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2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS
ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL

2014

Compromiso Climático”

ALUMNO:
Reyes Cornejo Diego Alonso
DOCENTE:
Ticona Michilot Julia Mercedes
CURSO:
Microbiología Ambiental
TEMA:
El antibiograma: acción de los antibióticos
FACULTAD:
Ingeniería de Minas.
ESPECIALIDAD:
Ingeniería Ambiental y Seguridad Industrial.

SULLANA - 2014

Blga. Julia M. Ticona Michilot

EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS

“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del

al ser sustancias que poseen una toxicidad selectiva. Si esta resistencia es extracromosómica. están continuamente expuestas a gran cantidad de estas sustancias. Por lo tanto. Ticona Michilot EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS . podemos dividirlos en: son aquellos que producen una acción letal irreversible sobre los microorganismos. y dependiendo de la acción que dichos agentes ejercen sobre los microorganismos. A estos últimos se les considera Antibióticos si bien algunos de ellos. conjugación y transducción. De esta manera. Esta serie de propiedades (toxicidad selectiva. el individuo puede recuperarse sin consecuencias graves. que fueron primero descubiertos en la naturaleza. La resistencia bacteriana a quimioterápicos y antibióticos tomó su verdadera importancia cuando se comprobó la posibilidad de su adquisición por mecanismos de transformación. Dependiendo de su naturaleza y procedencia. En nuestros días han sido puestos a nuestra disposición para la lucha contra las enfermedades bacterianas gran cantidad de agentes antibacterianos.2013 UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL 2014 PRACTICA DE LABORATORIO Nº07 I. Introducción: Podemos definir en líneas generales como agentes antimicrobianos a aquellas sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos o producen su inactivación. De esta manera se obtiene la resistencia a gran cantidad de antibióticos y quimioterápicos al contactar cepas patógenas con cepas saprofitas que. Blga. al ser huéspedes habituales del hombre y los animales. Julia M. de una forma más sencilla y barata. El suministro de estos agentes antimicrobianos a los animales y hombre provoca la selección (que no el acostumbramiento) de los mutantes resistentes a estas sustancias. Por lo tanto. permitiendo la destrucción o eliminación del agente etiológico sin excesivos riesgos (o por lo menos menores que los producidos por la infección) en el hospedador. se obtienen en la actualidad sintética o semisintéticamente. pueden utilizarse terapéuticamente (de ahí su nombre) para inhibir a un determinado microorganismo sin ocasionar lesiones importantes en el hospedador. las sustancias antimicrobianas pueden ser productos químicos de síntesis o bien productos naturales producidos por microorganismos u otros organismos vivos. Entre las sustancias antimicrobianas químicas de síntesis se ha englobado dentro del concepto de Quimioterápico a aquellas que pueden interferir directamente en la proliferación de los microorganismos a concentraciones toleradas por el huésped. especificidad y extremada actividad) justifican la aplicación de este tipo de sustancias en la clínica cuando las defensas corporales no bastan para que el individuo supere la enfermedad. puede ser transferida a otros microorganismos menos frecuentes y más patógenos.

• Agentes microbicidas: se define como la menor concentración de antimicrobiano capaz de destruir una cepa bacteriana dada. • Agentes microbiostáticos: se define como la menor concentración de antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de una cepa bacteriana dada. La evaluación de esta sensibilidad nos va a ayudar en la selección del compuesto más adecuado para el tratamiento de una infección bacteriana. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . Existen vanos métodos para probar la susceptibilidad de los microorganismos a los antibióticos siendo la difusión en disco el más utilizado. Las pruebas más utilizadas para evaluar la sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano están basadas en el enfrentamiento in vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente.UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos. fue ideada por Kirby y Bauer. se realiza en un medio transparente y simple como el agar de Müeller Hinton Se fundamenta en la liberación del antibiótico al medio e inhibición del crecimiento bacteriano en áreas concéntricas a la del disco. pneumoniae) NCCLS 2002(V) R ≤ - ≤13 ≤ ≤ 19 – 25 ≤ ≤ 14 – 17 SFM 2001 Estafilococos Otros organismos NCCLS 2002(V) ≥ 17 ≤14 ≥ 14 13 15 – 16 ≥ 22 ≤15 ≥ 18 ≤14 ≥ 21 ≤17 16 – 21 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 15 – 17 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 18 – 20 Actinobacilluspl europneumoniae NCCLS 2002(V) NCCLS 2002(V) ≤ VAV Blga. TABLA 1:CRITERIOS PARA ESTABLECER CATEGORÍAS EN ANTIBIOGRAMAS Antimicrobiano Disco Ácido Nalidíxico NA 30μg Ácido Oxolinico OA 2μg Ampicilina AM 10μg Amoxicilina AMX 25μg Amoxicilina+cla AMC 30μg Amikacina AN 30μg Apramicina APR 40μg Aztreonam ATM 30μg Ceftazidima CAZ 30μg Ceftiofur EFT 30μg Diámetro (Interpretación) S ≥ 19 ≤13 ≥ 11 10 I 14 – 18 ≥ 17 ≥ 29 28 ≥ 17 16 ≥ 26 ≤18 14 – 16 - ≥ 21 14 ≥ 20 19 ≥ 18 ≤13 Aplicable en: Referencia Enterobacterias NCCLS 2002(V) Enterobacterias Estafilococos Enterococos Estreptococos (salvo S. Julia M.

