Cromatografa

Mariana A. Uzcategui. P, Milvia J. Martinez A.

Universidad Nacional Federico Villarreal
Facultad de Oceanografia, Pequeria, Ciencias Alimentarias y Acuicultura
Escuela Profesional de Ingenieria en Acuicultura

2014

Resumen

El objetivo de la prctica, fue comprender los fundamentos de separacin de compuestos de una

mezcla mediante la tcnica de cromatografa, emplendonos como fase estacionaria el papel Whatman
y como fase mvil solventes. De acuerdo al fundamento la fase mvil o disolvente arrastra los
componentes a travs del papel separndolos en este caso por tamao, siendo las partculas ms
grandes retenidas con mayor facilidad a travs del papel y las ms pequeas avanzando con mayor
velocidad, por lo cual se pudo observar en el ensayo la separacin de los colorantes sintticos
presentes en caramelo de chupetn. Cada compuesto tendr una distancia que al comparar con el
movimiento del solvente en la fase mvil permitir calcular un Rf (Ratio of Front) el cual es una
constante o ndice de retencin caracterstico a cada compuesto de acuerdo a su configuracin
molecular que le confiere propiedades particulares, con este Rf se determina los componentes
presentes en la muestra. En este caso la muestra es slida por tanto se realiz una dilucin previa a la
extraccin de los colorantes sintticos, ntese que esta tcnica no solo se emplea para separar
colorantes sino como mtodo de separacin de componentes, existen numerosos tipos de
cromatografas adaptado a los componentes que se deseen identificar ya sea en anlisis de alimentos, o
incluso con aplicaciones en toxicologa.

Palabras clave: Separacin de compuestos, cromatografa , fase estacionaria, fase mvil, Rf, ndice de
retencin.

Objetivo General

Comprender y aprender los fundamentos de la separacin de compuestos mediante el mtodo

de cromatografa en papel.

Objetivos Especficos

Dilucin y extraccin de colorantes sintticos de la muestra slida.

Separacin de los colorantes sintticos presentes en la muestra.

Caracterizacin de compuestos mediante el clculo de Rf.

Mtodo
mbito espacio-temporal
La prctica se realiz el da 20 de octubre en el laboratorio de Bioqumica de la Facultad de
Oceanografa, Pesquera, Ciencias Alimentarias y Acuicultura, ubicado en Calle Roma 350, distrito de
Miraflores.
Unidad de anlisis
Se emple reactivos provenientes del laboratorio de Bioqumica. Disolucin acuosa de cloruro sdico
(al 2.5% p/v)

Tiras de papel whatman

2 vasos precipitados de 250ml
2 beaker de 50ml
2 pipetas Pasteur
2 pisetas
2 rejillas de asbesto
2 trpodes
2 mecheros Fisher
1 tabla de madera
4 frascos de vidrio
Agua destilada
Mascarilla
Guantes
Regla
Lpiz
Tijeras
Ganchos

Reactivos

Solucin de HCl
Disolucin acuosa de cloruro sdico (al 2.5% p/v)
Solucin de Hidrxido de sodio.
Muestra: Chupetin comercial de marca plop, color rojo y morado.

Experimento 1: Extraccin de colorante en muestra de caramelo

Procedimiento:
Se tritur el caramelo, luego se verti en un vaso precipitado de 250ml
Se hirvi el caramelo triturado con adicin de 50ml de agua acidificada con cido
clorhdrico.
Se enjuag la lana, luego adicionar 3ml de hidrxido de sodio y 50 ml de agua.
Se calent la muestra logrando extraer la mayor cantidad de colorante retenida en la lana y
se dej ebullir hasta concentrar la mezcla.

Foto 1. Preparacin de muestras (triturado)

Foto 2. Dilucin de muestra de caramelo en 50 ml de agua, previo a hervir.

Foto 3. Adicin de la lana en la solucin de la muestra.

Experimento 2: Cromatografa en papel.
Procedimiento:
Se traz una marca de inicio a 1,5 cm del extremo del papel y una marca final 12cm
siguiente a la marca inicial, adems se rotulo correspondiente a las tiras de papel.
Se extrajo el colorante con la pipeta Pasteur y se procedi con colocar la marca con un
punto en el papel whatman, se realiz el mismo proceso para las 4 muestras.
Se coloc cada papel en cada frasco, se dej reposando por 45 minutos para el Caramelo
rojo para ambas soluciones (I y II) para el caramelo morado 35 minutos (solucin I y II).
Rf = Distancia recorrida por el colorante / Distancia recorrida por el solvente (12cm)

Foto 4. Rotulado y marcado del papel.

Foto 5. Identificacin de colorantes en muestra caramelo rojo solucin I (derecha) y

solucin II (izquierda).

Figura 1. Rtulo para cromatografa sobre papel

Resultados

Experimento 1: Dilucin y extraccin de colorantes.

Tabla 1. Resultados observados durante la dilucin y extraccin de colorantes luego del

calentamiento.

Calentamiento
HCl

Color de la lana/liquido
Rojo/incoloro
Morado/incoloro

NaOH

Blanco original/Rojo
Blanco original/ morado

Concentrado

Rojo intenso y oscuro poco

traslcido de mayor densidad
Morado intenso y oscuro
poco traslcido de mayor
densidad.

Observacin
La acidificacin del medio
permite a la lana absorber
los colorantes y retenerlos
sellando las escamas de la
fibra.
El medio alcalino permite
relajar las fibras y abrir las
escamas permitiendo liberar
los componentes atrados
por el medio.
La ebullicin acelera la
evaporacin
permitiendo
concentrar el colorante para
asegurar una concentracin
ideal en el ensayo de
cromatografa.

Experimento 2: Cromatografa en papel.

Tabla 2. Resultados observados durante la cromatografa en papel.
Color de mezcla

Solucin

Rojo

I
II
I

Nmero
compuestos
1
1
2

II

Morado

de

Distancia
Recorrida

Rf

Discusiones
En comparacin con los colorantes naturales las ventajas y desventajas de los colorantes sintticos
son:
Colorantes

Sintticos

Ventajas
Mayor poder tintreo.

Desventajas

Mayor estabilidad en las

condiciones de procesado y
almacenamiento

Producen efectos en la salud

como alergias, cncer,
hiperactividad y dficit de
atencin en nios.

Solubles en agua

Tabla 1. Ventajas y desventajas de colorantes sintticos en relacin a colorantes naturales.

Los colorantes naturales podran adicionar sabores no deseados a un producto, con ello
tampoco presentan fuerza en la tincin. Lo favorable es que no son dainos para la salud.

Conclusiones
Referencias Bibliogrficas

CALVO MIGUEL. Bioqumica de los alimentos

Moreno A., Figueroa D., Hormaza A. (2012)"Diseo estadstico para la remocin eficiente del
colorante rojo 40 sobre tusa de maz"
*Artculo derivado de la investigacin Utilizacin de residuos agroindustriales para el tratamiento de
aguas contaminadas con colorantes. Universidad Nacional de Colombia.