You are on page 1of 2

STRUCTURE

:
1000­1000000 bases/gene,
human genome 3 billion bases, 20,000 genes, 23 pairs of chromosomes; on chromo, p = small, q = big
REPLICATION
exonuclease = repair enzyme
discontinuous ­ leading vs. lagging (Okazaki)
1953 Watson, Crick, Wilkins, Franklin = structure
GENETICS
meiosis 2 ÷ , 4 haploids, indep assort
X linked (sex) IN MALES: traits colorblind, hemophilia, ALD, MD, male pattern baldness
Karyotype ­ nondisjunction disorders:  Klinefelters(XXY) Turner (Xo) Down (tri21)
diploid, monosomy, trisomy
GENE EXPRESSION
operons ­ lac/trp Jacob and Monod
1.   regulator gene ­ producing the repressor molecule
2.   operator gene ­ repressor binds here.  Repressible it binds, Inducible it releases.  RNA polymerase binds here
3.   structural gene is responsible for the production of enzymes used in biochemical pathways
4.  repressor molecule is responsible for combining to either lactose  or the operator gene.
DETECTION of gene expression ­ BLOTTING SNoW DRoP
MUTATIONS ­ chromo # ­ nondisjunction, chromos size ­ add/sub/invert.  genes ­ frame shift = add/sub, point =
substitution,
SEQUENCING ­ Sanger ddNTP are NOT elongating.  End growth, run on gel
RFLP­Restriction fragment length polymorphism­exploits variations in homologous DNA sequences; DNA broken
into pieces by restriction enzymes ­­> restriction fragments are separated by length by gel electrophoresis
Plasmid selection and isolation ­ mini, midi, maxi prep (culture volume ­­> plasmid yeild) an extraction w Basic
buffer
selection w drug (amp^r)
PCR  ­ amplify DNA copies exponentially, region between primers,
for ID or detection of disease, Taq DNA polymerase, Thermocycler (denature, anneal, extend by temp 95, 50, 72o)
Kary Mullis 1983 Nobel
Polymerase chain reaction (PCR)
o Copy a gene many times to generate sufficient amount of material for experiments
o Describe PCR cycle: denaturation, annealing of primers, primer extension
o Reagents: DNA polymerase, free nucleotides
o Number of DNA copies doubles in each cycle (chain reaction)
ELISA – Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay – identify antibody/antigen with the other, color changing enzyme
linked to 2ndary antibody
GENE THERAPY ­  supplement or alter genes to treat disease.  Replace a mutated gene, viral vectors, Cystic
Fibrosis ­ place CFTR gene which regulates salts into the Cold virus or liposome.
In genetics, and operon is a functioning unit of genomic DNA containing a cluster of genes under the control of a
single regulatory signal or promoter.
lac ­ metabolism of lactose in bacteria, esp. E. coli; trp ­ codes for tryptophan production
The lac operon consists of three structural genes, and a promoter, a terminator, regulator, and an operator. The
three structural genes are: lacZ, lacY, and lacA.
­lacZ encodes β­galactosidase (LacZ), an intracellular enzyme that cleaves the disaccharide lactose into glucose
and galactose.
­lacY encodes β­galactoside permease (LacY), a membrane­bound transport protein that pumps lactose into the
cell.
­lacA encodes β­galactoside transacetylase (LacA), an enzyme that transfers an acetyl group from acetyl­CoA to

 the repressor is in its inactive conformation and cannot bind the operator region. TRP: negative repressive feedback mechanism. G. dCTP and dTTP) ­Chain­terminating dideoxynucleotides (ddATP. or ddTTP) lack the 3’­OH group ­The DNA iinto four separate sequencing reactions. .. which is continually expressed at a low level. Hybridization: annealing of a single stranded DNA to its complimentary region on another single stranded DNA Short tandem repeats or STRs are non­coding DNA that consist of 2 – 5 nucleotide sequences repeated many times (in tandem). C). The repressor for the trp operon produced upstream by trpR gene. ddGTP. the resulting DNA fragments are heat denatured and separated by size using gel electrophoresis. When tryptophan is present. Creates monomers. This is frequently performed using a denaturing polyacrylamide­urea gel with each of the four reactions run in one of four individual lanes (lanes A. dGTP. When tryptophan is not present. Their number and arrangement in human chromosomes is unique to each individual. so tryptophan is not produced from its precursor. containing all four of the standard deoxynucleotides and DNA poly. The DNA bands may then be visualized by autoradiography or UV light and the DNA sequence can be directly read off the X­ray film or gel image. Following rounds of template DNA extension from the bound primer. ddCTP. cause change in conformation (in repressor).β­galactosides. Only lacZ and lacY appear to be necessary for lactose catabolism. which associate into tetramers. so transcription is not inhibited by the repressor. Autoradiography: The process of detection of radioactively labeled molecules by exposure of an X­ray sensitive film.are dissolved in nucleoplasm. these tryptophan repressor tetramers bind to tryptophan. DNA Sequencing o Dideoxy DNA sequencing (Frederick Sanger): Determine nucleotide sequence from sequencing gel Standard deoxynucleotides (dATP. This prevents RNA polymerase from binding to and transcribing the operon. To each reaction is added only one of the four dideoxynucleotides. T. These tetramers are inactive. allows repressor to the operator.