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Emmanuel Ibarra Estrada, Rocío Téllez Morales, Marcos Soto-Hernández, Mariano Martínez Vázquez, Rosario
García-Mateos, Rubén San Miguel-Chávez
ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA in vitro DE ERISOVINA
Revista Fitotecnia Mexicana, vol. 32, núm. 4, octubre-diciembre, 2009, pp. 327-330,
Sociedad Mexicana de Fitogenética, A.C.
México
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=61011789010

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57 and 43 %.mx) RESUMEN Varios alcaloides del género Erythrina presentan actividad farmacológica que parece estar asociada con la amina terciaria espiroamina..). Colegio de Postgraduados.) y alfalfa (Medicago sativa L. Palabras clave: Erythrina americana. fructicola presentaron la mayor susceptibilidad a la erisovina. México-Texcoco. B. pterocarpanos y de un alcaloide nuevo denominado (+)-10. Edo. D. erisovina. 2001). solani.). hongo oportunista que provoca pérdidas en postcosecha y presenta resistencia innata a muchos agroquímicos. and T. actividad antimicótica. Mariano Martínez Vázquez2. A. están: Alternaria solani que ocasiona la descomposición de hortalizas y frutos frescos antes y después de la cosecha (Chaerani y Voorrips. valores superiores al testigo tratado con dimetilsulfóxido. americana en los hongos fitopatógenos Alternaria solani. Fusarium oxysporum que perjudica a cultivos como sorgo (Sorghum bicolor L. Monilia fructicola. americana. 2Instituto de Química. 32 (4): 327 . 2006). Penicillium sp. México. alcaloide. Chapingo. .. Montecillo. 2002). maíz (Zea ways L. * Autor para correspondencia (sanmi@colpos.. cinerea. antifungal activity. cinerea. SUMMARY Several alkaloids of the Erythrina genus display pharmacological activity which seem to be associated with the tertiary amine spiroamine. Index words: Erythrina americana. a higher inhibition than that produced by dimethil sulfoxide used as control. Tel (55) 58-0459-00 Ext. ya que una dosis de 8 mg mL-1 inhibió el crecimiento del micelio en 88. Wanjala et al. seeds. 3Preparatoria Agrícola. harzianum. americana. Botrytis cinerea. fructicola displayed greater susceptibility when exposed to at a dose of 8 mg mL-1 of erysovine which inhibited mycelium by 88. In A. Botrytis cinerea. Del mismo modo. En este estudio se investigó la actividad antimicótica de la erisovina. 57 y 43 %. 56200. y Trichoderma harzianum. Moench). americana was evaluated against phythopathogen fungi: Alternaria solani. y Trichoderma harzianum mediante el método de difusión de disco de papel. E. Universidad Autónoma Chapingo. Fitotec. de México. de México. using the paper disc diffusion method. americana synthesizes erysovine. B. Recibido: 02 de Septiembre del 2008 Aceptado: 18 de Agosto del 2009 INTRODUCCIÓN Entre los hongos fitopatógenos con importancia económica por el daño que causan a diversos cultivos.11-dioxoerisotrina en E. and has not been tested as an biocide agent on microorganisms. 2009 ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA in vitro DE ERISOVINA In vitro ANTIFUNGAL ACTIVITY OF ERYSOVINE Emmanuel Ibarra Estrada1. isolated from mature seeds of E. Marcos Soto-Hernández1. harzianum the inhibition of mycelium growth was only 27 % above the control. Monilia fructicola. oxysporum y M. San Miguel-Chávez y Soto-Hernández (2009) reportaron actividad antimicótica de un extracto crudo de alcaloides obtenido de plántulas de E. Circuito Exterior.Nota Científica Rev. Rocío Téllez Morales1. In this study the antimicotic activity of erysovine. E. Fusarium oxysporum. alkaloid. Penicillium sp. Fusarium oxysporum. 