E. pneumoniae) NCCLS 2002(V) 18 – 20 < 13 – 15 SFM 2001 Estafilococos. P. multocida y H. P. multocida y H. P. somnus (bovino) NCCLS 2002(V) M. somnus (Bovino) NCCLS 2002(V) Estreptomicina S 10μg Espectinomicina SPC 100μg Florfenicol FFC 30μg ≥ 19 ≤14 15 – 18 Flumequina AR 30μg ≥ 19 ≤13 14 – 18 Gentamicina GM 10μg 13 – 14 NCCLS 2002(V) Imipenem IMP 10μg 14 – 15 NCCLS 2002(V) Kanamicina K 30μg ≥ 15 ≤12 ≥ 16 ≤13 ≥ 18 14 – 17 NCCLS 2002(V) Blga. multocida. coli (Aves) Mannheimia haemolytica. Ticona Michilot EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS Pasteurella multocida Salmonella enterica . haemolytica. somnus (bovino) NCCLS 2002(V) ≥ 23 ≤13 ≥ 21 ≤15 14 – 22 NCCLS 2002(V) 16 – 20 Salvo Estreptococos Estreptococos ≥ 15 ≤11 ≥ 14 ≤10 12 – 14 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 11 – 13 M. Julia M. haemolytica.multocida H.2013 UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL 2014 Cefotaxima CTX 30μg Cefoxitina FOX 30μg Ciprofloxacina Cip 5 μg Cloranfenicol C 30μg Colistina CL 50μg Doxiciclina D 30μg Enrofloxacina ENR 5μg Eritromicina E 15μg ≥ 23 ≤14 ≥ 18 ≤14 ≥ 21 ≤15 ≥ 18 ≤12 ≥ 21 ≤17 ≥ 15 15 ≥ 16 ≤12 15 – 22 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 15 – 17 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 16 – 20 Enterobacterias NCCLS 2002(H) 13 – 17 Salvo Estreptococos Estreptococos (no S. Enterobacterias y Pseudomonas NCCLS 2000(H) ≥ 23 ≤16 ≥ 21 ≤16 17 – 22 17 – 20 P.

27 ≤ 28 ≤ 14 ≤ 19 Estafilococos Enterococos Estreptococos (salvoS.UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL MAR 5μg ≤13 ≥ 21 17 ≥ 18 Marbofloxacina MAR 5μg Neomicina < SFM 2001 15 – 17 ≤14 ROSCO ≥ 18 15 – 17 ≤14 VÉTOQUINOL N 30μg ≥ 17 13 – 16 ≤12 LIOFILCHEM Penicilina P 10μg ≥ 29 ≥ 15 ≥ 28 Sulfafurazol (sulfamidas) SF 300μg ≥ 17 12 13 – 16 Tetraciclina TE 30μg ≥ 19 ≤14 ≥ 23 ≤18 15 – 18 Lincomicina L 15μg Marbofloxacina Tiamulina T 30μg Tilmicosina TIL 15g Tilosina TY 30μg Trimetoprim TM 30μg ≥ 20 16 ≥ 14 ≤10 ≥ 11 10 ≥ 20 16 ≥ 16 10 20 . Julia M.  Mostrar la sensibilidad in vitro de los microorganismos frente a diferentes antibióticos. la difusión del antibiótico en el medio de cultivo. Este método está estandarizado y los halos de inhibición han sido obtenidos correlacionándolos con las CMI y aparecen en unas tablas. el tamaño del inóculo bacteriano. NCCLS 2002(H) Objetivos:  Determinar la sensibilidad bacteriana utilizando una metodología sencilla y asequible a cualquier laboratorio de Microbiología. multocida. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . Pleuropneumoni ae (Porcino) ≤ 11 – 15 NCCLS 1999(V) NCCLS 2002(V) LIOFILCHEM Enterobacterias Estafilococos II.pneumon iae) ≤ NCCLS 2002(V) Otros salvo Estreptococos Estreptococos 19 – 22 ≤ 11 – 13 ≤ ≤ NCCLS 2002(V) LIOFILCHEM M. Marco teorico: El antibiograma por el método de difusión en agar es una prueba en la que se enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar con una solución antibiótica absorbida en discos de papel de filtro. Hay varios factores que afectan al halo de inhibición: la carga del antibiótico en los discos. III. la composición y grosor del Blga. haemolytica (Bovino) P. A.

