exemplo. Nas fases G1 e S, escolhas
adequadas tm maior chance de obter
um carto de sorte, enquanto que escolhas inadequadas, maior chance de
azar e acmulo de mutaes. Assim, a
estratgia de que aes tomar de acordo
com a situao determinante para uma
progresso sem mutaes no DNA. Em
G2/M, os cartes so de Pergunta e Resposta assim, para conseguir o benefcio
do carto, necessrio acertar a questo.
O professor coordenar a leitura das
perguntas e revelar a resposta, auxiliando o aluno a decidir sobre como dever
fazer (ganhar uma mutao, remover
danos no DNA, progredir no ciclo ou
manter-se na mesma fase, indo para o
fim da fila)

8. Os benefcios podem ser a remoo de


leso ou ento um bnus, que multiplica
o reparo conseguido na rodada seguinte.
Assim, se uma clula conseguir o Bnus
Reparo x3 em uma rodada e conseguir
ativar reparo NER em uma rodada seguinte, a remoo de leses ser triplicada, ao invs de reparar 1 dano; sero
reparados 3 danos no DNA. O bnus de
reparo pode ser guardado e utilizado no
momento desejado, podendo inclusive
ter valor acumulativo.

Figura 1.
Telas em Power Point com
escolha das aes do Jogo
Resposta ao dano no DNA.
Existem diferentes possibilidades
de escolha dependendo da fase
do ciclo celular. Em G1, pode
ocorrer Reparo por exciso de
nucleotdeos (NER) para dmeros
causados por UV; Reparo por
exciso de bases (BER), para
reparar bases oxidadas como
consequncia da radiao solar;
Ativao de Checkpoint (Chk),
para continuar na mesma fase do
ciclo; Modular Expresso Gnica
(Ex Gn), para responder de
maneira mais eficiente ao danos;
Ligao de extremidades no
homlogas (Non homologous
end-joining -NHEJ), para reparos
de duplas-quebras quando no
se tem cromtide irm; Ativar
Apoptose (Apopt), para sacrifcio
celular; ou Progredir direto
fase S (Ir S), sem querer ativar
nada. Na fase S, pode ocorrer
Sntese Transleso (TLS), para
progredir evitando bloqueio
na forquilha de replicao;
Recombinao Homloga (Rec
Hom), pois em fase comea
a sntese da cromtide irm; e
Remodelamento da cromatina
(Cromat), para auxiliar em um
reparo mais eficiente, alm da
proguesso direta fase G2 (Ir
G2), em que alm de todas
opes, possvel tentar entrar
em Mitose sem ativar nada
(Mitose). (Uma smula da
teoria passar para o incio da
atividade).

9. Aps a escolha da ao, a clula pode


avanar no ciclo ou manter-se na mesma fase mais uma rodada, dependendo da consequncia da ao escolhida
Caso permanea, o participante dever
dirigir-se ao final da fila de sua fase celular. Se permanecer a rodada em fase S,
acumula-se automaticamente mutaes
proporcionais s leses:

5 ou 4 leses causadas por UV solar = 2


mutaes pontuais;

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3 ou 2 leses causadas por UV solar = 1


mutao pontual;

Se passou por mitose com 1 leso dupla-quebra no reparada = Aneuploidia


(equivalente a 3 mutaes)

aumentando-se a chance de incorporaes


errneas de bases, alterando a informao
gentica e gerando uma mutao. No caso
de dupla-quebra no DNA, no necessrio
replicao para gerar uma mutao, j que
translocaes e inverses ocorrem quando
fragmentos so ligados de maneira incorreta, resultando em rearranjos cromossmicos, como no caso da ocorrncia de reparo que liga extremidades no homlogas.
Porm, o maior perigo para a estabilidade
genmica ocorre quando h persistncias
de quebras durante a mitose e separao
desigual dos cromossomos durante a anfase, o que resultar em aneuploidia. Como
consequncia, a tumorignese acelerada,
j que por afetar cromossomos inteiros,
existe potencial de gerar mais mutaes e,
assim, aumenta a chance de mais genes supressores de tumor serem afetados .