2000). 2007). Rosario García-Mateos3 y Rubén San Miguel-Chávez1* 1 Posgrado en Botánica. Botritys cinerea que ocasiona la pudrición de frutos como fresa (Fragaria x ananassa Duch) (Bautista-Baños et al. 04510. aislada de semillas maduras de E. así como a árboles frutales y forestales (Singh et al. Penicillium spp. and Trichoderma harzianum. que causan las pudriciones más comunes y a menudo las más destructivas en postcosecha (Lemmen. Edo.. alcaloide tóxico con una D L50 de 25. americana sintetiza erisovina. F.23 mg kg-1 contra ratas ‘Winstar’. F. Monilia fructicola que provoca la pudrición café de frutos con semillas grandes (Lichou et al.23 mg kg-1 against ‘Winstar’ rats. y T. (2006) reportaron la presencia de erisodina. latissima.5 Carr.330. 1361. y que no ha sido probado como agente biocida contra microorganismos. Penicillium sp. 56230. San Miguel-Chávez et al. Universidad Nacional Autónoma de México. algodón (Gossypium hirsutum L. Ciudad Universitaria. Penicillium sp. a toxic alkaloid with a LD50 of 25. como a los fungicidas. Vol. Mex. tuvieron diámetros de inhibición apenas 27 % mayores que el testigo. (2002) determinaron una fuerte actividad antibacteriana y antimicótica de flavonoides. oxysporum and M. F. Km. El género Erythrina ha sido estudiado por su alto contenido en alcaloides con actividad farmacológica (García-Mateos et al. 1999). -y -eritroidina en extractos de semillas y de plántulas de E. Texcoco. solani. 36. Campus Montecillo. semillas.

0. para inocular las cajas de Petri que contenían el medio de cultivo papa-dextrosa-agar. por resonancia magnética nuclear de hidrógeno (RMN-1H) y por espectrometría de masas (EM) con un aparato Varian VXR300S . Rev. 1999). RESULTADOS Y DISCUSIÓN Identificación del alcaloide utilizado La fracción de alcaloides liberados se separó por medio de CC sucesivas. y cuando hubo diferencias se aplicó la prueba de diferencia mínima significativa (DMS. y Trichoderma harzianum Rifai.7a-tetrahidro-1H-isoindol-1. y el extracto metanólico (MeOH) concentrado con alcaloides abundantes. El extracto hexánico contuvo lípidos y trazas de alcaloides por lo que se descartó. Batra. M. solani. R.23 mg kg-1 contra ratas ‘Winstar’ (Valencia et al.4. Después se tomó 1 mL de cada suspensión.3(2H)-diona]. Fitotec. Se utilizó el paquete estadístico SAS versión 6 (SAS Institute. B. 0. La identificación de la erisovina se hizo por espectroscopia ultravioleta (UV) en un espectrofotómetro Perkin-Elmer . Después de 2 min se colocaron en forma equidistante siete discos de papel filtro Whatman no. Mex.6-tetracloroisoftalonitrilo ) y 0. Dado que erisovina y erisodina son 328 . Monilia fructicola L. purificar e identificar el alcaloide erisovina a partir de semillas de E. americana.05). Posteriormente se midió la zona de inhibición de crecimiento del micelio. 1 de 6 mm de diámetro. la cual incluyó el diámetro del disco de papel. Se prepararon suspensiones acuosas con 105 esporas mL-1 de los hongos Alternaria solani Sorauer. Material vegetal Las semillas de E. Las cajas de Petri se incubaron a 30 ºC bajo iluminación continua. Se efectuaron extracciones con hexano y posteriormente con metanol.5. Se reunieron las fracciones iguales. harzianum. Extracción. F.8 mg mL-1 de Benomil (1-(butilcarbamoil) bencimidazol2-ilcarbamato de metilo). Vol. 30 mg mL-1 de Captán 50 [(3aR. y su caracterización por difracción de rayos X en un difractómetro Bruker AXS con detector de área CCD y radiación de molibdeno. Botrytis cinerea. se fraccionó por cromatografía en una columna (CC) Kimax empacada con gel de sílice G60 Merck (70-230 mallas). Fusarium oxysporum Schlechtend. 