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Facultad de Medicina

Manual de Prcticas de
Laboratorio Clnico 2012 2013

San Francisco de Campeche, Campeche, Enero del 2014.

Directorio
Lic. Adriana Del Pilar Ortiz Lanz
Rectora
Dra. Xchitl Georgina Poot Lpez
Directora
M.A.D. Taymi Esperanza Padilla Rodrguez
Secretaria Acadmica
Dr. Eduardo Gabriel R de la Gala Guerrero
Coordinador de Carrera
Q.F.B. Miguel Pia Quijano M. en F
Responsable Laboratorio Clnico

PRLOGO
El nico medio para establecer un diagnstico correcto es practicar una exploracin del
enfermo con un mtodo perfecto. Slo as cubriremos adecuadamente las cuatro etapas
fundamentales del diagnstico. Es preciso que aclaremos, paso a paso, estas etapas,
indagando ante todo el trastorno funcional (etapa funcional), para localizar luego el rgano
enfermo (etapa anatmica); despus precisaremos el mecanismo productor del trastorno
(etapa patognica). Para ello disponemos de tres mtodos de exploracin: el interrogatorio,
la exploracin objetiva del enfermo y las exploraciones complementarias. A los dos
primeros se les considera como dos fases del mtodo clnico. Los segundos son mtodos de
anlisis fisicoqumicos, aplicados unos directamente al enfermo y otros a sus humores o
secreciones. A estos ltimos se les acostumbra calificar como mtodos de laboratorio.
En muchsimas enfermedades, los exmenes de laboratorio son decisivos para el
diagnstico, hasta tal punto que el desconocimiento de los datos de auscultacin sera un
defecto tan grande como el desconocimiento de los datos de auscultacin de un cardaco, o
de los interrogatorios de un dispptico. Como todos los signos de exploracin, los datos de
laboratorio tienen su jerarqua y es preciso situarlos en el plano que les corresponde al
hacer el razonamiento diagnstico. Lo importante es recordar que ese diagnstico jams
ser la suma resultante de todos ellos, aunque a estos se aadan, como sumandos, los datos
de exploracin clnica. Ello es as porque el diagnstico no es una suma, sino una sntesis.
Lo primero lo podra hacer una mquina, lo segundo slo puede hacerlo el mdico. Para
ello el mdico necesita tener sentido clnico, cosa que slo se puede adquirir con la
experiencia propia. Por eso, nosotros solemos decir que el diagnstico es una sntesis
plena de sentido. Esta sntesis ser tanto ms perfecta cuantos ms datos se hayan
analizado para llevarla a cabo. Entre estos datos, los de laboratorio cumplen un papel
importantsimo y es necesaria su ordenacin adecuada para su perfecta aplicacin.
M. Soriano. Jimnez.

REGLAMENTO DE LABORATORIO
1. Asistir con puntualidad (TOLERANCIA DE 10 min.)
2. Usar bata, lentes de seguridad, guantes y cubre bocas, siempre que se acuda al
laboratorio a realizar prcticas.
3. Leer las instrucciones de la prctica antes de asistir al laboratorio.
4. Seguir las recomendaciones dadas por el maestro, a fin de obtener un mejor resultado
de la prctica y para evitar prdida de tiempo, desperdicio de materiales y reactivos o
bien algn accidente.
5. Las prcticas no son sustituibles, reprogramables o recuperables por
inasistencia.
6. Traer la (las) muestra (s) biolgica (s) por estudiar.
7. Evitar los juegos y bromas en el interior del laboratorio.
8. Todo material roto por descuido, deber ser repuesto por el causante.
9. No introducir alimentos en el laboratorio.
10. Aplicar las consideraciones generales establecidas para el tratamiento de muestras
de desecho y lavado de materiales, (anexos).
11. Aplicar las normas de separacin y envasado de residuos peligrosos biolgico
infecciosos de acuerdo a sus caractersticas fsicas y biolgicas infecciosas, (anexos).
12. Al trmino de la prctica, limpiar y ordenar las mesas, materiales y bancos.
NOTA: EL ALUMNO QUE NO SE SUJETE AL PRESENTE REGLAMENTO SERA
SANCIONADO O EN SU DEFECTO, EXPULSADO DEL LABORATORIO
TEMPORAL O DEFINITIVAMENTE.
.

Contenido
BIOMETRA HEMTICA: ................................................................................................. 1
GRUPOS SANGUINEOS Y RH ......................................................................................... 11
TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) ................................................................................. 16
TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA (TPT) ............................................................. 19
DETERMINACIN DE GLUCOSA .................................................................................... 21
DETERMINACIN DE CREATININA Y DEPURACIN DE CREATININA ............................... 24
DETERMINACIN DE UREA ......................................................................................... 29
LDL-COLESTEROL, HDL-COLESTEROL ............................................................................. 32
DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL ..................................................................... 35
DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS ............................................................................ 37
DETERMINACIN DE ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST) ..................................... 40
DETERMINACIN DE ALANINO AMINOTRANSFERASA (ALT) ......................................... 42
DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA .................................................. 44
FOSFATASA ALCALINA ................................................................................................. 47
PROTENAS TOTALES Y ALBMINA:.............................................................................. 49
REACCIONES FEBRILES ................................................................................................. 53
ANTIESTREPTOLISINAS................................................................................................. 56
DETERMINACIN DE PROTEINA C REACTIVA .............................................................. 58
DETECCIN DE FACTOR REUMATOIDE.......................................................................... 60
PRUEBA DE EMBARAZO ............................................................................................... 62
COPROPARASITOSCPICO ........................................................................................... 66
EXAMEN GENERAL DE ORINA....................................................................................... 76
ANEXOS....................................................................................................................... 94
I.- CONSIDERACIONES GENERALES PARA EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE DESECHO Y
LAVADO DE MATERIALES. .................................................................................................... 94

II. SEPARACIN Y ENVASADO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO INFECCIOSOS DE


ACUERDO A SUS CARACTERSTICAS FSICAS Y BIOLGICAS INFECCIOSAS. ............................. 95
III. EXTRACCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS ....................................................................... 96
IV. NORMATIVIDAD PARA LA UNIDAD DE APRENDIZAJE: LABORATORIO CLNICO ............ 104

BIOMETRA HEMTICA:
INTRODUCCIN:
La sangre esta formada por dos partes fundamentales, una parte lquida constituida por el
plasma y otra parte slida que corresponde a los elementos figurados suspendidos en ella,
dichos elementos son los eritrocitos, leucocitos y plaquetas, cuando la sangre se coagula, el
lquido que queda despus de separa el cogulo, recibe el nombre de suero. Cuando se
utiliza anticoagulante la parte lquida que se separa de los elementos celulares se denomina
plasma, la diferencia fundamental entre plasma y suero, consiste en que el suero pierde el
fibringeno proteico que se convierte en filamento insoluble de fibrina en el curso de la
coagulacin.
La biometra hemtica es una ciencia de los mtodos estadsticos aplicada a estructuras y
funciones de los seres vivos, al recuento y medicin de las clulas, especficamente las
sanguneas.1,2
Fundamentalmente este estudio se halla divido en dos partes:
I. FRMULA ROJA:
Esta se halla conformada de los siguientes parmetros:
Hb. La hemoglobina, componente principal de los glbulos rojos, es una protena
conjugada que sirve de vehculo para el transporte de oxgeno y de carbono.
Hto. El hematocrito representa la proporcin de glbulos rojos a plasma en la sangre
circulante y se expresa en volmenes por ciento. Aproximadamente, la cifra del
hematocrito nos indica el nmero de hemates por milmetro cbico para lo cual se le suma
el 10% de su valor y se expresa en millones. El valor del hematocrito depende, en primer
lugar, del nmero de hemates circulantes, pero tambin de su forma y tamao.
VCM. El volumen corpuscular medio. Para conocer las dimensiones, en el espacio, de los
eritrocitos, no basta la determinacin del tamao de los hemates por la medicin
microscpica de su dimetro, dadas la morfologa discoidea de estas clulas y las
variaciones de unas a otras. Por lo que se recurre al VCM que es el volumen medio de los
hemates individuales en micras cbicas (3) o femtolitros (fl).
CCMH. Es la concentracin de hemoglobina por eritrocito en %.
VG. El contenido hemoglobnico de los hemates puede expresarse de diversas formas. El
ms sencillo y conocido es el valor globular o cromemia (CI= ndice de color).
HCM. La hemoglobina corpuscular media, es el contenido (peso) de hemoglobina en un
hemate individual medio, en microgammas () o picogramos (pg).
RDW ADE. La amplitud de distribucin eritrocitaria es el recuento diferencial de
tamaos y grado de dispersin de los hemates.1,2,3,4
SEMIOLOGA MORFOLGICA ERITROCITARIA.4
1. Poiquilocitosis: Desigualdad de forma, que no es circular, sino piriforme o abigarrada
entre los hemates. Suele aparecer en las anemias hipocromas y en sndromes
mieloproliferativos (mielosclersis primaria con metaplasia mieloide), y en el cncer
metastsico seo.

2. Planocitos o Leptositos: Adelgazamiento aplanado del disco eritrocitario. Tambin es


frecuente en las anemias hipocromas.
3. Anulocitos: Hemates en anillo, por exagerada depresin central muy plida. Igual
presentacin que los planocitos: unos y otros significan reduccin del contenido
hemoglobnico.
4. Esferocitos: Hemates en bola, redondos, mas pequeos e hipercromticos. Tpicos de la
anemia hemoltica constitucional (esferocitosis hereditaria).
5. Ovalocitos, eliptocitos: Eritrocitos alargados, en forma de huevo. Normal su hallazgo si
es inferior al 10%. En mayor proporcin en anemias ferropnicas y en las megaloblsticas.
En la eliptositosis hereditaria alcanzan el 90% de los elementos rojos.
6. Dacriocitos (Teardrop): Formas en lgrimas o raquetas, propio de la mielofibrsis con
metaplasia mieloide, pero tambin de trastornos de la hematopoyesis (anemia ferropnica o
megaloblstica).
7. Esquistocitosis o fragmentositosis: Formas en tringulo, yelmo, casco o lgrima, etc.. por
fragmentacin de hemates. Suelen registrarse en la hemlisis mecnica; p.ejm. en la
anemia microangioptica o por prtesis valvulares y en la prpura trombtica
trombocitopnica.
8. Dianocitos o clulas en Diana (Target cells): Hemates con zona central abultada, mas
coloreada rodeada de halo plido y anillos perifricos normales. Aparecen en anemias
hemolticas hemoglobinopticas (talasemia, HbF, A2 o C). Tambin en ictericia
obstructiva o hepatocelulares (Sherlock) y postesplenectoma.
9. Drepanocitos o clulas falsiformes: Hemates en forma de guadaa o semiluna (sicklecells) tpicos de la hemoglobinopata S, pero tambin en otras.
10. Acantocitosis: Hemates erizados con espinas o espculas (burr-cells). Corresponde a
una abetalipoproteinemia (con retinitis pigmentaria y ataxia) o a la neuroacatocitosis (con
corea) pero tambin se ha descrito en las anemias hemolticas microangiopticas, en la
prpura trombtica trombopnica, en le dficit de piruvato kinasa incluso en carcinomas
cirrosis y uremia. No confundirla con las formas espinosas del prominencias cortas
(equinocitos), artefacto osmtico por secado lento de la preparacin; pero tambien se ven
por hepatopatas alcoholicas y en el simdrome de Zieve (Spur-cells).
11. Estomatocitos: Hemates con una depresin central en ranura o boca por carencia de
ATPasa. Anomala presente en una anemia hemoltica hereditaria (estomatocitosis) y
algunas veces en hepatopatas, alcoholismo, saturnismo y tambin talasemia.