10. O vencedor do jogo a clula que, aps


o trmino dos cartes, ou aps um nmero de rodadas predefinido, sobreviveu
sem se transformar em tumor (medalha
de OURO). Aqueles que impediram tumorigsese atravs de morte celular ou
senescncia ficam com o prmio de consolao (medalha de PRATA); enquanto
que os perdedores so aqueles se transformaram em tumor. Ainda, sugere-se
a criao de prmios de destaque, com
a premiao de bombons, por exemplo,
para estimular as clulas a progredirem
no ciclo e tentarem reparar todas leses:
PRMIO REPLICADOR aquele
que completou mais mitoses
PRMIO HOMEOSTASE aquele
que terminou com menos leses

PROCEDIMENTO
PARA O PROFESSOR
1. Imprimir, com antecedncia, o Anexo 1 e
recortar Leses UV (2 pginas), Leses
Dupla-Quebra (1 pgina) e Mutaes (2
pginas).
2. Garantir projeo para o dia do jogo, para
apresentao do Anexo 2, com explicao
das regras para os alunos e cartes de escolha.
3. No dia do jogo, aps explicao do jogo,
distribuir 5 leses UV a cada um dos
participantes e dividi-los em 3 filas (G1,
S, G2)
4. Coordenar a escolha dos cartes, indicando que aes o aluno pode escolher.
Aps a escolha, o professor deve clicar na
respectiva escolha e ler a consequncia ou
a pergunta (para revelar a pergunta, basta clicar no boto Resposta quando em
modo de apresentao). Para voltar tela
com as opes de escolha s clicar no boto Voltar. Em seguida, deve distribuir e
recolher as leses no DNA e mutaes do
Anexo 1 correspondentes consequncia

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(lembrando-se de verificar bnus). Por


fim, deve guiar o aluno para qual fila deve
seguir.
5. O professor deve ficar atento para saber
se o aluno possui leses de dupla-quebra
quando entrar em mitose ou leses causadas por luz solar em fase S, que no foram reparadas ao trmino da rodada, para
ento distribuir mutaes adquiridas de
maneira adequada. Aconselha-se um monitor para auxiliar a distribuir leses e
mutaes.
6. Alunos que virarem tumor ou morrerem,
saem da fila e no jogam mais. O fim do
jogo pode ser de acordo com um tempo
determinado ou quando acabarem as opes de aes j que uma ao no pode
ser escolhida 2 vezes. Ento, o professor
conta quantos sobreviveram, quantos
morreram e quantos viraram tumor, podendo preencher a tela final (Por exemplo: com 20 participantes, ao trmino do
jogo, 10/20 sobreviveram; 6/20 viraram
tumor e 4/20 entraram em apoptose ou
senescncia). Como sugesto, pode-se se
dar um prmio (como um chocolate) ao
sobrevivente que passou por mais mitoses
e ao que terminou com menos leses. Por
fim, o professor comenta sobre quais estratgias foram mais vantajosas, retomando os conceitos tericos e faz uma reflexo
sobre a atividade.

REFLEXO SOBRE
A ATIVIDADE
Cada aluno comea com 5 leses causadas
por luz solar e dever refletir o que ser
mais adequado para no acumular mutaes. Assim, um ponto crucial diferenciar
leso no DNA e mutao. No caso de danos causados por UV, mutaes pontuais
ocorrem principalmente quando o DNA
lesionado replicado. Por ser um processo semiconservativo, o DNA a ser sintetizado usa o DNA lesionado como molde,

