You are on page 1of 7

Practica N° 6.

Pruebas Para Identificación de Gram Negativas
Prueba Citocromo Oxidasa:
Esta prueba detecta la presencia de citocromo oxidasa, enzima que transfiere
electrones del citocromo c al oxigeno. Cuando las colonias de bacterias son
tratadas con el reactivo oxidasa se tornan de color negro, debido a la enzima
oxidasa del reactivo y se convierte en incoloro en su forma reducida.
Oxidasa Positivas:
Muchos Gram-negativos, como los bacilos curvados como pseudomonas,
Helicobacter pylori, Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni son oxidasa
positiva.
Oxidadas Negativas
Las enterobacterias
Prueba Indol:
La prueba del indol es una prueba bioquímica realizada en especies
bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del
aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de
enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con
frecuencia triptofanasa.
Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rojovioleta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado
negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se
muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, también
conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la
degradación del triptófano.
Bacteria indol positiva
Las bacterias que resultan indol positivas al romper el indol del triptófano,
incluyen:
Aeromonas hydrophilia, Aeromonas punctata,
Bacillus alvei,
Escherichia coli,
Pasturella multocida, Pasturella pneumotropica, y
Vibrio spp.

junto con el metabolismo del .. Proteus mirabilis. Pseudomonas spp. La mayoría de los Bacillus spp. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que.. Prueba de Citrato: Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno. La mayoría de los Klebsiella spp. Aeromonas salmonicida. Salmonella spp... Alcaligenes spp.staphylococcus aureus Bacteria indol negativa Las bacterias que generan un indol negativo en esta prueba. provocando la alcalinización del medio.. Enterobacter spp. incluyen: Actinobacillus spp..

frecuentemente produce liberación de sulfhídrico. . El sulfhídrico reacciona con tales metales dando una coloración oscura al medio de cultivo.citrato. generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del mismo de verde a azul Prueba del Hidrógeno Sulfurado: La actividad de las bacterias sobre aminoácidos que contienen azufre. lo cual se demuestra empleando sales de metales pesados como el hierro.

peritricos. de esta forma podemos detectar la producción de amoniaco y. Al descomponerse se libera amoniaco que alcaliniza el medio. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. El medio de cultivo posee un indicador de pH que vira a un color rosa intenso cuando dicho pH se hace básico. la presencia del enzima ureasa. Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada. El medio de cultivo a emplear es el agar urea. capaz de atacar la urea. Prueba Ureasa: Algunas bacterias son capaces de emplear la urea como única fuente de nitrógeno. Se coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio.Prueba Motilidad: Llamada también de la gota suspendida. en última instancia. los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados(monotricos. En tal caso la bacteria ha de poseer un enzima. Podremos observar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa. etc.). Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo. Motilidad (-): como en Pasteurella multocida. . la ureasa.

Prueba de Rojo de Metilo Una coloración roja. constituye un resultado positivo. Prueba de Voges Proskauer La aparición de un color rosado constituye una reacción positiva indicadora de la presencia de acetoína. .Prueba de Rojo de Metilo Y Voges Proskauer Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa con producción de ácido por la vía ácido mixta o con producción de un producto final neutro (acetoína) por la vía butanodiólica. una coloración amarilla constituye una reacción negativa. producto de la fermentación de la glucosa. indicadora de la presencia de ácidos provenientes de la fermentación de la glucosa.

Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada.Prueba TSI Esta prueba se recomienda para la identificación de patógenos entéricos gram negativos. Un ennegrecimiento en el medio indica la producción de ácido sulfhídrico. Bisel alcalino (rojo): Lactosa y/o sacarosa no fermentada. saca-rosa y glucosa. con formación de ácido y gas. Taco alcalino (rojo) y bisel alcalino (rojo): Ninguno de los tres glúcidos es fermentado La aparición de burbujas en el taco indica que la fermentación se ha efectuado con producción de gas. . Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel ácido (amarillo): Lactosa y/o sacarosa fermentada. y también para detectar pro-ducción de ácido sulfhídrico. Se emplea para detectar la fermentación de lactosa.

A Glucosa. . La reacción negativa permite nuevamente la solidificación. La reacción positiva hace que el medio permanezca líquido después de la incubación aún después de dejarse en refrigeración durante media hora. lactosa y/o sacarosa fermentada B Glucosa fermentada con producción de ácido sulfídrico y gas C Glucosa fermentada con producción de ácido sulfídrico D Ninguno de los tres azúcares es fermentado Prueba de Producción de Gelatinasas Se usa para valorar la licuefacción o licuación de la gelatina por acción de las gelatinasas bacterianas producidas por algunas Enterobacterias.