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PRÁCTICA NRO 6: DIAGNÓSTICO DE LAS PRINCIPALES

MICOSIS OPORTUNISTAS

OBJETIVO:
Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de:

diferentes agentes de micosis oportunistas.

Las micosis oportunistas son infecciones fúngicas

que se presentan en

pacientes inmunocomprometidos, causadas por hongos que viven como
saprófitos en la naturaleza o en cavidades de seres humanos.
Cualquier hongo saprófito, que sea termotolerante, puede transformarse en
patógeno secundario en el huésped inmunocomprometido.
Entre los principales agentes causales de micosis oportunistas se
encuentran:





Candida sp
Cryptococcus neoformans
Aspergillus sp
Zygomicetos
Pneumocystis jirovecci
Penicillium sp
CANDIDOSIS:
Micosis primaria o secundaria ocasionada por levaduras endógenas y

Práctica número 6: Diagnóstico de las principales Micosis Oportunistas

 Establecer las diferencias macroscópicas y microscópicas de los

oportunistas del género Candida, que pueden afectar piel, mucosas, estructuras
profundas y órganos internos.
DIAGNÓSTICO: Ver esquema diagnóstico en práctica de micosis
superficiales.
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CRIPTOCOCOSIS:
Es una micosis que afecta tanto a hombres como a animales, es
ocasionada por las tres variedades de la levadura capsulada Cryptococcus
neoformans:

Las variedades grubii y neoformans han sido aisladas de la naturaleza en
casi todo el mundo, en asociación con excrementos de aves, especialmente
palomas. La variedad Gatti ha sido aislada de la naturaleza en asociación con
detritos, flores y oquedades de numerosos árboles, entre ellos, los eucaliptos,
acacias, ficus y almendros.
El hombre adquiere la enfermedad por la inhalación de blastoconidias poco
capsuladas (2-3 µm) presentes en el ambiente. En el hospedero este patógeno
desarrolla una cápsula polisacárida protectora. Se establece un foco primario
pulmonar que puede ser asintomático en hospederos inmunocompetentes o
diseminada

en

inmunocomprometidos.

Las

presentaciones

clínicas

más

frecuentes de la criptococosis son la meningitis y la meningoencefalitis, aunque en
menor frecuencia se pueden observar lesiones en vísceras, hueso, piel, riñon y
próstata.
La criptococosis es de distribución mundial, afecta a ambos sexos y todas
las edades, aunque es poco frecuente en niños, y aquellos con enfermedad de
base que comprometan tanto la inmunidad celular como la humoral.

Práctica número 6: Diagnóstico de las principales Micosis Oportunistas

 C. neoformans var. grubii, serotipo A
 C. neoformans var. neoformans serotipo D y C
 C. neoformans var. gatti serotipo B

DIAGNÓSTICO
Muestra:

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LCR
Esputo, lavado broncoalveolar
Orina
Biopsias
Sangre, médula ósea
Exudado de ulceras, material purulento
Secreción prostática.

 Observación entre lámina y laminilla
 Tinta china o nigrosina
 Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata metenamina, mucicarmina de
Meyer, Azul de Alcián)
Al realizar una tinción negativa con la tinta china, se observan
blastoconidias provistas de una pared bien definida y una cápsula refringente, con
o sin gemación, redondas u ovaladas de 4-6 µm de diámetro y hasta de 12-20
µm, dependiendo del tamaño de la cápsula (Figura 40). En las preparaciones en
fresco, para observar la cápsula, se baja el condensador, se cierra el diafragma y
se observa con poca luz.

Práctica número 6: Diagnóstico de las principales Micosis Oportunistas

Examen directo:

Figura 40: Levaduras encapsuladas de Cryptococcus
neoformans
(flechas
azules).
Tinta
china.
http://sameens.dia.uned.es/Trabajos9/Trab_Publicos/
Trab_2/Garcia_Torrecillas_2/01_criptococosis.html

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En los estudios histopatológicos, la intensidad de la respuesta inflamatoria
va a depender del órgano y de las características del hospedero. Hay formación de
granulomas con necrosis.
Cultivo:
Se realiza en Agar Sabouraud u otros medios de cultivo sin cicloheximida,
ya que inhibe su crecimiento. Se incuba a una temperatura de 32 a 37° C,
desarrolla en 48 horas, son blancas o amarillentas, lisas y brillantes, a los cinco
días toman un aspecto mucoide que recuerdan el aspecto de la leche
condensada. Por ser el C. neoformans el único género que utiliza la enzima
fenoloxidasa, crece en medios con semillas pulverizadas de Guizotia abyssinica
(medio de Staib o agar de semillas de niger o agar ácido cafeico), donde adopta
un color ocre. También se puede sembrar en un medio a base de semillas de
girasol.