Deben contener la cantidad establecida de antibiótico y ser conservados a 4ºC protegidos de la humedad. Cada equipo trabajará con el mismo cultivo puro. Por tanto. Materiales: V.UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL medio de cultivo. El inóculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0. * Medio de cultivo: el medio que se utiliza es el Mueller-Hinton. es decir.     b.5 de la escala de McFarland. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . agua destilada incubadora Alcohol 70% Procedimientos: La profesora proporcionará el cultivo puro de Escherichia coli. la velocidad del crecimiento bacteriano y el tiempo de incubación. antibiograma por técnica de difusión en agar: Esta prueba consiste en enfrentar a un microorganismo a diversas sustancias antimicrobianas a una concentración determinada para establecer la sensibilidad o resistencia de dicho microorganismo a las mismas. Materiales. Los discos de antibióticos son adquiridos comercialmente. no debiéndose utilizar una población mixta de microorganismos para realizar el antibiograma. Blga. deberán realizarse tantos antibiogramas como microorganismos significativos encontremos en la muestra clínica. 01 piceta Hisopos estériles Pinzas de laboratorio papel para envolver algodón y gasa Pinzas estériles. Equipos y reactivos : Discos comerciales de antibióticos. que inocularán en diferentes medios de cultivo (por estrías) para evaluar diferentes actividades metabólicas. Julia M. aproximadamente 108 UFC/ml y ser preparado en solución salina estéril o caldo de cultivo. IV. equipos y reactivos : a. Hay que señalar que el antibiograma se debe realizar con un solo tipo de microorganismo cada vez. con un microorganismo en cultivo puro.         01Mechero Cultivo puro de Escherichia coli.

Dejar secar 10 minutos. Tras este periodo se observará el crecimiento bacteriano y los halos de inhibición. Aplicación de los discos antibióticos: los discos se ponen a unos 15 mm de la periferia de la placa con ayuda del aplicador. Siembra: se realiza una siembra por estria. Incubar la placa en posición invertida a 35 . normalmente a la temperatura de 37°C. b) Inóculo: la cepa que se estudia se cultiva durante 24 horas en medio de cultivo sólido. 2. 4. Medir los diámetros de los halos de inhibición con una regla(en este caso se hará una excepción durante la práctica de laboratorio) Ensayo cualitativo: un mismo cultivo se enfrenta a distintas soluciones antibióticas.37ºC durante 18horas. Se deja reposar 10 minutos a 37°C 2. Cuando el borde no es neto.UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL 1. 3. de manera que obtengamos aproximadamente una concentración de 10 de bacterias/ml. posteriormente se realiza una suspensión en solución salina estéril. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . Dejar las placas 15 minutos a temperatura ambiente para que comiencen a difundir los antibióticos. Incubación de las placas a 37°C durante 18-24 horas. Se pueden colocar aproximadamente 6 discos por placa. utilizando 3-5 ml de la dilución preparada. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y lo bastante separados entre ellos para que no se superpongan sus zonas de ihnibición. Preparación del inóculo. apretando ligeramente los discos que no hayan entrado totalmente en contacto con el medio usando para tal fin el asa dehisopo esterilizada. Partiendo de un cultivo puro tomar con el hisopo esteril la bacteria de Escherichia coli e introducirlas en el caldo de cultivo . * Lectura de la zona de inhibición: se mide el diámetro (en milímetros) de la zona de inhibición con una regla o compás. Inocular la superficie de una placa de agar con el hisopo pasándolo uniformemente por toda la superficie. c) Discos de antibióticos. la lectura se realiza en la zona que corresponda aproximadamente al 80% de 6 Blga. ANTIBIOGRAMA POR TECNICA DE DIFUSION EN AGAR a) Medio de cultivo: el medio que se utiliza es el Mueller-Hinton. Las placas se secan 30 minutos a 37°C antes de su empleo. si los hubiera. Ensayo cuantitativo: un mismo cultivo se enfrenta a un sólo antibiótico. preparado a distintas concentraciones. pasar el hisopo por el reborde de la placa de agar. 3. Técnica: 1. Colocar los discos de antibióticos sobre la superficie del agar utilizando unas pinzas estériles y apretándolos suavemente sobre la superficie del agar. Julia M. Por último. teniendo en cuenta que las zonas de inhibición de los diferentes discos no deben entrecruzarse para que se puedan efectuar la lectura de los diámetros de los halos de inhibición en varias direcciones.

