TP technologie de la matière grasse

& R.G

1 Objectifs
Déterminer la concentration d’acide ascorbique dans un jus et de benzoate de
sodium dans une eau gazéifiée par HPLC.

2 Principe
Les composés à séparer (solutés) sont mis en solution dans un solvant. Ce
mélange est introduit dans la phase mobile liquide (éluant). Suivant la nature des
molécules, elles interagissent plus ou moins avec la phase stationnaire dans la
colonne.
Une fois le mélange est injecté, les molécules vont être éluées plus ou moins
rapidement selon leur affinité avec la phase stationnaire (polaire ou apolaire), en
sortie de colonne grâce à un détecteur UV des pics sont obtenues avec un temps
de rétention et une aire de pic bien spécifique.

3 Mode opératoire
3.1 Préparation de l’éluant
La préparation du tampon : pour une solution de 200 ml constitué de 102 ml
d’acide acétique et de 98 ml d’acétate de sodium de 0.1 M
Remarque les relations suivante ont étés appliqué :

C=

nombre de mole
V

nombre de mole=C∗V ❑ la masse=nombre de mole∗la masse molaire

pour≤cas de l ' acide acétique :

masse
ρ

Une fois le tampon préparé 67 ml d’ acétonitrile (75% 25%)

3.2 Préparation des solutions de référence
Concentration mg.ml-1
0.8
0.60
0.4
0.2
Volume prélevé de solution0.8
0.6
0.4
0.2
mère (ml)
Volume d’eau distillé (ml)
0.2
0.4
0.6
0.5
Volume total (ml)
1
1
1
1
À partir de deux solutions (eau distillée acide ascorbique et eau distillée benzoate
de sodium) de concentration 1mg.ml-1 les concentrations suivantes sont
obtenues : 0.8 mg.ml-1, 0.6 mg.ml-1 ,0.4 mg.ml-1, 0.2 mg.ml-1 comme suite :

1

pics 811 279 816 332 166 311 Temps de 2. 34035.36x R² = 0. 3.TP technologie de la matière grasse & R.5 (25/75) 3.5. 13857.4 Conditions chromatographiques :      Colonne : Eurospher C18 (5*3.35 min qui reste constant indépendamment de la concentration donc les pics obtenus sont superposés.G 3.1 Acide ascorbique Jus 1 = jus avec des conditions de conservation optimales. 12499. Jus 2 = le pack a été ouvert depuis longtemps. 28277. dégazer par agitation pendant quelques minutes et est injecté la préparation obtenue. Concentratio 20 40 60 80 Jus 1 Jus 2 n acide ascorbique Aires des 10940.9mm) Détecteur : UV (254 nm) Température : 30°C Débit de l’éluant : 1mL/min Phase mobile : acétonitrile/tampon pH4.35 rétention Le temps de rétention de l’acide ascorbique : 2. Courbe d'étalonnage acide ascorbique 0tan14a576914 0tan4a57564 0tan25a574225 f(x) = 45878.5 Résultats et discutions 3.99 0tan15a572815 0tan6a57156 aire des pics Linear (aire des pics) 0tan25a570125 0tan16a568716 0tan6a56736 0tan28a566028 0tan28a566028 0tan28a566028 0tan29a566029 Figure 1 : courbe d’étalonnage de l’acide ascorbique 2 . 20777.3 Préparation des échantillons L’échantillon est filtré sur une membrane Millipore pour éviter le colmatage.

5 12 2.17 mg/ml 11598 3 .29 min qui reste constant indépendamment de la concentration donc les pics obtenus sont superposés.5.29 81433.2 Benzoate de sodium Concentration acide ascorbique Aires des pics 20 40 60 80 E 2314.6 78 990.TP technologie de la matière grasse Jus 1 = & R.4 05 Temps de rétention Le temps de rétention du benzoate de sodium: 2.79x R² = 1 0tan6a56736 0tan12a567112 aire des pics Linear (aire des pics) 0tan15a566815 0tan19a566519 0tan24a566224 0tan28a566028 0tan28a566028 0tan28a566028 0tan29a566029 La concentration de l’acide ascorbique dans le jus d’orange frais = Aire de pic de l ' échantillons ∗2=0.302 mg/ml 45878 Aire de pic de l ' échan tillons =0. Jus 2 = 45878 Le jus 1 contient plus d’acide ascorbique que le jus 2 car le jus 2 et plus susceptible d’être oxydée sur au contact avec l’air la lumière favorisent l'oxydation et puis l’acide ascorbique est un antioxydant il s’oxyde le premier. Courbe d'étalonnage du benzoate de sodium 0tan24a568224 0tan29a567929 0tan3a56763 f(x) = 11597. Pour le jus le CODEX STAN 192-1995 ne limite pas l’utilisation de l’acide ascorbique et mentionne BPF 3.272 mg/ml .4 18 6925.4 35 4691.G Aire de pic de l ' échantillons ∗2=0.

TP technologie de la matière grasse & R.G Norme CODEX STAN 192-1995 : 600 mg/l L’échantillon présente une concentration en benzoate de sodium de 170 mg/l ce qui respecte bien les normes. 4 .