Estudio inmunológico:
Por el estado de inmunodeficiencia de los pacientes y por la escasa
antigenicidad de la cápsula que rodea al hongo, no se han obtenido antígenos
adecuados para detectar hipersensibilidad retardada en los pacientes.
El diagnóstico inmunológico de criptococosis se establece mediante el uso
de la técnica de aglutinación de partículas de látex, la cual permite detectar
antígenos polisacáridos capsulares en las muestras clínicas.

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temperaturas mayores o iguales a 40 °C inhiben su crecimiento. La colonia se

ASPERGILOSIS
Bajo este término se incluyen una serie de enfermedades clínicamente
diferentes, pero producidas por especies de mohos hialinos septados, del genero
Aspergillus. Este grupo de hongos se caracteriza por tener distribución mundial y
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ser ubicuos en la naturaleza; sin embargo, se presentan con mayor frecuencia en
ambientes húmedos, asociados con todo tipo de material orgánico como plantas,
tierras, telas, condimentos y filtros de aire acondicionado.
La clasificación clínica de aspergilosis es muy compleja y extensa, se
consideran tres grupos de enfermedades, basados en la asociación establecida
entre el hongo y el hospedero: Aspergilosis por hipersensibilidad, colonización por

DIAGNÓSTICO
Muestra:




Escamas, detrito subungueal
Esputos, lavado broncoalveolar
Material purulento o necrótico
Biopsias
Hemocultivos (raramente positivos)

Examen directo:




En fresco, entre lámina y laminilla
KOH al 10-20% con tinta
Negro de clorazol E
Calcofluor
Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metenamina)

Al examen directo se observan hifas hialinas, septadas, con un diámetro de
3-6 µm, de pared lisa y gruesa, con ramificaciones dicotómicas en ángulo de 45. A
veces se observan clamidoconidias. Las hifas proliferan en el tejido con arreglo
radial o paralelo a este; ocasionalmente las hifas exiben características
morfológicas atípicas y se ven globosas, distorsioonadas y más amplias que lo
usual, hasta de 12 µm de diámetro, con escaso o ningún septo, por lo que pueden

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Aspergillus y Aspergilosis invasiva.

confundirse con las de zigomicetos.
En algunas muestras, especialmente en aquellas provenientes de otitis y
aspergiloma pulmonar y nasal, pueden encontrarse cabezas aspergilares. En los

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casos de aspergiloma, en las cavidades pulmonares y de senos (paranasal,
etmoidal y maxilar), se observan masas o bolas del hongo, constituídas por hifas
septadas dicotómicas, con proyección radiada. Las hifas no invaden la pared de la
cavidad o caverna.
En las biopsias de aspergilosis invasora, se observan numerosas hifas con
tendencia a proyectarse en forma radial. Las hifas, por crecer en la luz de los
inflamatorio

constituído

principalmente

por

leucocitos

polimorfonucleares

neutrófilos y grados variables de necrosis.
Cultivo:
Se realiza en Sabouraud con y sin antibióticos, Lactrimel o Czapek. Es un
hongo de crecimiento rápido, 3 ó 4 días, son de color blanco, verde amarillo, café
o rojizo y puede haber difusión del pigmento al medio de cultivo. Son de aspecto
aterciopelado, granuloso, pulverulento. Las características tanto macro como
microscópicas dependerán de la especie de Aspergillus (Figura 41).

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vasos y perforarlos, se ven rodeadas de áreas hemorrágicas e infiltrado

Figura 41: Principales estructuras morfológicas del género Aspergillus.
www.uprm.edu/.../Lab/Aspergilosis.htm
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Estudio inmunológico:
Las pruebas serológicas para la determinación de anticuerpos son útiles en
pacientes alérgicos y las pruebas de antígenos lo son en las formas invasivas.
Pueden realizarse IDD, Inmunoelectroforesis, contrainmunoelectroforesis, ELISA y

