INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MICROBIANA
PRÁCTICA 3: “Determinación de actividad de succinato deshidrogenasa de
Escherichia Coli”

ALUMNOS
Hernández Basilio José Raúl
Oliva Nava Martha Alejandra
Santiago Flores Uriel Mauricio

Grupo 5IV1
Sección: 2
Equipo: 8

PROFESORES
Carlos Martínez Canseco
Elisa Rivera Pérez
Alma María Rodríguez Olvera
Erika Angeles Morales
ASPECTO
Hipótesis
Objetivo
Resultados finales (tabla o grafica)
Discusión de resultados
Conclusiones
Bibliografía
Total

Fecha de entrega: 7g–Octubre-2014
________________

CALIFICACIÓN
MIN-MAX
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.5 PUNTOS
0.0-0.3PUNTOS
0.0-0.1PUNTOS
0.0-1.5 PUNTOS

Firma

CALIFICACIÓN

del

profesor:

Hipótesis
 Si la enzima succinato deshidrogenasa se induce en presencia de
succinato, entonces la succinato deshidrogenasa en células de Escherichia

 Determinar el efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de Escherichia coli.602 0. . que mediante una gráfica denotamos dicho efecto: Cultivos previos en Succinato Glucosa Matraz Medio base 1 2 3 4 Succinato Glucosa Succinato Glucosa Crecimiento (Abs 600 nm) Inicial Final 0.  Determinar la actividad de la enzima Succinato Deshidrogenasa por el método de Ells. Registro de datos  Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento de Escherichia coli.450 0.903 Tabla 1.  Determinar si la enzima succinato deshidrogenasa es inducible. ya sea en el medio de inoculación o adicionada posteriormente.845 0.  Determinar si la enzima succinato deshidrogenasa está implicada en el proceso de respiración. con fuentes de Carbono de Succinato y Glucosa. A mayor concentración de glucosa. se elaboraron los medios y se midieron absorbancias a 600 nm al inicio y final de incubarlos 5h a 37ºC.639 0. leidas como crecimiento. Para observar el efecto que ocasiona al inocular al medio de cultivo Succinato y Glucosa.903 0. coli tendrá una mayor actividad enzimática que aquellas células crecidas en glucosa.962 0.452 0. menor actividad enzimática presentará la Succinato Deshidrogenasa Objetivo  Analizar el papel fisiológico de la enzima Succinato deshidrogenasa en Escherichia coli comparando la actividad de la enzima y el crecimiento bacteriano obtenidos bajo diferentes condiciones de cultivo. Valores de absorbancias a 600nm del efecto del crecimiento de Escherichia coli. Obteniendo los siguientes datos.

4 10.4 5.4 14.0 Tabla 2.5 300 35.9 18. y se obtuvieron las siguientes lecturas %T a 600 nm de suspensiones celulares crecidas en las fuentes Tiempo de carbono (s) S-S S-G G-S G-G 0 6.9 7.7 12.9 15.6 29.5 13.5 90 14.3 6. Para observar el efecto que generan las fuentes de carbono utilizadas.4 10.6 19.7 8.8 270 32. Regulador de fosfatos.5 210 25.2 11.4 12.0 13.9 26.2 4.2 17. KCN. para ello . coli Efecto de la fuente de carbon en el crecimiento de E. realizamos una gráfica comparando las fuentes de carbono con respecto del tiempo.2 8.6 22.9 11.6 120 17.4 180 22.4 13.7 15. coli 6 5 4 A 600nm 3 Final Inicial 2 1 0 S-S  Efecto de la fuente deshidrogenasa.5 9.6 14.3 150 19.7 60 12.6 10. Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E.3 12.Gráfica 1. de carbono en la actividad de succinato Se evidencia el efecto de la fuente de Carbono sobre la actividad de la Succinato deshidrogenasa únicamente adicionando DCFIF.1 240 28. MSF.7 8.0 11.8 33.2 17.0 14.7 30 10. Valores de transmitancias de las diferentes fuentes de carbono en la actividad de la enzima Succinato deshidrogenasa. se leyeron %T a 600 nm de las 4 celdas cada una con un inóculo de células y una fuente de carbono adicionada. Succinato de Na y suspensión celular.

2 14.4 2.8 210 19.4 240 22.2 2.1 7.5 4.7 14.6 9.2 6.2 17. Diferencias del %T a 600 nm de los medios de cultivo con diferentes fuentes de carbono Efecto de la fuente de carbono en la actividad enzimática 35 30 25 S-S 20 Δ%T S-G G-S 15 G-G 10 5 0 0 50 100 150 200 250 300 350 t (s) Gráfica 2.5 20.9 120 11.2 9.7 2.4 6.4 10.0 7.4 28.2 24.0 13.6 8.7 7.es necesario la diferencia de las transmitancias en todos los tiempos y la transmitancia inicial (0 segundos) para cada matraz se obtiene: %T a 600 nm de suspensiones celulares crecidas en las fuentes Tiempo de carbono (s) S-S S-G G-S G-G 0 0 0 0 0 30 4.8 11.1 7.0 5.7 4.8 3.6 150 13.1 270 26.0 6.3 Tabla 3.5 11.6 4.8 90 8. Efecto de la fuente de Carbono en la actividad enzimática de la succinato deshidrogenasa de Escherichia coli.4 5.7 180 16.1 2.8 300 29.0 60 6. Discusión .