OBJETIVO:
Realizar la frmula roja y la determinacin adecuada de los parmetros que la conforman:
Hemoglobina (Hb), hematocrito (Hto), Volumen corpuscular medio (VCM), Concentracin
corpuscular media de hemoglobina (CCMH), Valor globular (VG), Hemoglobina
corpuscular media (HCM), Amplitud de distribucin eritrocitaria (RDW ADE), y
establecer la relacin de sus valores con su importancia clnica.
MATERIAL Y EQUIPO:
Jeringa con aguja hipodrmica de 3 mL.
Torundas de algodn
Alcohol desnaturalizado
Tubos de 13 x 100mm.
Tapones
Gradilla
Cnulas
Tubos de Wintrobe
Pipeta de Sahl
Boquillas
Gasas
E.D.T.A.
Cianometahemoglobina
Sangre venosa anticuagulada. (Se extraer en el Laboratorio)
Centrfuga
Espectrofotmetro
PROCEDIMIENTOS:
Toma de muestra. Extraer aproximadamente de 3-5mL de sangre (ver anexos) y depositar
en un tubo de ensayo con EDTA, mezclar suavemente.
a) Determinacin de hemoglobina.
1. Con ayuda de una boquilla llenar una pipeta de Sahl hasta la marca de 20 cmm. con
sangre venosa previamente anticuagulada y mezclada. (no deben formarse burbujas de
aire).
2. En un tubo de ensayo con 5 mL de cianometahemoglobina diluir la muestra de sangre de
forma homognea.
3. Dejar en reposo durante 10min. y leer en el espectrofotmetro a 540 nm. Ajustando a
100% de transmitancia cero de absorbancia con solucin de cianometahemoglobina.
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres : 13.2 17 g/100mL
Mujeres : 12 16 g/100mL
Promedio general: 14.5 g/100mL

b) Determinacin del hematocrito.


La fuerza centrfuga aplicada, va sedimentando poco a poco los hemates seguidos de
leucocitos y plaquetas, esto nos permite calcular el volumen de hemates sedimentado
(hematocrito).
1. Con ayuda de una cnula llenar con sangre un tubo de Wintrobe hasta la marca de 10 (no
debe contener burbujas de aire).
2. Centrifugar durante 30 min. a 3000 rpm.
3. Leer en la escala de la derecha y expresar en %.
VALORES DE REFERENCIA
Hombres : 40 52 %
Mujeres : 37 47 %

c) Clculo del Nmero de Eritrocitos


Al valor del hematocrito expresado en millones se le suma el 10% del mismo, Ejem:
Hematocrito = 40% = 4 000 000 + 10% = 4 400 000 eritrocitos x mm3
VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 5 000 000 x mm3
Mujeres : 4 500 000 x mm3
d) Volumen Corpuscular medio.
Permite conocer el volumen medio de cada eritrocito.
Se determina por clculo mediante el empleo de la frmula siguiente:
Hematocrito
VCM = ---------------------------------------------------------- x 100
Dos primeras cifras del recuento de hemates
VALORES DE REFERENCIA:
El resultado, expresado en micrones cbicos o femtolitros, oscila normalmente entre 80 y
94; volumen corpuscular (normocitico). Valores superiores a 94 se observan en las anemias
macrociticas, e inferiores de 80 en las microciticas.
e) Concentracin corpuscular media de hemoglobina.
Se determina por clculo mediante el empleo de la frmula siguiente:
Hemoglobina
CCMH = ------------------------------------- x 100
Hematocrito

VALORES DE REFERENCIA:
Normal de 32 a 36 %. En las anemias ferroprivas se encuentran valores bajos (de 20
30%), en las anemias macrociticas la CCMH es normal o ligeramente baja.
f) Hemoglobina Corpuscular Media.
Se determina por clculo mediante el empleo de la frmula siguiente:

HCM =

Hemoglobina
------------------------------------------------------------------------- x 100
Dos primeras cifras del recuento de hemates

VALORES DE REFERENCIA:
Normal de 27 33 pg.
Las anemias hipocromas (ferropenicas, etc.) ofrecen valores inferiores a 27 y las
hipercromas, superiores a 32 (megalocitarias: perniciosa y otras macrocitarias).
g) Valor globular.
Se determina por clculo mediante el empleo de la frmula siguiente:

VG =

Hemoglobina encontrada
--------------------------------Hemoglobina normal
-----------------------------------------# de hemates encontrados
----------------------------------# de hemates normales

VALORES DE REFERENCIA:
Normalmente el VG es 1, con oscilaciones entre 0.9 y 1.1, un volumen VG bajo inferior a
0.9 se observa en las anemias hipocromas y alto superior a 1.1 en las hipercromas,
perniciosas, etc.
h) Amplitud de distribucin eritrocitaria.
Este parmetro puede registrarse con histogramas de recuento diferencial de tamaos y
grado de dispersin con ayuda de modernos aparatos electrnicos. La RDW ADE normal
es de 11.5 14.5 %. La isocitosis y anisocitosis as comprobadas pueden ser un criterio
para el diagnstico hematolgico de las anemias:

CURVA DE PRICE-JONES
Microcitosis
30
%
de
clulas

Isocitosis
20
Macrocitosis
10
4
6
8
10
Dimetro de hemates en m

12

VALORES DE REFERENCIA:
Dimetro promedio de Hemates :

5.5 8.8 m

Dimetro promedio de Leucocitos:

6 15 m

Dimetro promedio de Plaquetas:

2 4 m

ADE normal

ADE alta

VCM normal
Enfermedad crnica
Hemorragia aguda
Esferocitosis hereditaria

Anemia sideroblstica
Anemia drepanocitica
Mielofibrosis

VCM bajo
Talasemia minor
HbE

Anemia ferropnica
Hb-H

VCM alto
Talasemia aplsica
Alcoholismo
Sndrome mielodisplsico

Deficiencia de vitamina B12 o folatos


Anemia hemoltica autoinmune
Anemia por aglutininas fras.

II.-FRMULA BLANCA:

Durante las infecciones y en toda reaccin general de agresin, la frmula blanca muestra
variaciones segn la fase en el tiempo, la virulencia del agente y la resistencia del
organismo. Schilling ha establecido una curva leucocitaria biolgica, tpica y comn al
sndrome general parainflamatorio: la primera fase, de lucha, consiste en una leucocitosis
neutrfila, con desviacin a la izquierda (formas inmaduras) y granulaciones txicas;
aneosinoflia y linfo y monopenia. En la segunda fase, de defensa, aparece una monocitosis
y en la tercera, de curacin, una linfocitosis con reaparicin de los eosinfilos. Se apartan
de este patrn determinadas infecciones bacterianas. P.ejm. tifoidea, y la viriasis, que
cursan generalmente con leucopenia.
Tiene inters pronstico seguir la evolucin de la frmula leucocitaria; una leucopenia con
abundantes granulaciones txicas y marcada desviacin a la izquierda en una sepsis o en
otra infeccin habitualmente leucocitaria supone malignidad del proceso.
OBJETIVO:
Aplicar los mtodos de Neubauer y Hemocolorante en una muestra sangunea problema, a
fin de contabilizar glbulos blancos y establecer la diferenciacin celular.
MATERIAL Y EQUIPO:
Jeringa con aguja hipodrmica de 3 mL.
Torundas de algodn
Alcohol desnaturalizado
Tubos de 13 x 100mm.
Tapones
Gradilla
Pipeta de Thoma
Cmara de Neubauer
Boquillas
Portaobjetos
Gasas
E.D.T.A.
Lquido de Turk
Kit de Hemocolrante
Aceite de inmersin
Microscopio
Sangre venosa anticoagulada (se extraer en el Laboratorio)
Contador de clulas
Contador diferencial de clulas
PROCEDIMIENTOS:
a) Recuento de leucocitos.
En el recuento de leucocitos totales no existe distincin entre los cinco tipos de clulas
normales. Para ello se emplea el llamado Reactivo de Turk a base de cido actico glacial,
agua destilada y violeta de genciana . Esta solucin hipotnica tiene por objeto destruir los
eritrocitos. El violeta de genciana permite reconocer fcilmente el lquido, y observar mejor
los glbulos blancos a los que tie ligeramente.
7

1. Con ayuda de una boquilla llenar con sangre la pipeta de Thoma hasta la marca de 0.5 y
limpiar la punta de la pipeta con una gasa para quitar el exceso de sangre. MANTENER EN
POSICIN HORIZONTAL.
2. En rpida posicin vertical, aspirar el liquido de Turk hasta la marca de 11,evitando que
se formen burbujas de aire en la pipeta, y regresar a la posicin anterior.
3. Tapar la pipeta de ambos lados para evitar que salga el contenido y agitar por 2 minutos
para hacer una mezcla homognea.
4. Desechar las dos primeras gotas y la tercera colocarla entre la cmara de Neubauer y el
cubreobjetos.
5. Observar al microscopio con el objetivo seco dbil (10 x /0.22) y contabilizar los
leucocitos en los 16 cuadros (sealado en el esquema) de los 4 cuadrantes de la cmara.
1

2
Observacin del campo
En el microscopio

Representacin del rayado de la Cmara de Neubauer.

6. Clculo:

Nmero de leucocitos por mm3 = leucocitos contados x 50

VALORES DE REFERENCIA:
Leucocitos x mm3 : 5 000 a 10 000

b) Diferenciacin de leucocitos. (apoyarse en el esquema de tipos celulares)


8

Una parte importante de la biometra hemtica es el examinar los frotis sanguneos, y la


fidelidad de la informacin as obtenida depende de la calidad de las extensiones. Cada
tipo de clula (neutrfilos, linfocitos, monocitos, eosinfilos y basfilos, en orden
decreciente de cantidad), tiene su funcin particular en la defensa del organismo contra las
amenazas exgenas.
Preparacin del frtis sanguneo:
1. Con ayuda del tapn del tubo de ensaye depositar una pequea gota de sangre en uno de
los extremos de un portaobjetos.
2. Colquese el extremo de un segundo portaobjetos sobre la gota de sangre, recorriendo la
superficie en la siguiente forma:

portaobjetos
deslizar en
esta direccin
mantener fijo el portaobjetos
Gota de sangre pequea

3. Dejar secar el frotis al aire


4. Sumergir el frotis en la solucin fijadora 5 veces durante 1 seg. c/u, escurrir el exceso.
5. Sumergir el frotis en el hemocolorante # 1, 5 veces durante 1 seg. c/u escurrir el exceso.
6. Sumergir el frotis en el hemocolorante # 2, 5 veces durante 1 seg. c/u escurrir el exceso.
7. Lavar con agua destilada y dejar secar.
8. Observar al microscopio con objetivo de 100 x /1.25 con una gota de aceite de
inmersin, segn el esquema siguiente:

VALORES DE REFERENCIA:

Neutrfilos segmentados
Neutrfilos en cayado
Esosinfilos
Basofilos
Monocitos
Linfocitos

55 65 %
3 - 5 %0
0.5 4 %
0 - 0.5 %
4 -8 %
25 - 35 %

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6. Edicin 1978. Editorial Salvat.
2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
3. Marcus A. Krupp.et.al. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8.edicin
1985. Editorial Manual Moderno.
4.Alfonso Balcells. Ka Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.