Cepa resistente: es aquella que probablemente no será afectada con las dosis habituales. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . bilis.Kak. Se debe tener en cuenta de sembrar por estría toda la superficie de la placa para que se junte con el antibiótico.UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL inhibición.). VI. Resultados:  Se observó la presencia de halos (anillos transparentes) en todas los antibióticos a excepción de una debido a que hubo una mala técnica (estria muy amplia) de sembrado y por ende no hubo la bacteria de Escherichia coli. con la excepción de TXC VII. * Interpretación del antibiograma: se comparan los diámetros de los halos de inhibición producidos por cada uno de los antibióticos. .  Uno de los datos que más se maneja a nivel clínico y que más trascendencia tiene es el de la sensibilidad.  Se hallo halos en los siguientes antibióticos sobre la bacteria de Escherichia coli que son Orn. Con los datos obtenidos puede planificarse la posible utilidad terapéutica del producto ensayado. Ciertos antibióticos producen a veces extensas colonias periféricas que no hay que tener en cuenta en la medición del diámetro si éstas son escasas.Cepa intermedia: es aquella que puede ser afectada por un tratamiento local. para calcularla se enfrentan los microorganismos problema a diversas concentraciones de sustancias antibióticas o quimioterápicas. Conclusiones: Blga. Julia M. En esta tabla se relacionan las zonas de inhibición con la potencia de los discos y la sensibilidad bacteriana. según su sensibilidad antibiótica: .Xsx.  No se debe realizar el antibiograma sobre una población mixta de microorganismos.Pip.   Se debe tener en cuenta la esterilización de la pinza microbiológica. Para el uso clínico se han clasificado las bacterias en tres grandes grupos. Discusión de resultados:  La acción de los agentes antimicrobianos debe estudiarse sobre cultivos "in vitro" del agente en cuestión. mediante un aumento de las dosis por vía general. etc. sea cual sea el tipo de tratamiento. VIII. . o por una concentración fisiológica particular (orina. .Ege.Aaa.Cph.Cepa sensible: es aquella que puede ser afectada por un tratamiento a la dosis habituales por vía general. por lo que debemos asegurarnos que la potencia de los discos que refleja la tabla coincide con la usada por nosotros.

12th informational supplement. 2006. Wayne. Córdoba R. Chaves E.20(4):176-86. CLSI document M100-S16. 2002. Medidas de control de SARM adoptadas por los Países Bajos. García F (2006) Bacteriología Diagnóstica. Aquiahuatl Ramos. Editorial El Manual Moderno. Available from: http://www. Cantón R. Rojas N. Costa Rica. pp: 177-214. Differences in clinical and molecular characteristics of skin and soft tissue MRSA isolates between two hospitals in Northern California. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Wagenvoort JHT. Staphylococcus aureus throat colonization is more frequent than colonization in the anterior nares. 2000. Kemps BS. J Clin Microbiol. Hososaka Y.2006-2007. Jawetz Ernest.5(3):26-8. 2007.44:3334-9. CLSI. Detección de resistencia a oxacilina en un aislado de Staphylococcus aureus en bacteremia. J Infect Chemother.  Los antibióticos son sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos o producen su inactivación. Julia M. Referencias bibliográficas:              Manual de prácticas de laboratorio.amedeo. 2006.com Oteo J. Blga.13(2):7986.7(1):10. Characterization of oxacillinsusceptible mecA positive Staphylococcus aureus: a new type of MRSA. Capítulo10. 2007. 2004. Lectura interpretativa del antibiograma. Microbiología. Universidad de Costa Rica.2012. Casos de Microbiología Clínica. 2007. J Clin Microbiol. Facultad de Microbiología. AMEDEO List. Bhattacharya D. Pa. (1988) Manual Ilustrado para Laboratorio de Bacteriología y Micología. 2002.IX. a raíz de la expansión de la Unión Europea. Microbiología general. Nilsson P. Smith D. García R.45(6):1798-803. Sergio González. Euro Surveil. 17ª edición. Ticona Michilot 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . Microbiología Médica. UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL  Entre estos datos puede ser interesante conocer los tipos de microorganismos sobre los que actúa un antibacteriano (espectro antimicrobiano). Hososaka I. ¿Ejercicio intelectual o necesidad clínica? Enferm Infecc Microbiol.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL  X.52:204-7. 2003. Anexos: Discos antibióticos inoculación de E. 2014 Skov R. coli en la placa . Julia M. 1º muestra con los discos antibióticos 2º muestra con los discos antibióticos Blga. Evaluation of a cefoxitin 30 ìg disc on Iso-Sensitest agar for detection of MRSA. J Antimicrob Chemother. Ticona Michilot EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 . Lov M.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA DE MINAS ESPECIALIDAD INGENIERIA AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL 2014 EL ANTIBIOGRAMA: ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS 2013 Blga. Ticona Michilot . Julia M.