1995). 32Vol. que es 2.ACTIVIDAD Artículo Científico ANTIMICÓTICA IN VITRO DE ERISOVINA Rev. UNAM (MEXU) con el número de registro 4838. Se recolectaron 72 fracciones de 15 mL cada una. Los alcaloides se purificaron por fraccionamientos sucesivos mediante CC. oxysporum.7aS)-2-[(triclorometil)sulfanil]3a. de acuerdo con el método de Games et al. fructicola. Mex. Penicillium sp.. y la muestra se mantuvo en refrigeración a 5 ºC. que previamente fueron saturados con soluciones que contenían 4. cinerea.05:0. estos últimos tres son fungicidas comerciales que se utilizaron como testigos positivos. bajo las condiciones ya descritas. para ello se colocó 1 g del extracto de alcaloides solubles en MeOH y se mezcló con sílica gel y cloruro de metileno (CH2Cl2). Los fungicidas y la erisovina fueron disueltos en dimetil disulfóxido (DMSO) 0. 1990). 2009 Erisovina es un alcaloide reportado como antibiótico con una DL50 de 25. Fitotec. y b) Evaluar su actividad antimicótica en contra de los hongos fitopatógenos A.5 veces más tóxico que su isómero erisodina. americana fueron recolectadas entre enero y marzo de 2004 en los jardines de la Facultad de Química de la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). Se conservaron ejemplares de respaldo que se depositaron en el Herbario Nacional del Instituto de Biología. Penicillium sp. Las pruebas se hicieron por triplicado y con tres repeticiones. La concentración de esporas en suspensión se ajustó mediante una cámara de Neubauer. al final se recristalizó la muestra por par de disolventes (acetona/éter de petróleo) y se obtuvieron cristales amorfos a los que se les determinó su rendimiento y punto de fusión. y se obtuvo un polvo café y cristales blancos a los que se les determinó su punto de fusión con un aparato de punto de fusión Electrothermal .7. (1974). las cuales se analizaron por cromatografía en capa fina.. Los resultados se analizaron para cada hongo y el análisis de varianza se hizo con el modelo lineal general. por espectroscopia infrarroja (IR) en un espectrofotómetro Perkin-Elmer 599B . y como eluyente se utilizó una mezcla de CH2Cl2: MeOH cuya polaridad aumentó de 99. (4): 32 X -(4). 6 y 8 mg mL-1 de erisovina. En esta investigación se plantearon los siguientes objetivos: a) Extraer. y T. con el método antes descrito. Evaluación de la actividad antimicótica MATERIALES Y MÉTODOS La evaluación de la erisovina como agente antimicótico se llevó a cabo mediante el método de difusión de disco (Murray et al. purificación e identificación de erisovina Se pulverizaron 5 kg de semilla.1 % y este disolvente se empleó como testigo negativo. X.8 mg mL-1 de Daconil (2.05 hasta 80:20.4.

3 OCH3 3.46 l m). GARCÍA Y CHÁVEZ Rev. americana (San Miguel-Chávez et al. y éstos se encuentran en alto porcentaje en extractos de distintos tejidos de E. cuyo ángulo diedral fue de 85.IBARRA. oxysporum y M. 4Hb 2. 1185. La erisovina demostró tener actividad antimicótica en los bioensayos llevados a cabo para tal efecto. 7H 5. 8Ha 3. 284 (M+-15). 16 O-CH3 3. 11Hb 2.74º.. Sin embargo. como -y -eritroidinas. cuyos diámetros de inhibición apenas fueron 27 % mayores que el testigo. 11 Ha 2. (2002). cinerea.. 4 7 6 1 3 2 H3CO Erisovina 11 17 HO En la literatura se ha reportado que la fracción de alcaloides lactónicos. X. con forma de prisma irregular. Con excepción de Penicillium sp. solani. el cual también es antimicótico. 10Hb 3. (2004) las zonas de inhibición ≥ 3 mm se consideran como de alta actividad. 