ZIGOMICOSIS:
Bajo este término se agrupan una variedad de infecciones oportunistas
producidas por varios géneros de mohos aceptados, pertenecientes a la clase
Zygomycetes, orden mucorales. Son hongos termotolerantes, saprófitos, que se
aíslan con frecuencia de suelos y de materia orgánica en descomposición;
también son contaminantes de alimentos y vendajes almacenados en ambientes
húmedos.
Las infecciones más frecuentes producidas por estos hongos, pueden ser
clasificadas de acuerdo con su ubicación anatómica en rinocerebral, pulmonar,
gastrointestinal, subcutánea y sistémica, pero también pueden manifestarse en un
órgano aislado como cerebro, riñón y corazón.
La

mucormicosis

es

de

distribución

mundial,

no

son

factores

predisponentes la edad, el sexo y el tamaño del inóculo.
DIAGNÓSTICO
Muestra:




Biopsias (se debe obtener material abundante y de buena calidad)
Tejidos necróticos
Secreciones
Aspirado de senos nasales y paranasales
Esputos, lavado broncoalveolar.

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fijación de complemento.

Examen directo:

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En fresco, entre lámina y laminilla
KOH al 10% con o sin tinta
Negro de clorazol E
Calcofluor
Coloraciones histológicas (PAS, HE, plata-metenamina).

Se observan hifas anchas, de 7-15 µm de diámetro, aceptadas o
infrecuentemente septadas, que se ramifican en ángulo de 90. Son de paredes
falsos septos o de ramificaciones en diferentes ángulos y de cintas más que de
cilindro.
Las tinciones usuales de las biopsias, también permiten la visualización de
los elementos micóticos. Se observa edema y necrosis tisular. El infiltrado celular
es escaso y está constituido principalmente por polimorfonucleares neutrófilos.
Cultivo:
Se realiza en agar Sabouraud sin cicloheximida y se incuban a 37 °C. El
crecimiento es rápido (12 a 48 horas), las colonias son elevadas y cubren toda la
superficie del medio de cultivo. Para demostrar su patogenicidad se deben
realizar cultivos repetidos y observar la presencia del hongo en todos los tubos
sembrados. Las características macro y microscópicas van a depender de la
especie involucrada.
NEUMOCISTOSIS:
Neumonía ocasionada por el hongo Pneomocystis jiroveci (P. carinii). Es
una infección cosmopolita oportunista muy bien reconocida y estudiada en los
pacientes infectados con el VIH. La infección se adquiere por vía aérea. En
hospederos inmunodeficientes la infección cursa casi siempre con una neumonitis

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delgadas y flexibles por lo que se doblan y colapsan, dando la apariencia de

bilateral con infiltrados intersticiales difusos. La taquipnea con disnea progresiva,
la tos seca y la cianosis son los síntomas habituales. Desde el pulmón el hongo
puede diseminarse a otros órganos como ganglios linfáticos, bazo, hígado,

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corazón, medula ósea y con menor frecuencia a cerebro, páncreas, timo, tiroides,
retina, coroides, oído y piel, entre otros.
DIAGNÓSTICO




Lavado broncoalveolar
Cepillado bronquial
Esputos inducidos
Biopsias

Examen directo:




Giemsa, Wright
Diff-Quik
Plata-metenamina
Azul de toluidina O
Calcofluor

Se observan trofozoítos (ascosporas) y quistes (ascas) de P. jiroveci (P.
carinii). Los trofozoítos tienen un diámetro de 1-3 µm, su núcleo es redondeado y
su citoplasma es de contornos irregulares. Los quistes constituyen solo el 1% de
los microorganismos, tienen 4-7 µm de diámetro y su forma varía de redonda a
ovoide, observándose también formas colapsadas. Poseen una gruesa pared
celular y están provistos de una u ocho núcleos dependiendo de su estado de
maduración.
El cuadro histológico típico en cortes teñidos con HE se caracteriza por un
exudado intra-alveolar eosinófilo, espumoso, con aspecto de panal de abejas, lo
cual se considera diagnóstico aún en ausencia de la demostración de P. jirovecci
(P. carinii) mediante coloraciones especiales. En preparaciones teñidas con Platametenamina, se aprecian claramente quistes y trofozoítos.

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Muestra.

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Cultivo: Aun no se ha podido recuperar en cultivo.
Otros métodos diagnósticos: Amplificación del ADN por PCR.

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Figura 41: Quistes de Pneumocystis jiroveci en pulmón (flechas).
Coloración histological Plata-metenamina. Disponible
en:
student.ccbcmd.edu/.../lab9/u1fig32d.html

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ACTIVIDAD PRÁCTICA
Dibuje las estructuras observadas al microscopio de los principales agentes

Candida spp

Cryptococcus
neoformans

Aspergillus spp

Hifas no septadas

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de micosis oportunistas.

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