COY Anaerobic  Chamber

Overview
The chamber is a heavy
duty, clear poly vinyl
chloride (PVC) enclosure
supported by an aluminum
frame and mounted on a
plywood base covered with
a foam pad and heavy vinyl.
It is equipped with a
vacuum airlock system that
allows the transfer of
materials while maintaining
an internal anaerobic
atmosphere.
The airlock is connected to two gas tanks containing (i) 100% N2 and (ii) a gas mix
of 5% H2, 85% N2, 10% CO2.  Standard settings for the airlocks include two
consecutive cycles of vacuum and N2 purge for O2 displacement, followed by one
cycle vacuum and gas mix purge to equilibrate the atmosphere with the inside of
the chamber.
Vinyl chambers accurately maintain a strict anaerobic
atmosphere of 0‐5 parts per million O2.  Internal atmosphere is
kept O2 free with a combination of H2‐containing gas mix and
the palladium catalyst.  The catalyst is composed of alumina
pellets coated with a thin layer of palladium chloride.  The
palladium chloride adsorbs H2 from the gas mix allowing it to
react with any O2 in the chambers atmosphere to generate H2O, which is then
adsorbed by the alumina.   The catalyst is contained in a metal wire mesh container
(Stak‐Pak) that is housed in a fan box to promote gas circulation.
The O2‐H2 gas analyzer constantly monitors and displays levels in
the chamber’s atmosphere.  It is calibrated to produce visible and
audible alarms when O2 levels have risen above a set
concentration or H2 levels are outside a concentration range.

Lock inner door to seal airlock cabinet d.  If you are unsure of the status of the airlock. and press “Start” button. Transferring materials out of glove box a. It is recommended that outer door to airlock cabinet is LOCKED AT ALL TIMES to minimize risk of O2 intrusions General Rules for Glove Box operation: 1. the airlock will indicate that it is “anaerobic” and safe to open the inner door of the airlock. Sealed packages and tubes should be opened slightly to permit gas exchange during airlock cycles b. Airlock: Always check that the “anaerobic” display is on before opening inner door 3. if necessary keep Sharps box in chamber (Remove any sharp jewelry prior to use) 4. H2  levels displayed on LED of the O2 ‐H2  analyzer are ~2% or above and O2 levels are within desired range (approaching or at 0) If H2 levels are below 2% or O2 levels are above 100 ppm see Glove Box Maintenance below. Cleaning: use absorbent bench paper in chamber to contain spills and debris and to clean workspace (70% ethanol or other disinfectants can be used) 5. Inner door of airlock is completely closed and locked 2.. check the following: a. Doors: Never open airlock’s outer entry door before checking to see if the inner door is securely closed and vice versa 2. Economy: Minimize the number of chamber entries by coordinating . Emergency: A role of vinyl tape and scissors should be kept in or near the chamber for emergency repair 6. Sharps: Avoid using sharps in or around glove box. Regenerate catalyst Stak‐Pak in oven once a week b. Outer door must be locked and airlock chamber must be anaerobic prior to opening inner door. b. perform exchanges (i. b. Prior to introducing items in the airlock.e. press “start”) to make it anaerobic. Maintenance: a. Inner door can be opened and materials can be transferred into airlock cabinet c. Load materials through outer door a.  After cycling (4 exchanges). Put objects inside airlock. Periodically replace ~ 1/4 of the chamber’s atmosphere with gas mix to maintain optimum H2levels 7. 3.Operation and Maintenance of the General User Transferring items into and out of the chamber: 1. Outer door can be opened to remove materials e. close and latch front door.