10

GRUPOS SANGUINEOS Y RH
INTRODUCCIN
La determinacin del grupo sanguneo a que pertenece el sujeto est indicada,
corrientemente, ante la inminencia de una transfusin sangunea, para evitar accidentes
inmediatos. Hoy se sabe que, adems del sistema ABO, existen otros muchos sistemas
MNSs, P, Q, Lutheran, Kell-Cellano, Lewis, Duffy, Sutter, Kidd y sobre todo, por su
importancia clnica, el Rh- independientes del primero y entre si, de modo que cada
individuo tiene unos caracteres hemticos constitucionales que le son propios y que
dependen de la combinacin gentica de los distintos factores.1,2
El primer sistema de grupos sanguneos se describi al inicio del siglo XIX por Karl
Landsteiner. El observ que los eritrocitos de algunos individuos se aglutinan cuando se
mezclan con el suero de otros, pero no con su propio suero. Mediante esta tcnica de
aglutinacin se calsifican a los eritrocitos individuales en cuatro tipos: A, B, AB, y O. Los
estudios realizados por Landsteiner, llevaron a establecer que solamente se necesitan dos
tipos de antgenos para explicar la presencia de los cuatro grupos sanguneos del sistema.
Los determinantes antignicos de este sistema, son molculas de carbohidratos, ubicados en
la superficie de la membrana eritrocitaria; su especificidad o diferenciacin reside en los
azcares terminales de un oligosacrido. La expresin de los determinantes antignicos
sigue un control gentico, que ocurre a travs de la produccin de enzimas transferasas que
conjugan los azcares terminales a un carbohidrato original. Por tanto, se ha establecido
que genes codifican a dichas enzimas par la manifestacin del antgeno especfico, siendo
los genes allicos A, B y H respectivamente los que determinan la conjugacin de los
azcares. El gen H codifica para la enzima fucosiltransferasa que efecta la adicin de la
fucosa a la cadena precursora y completa la cadena original de la cual se derivan los otros
antgenos.
El gen A codifica a la transferasa que va a conjugar la N-acetilgalactosamina a la cadena
original completa, producindose as antgeno de tipo A. Las transferasas del grupo B
conjugan a la cadena original la galactosa terminal expresando as el antgeno B.
Existe tambin en el sistema el gen O que no produce transferasa por lo tanto no modifica
la sustancia H o cadena original:

ESTRUCTURA QUMICA DE LOS ANTGENOS DEL SISTEMA ABO

GlucNac

Gal

GlcNac

Gal

ANTGENO A

Fuc

11

Gal

Gal

GlcNac

Gal

ANTGENO B

GlcNac

Gal

ANTGENO H

Fuc

Gal

Fuc

En el sistema ABO existen para cada antgeno en el suero la presencia de anticuerpos


(aglutininas), considerados naturales y los anticuerpos inmunes. Los anticuerpos naturales
son inmunoglobulinas de tipo IgM que en ocasiones puede activar el sistema de
complemento. Dentro de este tipo de anticuerpos se consideran a los anti-A y ant-B, los
cuales se originan de manera natural sin que el individuo haya recibido algn evento
inmunizante. Los anticuerpos llamados inmunes son aquellos que se producen en un
individuo como respuesta a una inmunizacin. En estos ltimos se encuentran anticuerpos
conocidos pero que han sufrido algn cambio conformacional o mal formados.
Los anticuerpos inmunes en algunos casos son IgG que son peligrosos por que pueden
atravesar la barrera placentaria y pueden reaccionar con algunos antgenos causando
hemlisis en las clulas sanguneas por lo que se conoce a estos anticuerpos tambin con el
nombre de hemolisinas.
Landsteiner, al efectuar reacciones angeno-anticuerpo establece una relacin recproca
entre los antgenos de los eritrocitos y los anticuerpos presentes en el suero. La presencia
de un antgeno en el eritrocito significa la ausencia de su aglutinina correspondiente en el
suiero.3
A parte la prevencin de los accidentes transfusionales, el inters clnico de la
determinacin del factor Rh estriba en el reconocimiento y prevencin de la eritroblastosis
fetal por incompatibilidad materno-fetal. Tiene su importancia tambin en medicina legal
(exclusin forense de la paternidad y criminologa).1,2
En la raza blanca, el 84% de los individuos son Rh-positivos y slo el 16% Rh-negativos.
Una madre Rh-negativa desarrolla anticuerpos frente a los hemates del feto, si ste es Rh positivo, desencadenando una eritoblastosis fetal, enfermedad hemoltica intrauterina,
responsable de abortos por hidropesa fetal o mortinatos, de ictericia grave en el recin
nacido con trastornos cerebrales (Kern ikterus) irreversibles o simplemente de una anemia
hemoltica en los casos menos graves .1,2

12

Naturalmente, esto tiene lugar porque el padre es Rh-positivo, ante la consulta de una
mujer, a resultas de una determinacin prematrimonial de los grupos sanguneos, sobre la
conveniencia eugensica de tal enlace, tngase en cuenta que la concepcin de los hijos que
incurran en la eritroblastosis fetal es slo una posibilidad remota y desde luego dependiente
del carcter homocigtico o heterocigtico del padre. En este ltimo caso, el 50% de los
hijos sern Rh-positivos y, por otra parte, un nmero relativamente pequeo entre los
matrimonios Rh+ /Rh- tienen hijos con eritoblastosis fetal .1,2
El primer hijo suele quedar indemne, y el segundo, aunque sufra la enfermedad, por lo
general sobrevive. Hay casos, sin embargo, en que el primognito nace muerto, lo cual
obedece probablemente a que la madre esta previamente sensibilizada por transfusiones de
sangre del grupo Rh-positivo. Por esto es inadmisible, actualmente, utilizar dadores Rh
positivos para las nias y mujeres antes del climaterio sin averiguacin previa de sus grupos
sanguneos.1,2
El enjuiciamiento serolgico de una gestante requiere, no obstante, ciertas cautelas. Aunque
un ascenso del ttulo de anticuerpos Rh en los ltimos meses del embarazo corresponde
verosmilmente a la incompatibilidad maternofetal, puede tratarse todava de una reaccin
inespecfica, anamnsica, por parte de la madre Rh-negativa, ante estmulos
intercurrentes desconocidos. Por tanto, no es sensato hacer pronstico absoluto ante partum
en relacin al feto a resultas de los anticuerpos maternos (Wolman). Estos pueden deberse a
transfusiones anteriores al presente embarazo. El feto actual puede ser Rh-negativo como la
madre y no afectarse por aquellos anticuerpos (Wolman). Sin embargo, como advierte
Vives Ma, la comprobacin de anticuerpos incompletos monovalentes, mediante test de
Coombs Indirecto, en la sangre de la madre y a ttulo progresivo, en los ltimos meses del
embarazo, hace posible la presentacin de accidentes en el nio.1,2
La conducta que hay que seguir ante un posible caso de incompatibilidad materno fetal es
la siguiente:1,2
1. Averiguar el Rh de la madre. Esto debiera generalizarse a toda mujer embarazada; y es
ms, toda mujer debiera conocer su Rh.
2. Si la madre es Rh-negativa, debe averiguarse tambin el Rh del marido. Si se es
positivo, el problema est en potencia.
1. Practicar con el suero de la madre frente a hemates grupo O Rh-positivos el test
de Coombs Indirecto. Si es positivo, la madre est inmunizada, bien por el nio que
va a nacer, bien por anteriores transfusiones Rh positivas, etc..
2. Practicar durante el embarzo, especialmente los ltimos meses, la titulacin de
anticuerpos. Un ttulo alto aislado tiene menos valor que un ttulo bajo, pero
creciente, en relacin al pronstico.
3. Apenas nazca el nio, debe averiguarse su Rh (si es negativo no hay problema). Si
es positivo, debe practicarse un test de Coombs directo, que nos dir si los hemates
del nio estn recubiertos de anticuerpos bloqueantes.
4. Bilirrubinemia en el nio; con el test de Coombs Directo y la cifra de bilirrubina
sabremos si es necesaria una exanguinotransfusin.
5. Averiguar si el padre es homocigtico o heterocigtico, con vistas al pronstico en
futuros embarazos.

13

OBJETIVO:
Determinar mediante reacciones antgeno-anticuerpo el tipo sanguneo y factor Rh de una
muestra hemtica.
MATERIAL Y EQUIPO:
Jeringa con aguja hipodermica
Torundas de algodn
Alcohol desnaturalizado
Tubos de 13 x 100mm.
Tapones
Gradilla
Portaobjetos o placas cncavas
Aplicadores de madera
E.D.T.A.
Lancetas
Suero Anti-A
Suero Anti-B
Suero Anti-Rh o D
Solucin salina 0.9%
Sangre capilar o venosa (se extraer en laboratorio)

PROCEDIMIENTOS:
a) Mtodo de portaobjetos.
1.-Depositar una gota de sangre anticuagulada en 3 pozos de una placa cncava
respectivamente.
2. Agregar una gota de suero anti-A , anti B y anti D Rh (una para cada pozo
respectivamente).
3.-Mezclar con un aplicador de madera y agitar con movimientos de balanceo por unos
segundos y observar resultados como mximo a los dos minutos.

14

4. INTERPRETACIN:
GRUPO
A, Rh positivo
A, Rh negativo
B, Rh positivo
B, Rh negativo
AB, Rh positivo

Anti-A
+
+
+

Anti-B
+
+
+

Anti-D Rh
+
+
+

AB, Rh negativo
O, Rh positivo
O, Rh negativo

+
-

+
-

+
-

NOTA: (+) = Aglutinacin


(- ) = No aglutinacin

b) Mtodo de tubo de ensayo


1. Lavar los eritrocitos con solucin salina al 0.9% , 3 veces por 3min c/u.
1. Preparar una suspensin al 5% de eritrocitos en solucin salina (0.25mL de eritrocitos +
4.75mL de solucin salina al 0.9%)
2. En tres tubos de ensayo depositar una gota de suero anti-A , anti B y anti D Rh
(una para cada uno).
3. Agregar una gota de la suspensin al 5% de eritrocitos a cada tubo.
4. Mezclar y centrifugar a 2500 rpm por 1 min.
5. Resuspender el paquete globular mediante ligera agitacin y examinar la presencia o
ausencia de aglutinacin.
6. Interpretar como en el mtodo anterior.