Alm disso, leso de um tipo pode se transformar em outra. Dmeros de pirimidina


bloqueiam a DNA polimerase e podem
gerar quebras no DNA quando a forquilha
de replicao sofre colapso. Assim, a melhor alternativa para a clula no depende
s do tipo de leso, mas tambm da fase do
ciclo celular em que se encontra. Durante a
replicao com danos, existe o risco de bloqueio da replicao com as DNA polimerases mais fiis, com menor taxa de erros,
devido ao stio cataltico mais restrito. Ser
melhor tentar reparar em fase S ou fazer
sntese transleso e reparar em G2? Para
uma clula, o pior cenrio a presena de
leses em fase S, pois alm de aumento do
nmero de mutaes pontuais, aumenta-se a chance de converter um dmero em
quebras no DNA, leses estas que geram
maior instabilidade genmica e so mais
letais clula.
Mas a resposta ao dano no envolve apenas
reparo de DNA. Antes de tentar reparar os
danos logo no comeo e prosseguir no ciclo
celular, a clula se prepara para tal situao
com modulao da expresso gnica (fatores de transcrio como p53 so ativados e
induzem a produo de mais protenas de
reparo como XPC no Reparo por exciso
de nucleotdeos e de protenas que controlam o ciclo celular como p21) e remodelamento de cromatina (modificao ps-tra-

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ducionais em histonas; como a fosforilao
da histona H2AX facilita o recrutamento
de protenas de reparo), alm de ativao
de checkpoints (parada no ciclo celular proporciona mais tempo para reparo e impede
replicao ou mitose com danos no DNA).
Assim, os participantes com estratgia de
primeiro ativar checkpoints e modular expresso gnica e s depois reparar o DNA,
conseguiro maior xito na remoo e, assim, diminuiro a chance de mutaes e tumorignese. Assim, alunos na fase G1 e S
no dependero somente da sorte ou azar
com a escolha do carto, j a escolha da estratgia determinante para seu sucesso
no jogo. Um aluno em fase S que escolhe
reparar, quase certamente permanecer em
fase S na rodada seguinte e ganhar mutaes por isso. Aquele aluno que perceber
que a melhor estratgia fazer a sntese
transleso e sair da fase S para remover as
leses em G2 se sair bem melhor, na mdia, mesmo existindo carta de azar. Alm
disso, com o passar das rodadas, os cartes
vo se esgotando, portanto quem demorar
para escolher a melhor estratgia ser forado a escolher cartes inadequados e ter
a disposio mais cartas de azar.

REFERNCIAS
BARTEK J.;BARTKOVA J.;LUKAS J. DNA
damage signaling guards against activated
oncogenes and tumor progression. Oncogene, v. 26, n. 56, p. 7773-9, 2007.

ANEXO 1
Danos por UV solar
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BRANZEI D.; FOIANI, M. Regulation of


DNA repair throughout the cell cycle. Nature Reviews Molecular Cell Biology, v.9, n. 4,
p. 297-308, 2008.
CHANG, D. J.; CIMPRICH K. DNA damage
tolerance: when its OK to make mistakes.
Nature Chemical Biology, v. 5, n. 2, p. 82-90,
2009.
COSTA R. M. A.; ORTOLAN T. G.; LIMA-BESSA K. M.; MENCK, C. F. M. Processos de Reparo de DNA: os guardies do
genoma celular. In: Carlos Gil Ferreira; Jos
Cludio Casali da Rocha, Ed. Oncologia Molecular. 2 Edio. So Paulo, Editora Atheneu, p. 41-61, 2010.
LJUNGMAN, M. The DNA damage response-repair or despair? Environmental and molecular mutagenesis, v. 51, n. 8-9, p. 879-89,
2010.

Por fim, a sinalizao pode ativar senescncia ou morte celular em ltimo caso, quando quantidade de leses elevada. Durante
o jogo, se h muitas leses e j se acumularam 4 mutaes, melhor reparar o dano
ou ativar apoptose? A clula no consegue
identificar se tem muitas mutaes e est
perto de virar um tumor, como na nossa
atividade ldica, mas indica que existe uma
sinalizao em relao aos danos que pode
ser acionada em ltima estncia, o que evita um desastre ainda maior. Afinal, clula
morta, no vira tumor.

AGRADECIMENTOS
Agradeo Gisella Grazioli pelo suporte e
primeiros testes. Agradeo a todo laboratrio de Reparo de DNA e ao Prof. Dr. Carlos
Menck pelas crticas e apoio para fazer com
que jogo fosse parte do contedo do Curso
de Difuso Respostas aos danos no DNA
Implicaes em envelhecimento e cncer e
ao Departamento de Microbiologia do ICB-USP pelo suporte ao curso de Difuso.

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Dupla quebra
do DNA
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