17 H 6. fue menor.92 (m). Mex. La actividad antimicótica de la erisovina en dosis de 8 mg mL-1 fue mayor contra B. harzianum. Entonces. fructicola. Rev.71 (dd).84 (s).32 (s).47 (m). los primeros fueron sensiblemente menores. respectivamente. y T. 11 17 H3CO Evaluación de la actividad antimicótica 10 16 N 15 8 5 14 HO Al comparar los diámetros de inhibición de crecimiento del micelio por erisovina.09 (m). 2006).07 (m). 10 16 N 15 5 14 H3CO 8 4 6 7 1 3 2 H3CO Erisodina Figura 1. latissima descrito por Wanjala et al. 3H 4. 215 (M+. La actividad contra A. (4): 32 X -(4). 4Ha 1. Por medio de rayos X en la estructura se observó un sistema diolefínico de forma casi perpendicular al sistema bencénico. ya que según Uzel et al. IR: 3500. 14). Esto pudiera indicar que el mayor efecto reside en un fenómeno sinergista en el cual la combinación de todos los componentes presentes en el extracto provocan un efecto superior. Estos datos corroboraron la pureza del compuesto aislado. 2009 isómeros (Figura 1). hongos en los que los diámetros de inhibición de crecimiento de micelio fueron de 88. 1HRMN: 1H 6. Fitotec. EM-IE: m/z 299 (M+). Mex. 268 (M+-31). y luego por recristalización por par de disolventes (acetona/éter de petróleo). 32Vol.98 (dd). Estructura de los alcaloides purificados. 14 H 6. pudieron obtenerse por separado mediante lavados con acetona y metanol. F.05) a la mostrada por alguno de los tres antimicóticos comerciales. 8Hb 3.. La actividad de erisovina contra hongos fitopatógenos no había sido reportada previamente y es comparable al alcaloide de tipo eritrinano aislado de E. se observaron diferencias en la susceptibilidad de las distintas especies fitopatógenas probadas (Cuadro 1). 2H 5.61 (l). Artículo Científico TÉLLEZ. Las lecturas de inhibición obtenidas con los fungicidas comerciales mostraron que el más activo fue Benomil seguido de Captán 50 y después de Daconil . MARTÍNEZ.52 (dd). Fitotec. (1991) para este alcaloide.86 (s). SOTO. en las demás especies probadas la erisovina en su mayor concentración tuvo actividad antimicótica igual (P ≤ 0. 2842. 57 y 43 % superiores al testigo con DMSO. Los datos concernientes a la caracterización química de la erisovina fueron UV: 285 nm. 3080. puesto que cada constante se comparó con lo reportado por Masouda et al. también son sumamente tóxicos (García-Mateos et al.52 (dd).51 (m).68 (d). Después del proceso de recristalización se obtuvo un polvo formado por cristales incoloros.98 (d). la erisovina podría ser evaluada en futuras investigaciones contra otro tipo de microorganismos. 2001). 10Ha (2. 329 . Vol. con los hallados por San Miguel-Chávez y Soto-Hernández (2009) con extractos crudos de alcaloides (datos no mostrados). por la posibilidad de tener un mayor espectro de actividad biocida. Penicillium sp.

Actividad antimicótica del alcaloide erisovina en hongos fitopatógenos. N. M Shamma.2 b sa 7. Fabaceae). Version 6. Nat.8) 7. cinerea. Cary.0±0. Fitotec.8±0.8) Benomil (0. IV. G Kite (2006) Morphology and alkaloidal profile of the seedlings of Erythrina americana Mill.0±0. In: Productos Naturales.2±0.2 d 7.2 c 17. D S Millington (1974) Alkaloids of some African. Vol. M Soto-Hernández (2009) Chemical composition and antifungal activity of the alkaloid extract of Erythrina americana Miller seedlings. Singh G.2 a 7. Unidad Iztapalapa.0 b 8. García-Mateos R. V Mercier. E Bellau (2002) Monilia diseases on fruit trees. San Miguel-Chávez R. fue la especie sobre la cual la erisovina tuvo su menor efecto. Masouda E A.6±2. J F Mandarin. A J Freyer (1991) The tetracyclic Erythrina alkaloids.3±1.8±0. USA. Washington DC. pp:67-75.4±0. y T.6±0. J. SAS Institute (1996) SAS/ STAT Guide for Personal Computers.6 ab 7. 