BIBLIOGRAFA:
1. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
2 .Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.
3. Tesina de Banco de Sangre del Seminario de Titulacin de la Carrera de Q.F.B.
Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas de la Universidad Autnoma de Campeche. 2001

15

TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)


INTRODUCCIN
Cuando uno sangra, el cuerpo inicia una serie de actividades que ayudan a que la sangre se
coagule, lo cual se denomina cascada de la coagulacin.
La coagulacin plasmtica cumple la funcin de generar fibrina, polmero insoluble que
dar consistencia y estabilidad al cogulo.
El sistema plasmtico de la coagulacin est integrado por diversos factores que son
enzimas circulantes en forma inactiva (cimgenos) denominadas serin-proteasas. Desde el
punto de vista funcional, estn agrupados en tres sistemas: El de activacin intrnseca
(factores XII, XI, IX, VIII, precalicrena, y ciningeno de alto peso molecular); El de
activacin extrnseca (factor VII) y una va comn (factores V, X, II y I); Mientras que
desde el punto de vista bioqumico se pueden dividir en tres grupos: Grupo I del
Fibringeno, comprende los factores I, V, VIII y XIII; se hallan en los grnulos alfa de las
plaquetas, se consumen totalmente durante la coagulacin, no se afectan por los
anticoagulantes ya que su sntesis no depende de vitamina K, se incrementan en la
inflamacin aguda y no se absorben con sulfato de bario o sales similares. Grupo II
Protrombnico. Incluye los factores II, VII, IX, X y las protenas C y S, se sintetizan en los
hepatocitos, para lo que requieren vitamina K; no se consumen por completo durante la
coagulacin, se afectan por ingesta de anticoagulantes orales y se precipitan con sulfato de
bario o hidrxido de aluminio. Grupo III del Sistema de activacin por contacto,
comprende los factores XII, XI, ciningeno de alto peso molecular y precalicrena, no se
consumen totalmente durante la coagulacin y precipitan con sulfato de bario e hidrxido
de aluminio.
La prueba del tiempo de protrombina (TP), como fue originalmente diseada por Quick, ha
sido utilizada ampliamente durante varios aos como una prueba pre-operatoria para
conocer ciertos factores de coagulacin y en el monitoreo de la terapia anticoagulante oral.
El TP es un examen de sangre que mide el tiempo que le toma a la porcin lquida de la
sangre (plasma) coagularse, es un examen de deteccin amplio para muchos tipos de
trastornos hemorrgicos e indicado cuando hay signos de un trastorno de coagulacin de la
sangre.
Este examen mide la capacidad de coagulacin de los factores I (fibringeno), II
(protrombina), V, VII y X. (activadores del sistema extrnseco) Cuando cualquiera de estos
factores no est presente, el tiempo de protrombina se prolonga.
El tiempo de protrombina de un estado, mide el tiempo de coagulacin del plasma de
prueba despus de la adicin del reactivo de Tromboplastina que contiene cloruro de calcio.
El reactivo proporciona una fuente de tromboplastina tisular activando el factor VII, y es
por lo tanto sensible para todos los factores de las fases II y III. La deficiencia en los
factores de la fase I (VII, IX, XI, y XII) no se detectan con la prueba.
El dicumarol y algunas drogas relacionadas reducen la actividad de los llamados factores
complejos de protrombina II, VII, IX y X. Como la prueba de tiempo de protrombina es
16

sensible a las deficiencias de todos estos factores excepto el IX, se ha probado que es til en
el monitoreo de la terapia anticoagulante oral y como prueba funcional heptica.

OBJETIVO:
Determinar el tiempo de protrombina de una muestra sangunea problema a fin de
establecer su correlacin clnica con algunos trastornos de la coagulacin sangunea.
MATERIAL Y EQUIPO:
Citrato de sodio al 3.8%
Jeringa con aguja hipodrmica
Tubos de ensayo 13x100mm
Pipetas de 1mL
Pipetas Pasteur
Bao de Mara
Cronmetro
Soluplastin (un vial)
Gasas
Preparacin de la muestra:
Obtenga la muestra en condiciones aspticas.
Mezcle 0.2mL de citrato de sodio con 1.8mL. de sangre venosa
Centrifugue la muestra a 3400rpm por 3min.
Retire el plasma y colquelo en otro tubo.
PROCEDIMIENTO
Colocar el plasma en bao de agua a 37C durante 2-3min
En un tubo de ensayo colocar0.2mL de soluplastin reconstituido y preincubar a 37C
durante 2-3min.
Pipetear 100L de plasma preincubado y agregar rpidamente al tubo conteniendo 0.2mL
de soluplastin, disparando simultneamente el cronmetro.
Mantener el tubo dentro del bao y cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado
de coagulacin, sacar el tubo del bao, inclinar suavemente una o dos veces por segundo y
detener el cronmetro en el momento de la aparicin del cogulo.
Reporte los resultados como tiempo de protrombina en segundos.
VALORES NORMALES
El rango normal es de 11 a 13.5 segundos, sin embargo, el concepto de "normal" vara de
un laboratorio a otro.
El tiempo de protrombina ser ms prolongado en personas que toman anticoagulantes.
Significado de los resultados anormales
El aumento en los tiempos TP puede deberse a:
Obstruccin de las vas biliares
Cirrosis
Coagulacin intravascular diseminada
Hepatitis
17

Sndrome de Malabsorcin
Deficiencia de vitamina K
Terapia con cumadina (warfarina)

Deficiencia del factor VII (proconvertina - factor estable)


Deficiencia del factor X (Stuart Power)
Deficiencia del factor II (protrombina)
Deficiencia del factor V (proacelerina-factor lbil)
Deficiencia del factor I (fibringeno)

BIBLIOGRAFA
1. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003652.htm
2. Quick, A.J.Haemorragic diseases. Philadelphia. Lea & Febiger- 1957
3. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003652.htm
4. Ferri FF. Ferris Clinical Advisor: Instant Diagnosis and Treatment. 2005 ed. St.
Louis, Mo: Mosby; 2005:1365.
5. Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al. Hematology: Basic Principles and Practice.
4th ed. Orlando, Fl: Churchill Livingstone; 2005:2004-2005.
6. 4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial
Masson.
7. Wiener Lab. Soluplastin. Instructivo 2000.
8. G.J. Ruiz Arguelles. Fundamentos de Hematologa.Edicin 1995.Editorial
Panamericana

18

PRUEBAS DE COAGULACIN
TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA (TPT)
INTRUDUCCIN
Llamado tambin Tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) Tiempo de
Cefalina, es una prueba sensible a la deficiencia de factores procoagulantes del plasma as
como a la presencia de ciertos factores de la coagulacin, examina el tiempo que le toma a
la sangre coagularse y puede ayudar a establecer si una persona tiene problemas de
sangrado o coagulacin, en s este mtodo sirve para comprobar la existencia de todos los
factores de la va intrnseca (XII, XI, IX y VIII), as como los de la va comn ( X,V,
Protrombina(II) y fibringeno(I) ), el factor Fletcher, no siendo as con los trastornos
plaquetarios, las deficiencias de los factores VII y XIII, ni los problemas vasculares.
La prueba es muy adecuada para determinar problemas de sangrado o coagulacin de la
sangre, as como para el control de la teraputica anticoagulante por heparina. Tambin
permite la identificacin rpida de hemoflicos en potencia, a fin de poder someterlos a
tratamientos preventivos pre quirrgicos y evitar problemas hemorrgicos.
Este examen generalmente se hace junto con otros exmenes, como un examen de
protrombina.
OBJETIVO
Determinar el tiempo parcial de tromboplastina de una muestra sangunea problema a fin de
establecer su correlacin clnica con algunos trastornos de la coagulacin sangunea.
MATERIAL Y EQUIPO
Citrato de sodio al 3.8%
Jeringa con aguja hipodrmica
Tubos de ensayo 13x100mm
Pipetas de 1mL
Pipeta Pasteur
Bao de Mara
Cronmetro
APTTest
Cloruro de calcio 0.025mol/L
Plasma humano
Gasas
Preparacin de la muestra:
Obtenga la muestra por venopuncin
Mezcle 0.2mLde citrato de sodio con 1.8mL. de sangre venosa
Centrifugue la muestra a 3400rpm por 3min.
Retire el plasma y colquelo en otro tubo.
PROCEDIMIENTO
19

Precalentar el cloruro de calcio antes de realizar la prueba en bao de agua a 37C


En un tubo de ensayo colocar 0.1mLde plasma problema
Aadir 0.1mL de APTT, mezclar e incubar 3 min. a 37C.
Agregar 100L de cloruro de calcio y disparar simultneamente un cronmetro
Agitar brevemente para homogenizar el contenido, mantener en el bao unos 25seg- .
Luego sacar el tubo del bao, inclinar suavemente una o dos veces por segundo y detener el
cronmetro en el momento de la aparicin del cogulo.
Reporte los resultados como tiempo parcial de tromboplastina en segundos.
VALORES NORMALES
Entre 25 a 35 segundos.
El alargamiento del tiempo ocurre de forma patolgica cuando alguno de los factores est
por debajo de 15 -20% de su concentracin normal. No se altera en la ditesis broncopatica
o angiopticas.
Si la persona est tomando anticoagulantes, la coagulacin toma hasta 2 veces ms
tiempo.
Los medicamentos que pueden afectar los resultados de un examen TPT abarcan
antihistamnicos, vitamina C (cido ascrbico), aspirina y clorpromazina (Thorazine).
Significado de los resultados anormales
Un resultado de TPT anormal (demasiado prolongado) puede deberse a:
Cirrosis
Coagulacin intravascular diseminada (CID)
Deficiencia del factor XII
Hemofilia A
Hemofilia B
Hipofibrinogenemia
Malabsorcin
Enfermedad de von Willebrand
Anticoagulantes para lupus
BIBLIOGRAFA:
Ferri FF. Ferris Clinical Advisor: Instant Diagnosis and Treatment. 2005 ed. St. Louis,
Mo: Mosby; 2005:1365.
Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al. Hematology: Basic Principles and Practice. 4th ed.
Orlando, Fl: Churchill Livingstone; 2005:2004-2005.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003653.htm
Lynch Mattew J. Mtodos de Laboratorio Vol. 1. 2 edicin. Editorial Manual Moderno.
Impreso en Mxico, 1987
Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
Viener Lab. APTTest. 2000 Rosario - Argentina.
G.J. Ruiz Arguelles. Fundamentos de Hematologa.Edicin 1995.Editorial Panamericana

20

QUMICA SANGUNEA
DETERMINACIN DE GLUCOSA
INTRODUCCIN:
La glucosa es un substrato hidrosoluble que constituye el principal alimento energtico de
las clulas. Es absorbida, casi siempre, bajo la forma de polisacridos (almidn,
glucgeno), o de disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa). Estas substancias son degradadas
parcialmente por la accin de la amilasa salivar y posteriormente por una hidrlisis cida en
el estmago. Los oligsidos liberados son escindidos por las amilasas pancreticas y los
disacridos intestinales en monosacridos, de los cuales el principal es la glucosa. La
absorcin de la glucosa a nivel de tubo digestivo es un mecanismo de transporte activo que,
una vez entrado en circulacin, se reparte entre los diferentes compartimentos: circulatorio
(sanguneo, linftico), intestinal y tisular. A nivel del hgado y de los msculos, la forma
primaria de almacenamiento de la glucosa es el glucgeno (polmero de almacenaje). La
glucosa circulante es captada por las clulas de los diferentes rganos y les sirve de
substrato energtico principal (gluclisis). En caso de necesidad energtica anormal
(esfuerzo), hay una movilizacin de glucgeno (glucogenlisis) y/o una biosntesis de
glucosa (neoglucogenlisis). La correlacin con el estudio del metabolismo de la glucosa es
esencial para poder apreciar las variaciones en la concentracin sangunea de la glucosa que
pueden reflejar alteraciones primarias del metabolismo de los carbohidratos al igual que ser
manifestaciones secundarias que acompaan a otras enfermedades. Tras la absorcin de
glucosa a la sangre, los niveles normales en ayunas, que oscilan entre 60 y 90 mg/100
mL.de sangre, se elevan a 120 150mg /100mL. o incluso ms. En los sujetos normales,
estos niveles de glucosa bajan enseguida de sus valores mximos, de manera que tras de
1:30hs.a 2 hs, se vuelven a alcanzar los niveles que en ayunas. Sin embargo, el diabtico es
incapaz de utilizar de manera eficiente la glucosa administrada y los niveles hemticos
despus de la ingestin de glucosa retornan al nivel basal slo despus de un perodo
prolongado de tiempo. El mantenimiento de la glucemia en unos valores normales asegura
una aportacin energtica permanente a las clulas.
Normalmente de 80 a 120 mg/100mL, segn los mtodos clsicos de Hagedorn-Jensen,
Folin, etc. En la actualidad, con las tcnicas enzimticas, se determina la glucemia
verdadera, y su concentracin normal en sangre oscila entre 60 y 100mg/100mL. Para
equivalencias en la glucemia: 100mg/100mL. = 5.5 mmol/L. Existe una diferencia de 10 a
20 mg/100mL. Entre la glucemia de la sangre capilar y de la venosa, en sta menos.