b. No flame can be used in the glove box a. instrumentation and (especially between fingers) can be cleaned with 70% ethanol or damp disinfectant wipes.) c. . If there is a time out error. Replenish chamber’s atmosphere with gas mix (Start button) until inside pressure is sufficient to inflate the bag but not the arm sleeves iii. Other basic rules of sterile technique a. Automatic gas injection system can be programmed to replace a set volume of the chamber’s atmosphere with gas mix for a fixed time‐period and at a fixed frequency Time outs 1. Glove box should be cleaned periodically with disinfectants as part of its regular maintenance Additional Notes for Coy Use Gas analyzer alarm goes off 1. spreaders. Evacuate ~1/4 of the chamber atmosphere using the vacuum (^ button) i. loops. and transfer airlock to “Manuel” mode by pressing “Enter/Menu” button.e. Prior to work. Any materials housed in glove box for long periods of time should be re‐sterilized frequently to prevent contamination b. Lack of O2  prevents H2  ignition b. Proper cleaning of anaerobic chamber and airlock to prevent contamination a. Deflate glove box 1‐2 inches below the top aluminum frame ii. To increase H2 concentration in chamber. Utilize disposable items when possible (i. Any used utensils are disposed of in a waste container and should be removed from the glove box. Close inner door of the airlock and press “Enter/Menu” button to exit Manuel mode when finished c. you can usually identify the problem based on what part of the cycling the time out occurred.transfers with other lab members Aseptic Techniques in an Anaerobic Chamber Environment 1. b. open inner airlock door. then “Start” button. Repeat as necessary to increase the H2levels to 2‐3% iv. emptied and disinfected after each use 3. the chamber work pad. make sure inner airlock is anaerobic. etc. Incandescent flaming device can be purchased from Coy if necessary 2. Low H2  levels a.

Check oxygen levels to make sure that they are either at 0 ppm or are steadily decreasing to that (daily). 2. then patch it. one of the doors is probably open. do an exchange to make the transfer chamber anaerobic. ii.  Check the levels indicated on the tank regulator. Check hydrogen levels to make sure they are maintained around 2. and repeatedly alternating cycles of vacuum and gas mix. b. check for leaks in walls of Coy and doors. Leaks 1.0%. return Coy to standard mode and ensure that 1. the respective tank is likely empty. and if a tank is close to empty. If contamination is suspected. b. exchange catalyst immediately.  In most cases. i. remove all equipment and clean chamber with 50% IPA. If the error happened during a vacuum cycle. opening the interior door connected to that side. If oxygen stays high. This will also happen sometimes with a new tank if someone has forgotten to open the tank or the regulator. 3. If levels are too low. Routinely clean the rubber seal airlock doors to remove dust and dirt to prevent air leaks Lab Job Duties for Coy Heat catalyst plates in oven under Coy (150‐200oC) for >2 hours. b.  Switch in to manual mode and increase pressure using the gas mix until positive pressure is reached. a. there may be a small hole somewhere. so check those problems if the time out persists. Open a solidified rich medium in chamber to check for presence of contaminating organisms i. then allow plates to cool to approximately room temp and exchange with plates currently inside Coy (weekly). a. Contamination 1. i. b. If the pressure has dropped the next day. replace it. so check that all outer and inner doors are completely closed and try again. If levels are decreasing too slowly.  Use the leak detector and/or soapy water to identify the hole. 1‐2% Clorox a.  If there is an error on the purge or gas mix steps. After you are done. a. then raise hydrogen levels by switching Coy into manual mode. . If the pressure in one side of the Coy is abnormally low a. addressing these possible issues then turning the Coy off and back on will resolve the problem. often near the gloves.

