Irina Tamaracca Ruiz

Grupo nº: 1
Compañero:

PRÁCTICA Nº 10
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Fecha: 4-11-2014
OBJETIVO: Identificación de MOs aplicando distintas pruebas BQ
consistentes en someter a los MOs aislados en colonias, a diferentes medios
de cultivo y reactivos específicos para estudiar su comportamiento BQ y la
presencia de determinadas enzimas.
MATERIALES:
- Los de preparación de medios de cultivo sólido y líquido (Visto en
práctica de preparación de medios)
- Los de siembra en medio sólido y líquido (Visto en práctica de siembras)
- Los de tinción de Gram y tinción de esporas (Visto en prácticas de
tinciones)
MUESTRA: 1.2 en tubo
MEDIOS DE CULTIVO: Agar nutritivo, suero fisiológico estéril, agar Mc
Conkey, agar urea de Christensen, agar DNA, medio TSB con 6,5% de NaCl,
KIA, caldo nutritivo + con agar al 5%, agua de peptona, caldo RM/VP, Citrato
de Simmons
REACTIVOS: H2O2 al 30%, tiras con p-fenilendiamina, discos ONPG, HCl 1N,
reactivo indol de Kovacs, indicador de pH rojo de metilo, solución alfa-naftol
al 5%, solución KOH al 40%
PROCEDIMIENTO:
1. CÁLCULOS: de los distintos medios líquidos, sólidos y semisólidos a
utilizar en las pruebas
Agar nutritivo (AN): 23 g/L
Preparar 2 placas/alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 2 placas
x 4 alumnos = 8 placas + 2 placas por grupo = 10 placas x 25 mL =
250 mL
23 gramos en 1000 mL
X gramos en 250 mL
X = 5,75 gr de AN pesados
Medio Mc Conkey (Mc): 50 g/L
Preparar 1 placa/alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 1 placa x
4 alumnos = 4 placas + 2 placas por grupo = 6 placas x 25 mL = 150
mL
50 gramos en 1000 mL
X gramos en 150 mL
X = 7,5 gr pesados
Medio Kliger (KIA): 52 g/L

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. 15 g agar 45 mL ………….45 gr pesados Agar DNA: 42 g/L Preparar 1 placa /alumno + 2 placas/grupo (25 mL x placa) => 1 placa x 4 alumnos = 4 tubos + 2 placas por grupo = 6 placas x 25 mL = 150 mL 42 gramos en 1000 mL X gramos en 150 mL X = 6.12 gr de KIA pesados Agar Citrato Simmons: 24.Agar bacteriológico: 1000 mL …………. 29 g/100 mL urea Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 1 tubo/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 1 tubo por grupo = 5 tubos x 10 mL = 50 mL .2 g/L Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL 24. 900 mL 50 mL ………….3 gr pesados Caldo RM/VP: 17 g/L Preparar 2 tubos/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 2 tubo x 4 alumnos = 8 tubos + 2 tubos por grupo = 10 tubos x 10 mL = 100 mL 17 gramos en 1000 mL X gramos en 100 Ml X = 1. X X = 45 mL de agar a preparar 900 mL ………….53 gr pesados Triptona de soja: 30 g/L Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL 30 gramos en 1000 mL X gramos en 60 Ml X = 1.8 gr pesados Agar Urea: 15 g/900mL H2O.7 gr pesados Agua de peptona: 25.5 g/L Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL 25.2 gramos en 1000 mL X gramos en 60 Ml X = 1.5 gramos en 1000 mL X gramos en 60 Ml X = 1.Preparar 1 tubo inclinado/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL 52 gramos en 1000 mL X gramos en 60 Ml X = 3. X g agar 2 .

Se ha dejado todas las siembras 72 horas en incubación 3 .5/1 = 36. 29 g de agar 5 mL …………….5 g de AN a pesar para prepara 60 mL de AN semisólido HCl 1N: (25 mL): N = nº equiv/V (L) disolución.AN 5%: 2. 1N = nº equiv/0. = Mm/v Mm HCl = 36.. Riqueza 37%.5 g/mol.025 = m soluto/36.47gr/X => X = 2. X X = 5 mL de solución urea a preparar 100 mL ……………. = masa soluto/peso eq. 4. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO .025 = 0.47/1.La 3. 100 mL 50 mL ………….1 mL 2. P eq.19 = 2.5 = 0.025 x 36.4 g de CN a pesar .- Solución Urea: X = 0.025 L => nº equiv = 1 x 0. X g de agar X = 1.5 => m soluto = 0.5 P eq. nº eq.07 mL de HCl ≈ 2. densidad 1.19 P equiv = 36. Valencia 1.9125 gr puros X = 2.47 gr comerciales de HCl d = m/v => 1.CN: 8 g …………… 1000 mL X g …………… 60 mL X = 0.19 = 2.75 g de agar bacteriológico a pesar 1000 mL …………..45 g agar a pesar Medio motilidad: 8 g/L caldo + 5% agar Preparar 1 tubo/alumno + 2 tubos/grupo (10 mL x tubo) => 1 tubo x 4 alumnos = 4 tubos + 2 tubos por grupo = 6 tubos x 10 mL = 60 mL . 0.9125 gr de HCl puros 100 gr comerciales ……… 37 gr puros X gr comerciales ……… 0. DÍA 2 DE LA PRÁCTICA Nº 7 LECTURA (OBSERVACIONES Y RESULTADOS) DE LAS SIEMBRAS Fecha: 20-10-2014 RESULTADOS/OBSERVACIONES: 1.025 nº eq.

Tres giros y estría múltiple (Muestra 10):  No se observa crecimiento de colonias  Se vuelven a incubar en la estufa y tras unos días (27/10/10) siguen sin observarse crecimiento. planas. de forma circular.Estría simple y cuatro cuadrantes (Muestra 2):  Crecimiento claro  Al final de la estría se observan colonias asiladas.2. Aparentemente no se realizó correctamente las técnicas con esta muestra. Examinamos todos los cultivos de las placas para identificar la distribución de las colonias . ESPACIO PARA CORRECCIONES: 4 . borde entero. color blanquecino y de apariencia cremosa .