. Y se observa un mayor crecimiento en SuccinatoGlucosa que en Glucosa-Glucosa. el cual es un carbohidrato que es asimilado de manera más lenta ya que las enzimas que lo degradan son inducibles y al ser catabolizado forma un producto intermediario (fumarato) que entra en el paso 7 del ciclo de los ácidos tricarboxílicos [3]. la cual es inducible y por lo tanto se sintetiza con mayor lentitud que las constitutivas ya que estas se puede metabolizar más rápido y generar una mayor cantidad de biomasa con la glucosa como fuente de carbono. proporcionando de esta manera coenzimas que se reducirán en el Ciclo de Krebs quien a su vez proporcionará los electrones a través del FADH 2 para que lleve a cabo la cadena transportadora de electrones y así poder vivir. claramente no es la principal y es por ello que el crecimiento no es tan grande que como si lo hiciera con glucosa. formando una menor cantidad de coenzimas reducidas como el FADH 2 el cual produce menor cantidad de energía (ATP) por medio de la cadena transportadora de electrones. combinando también la fuente de carbono que se le adicionaba una vez cultivada.La bacteria Escherichia coli es una enterobacteria que puede llevar a cabo tanto respiración aerobia como fermentación. E. ya que la glucosa reprime la síntesis de la SDH. ya que la enzima que utiliza es constitutiva. es decir a mayor crecimiento. al llevar a cabo glicólisis. ya que es más fácil que la succinato deshidrogenasa se encuentre presente en un medio de Succinato que de Glucosa. Aunque el succinato también forma parte de una de las vías que esta bacteria lleva a cabo. además de que es un carbohidrato que entra fosforilado por medio del transporte de traslocación de grupo [2]. Esta bacteria lleva a cabo la glicólisis. Sin embargo en el experimento realizamos pruebas con dos fuentes de carbono como medio de cultivo: glucosa y succinato. mientras que en el caso del Succinato como fuente de carbono existe un menor crecimiento ya que necesita de la succinato deshidrogenasa. la fuente de carbono principal es la glucosa. En las gráficas podemos observar que la bacteria no tiene un crecimiento grande en el medio de Glucosa/Glucosa (dónde el primero indica el sustrato adicionado y el segundo el medio de cultivo) pero sabemos que esto es falso. mayor diferencia entre la turbidez inicial y la turbidez final reflejado en la absorbancia. esto ayuda a que se adapte casi a cualquier medio en el que se cultive. coli siempre preferirá a la glucosa como fuente de carbono debido a que las enzimas que degradan a la glucosa son constitutivas en Escherichia coli [1]. se basa en el aumento de la turbidez. esto permite que la glucosa se metabolice directamente por la vía catabólica de glicolisis obteniendo así un producto intermediario que a través de una descarboxilación oxidativa sigue la vía de los ácidos tricarboxílicos formando así una serie de coenzimas reducidas que entran a la cadena trasportadora de electrones obteniendo mayor cantidad de energía en comparación con el cultivo que contiene como fuente de carbono succinato. siendo estos los determinantes para que exista un mayor o menor crecimiento de la misma. ya que como ya se mencionó anteriormente. En la gráfica uno.

así como se observa en la grafica 2. En succinato-succinato. quedando en el siguiente orden. 1985. 183-184. En succinato-glucosa. García. Microbiología industrial. se va a ver favorecida la enzima succinato deshidrogenasa. de acuerdo a las necesidades que presente dicha bacteria Se determinó la actividad enzimática de la succinato deshidrogenasa por el método de Ells. J y L. al adicionarle succinato. por la presencia de succinato en el medio. En glucosa-glucosa. 7°Edición. se vería beneficiada la enzima succinato deshidrogenasa al contar con el inductor (succinato). J. haciendo que la actividad enzimática se vea reprimida[4]. Principles and explorations. Editorial EUNED. Bibliografía  [1] Ruíz. al inicio. debido a que al inicio. 2008.En la experiencia del efecto de la fuente de carbono sobre la actividad de succinato deshidrogenasa en Escherichia coli. 166-167. Microbiol. EUA. Regulation of succinate deshydrogenase in Escherichia coli. Pág 211. teóricamente en las suspensiones celulares se debería de haber visto una mayor actividad enzimática de la succinato deshidrogenasa. 72:29-35.  [4] Hebing. A.  [2] Black. se promovía la expresión y actividad de la succinato deshidrogenasa. Conclusiones      La enzima Succinato deshidrogenasa es una enzima inducida en el metabolismo de Escherichia coli. Microbiology. Editorial Wiley.Herrera. Editorial Reverté. Tablas químicas para laboratorio e industria. 2003. por lo tanto. no se expresaría la enzima succinato deshidrogenasa al no contar con el inductor [5]. reprimiendo su actividad. Por lo tanto. no se esperaría que existiera una mayor actividad enzimática que la actividad basal de la enzima. sin embargo al tener la glucosa. España. J. Se determinó que la enzima succinato deshidrogenasa está implicada en el proceso de respiración.  [3] Hernández. Costa Rica. generando la represión catabólica de la misma. . la cepa solamente se veía favorecida para su crecimiento al usar la glucosa como fuente de carbono. lleva a cabo la represión catabólica. debido a que la cepa al ser crecida previamente en un medio con succinato y al adicionarle de nuevo succinato en un medio base. Gen. la síntesis de la enzima se vería afectada. W. Pág. sin embargo. Pág. La actividad y síntesis de la enzima Succinato deshidrogenasa de Escherichia coli es afectada por las diferentes fuentes de carbono en las que se puede encontrar. 1972. Se determinó que la enzima succinato deshidrogenasa es inducible. debido a que el succinato tomará el papel de un inductor promoviendo la actividad de la misma. se conoce que la presencia de succinato induce a la enzima succinato deshidrogenasa mientras que la glucosa. En glucosasuccinato.

4° Edición. Las bases moleculares de la vida. T. .. Bioquímica. . Pág. Mckee. J. Londres. 310-311. [5] Mckee.2008. 340-348. Editorial Mc Graw Hill.