OBJETIVO:
Determinar la concentracin de glucosa sangunea central y perifrica, para correlacionar su
importancia clnica.

21

MATERIAL Y EQUIPO:
Jeringa con aguja hipodrmica de 3 mL.
Torundas de algodn
Alcohol desnaturalizado
Tubos de 13 x 100mm.
Pipetas de 1 y 5 mL.
Micropipeta de Volumen variable
Puntillas para micropipeta
Gradilla
Centrfuga
Espectrofotmetro
Bao Mara
Tiras reactivas de Glucosa Accu-Chek
Kit de Glucosa SPINREACT
ACCU-CHEK, SENSOR
E.D.T.A.
* Plasma suero
* Sangre capilar
* Se extraern al mismo paciente en el laboratorio
PROCEDIMIENTO:
PREPARACIN DEL REACTIVO
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 Enzimas en un frasco
de R 1 Tampn.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 1 mes en nevera (2-8C) o 7 das a Temperatura
ambiente (15-25C)

PROCEDIMIENTO
Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (490-550)
Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C
Ajuste a cero el espectrofotmetro con blanco de reactivo
Pipetear en tres tubos:
PATRN
MUESTRA
REACTIVO (RT)

BLANCO
1.0 mL.

PATRN
10 L.
1.0 mL

MUESTRA
10 L.
1.0 mL

22

Mezclar e incubar 10 min. A 37C, o 20 min. A temperatura ambiente.


Coloracin estable 30 min.
Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es
estable como mnimo 30 minutos.
Clculo:
(A) Muestra
Mg/dL Glucosa = --------------------------- x 100
(A) Standard
Linealidad:
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL . si la concentracin de glucosa es superior
a 400mg/dL diluir la muestra a 1:2 con solucin salina y multiplicar el resultado por 2.

VALORES DE REFERENCIA:
De 60 a 110 mg/dL

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6. Edicin 1978. Editorial Salvat.
2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
3. Marcus A. Krupp.et.al. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8.edicin
1985. Editorial Manual Moderno.
4.Alfonso Balcells. Ka Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.
5.SPINREACT, Test GOD-POP. SPINREACT,S.A.U. Ctra.Santa Coloma. SPAIN.

23

DETERMINACIN DE CREATININA Y DEPURACIN DE


CREATININA
INTRODUCCIN:
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la
creatina por prdida de una molcula de agua (anhdrido). A su vez, la creatina se produce
por hidrlisis del fosfato de creatina, por accin de la creatin-fosfo-quinasa (CPK),
apareciendo como metabolitos de dicha reaccin del fosfato energtico y la creatina. El
radical fosfato puede aportar energa directamente por dicha reaccin o a travs de su
acoplamiento a una molcula de ADP para formar ATP y posterior hidrlisis por accin de
la ATPasa. En el msculo estriado, se encuentra el 98% de toda la creatina del organismo.
La cantidad de creatinina excretada est en relacin con el desarrollo muscular del
individuo y por esto es mayor en el hombre que en la mujer, y en los atletas que en los
individuos no musculados. Los niveles de creatinina sangunea se utilizan como ndice de la
funcin renal, debido a que es una sustancia que no tiene umbral renal, o sea que, en cuanto
aparece en sangre, es eliminada y conserva niveles muy bajos en sangre, cuando este nivel
aumenta, se debe a una nefropata. La eliminacin de la creatinina en la especie humana
tiene lugar casi exclusivamente a travs de la filtracin glomerular, siendo un importante
ndice del funcionalismo renal. La elevacin de su valor suele ir parejo con la urea, an
cuando es ms tarda, en la uremia prerrenal circulatoria la creatinina aumenta tambin,
pero no en la histoltica ( sangre en intestino, etc..) A diferencia de la urea, la eliminacin
de la creatinina por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una
misma persona es muy constante su eliminacin diaria con casi independencia de la dieta
alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante ms directo de su excrecin
total por da.
Tiene particular inters diagnstico y pronstico en los siguientes casos:
Nefropata. Cuando es una insuficiencia renal con uremia se observan cifras de creatinina
superiores a 5mg%, el pronstico es fatal a corto plazo. Esto solo sucede en las fases
avanzadas ya que en los precoces, dada la facilidad de eliminacin de creatinina, solo
aumenta el cido rico y la urea. En la Nefritis aguda generalmente no hay elevacin, en los
casos en que existe (40%) es un cambio reversible y de escaso valor pronstico. En la
Nefrosis por txicos (Hg y Ag) es donde se observan mayores elevaciones. En la
Insuficiencia circulatoria con dficit prerenal de sangre al rin: Insuficiencia cardaca
avanzada, hipovolemia por deshidratacin y deplecin salina (digestiva, sudoral profusa,
diurtica-coma diabtico-, ciertas insuficiencias suprarrenales, etc.). En Obstrucciones
urinarias ( afecciones de prstata, vejiga, urter, etc.) y en la anuria refleja (clculos
uretrales, etc.) se producen as mismo elevaciones marcadas de la creatinina (incluso 30mg
o ms), igualmente reversibles con la reparacin de la obstruccin. En el Gigantismo y en
la Acromegalia, discretas elevaciones.

24

Pruebas de Depuracin. Estas pruebas se han ideado para medir la capacidad de los riones
para depurar la sangre de productos de desecho o materiales extraos (inulina, yodopiracet,
etc.) y excretadas en la orina. Si se conoce la concentracin sangunea del material de
prueba y la cantidad eliminada en orina, se puede determinar la depuracin en trminos de
mililitros de sangre depurada por unidad de tiempo. La creatinina se filtra a nivel del
glomrulo. En condiciones normales, la depuracin de creatinina endgena se acerca a la
tasa de filtracin glomerular.
En resumen podemos decir que la eliminacin de creatinina es un intervalo de 24Hs en un
valor muy constante, dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y es
que por otro lado el clculo del aclaramiento de la creatinina ser un parmetro directo del
funcionalismo renal. Se pueden usar perodos de depuracin de 2 a 6 hs. Para el perodo de
depuracin corto es preferible que el enfermo se encuentre en ayunas. Se obtiene una
muestra urinaria correspondiente a 2 6 hs. y se toma una muestra de sangre
aproximadamente en el punto medio del perodo de recoleccin de la orina. Para el clculo
de la depuracin se determina las concentraciones de creatinina en plasma y orina, as como
el volumen urinario.
Es esencial el cuidado en las determinaciones qumicas de la creatinina. Pueden observarse
falsos resultados bajos de depuracin, debido a la presencia del cromgeno no creatinnico
plasmtico, como ocurre en algunos enfermos con cardiopatas. En caso de insuficiencia
renal avanzada, la secrecin tubular de creatinina es la responsable de una proporcin
significativa del total de creatinina excretada. En presencia de insuficiencia renal crnica, la
depuracin de creatinina, da valores ms altos que los de inulina.

OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de Creatinina y Depuracin en una muestra problema,
mediante el empleo de una prueba cintico-calorimtrica a fin de establecer su importancia
en el diagnstico clnico de patologas relacionadas con el funcionamiento renal.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Probeta
Gradilla
Pipetas Pasteur
Pipetas graduadas de 2mL
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Espectrofotmetro
Kit cintico-colorimtrico de Creatinina, MEXLAB
Suero y Orina de 24hs. Problema

25

TCNICA:
a) Preparacin de reactivo y muestra
1. Mezclar a partes iguales los reactivos R1 y R2, segn la necesidad.
2. En el caso de la orina, diluir esta 1:10 con agua destilada y multiplicar el resultado x 10.
b) Mtodo
Standard
Muestra
Suero u orina diluida
-100L
Standard
100L
-Mezcla reactiva
1.0mL
1.0mL
Mezclar y poner en marcha el cronmetro.
Anotar la Absorbancia (A) a los 30seg. (A1), y a los 90 seg. (A2)
Lectura a 505 nm (490 520)
c) Nomogramas para la determinacin de la superficie corporal de nios y adultos:

26

d) Clculos
(A2 - A1) muestra
mg/dL creatinina = ---------------------------- x 1.5
(A2 - A1) standard
Depuracin de Creatinina
27

V x O
CL = -----------S x 1440
CL = Depuracin de creatinina (mL/min)
V = volumen de orina de 24hs (mL)
O = Concentracin creatinina en orina (mg/dL)

S = Concentracin de creatinina en suero (mg/dL)


Depuracin Corregida:
Depuracin
De
Creatinina

1.73 metros cuadrados


X ------------------------------------ = Depuracin Corregida
Superficie corporal

e) Valores de referencia:
Creatinina:

Suero : 0.7 1.4 mg/dL


Orina : 15 25 mg/Kg/24hs.

Depuracin de Creatinina Corregida


Hombres : 110 150 mL/min.
Mujeres : 105 132 mL/min.

BIBLIOGRAFA:
1. Todd Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.

3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8. Edicin.


Editorial Manual Moderno.
4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
5. Instructivo Test cintico-colorimtrico. MEXLAB.