55:391-400. (4): 32 X -(4). Y Gan (2007) Diseases and their management. en función de los diámetros de inhibición del micelio (mm ± error estándar. San Miguel-Chávez R. R H Yolke (1995) Manual of Clinical Microbiology 6.4±1. Protective Measures. Ethnopharmacol.2±1. F C Tenover. F. B F Juna. X.6±0. 72:335-347. Lichou J. B A Bojase. Vol. R J Redden. M Soto-Hernández. D Rubiales.0 d sa 7. B. Agric. A H Jackson. Mex.5 bc sa 7.harzianum y concentración (mg mL-1) Erisovina (0. Erisovina es potencialmente aceptable para llevar a cabo otros estudios biodirigidos con el fin de probar su efectividad contra otra clase de microorganismos.6±0.0 mm. In: Chickpea Breeding and Management. solani. a versatile resource from Mexico: a review. Gen.2±0. K Moore. CABI International. 330 .8±1. M Hernández-López.6 b 8. Fitotec. Rev. solani B.0±0. Schwarz from Turkey. D Desbrus. M Soto-Hernández. Rev. CONCLUSIONES La erisovina posee un efecto inhibitorio en el crecimiento micelial de los hongos fitopatógenos A. ASM. The emergence of a new species: Monilia fructicola. México. Games D E. Lemmen C (1999) Moulds: Occurrence. Mex. Chaerani R. Universidad Autónoma Metropolitana. T.6±0. Bot. genetics and breeding for resistance. W Chen. Prod. A Guvensen. cinerea F. 95:151-154.2±0. n = 3). Perspectivas Biotecnológicas. J. H Vibrans (2001) Erythrina americana Miller ("Colorín".6 c 19. J A Lechuga. 0. L L Barrera-Necha (2000) Antifungal screening of plants of the State of Morelos.2 c 7. pp:497-519. SAS Institute.0±0.5 a 13. (En prensa). Victoria Ayala Escobar.2±0.2 b 11.6±0. 32Vol.3 a 13. Lloydia 37:581-588.4 a 16.05).4 b 13. Uzel A. 117:232-239. Springer Verlag.3 d (0. harzianum.4±0. and E. Penicillium sp. Food Chem.4 b 7. N A Khan.2 b 7. E F Baron.ACTIVIDAD Artículo Científico ANTIMICÓTICA IN VITRO DE ERISOVINA Rev.2 cd (0. E M Servín (1999) Determinación de la dosis letal media (LD50) y caracterización química preliminar de fracciones de alcaloides de Erythrina herbacea. Mex. Compuesto A. 2009 Cuadro 1. T Terrazas.2 c 14. Feddes Repert.2 b 12.5±1.oxysporum M.4 b 7. BIBLIOGRAFÍA Bautista-Baños B S.6±0. Health Risks. Polynesian and Australian species of Erythrina. incluso parásitos del ser humano. Alemania. 1005 p. W Chen. Penicillium sp. Infos-Ctifl 179:32-36. B Sharma (eds). por la donación de las cepas de hongos con que se trabajó. Plant Pathol.6±0.2 b 11. J A García.fructicola Penicillium sp. R R T Majinda (2002) Erythrinaline Alkaloids and Antimicrobial Flavonoids from Erythrina latissima.0 b 9. D Breniaux.2±0.2±0. DC.5 a 7. E Cetin (2004) Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oils of Anthemis xylopoda O. Berlin.2 b 8.4) sa 7.8 bc 15.8) Captan 50 (30) Daconil (0. R E Voorrips (2006) Tomato early blight (Alternaria solani): the pathogen. P Blanc.6±0. M Soto-Hernández. oxysporum. J.1 b 8. F Cruz (eds).6) 7.9 b 7. Planta Médica 68:640-642.6±0. Y R Sharma. 54:329-363. Asian. P Giauque. AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen al Laboratorio de Hongos Fitopatógenos del Colegio de Postgraduados y en especial a la M.12. M A Pfaller. DF. sa = Sin actividad Murray P R. Econ.6±1. Mexico against four fungal postharvest pathogens of fruits and vegetables. Valencia G T. Fitopatol. S S Yadav. Wanjala C C W.2±0.2 b Medias con letras iguales en una columna no fueron significativamente diferentes (DMS. J. C.6±0. 18:36-41. 192 p.C. 1028 p. La dosis de 8 mg mL-1 fue la que presentó la actividad antimicótica más alta. coralloides A.9 a 12. El diámetro del testigo fue 6.