 regenerate once a week ii. If moisture develops in the chamber and condensation becomes noticeable on vinyl. especially those that seem to be abandoned (cracked plates. 5. Also. Place a tray containing the palladium catalyst inside the airlock ii. H2 and O2 i. give them a few days notice to move things they want to keep. remove immediately with absorbent paper to . 4. increasing gas consumption b. If catalyst is working correctly. Vacuum pressure inside the airlock chamber is achieved when pressure inside the chamber reads 20 in. Incubate solid media plates in airtight food canisters containing a petri dish with alumina desiccant pellets iv. Excessive moisture decreases H2  levels in chamber atmosphere and saturates the catalyst. empty them (as needed. and if they are.cycling program is returned to P1 using up and down arrows (daily). Fill the airlock chamber with gas mix (containing H2) v. Place a thermometer in direct contact with catalyst iii. occasionally check and empty trash containers (as necessary. Manually evacuate gas atmosphere from airlock. etc. mercury units iv. Minimize humidity i.). a.  If not. every couple of months). every couple of months). >1month old. the temperature will increase at least 10 C over a period of 10‐15 min 2. Moisture can be removed by baking in a dry oven (125‐200 C) for a minimum of 2 hrs. Check humidity indicator to ensure that humidity is 70‐80%. dried out cultures. Avoid long‐term storage of plates and cultures in Coy c. Catalyst a. Palladium catalyst is contained in a metal wire mesh (Stak‐Pak) i. Test to monitor catalyst performance is to measure the heat produced during the catalysis reaction between palladium. If you want to give people the chance to clean their own things. Replace Stak‐Pak every 1 to 2 years b. Regenerate catalyst more often than recommended schedule iii. Glove Box Maintenance 1. Coys are equipped with dehumidifier ii. Throw away leftover plates and cultures. Moisture a. make sure that dehumidifiers aren’t full. then toss anything that wasn’t moved.

Operator should remove any sharp jewelry that could puncture gloves and/or sleeves 4.A. 50% I. All sharps should be disposed of approved sharps containers b.  Repeat until optimal H2 levels are reached. Clean the outside vinyl of the glove box before each use b. 70% ethanol for work pad and gloves c. once repaired.prevent fungal growth 3.  Redo connections or replace regulator Leaks in connections to airlock Check for leaks with a soapy solution or gas leak detector for H2‐containing gases Regardless of the source of O2. Hygienic measures a. Sharps Disposal a. or 1‐2% Clorox for PVC Glove Box Troubleshooting Problem O2‐H2 analyzer alarm Possible Cause Low H2 levels Solution Replenish H2 levels in chamber’s atmosphere with gas exchange Airlock Doors Ensure the inner and outer doors are properly closed and there is no dirt build‐up on seals Remove any objects blocking the catalyst and/or fan Fan boxes are blocked Catalyst Stak‐Pak Replace Stak‐Paks (they are either saturated with moisture or don’t work) Puncture in glove box Inflate glove box with gas mix until gloves are full inflated.P. purge ¼ of the chamber’s atmosphere and replace with gas mix. Check for leaks with H2 detector and repair punctures Faulty regulators Check for leaks with soapy solution. Condensation/De‐Humidifier Catalyst Stak‐Pak Desiccant Stak‐Pak Exchange catalyst Stak‐Pak with rejuvenated ones (they either are saturated with moisture or don’t work) Replace desiccant Stak‐Pak with .

.  Replace or fix as needed Once problem is diagnosed.Experiment releasing excess moisture rejuvenated ones (they are either saturated with moisture or don’t work) Empty de‐humidifiers Replace desiccant Stak‐Pak with rejuvenated ones and add more desiccant Stak‐Paks if needed Once repaired. evacuate or inject gas as needed to bring the bag to the appropriate pressure Gas tanks Check that the tanks are turned on and not empty. Repeat as necessary.P. Clorox). apply vacuum or add gas as needed to equalize pressure in the airlock so the doors can be opened..  Place plates in sealed canisters to prevent cross‐contamination Disinfect the chamber and all surfaces with a disinfectant (I.  Clean with peracetic acid to sterilize chamber. Replace gloves if necessary Vacuum/gas exchange cycles Using the airlock. Contamination Improperly sterilized materials Re‐sterilize all sterile materials house in chamber Contaminated cultures Discard old or contaminated cultures.  Check connections to vacuum pump.  Ensure vacuum is functioning properly Leaks in vinyl bag or neoprene rubber gloves Detect leaks with gas leak detector. purge ¼ of the chamber’s atmosphere and replace with gas mix. Bag pressure too low or too high Autoinjector Airlock error/Time‐out error Test and/or reprogram the autoinjector.  Seal punctures.A. and regulators are on and functioning properly Working PSI should be 20‐25 (on regulator) Airlock chamber Ensure the inner and outer doors are properly closed and there is no dirt build‐up on the seals Vacuum Ensure the vacuum is functioning properly.