28

DETERMINACIN DE UREA
INTRODUCCIN:
La urea es el principal componente nitrogenado de la orina y producto del metabolismo
proteico.
Los aminocidos absorbidos en las vellosidades intestinales pasan de la vena porta al
hgado, son desaminados, esto es, pierden sus grupos amino nitrogenados que son
transformados en amoniaco. Este ltimo es muy txico especialmente para el cerebro, razn
por la cual debe ser eliminada con la misma rapidez con que se forma. En el hgado el
amoniaco se combina con bixido de carbono para formar urea, que es liberada en la sangre
y secretada al final en la orina.
La urea se forma principalmente en el hgado (de menor cantidad en el rin) a partir del
amoniaco, de ciertos grupos aminos y del CO2, en presencia de ATP, por medio de una
secuencia cclica de reacciones enzimticas mismas que pueden esquematizarse:
Ornitina

+ CO2 + NH3 Citrulina

Citrulina + NH3

Arginina + H2O

arginasa
------------- Ornitina

Arginina

Urea

La urea, producto final del metabolismo proteico, se excreta por el rin, en el filtrado
glomerular, la concentracin de urea es la misma que la del plasma. La resorcin tubular
de la urea vara en forma inversamente proporcional a la velocidad de flujo urinario. Por
esto, la urea es una medida de la filtracin glomerular menos til que la creatinina, ya que
esta ltima no se resorbe. El nitrgeno de la urea sangunea vara directamente con la
ingestin proteica e inversamente con la tasa de excrecin de la urea.
El valor srico se halla elevado en los casos siguientes:
a) Insuficiencia renal: nefritis, aguda y crnica, insuficiencia renal aguda (necrosis tubular) obstruccin de las
vas urinarias.

b) Aumento del metabolismo nitrogenado asociado con disminucin del flujo renal
sanguneo o funcin renal alterada. Deshidratacin de cualquier ndole, hemorragia
gastrointestinal (combinacin de una absorcin proteica elevada por la ingestin de la
sangre, junto con disminucin del flujo renal)
c) Disminucin del flujo sanguneo renal:
ocasionalmente insuficiencia cardiaca congestiva.

Choque,

insuficiencia

suprarrenal,

29

El valor srico se halla disminuido en los casos siguientes: En la insuficiencia heptica,


nefrosis no complicada por insuficiencia renal y caquexia. Casos raros pero probables:
Ingesta elevada de bebidas o administracin endovenosa abundante de lquidos; durante el
embarazo, por aumento del filtrado glomerular.
Efecto de los medicamentos sobre los resultados de laboratorio: elevados por muchos
antibiticos que alteran la funcin renal, por la guanetidina, metildopa, indometacina,
isoniacina, propranolol y los diurticos potentes ( volumen sanguneo y flujo renal
sanguneo disminuido)
OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de Urea en una muestra problema, mediante el empleo de una
prueba cintico Ureasa a fin de establecer su importancia en el diagnstico clnico de
nefropatas y/o enfermedades extrarrenales.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Pipetas graduadas de 2mL
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Espectrofotmetro
Kit cintico UV de Urea, SPINREACT
Suero problema
TCNICA:
a) Preparacin de reactivo (RT)
Disolver el contenido del vial de enzimas R2 en el frasco de solucin Tampn R1
b) Mtodo
Temperatura .......................
Longitud de onda ...............
Paso de luz .........................
Lectura ...............................

25/30/37C
340nm
1 cm
frente al blanco de reactivo.

Pipetear en 3 tubos:
BLANCO
PATRN
MUESTRA
REACTIVO (RT)
1mL
1mL
1mL
PATRN
10 L
MUESTRA
10 L
Mezclar y anotar la disminucin de extincin entre los 30 y los 90 segundos ( extincin)

30

c) Clculos
A= A1 A2
Con las diferencias de extincin anotadas, aplicar la siguiente ecuacin:
extincin muestra
------------------------ extincin patrn

50 = Conc. Muestra

d) Valores de referencia:
Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 gr/24hs.

BIBLIOGRAFA:
1. Todd Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.

3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8. Edicin.


Editorial Manual Moderno.
4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
5. Instructivo Test cintico UV , spinreact.

31

LPIDOS
LDL-COLESTEROL, HDL-COLESTEROL
INTRODUCCIN

Desde la dcada de los cincuenta, en los pases industrializados el infarto es el principal


factor de muerte en la poblacin adulta. Durante los ltimos aos en Mxico se han
incrementado las cifras de defunciones por la misma causa, la proporcin en que se
manifiestan es de una mujer por cada seis hombres que sufren de infartos.
Investigaciones especializadas arrojan que entre las causas principales del incremento de
infartos se considera el exceso de colesterol en la sangre, tambin conocido como
hipercolesterolemia, que imposibilita al flujo sanguneo transitar por las arterias de manera
que irrigue adecuadamente a rganos como el cerebro o el corazn, principalmente.
El colesterol es una sustancia grasa producida por el hgado y requerida para el
funcionamiento regular del organismo, que se desplaza por el torrente sanguneo hacia las
clulas en forma de paquetes llamados lipoprotenas. De presentarse en exceso, se acumula
en las paredes de las arterias formando placas, lo que limita su flexibilidad y reduce el flujo
de sangre hacia el corazn, proceso que recibe el nombre de aterosclerosis. Esta accin
causa dolor o inclusive angina de pecho, pero en el peor de los casos sobreviene un infarto.
El colesterol es necesario como protector de las membranas de las clulas de todo el
cuerpo, utilizando como va de transporte la sangre. Se reconocen tres tipos de colesterol: el
denominado total, que es el cmulo en todo el organismo. Otro es el llamado de baja
densidad (LDL), o tambin conocido como colesterol malo, que por su pequesimo
tamao perfora las paredes arteriales depositndose en ellas. Al abrir el poro de la arteria
ocasiona que sta se oxide, provocando su rompimiento y con ello la acumulacin de
glbulos rojos y plaquetas. Esta aglomeracin forma un trombo o cogulo que obstruye la
arteria e impide el libre trnsito de las sangre, por lo que la funcin irrigatoria al corazn u
otros rganos se torna inadecuada, y puede propiciar un infarto.
El tercer tipo es el de alta densidad o colesterol bueno (HDL), parte fundamental para la
sntesis que el propio organismo efecta de la adrenalina o las hormonas. La presencia de
HDL disminuye la concentracin de LDL en las arterias. Un elemento igualmente
importante en la evaluacin de grasa en la sangre son los triglicridos, derivados de
azcares que el organismo no necesita y que los transforma en grasas, por lo que tambin se
les considera parte del colesterol.
Como se ha mencionado, las clulas humanas contienen suficiente grasa para protegerse.
Sin embargo, un individuo se sobrecarga de ella cuando abusa de la ingesta de alimentos
que contienen colesterol, principalmente los de origen animal y sus derivados. El hgado es
el rgano encargado de inducir la grasa a las regiones del cuerpo en que hace falta o bien la
desaloja, pero si la cantidad es superior a la capacidad de procesamiento o si no cuenta con
los receptores adecuados del colesterol de baja densidad, ste es absorbido por la sangre
con las consecuencias mencionadas.
Con frecuencia, la cuantificacin de grasas, es un examen que se hace para determinar los
riesgos de arteriopata coronaria, dado que el nivel alto de colesterol y triglicridos en la
sangre ha sido asociado con ataque cardaco y accidente cerebrovascular.
El examen de colesterol total generalmente se hace como parte de un perfil lipdico, que
tambin verifica los niveles de LDL, HDL y triglicridos.

32

Las afecciones adicionales bajo las cuales se puede llevar a cabo el examen son:
Arterioesclerosis de las extremidades, Disbetalipoproteinemia familiar, Hipercolesterolemia
familiar, Hipotiroidismo primario, Hipotiroidismo secundario, Diabetes tipo I o tipo II,
Cirrosis biliar primaria
Significado de los resultados anormales.
En general, un valor de colesterol total por encima de 200 mg/dL puede significar que la
persona est en mayor riesgo de sufrir una cardiopata. Sin embargo, los niveles de LDL
son una mejor manera de predecir la cardiopata y determinan cmo se debe tratar el
colesterol alto.
Los niveles altos de colesterol total pueden ser causados por:
Cirrosis biliar, Hiperlipidemias familiares, Dieta alta en grasa, Hipotiroidismo, Sndrome
nefrtico, Diabetes no controlada.
Los niveles bajos de colesterol puede ser causados por:
Hipertiroidismo, Enfermedad heptica, Malabsorcin (absorcin inadecuada de nutrientes
desde el tracto intestinal), Desnutricin, Anemia perniciosa, Sepsis .
OBJETIVO
Cuantificar la concentracin de lipoprotenas de alta y baja densidad en una muestra de
suero problema, a fin de establecer su relacin e importancia clnica con los trastornos
cardiovasculares.
MATERIALES Y EQUIPO
Jeringa con aguja hipodrmica de 3 mL.
Torundas de algodn
Alcohol desnaturalizado
Tubos de 13 x 100mm.
Pipetas de 1 y 5 mL.
Micropipeta de Volumen variable
Puntillas para micropipeta
Gradilla
Centrfuga
Espectrofotmetro
Bao Mara
Kit ELI-Tech COLESTEROL HDL DIRECTO
Kit ELI-Tech COLESTEROL
Kit ELI-Tech TRIGLICERIDOS
Calibrador HDL-Colesterol. ELI-Tech.
Paciente o suero problema

33

PROCEDIMIENTO:
Longitud de onda............................600 nm (hasta 700)
Temperatura.................................... 37 C
Cubeta ............................................. 1 cm. Paso de luz
Leer contra blanco de reactivo
Pipetear en tres tubos:
BLANCO
CALIBRADOR
MUESTRA
REACTIVO 1
270L
270 L.
270L
AGUA DEST.
3L
CALIBRADOR
3L
MUESTRA
3L
Mezclar, esperar cuatro minutos, realizar la lectura de la densidad ptica y aadir 90L de
REACTIVO 2, mezclar y, tras una incubacin de cinco minutos, medir la densidad ptica.

Clculo HDL:

D.O. muestra
-------------------- x n
D.O. calibrador

n = concentracin del calibrador


VALORES DE REFERENCIA:
HDL:
Hombres: 35.3 79.5 mg/dL
Mujeres: 42.0 88.0 mg/dL
Para calcular LDL: (Frmula de Friedwald)
LDL = COL TOT HDL (TRIGLICRIDOS/5)

(NORMAL < 130)

VLDL = TRIGLICERIDOS/5
Indice aterognico:
COL TOT / HDL

(>5 ALTO RIESGO)

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6. Edicin 1978. Editorial Salvat.
2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
3. www.nutriscitech.com/chldx.htm
4.Alfonso Balcells. Ka Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.
5. Bayer. ELI-Tech, COLESTEROL HDL DIRECTO Argentina.
6. www.tuotromedico.com/temas/COLESTEROL_en_suero.htm
34

DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL


INTRODUCCIN:
El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medios acuosos y por tanto insoluble
en el plasma sanguneo. La circulacin sistemtica del colesterol es posible gracias a la
formacin de complejos solubles por su unin a protenas, las lipoprotenas sricas, y entre
ellas las de tipo low density lipoproteins (LDL) son las que representan el mayor
porcentaje, con aproximadamente un 60 70% del total. El hgado es el rgano principal
donde se produce la incorporacin del colesterol y otros lpidos a las lipoprotenas. As
mismo, en el hgado, se esterifica, con cidos grasos, la mayor parte de colesterol (60-75%
del total).
La dieta promedio (carne y yema de huevo especialmente) contribuye en una mnima
proporcin (fuente exgena) a la tasa total del colesterol corporal (endgeno ms exgeno).
En contraste con la sntesis endgena de alrededor de 1g/da, la dieta corriente produce
unos 0.3 g/da (aportacin exgena). El colesterol en asociacin con los quilomicrones, tras
su absorcin intestinal, pasa a la circulacin portal. El hgado extrae mucho del colesterol
exgeno. Sin embargo, los quilomicrones son distribuidos a los lugares hsticos donde se
libera colesterol a las clulas. La sntesis del colesterol ocurre sobre todo a nivel heptico,
pero tambin se realiza en otros muchos tejidos, incluyendo la corteza suprarrenal, aorta,
piel, intestinos y testculos. En su sntesis se lleva a cabo una serie compleja de reacciones
en las que interviene el acetilcoenzima A como fuente de todos los tomos de carbono y
varios intermediarios importantes, incluyendo el escualeno y lanosterol. Su conversin en
cidos biliares y la excrecin de esteroles neutrales a travs de la bilis y heces es papel
fundamental del hgado, que constituye la principal va (90%) de excrecin del colesterol.
La participacin intestinal en el metabolismo del colesterol se lleva a cabo a travs de la
circulacin enteroheptica del colesterol y sales biliares. El colesterol es de gran
importancia en la sntesis de las hormonas. La concentracin del colesterol sanguneo tiene
unas variaciones amplias que dependen de la edad. Aunque no puede ser sintetizado en
todos los tejidos, el colesterol est distribuido por todas las clulas y tejidos. Los jugos
biliares y pancretico son necesarios para la digestin y absorcin del colesterol en el
intestino.
La dieta rica en grasas saturadas hace que aumenten los niveles de colesterol al
incrementar la cantidad de grasas en el hgado.
Los niveles altos de colesterol en suero pueden guardar relacin con un mayor riesgo de
arteriopatas coronarias.

OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de Colesterol total en una muestra problema, mediante el
empleo de una prueba enzimtica a fin de establecer su importancia en el diagnstico
clnico de patologas relacionadas.

35

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipeta de 1 mL.
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Espectrofotmetro
Kit enzimtico de colesterol, SPINREACT.
Suero sanguneo problema
Bao Mara
PREPARACION DEL REACTIVO
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2
Enzimas en 1 frasco de R 1 Tampn.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad (RT): 4 meses en nevera (2-8C) o 40 das 15-25C
PROCEDIMIENTO:
Longitud de onda............................505 nm (490 550)
Temperatura.................................... 37 C
Cubeta ............................................. 1 cm. Paso de luz
Pipetear en tres tubos:
Blanco
Standard
Muestra
Patrn
-10L
-Muestra
--10L
Reactivo de uso
1.0 mL
1.0 mL
1.0 mL
Mezclar e incubar 5 min a 37C Ajustar el espectrofotmetro a 0 con el blanco de
reactivos. Leer contra blanco de reactivo
La coloracin es estable a 60 min.
Clculo
(A) muestra
----------------------- x 200
(A) patrn
VALORES DE REFERENCIA:
Menor a 200 mgdL
BIBLIOGRAFA:
1. Hamilton M.B. Rose. DIAGNOSTICO CLINICO.- 1 Edicin Editorial Interamericana,
Mxico 1985.
2. Lynch Mattew J. Mtodos de Laboratorio Vol. 1. 2 edicin. Editorial Manual Moderno.
Impreso en Mxico, 1987
3. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
4. Bayer.Test enzimtico-colorimtrico Colesterol ELI-Tech. Argentina.
36

DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS
INTRODUCCIN
Los Triacilglicridos son steres de glicerol y de tres cidos grasos, por lo regular esterico,
oleico y palmtico. Constituyen alrededor del 95 % del tejido adiposo y representan la
principal forma de almacenamiento de lpidos en el humano.
Los triglicridos sricos estn dispuestos en varios agregados o complejos lpidos,
fundamentalmente quilomicrones y protenas de muy baja densidad (VLDL), cuya funcin
principal es el transporte celular de los triglicridos de los alimentos. Los quilomicrones
son grandes partculas producidas en el intestino, muy ricos en triglicridos de origen
exgeno mientras que las protenas de muy baja densidad (VLDL) son algo ms pequeas y
ricas en triglicridos en menor proporcin son de origen endgeno principalmente heptico.
El metabolismo de lpidos se lleva a cabo en tres fases:
Fase intraluminal. La mayor parte de la digestin de la grasa alimentara tiene lugar en el
intestino mediante las enzimas intestinales, pancreticas y de los cidos biliares. Las sales
biliares son de importancia en la degradacin de las grasas debido a sus propiedades
anfipticas : por ser altamente hidrfila y altamente hidrfoba al mismo tiempo. Debido a
sus propiedades activas de superficie, encapsula a las grasas y las emulsiona, produciendo
partculas que pueden ser rpidamente modificadas por las enzimas digestivas. En el lumen
intestinal, la accin de la lipasa pancretica sobre la grasa ingerida da por resultado una
mezcla compleja de triglicridos, diglicridos, monoglicridos y cidos grasos libres.
Continuando con una fase oleosa y una acuosa.
Fase celular. Despus de los monoglicridos y los cidos grasos se ingresan al retculo
endoplsmico de las clulas mucosas, presumiblemente por difusin, los monoglicridos y
cidos grasos son reesterificado a triglicridos.
Fase de transporte. Una vez que se ha resintetizado los triglicridos en el interior de la
clula mucosa intestinal, estas sustancias son acumuladas en el retculo endoplsmico de la
clula mucosa y en el aparato de Golgi en la forma de macromolculas hidrosolubles, los
quilomicrones, y, hasta un cierto grado, de lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL).
Las lipoprotenas intestinales abandonan las clulas mucosas mediante un mecanismo de
pinocitosis inversa. Estos complejos aparecen inicialmente en los vasos linfticos de la
regin abdominal y ms tarde en la circulacin sistmica. Los complejos lipoproteicos ms
voluminosos son mezcla de triglicridos, algunas protenas, pequeas cantidades de
colesterol y fosfolpidos. La circulacin sangunea transporta quilomicrones y VLDL a
todos los tejidos del organismo, incluyendo el tejido adiposo que representa su principal
sitio de incorporacin. Los quilomicrones y los triglicridos de las VLDL son hidrolizados
por una enzima lipoprotena lipasa y tiene un sitio de actividad, es la superficie de las
clulas endoteliales. Los cidos grasos derivados de los triglicridos ingresan a las clulas
del tejido adiposo, en donde puede ser almacenado mientras que el glicerol es liberado a la
circulacin.

37

OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de Trigliceridos en una muestra problema, mediante el empleo
de una prueba enzimtica a fin de establecer su importancia en el diagnstico clnico de
patologas relacionadas con el metabolismo de lpidos.

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Pipetas graduadas de 2mL
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Espectrofotmetro
Bao Mara
Kit enzimtico de Triglicridos, SPINREACT
Suero sanguneo problema

PROCEDIMIENTO:
a) Mtodo
Pipetear en tres tubos de ensayo:

Muestra

Blanco
-

Estndar
-

Muestra
10L

Estndar

10L

Agua destilada

10L

Reactivo
1 mL
1 mL
1 mL
Mezclar e incubar a 37 C durante 5 minutos. Leer absorbancia de la muestra (A muestra) y
la del standar (A estndar) frente al blanco de reactivo.

Longitud de onda: 505 nm


Cubetas: 1 cm. De paso de luz
Temperatura: 37 C

38

b) Clculo
A muestra
-------------- x 200 = Triglicridos mg/dL
A standar

VALORES REFERENCIA

Hombres 40 - 160 mg/dL


Mujeres 35 - 135 mg/dL

BIBLIOGRAFA:
1. Hamilton, H.K. Diagnstico Clnico. Editorial Interamericana. Impreso en Mxico,1985.
2. Kaplan, Lawrance A. Qumica Clnica. Editorial Mdica Panamericana. Impreso en
Argentina, 1988.
3. SPINREACT, S.A. Enzimtico Triglicridos. Ctra. Santa Coloma. Espaa.

39

PRUEBAS FUNCIONALES HEPTICAS


DETERMINACIN DE ASPARTATO AMINOTRANSFERASA
(AST)
O TRANSAMINASA GLUTMICO-OXALACTICA (TGO o SGTO)
INTRODUCCIN:
El aspartato aminotrasferasa o transaminasa glutmco-oxalactica es una enzima que
cataliza la transferencia reversible del grupo amino desde el aspartato al -cetoglutarato
para producir oxalacetato, por esto es esencial en la produccin de energa en el ciclo de
krebs. Esta enzima se encuentra en el citoplasma de las clulas bsicamente, corazn,
hgado, msculo estriado, msculo esqueltico, riones, pncreas y tejido cerebral en
concentraciones decrecientes.
Significado Clnico. Los valores sricos de la TGO aumentan cuando se libera la enzima de
clulas daadas del miocardio, de 6 a 12 hs. despus de la oclusin de una arteria
coronaria. El grado de aumento es aproximadamente proporcional a la la extensin del
dao, siendo que el valor mximo se alcanza al cabo de unas 48 hs. del accidente,
disminuyendo a niveles normales de 3 a 5 das. Las cifras de TGO aumentan
considerablemente en las lesiones agudas del hepatocito; en la hepatitis viral, no son raros
valores hasta de 1200 unidades, y las lesiones hepticas por intoxicacin con tetracloruro de
carbono dan todava cifras mayores. Hay aumento moderado en otros trastornos del hgado
como en la ultimas etapas de la cirrosis y en las neoplasias pero rara vez pasan de 300
unidades. Lo mismo puede decirse de la ictericia obstructiva. En la mononucleosis
infecciosa, los niveles de TGO en suero corresponden a la amplitud de la lesin heptica;
en casos graves, las cifras pueden ser tan altas como en la hepatitis viral aguda. Los niveles
sricos de TGO aumentan ligera o moderadamente en algunas variedades de distrofia
muscular; se encuentran aumentos mayores en las lesiones por aplastamiento del msculo,
y en la dermatomiositis.
OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de aspartato aminotrasferasa en una muestra problema,
mediante el empleo de una prueba cintica a fin de establecer su importancia en el
diagnstico clnico.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
40

Espectrofotmetro
Kit cintico de TGO, MEXLAB
Suero problema
TCNICA
a). Preparacin del reactivo de trabajo
Mezclar 1mL de R1 con 200 L
b). Mtodo
Temperatura ................................... 37C
Longitud de onda ........................... 340nm
Cubeta ............................................ 1 cm paso de luz
Lectura frente agua destilada
COLOCAR EN UN TUBO
Reactivo al uso
1.0 mL
Muestra
100L
Mezclar, incubar a 37C 1 minuto. Anotar la lectura y poner
en marcha el cronmetro. Repetir la lectura a 1, 2 y 3
minutos. Calcular el valor promedio de los incrementos de
absorvancia por minuto (A/min)
c) Clculo
A/min x 1768 = U/L
d) Valor de referencia
HASTA 40 U/L
BIBLIOGRAFA:
1. M.J. Lynch, et.al., Mtodos de Laboratorio.2a. Edicin. Editorial Interamericana.

