Practica N 6.

Pruebas Para Identificacin de Gram Negativas

Prueba Citocromo Oxidasa:
Esta prueba detecta la presencia de citocromo oxidasa, enzima que transfiere
electrones del citocromo c al oxigeno. Cuando las colonias de bacterias son
tratadas con el reactivo oxidasa se tornan de color negro, debido a la enzima
oxidasa del reactivo y se convierte en incoloro en su forma reducida.
Oxidasa Positivas:
Muchos Gram-negativos, como los bacilos curvados como pseudomonas,
Helicobacter pylori, Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni son oxidasa
positiva.
Oxidadas Negativas
Las enterobacterias
Prueba Indol:
La prueba del indol es una prueba bioqumica realizada en especies
bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del
aminocido triptfano. Esta divisin molecular es lograda por una serie de
enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con
frecuencia triptofanasa.
Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rojovioleta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado
negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se
muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, tambin
conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la
degradacin del triptfano.
Bacteria indol positiva
Las bacterias que resultan indol positivas al romper el indol del triptfano,
incluyen:
Aeromonas hydrophilia, Aeromonas punctata,
Bacillus alvei,
Escherichia coli,
Pasturella multocida, Pasturella pneumotropica, y
Vibrio spp.

staphylococcus aureus
Bacteria indol negativa
Las bacterias que generan un indol negativo en esta prueba, incluyen:
Actinobacillus spp.,
Aeromonas salmonicida,
Alcaligenes spp.,
La mayora de los Bacillus spp.,
Enterobacter spp.,
La mayora de los Klebsiella spp.,
Proteus mirabilis,
Pseudomonas spp.,
Salmonella spp.

Prueba de Citrato:
Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de
crecer con citrato como nica fuente de carbono y sales amnicas inorgnicas
como nica fuente de nitrgeno, provocando la alcalinizacin del medio.
Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en
este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con el metabolismo del

citrato, generar una fuerte basificacin del medio que ser aparente por un
cambio de color del mismo de verde a azul

Prueba del Hidrgeno Sulfurado:

La actividad de las bacterias sobre aminocidos que contienen azufre,
frecuentemente produce liberacin de sulfhdrico, lo cual se demuestra
empleando sales de metales pesados como el hierro. El sulfhdrico reacciona
con tales metales dando una coloracin oscura al medio de cultivo.

Prueba Motilidad:
Llamada tambin de la gota suspendida. Algunas bacterias son mviles por
presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas
bacilares y pueden presentarse en nmero y posicin variados(monotricos,
peritricos, etc.). La base de esta prueba es determinar si la bacteria es mvil o
inmvil. Con un asa de inoculacin se le coloca a un cubreobjetos un poco de
muestra y se le agrega una gota de agua destilada. Se coloca sobre un
portaobjetos y se observa al microscopio. Podremos observar si las bacterias
tienen movimientos rectilneos o curvos y en todas direcciones
Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa.
Motilidad (-): como en Pasteurella multocida.

Prueba Ureasa:
Algunas bacterias son capaces de emplear la urea como nica fuente de
nitrgeno. En tal caso la bacteria ha de poseer un enzima, la ureasa, capaz de
atacar la urea. Al descomponerse se libera amoniaco que alcaliniza el medio.
El medio de cultivo posee un indicador de pH que vira a un color rosa intenso
cuando dicho pH se hace bsico; de esta forma podemos detectar la
produccin de amoniaco y, en ltima instancia, la presencia del enzima ureasa.
El medio de cultivo a emplear es el agar urea.

Prueba de Rojo de Metilo Y Voges Proskauer

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de
fermentar la glucosa con produccin de cido por la va cido mixta o con
produccin de un producto final neutro (acetona) por la va butanodilica.
Prueba de Voges Proskauer
La aparicin de un color rosado constituye una reaccin positiva indicadora de
la presencia de acetona, producto de la fermentacin de la glucosa.

Prueba de Rojo de Metilo

Una coloracin roja, indicadora de la presencia de cidos provenientes de la
fermentacin de la glucosa, constituye un resultado positivo, una coloracin
amarilla constituye una reaccin negativa.

Prueba TSI
Esta prueba se recomienda para la identificacin de patgenos entricos gram
negativos. Se emplea para detectar la fermentacin de lactosa, saca-rosa y
glucosa, con formacin de cido y gas, y tambin para detectar pro-duccin de
cido sulfhdrico.
Taco cido (amarillo): Glucosa fermentada.
Bisel cido (amarillo): Lactosa y/o sacarosa fermentada.
Taco cido (amarillo): Glucosa fermentada.
Bisel alcalino (rojo): Lactosa y/o sacarosa no fermentada.
Taco alcalino (rojo) y bisel alcalino (rojo): Ninguno de los tres glcidos es
fermentado
La aparicin de burbujas en el taco indica que la fermentacin se ha efectuado
con produccin de gas.
Un ennegrecimiento en el medio indica la produccin de cido sulfhdrico.

A Glucosa, lactosa y/o sacarosa fermentada

B Glucosa fermentada con produccin de cido sulfdrico y gas
C Glucosa fermentada con produccin de cido sulfdrico
D Ninguno de los tres azcares es fermentado

Prueba de Produccin de Gelatinasas

Se usa para valorar la licuefaccin o licuacin de la gelatina por accin de las
gelatinasas bacterianas producidas por algunas Enterobacterias. La reaccin
positiva hace que el medio permanezca lquido despus de la incubacin an
despus de dejarse en refrigeracin durante media hora. La reaccin negativa
permite nuevamente la solidificacin.