2. Todd Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.


3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8. Edicin.
Editorial Manual Moderno.
4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
5. Instructivo Test cinticoU.V. MexLab

41

DETERMINACIN DE ALANINO AMINOTRANSFERASA


(ALT)
O TRANSAMINASA GLUTMICO-PIRVICA (TGP o
SGTP)
INTRODUCCIN:
La Alanino aminotransferasa (ALT) o Transaminasa Glutmico Pirvica (TGP o SGTP)
es una enzima que cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del c. Glutmico
al Ac. Pirvico que entra en el ciclo del Ac. Tricarboxlico y que es necesario en los tejidos
para la produccin de energa, mientras que el glutamato es desaminado dando amonaco y
-cetoglutarato. Esta enzima se halla en gran concentracin en el hgado y en menor
medida en rin, corazn y msculo. El alto contenido de esta enzima en el hgado, en
comparacin con la relativamente baja concentracin de este en el miocardio y otros
tejidos, ha llevado a la aplicacin de la determinacin de la TGP al estudio de la
enfermedad heptica. El lmite normal para esta enzima, expresado en unidades Karmen,
es casi lo mismo que para la TGO. Los enfermos con hepatitis vrica y otras formas de
necrosis heptica muestran elevaciones llamativas del nivel de la TGP (DE 500 A 4000U).
Los valores de la TGP estn moderadamente elevados( 300U) en la mayora de los
enfermos con ictericia postheptica, colestasis intraheptica, carcinoma metastsico,
cirrosis o esteatonecrsis alcohlica ( hepatitis alcohlica). Los valores de TGP son tan
altos o ms que los de la TGO en la mayora de los enfermos con hepatitis vrica, ictericia
postheptica, o colestasis intrahepca, mientras que son muchos ms bajos que los
respectivos de TGO en los enfermos con cirrosis o carcinoma metastsico. Los niveles de
TGP son normales o estn solo mnimamente elevados en los pacientes afectados con
infarto al miocardio. En general la determinacin de ALT nos permite detectar una
alteracin en el hgado, para diferenciar la ictericia hemoltica de la heptica, para
monitorear el tratamiento de hepatitis u otras enfermedades, as como tambin el efecto de
ciertos frmacos txicos al hgado.
OBJETIVO:
Cuantificar la concentracin de Alanino aminotrasferasa en una muestra problema,
mediante el empleo de una prueba cintica a fin de establecer su importancia en el
diagnstico clnico.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Espectrofotmetro
42

Kit cintico de TGP, MexLab


Suero problema
TCNICA:
a). Preparacin del reactivo de trabajo
Mezclar 1mL de R1 con 200 L
b). Mtodo
Temperatura ................................... 37C
Longitud de onda ........................... 340nm
Cubeta ............................................ 1 cm paso de luz
Lectura frente agua destilada

Reactivo al uso
1.0 mL
Muestra
100L
Mezclar, incubar 1 minuto a 37C. Anotar la lectura y
poner en marcha el cronmetro. Repetir la lectura a 1, 2 y 3
minutos. Calcular el valor promedio de los incrementos de
absorbancia por minuto (A/min)
c) Clculo
A/min x 1768 = U/L
d) Valor de referencia
HASTA 45 U/L

BIBLIOGRAFA:
1. M.J. Lynch, et.al., Mtodos de Laboratorio.2a. Edicin. Editorial Interamericana.

2. Todd Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.


3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8. Edicin.
Editorial Manual Moderno.
4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18.Edicin. Editorial Masson.
5. Instructivo Test cinticoU.V. .MexLab.

43

DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA


INTRODUCCIN:
La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina en el sistema
retculo endotelial. Los hemates al degradarse liberan hemoglobina que es metabolizada a
dos molculas : el grupo hem y el grupo globina, el primero se transforma en biliverdina y
esta en bilirrubina a la cual se le llama no conjugada o indirecta. Al pasar por el hgado
esta se conjuga con cido glucurnico transformndose en bilirrubina conjugada o directa.
El hgado segrega esta bilirrubina directa a travs de las vas biliares hacia el intestino, al
metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrn a las
heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en forma de
urobilingeno.

44

La elevacin de los valores de bilirrubina no conjugada orientan hacia un problema a nivel


del hgado; mientras que la elevacin de los valores de bilirrubina conjugada orientan hacia
un problema a nivel de vas biliares.
Cuando se realiza un anlisis de rutina se mide La bilirrubina total, de la cual del 70% al
85% corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.
En general, desde un punto de vista analtico y clnico, interesa conocer los niveles de
bilirrubina total y diferenciar cuantitativamente la bilirrubina libre o preheptica, que
aumenta principalmente en procesos de tipo hemoltico, de la bilirrubina conjugada o
heptica que est incrementada en la disfuncin heptica y ms concretamente en fallos de
los mecanismos de su eliminacin, a travs del sistema biliar, cuyo primer paso es pasar del
hepatocito a los canalculos biliares.
OBJETIVO:
Determinar la concentracin srica de bilirrubina Total, Directa e Indirecta para establecer su importancia y
asociacin clnica con trastornos hepticos.

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Espectrofotmetro
Kit Bilirrubina DMSO Total y Directa, MEXLAB.
Suero Humano reciente
TCNICA:
Longitud de onda ...............................560nm ( 540 600)
Temperatura .......................................37C
Cubeta .................................................1cm paso de luz
Lectura ................................................frente a blanco de reactivo

R.1 Bilirrub. Directa


R. 2 Bilirrub. Total
R. 3 Nitrito Sdico

BLANCO
TOTAL
--1.0 mL
1gota

TOTAL
--1.0 mL
1gota

BLANCO
DIRECTA
1.0 mL
--1gota

DIRECTA
1.0 mL
--1gota

Mezclar y esperar 5 min exactamente a temperatura ambiente. Leer las D. pticas.


Clculos:
Bilirrubina Total (mg/dl) = (A) muestra x 19.1
Bilirrubina Directa (mg/dl) = (A)muestra x 15.0
45

Notas:
1. Utilice muestras recientes, protegidas de la luz.
2. No utilice muestras hemolizadas.
VALORES NORMALES:
Bilirrubina Total: 0.1 a 1.2 mg/dL
Bilirrubina Directa: 0 a 0.3 mg/dL

BIBLIOGRAFA:
1. Hamilton, H.K. Diagnstico Clnico. Editorial Interamericana. 1985.
2. Kaplan, Lawrance A. Qumica Clnica. Editorial Mdica Panamericana. 988.
3. Lynch Mattew J.Mtodos de laboratorio Vol 1.Segundaedicin.Editorial
Interamericana.1987.
4. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.
5. Instructivo Bilirrubina DMSO Total y Directa. MEXLAB

46

FOSFATASA ALCALINA
INTRODUCCIN
La fosfatasa alcalina, es una protena que se encuentra en todos los tejidos corporales.
Se origina principalmente en los huesos y accesoriamente en el hgado, aunque para
algunos es segregada slo por osteoclastos y el hgado es apenas el rgano de excrecin.
Est bien establecida la relacin que existe entre esta enzima, los osteoclastos y la
formacin sea. El ritmo rpido del incremento seo infantil, corre paralelo con las dosis
elevadas. Si el crecimiento se bloquea, la concentracin baja a cifras similares como en el
adulto.
Cuando hay deficiencia de vitamina D, raquitismo, enfermedad de Paget,
hiperparatiroidismo, fracturas en consolidacin y en metstasis seas, sus niveles
aumentan. Igualmente, durante el embarazo los niveles pueden ser hasta el triple de lo
normal y persisten hasta por 2 meses despus del parto.
Presta utilidad en las ictericias donde sirve para diferenciar la obstructiva de la
parenquimatosa, pues cuando es de origen mecnico sus cifras son mucho ms elevadas. En
el absceso heptico sus cifras se encuentran aumentadas y sin cabios ictricos. En el
embarazo, cuando sus niveles descienden, hay compatibilidad con feto muerto intrauterino.
Los tejidos con cantidades particularmente altas de FA abarcan el hgado, las vas biliares y
los huesos.
Este examen se hace para diagnosticar enfermedad del hgado y del hueso o para ver si los
tratamientos para dichas enfermedades estn funcionando. Puede incluirse como parte de
las pruebas de la funcin heptica de rutina.
Los valores normales pueden variar de un laboratorio a otro, segn la tcnica empleada, al
igual con la edad y el sexo de la persona. Los niveles altos de FA normalmente se observan
en nios que presentan un aumento repentino en su crecimiento y en las mujeres
embarazadas.
Los niveles de la fosfatasa alcalina superiores a los normales pueden deberse a:
Anemia, Obstruccin biliar, Enfermedad sea, Consolidacin de una fractura, Hepatitis,
Hiperparatiroidismo, Leucemia, Enfermedad heptica, Cnceres seos osteoblsticos,
Osteomalacia, Enfermedad de Paget, Raquitismo.
Los niveles de la fosfatasa alcalina (hipofosfatasemia) inferiores a los normales pueden
deberse a: Desnutricin, Deficiencia de protena.
Algunas afecciones adicionales bajo las cuales se puede hacer el examen son:
Enfermedad heptica alcohlica (hepatitis/cirrosis), Alcoholismo, Estenosis biliar, Arteritis
de clulas gigantes (temporal, craneal), Neoplasia endocrina mltiple (NEM) II Carcinoma
de clulas renales.

OBJETIVO.
Determinar la concentracin srica de fosfatasa alcalina en una muestra problema, a fin de
establecer su importancia clnica en los trastornos hepticos y del hueso principalmente.

47

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipeta de 1 mL.
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Espectrofotmetro
Kit cintico de Fosfatasa Alcalina, MEXLAB.
Suero sanguneo problema
Bao Mara
PROCEDIMIENTO:
Longitud de onda............................405 nm
Temperatura.................................... 37 C
Cubeta............................................. 1 cm. Paso de luz
Leer contra blanco de agua destilada.
Pipetear en un tubo:
Muestra
Reactivo de uso

25L
1.0 mL

Mezclar y, tras una incubacin de un minuto EXACTO a 37C, medir el cambio de


absorbancia (A/min) durante tres minutos.

Clculo:
Actividad (U/L) = A/min x 2180
VALORES DE REFERENCIA
30 125 UI/L
BIBLIOGRAFIA
1. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003470.htm.
2. G. Angel M. / M. Angel R. Interpretacin clnica del laboratorio. 5. Edicin. Editorial
Panamericana.1996.
3. Alfonzo Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18. Edicin. Editorial Masson. 2001.
4. Bayer.Test cintico de Fosfatasa alcalina MEXLAB.

48

PROTENAS TOTALES Y ALBMINA:


INTRODUCCIN:
Las protenas del plasma sanguneo son una mezcla de varias clases de cadenas
polipeptdicas y pueden clasificarse simplemente como: 1) protenas hsticas y 2) protenas
hemticas. A su vez, las protenas hsticas y hemticas pueden separarse en hemoglobina,
protenas de los eritrocitos y del plasma. Aunque las protenas de los tejidos son
obviamente de importancia vital para el organismo, las de la sangre, debido a su
accesibilidad, son ms importantes en trminos de la informacin de laboratorio clnico. No
slo pueden estudiarse conveniente las protenas plasmticas, sino que ocupan una
posicin central en el metabolismo proteico; interaccionan virtualmente con todos los
tejidos o clulas del organismo y estn ntimamente relacionadas con el metabolismo
proteico en el hgado. De hecho, el hgado es un rgano tan importante en el metabolismo
proteico, que la enfermedad heptica est frecuentemente asociada con alteraciones en las
protenas plasmticas y trastornos del metabolismo proteico. Las fracciones obtenidas
reciben diversos nombres segn el procedimiento empleado y no representan sustancias
puras en la generalidad de los casos sino macromolculas con caracteres fsico-qumicos
semejantes en las condiciones del experimento.
La fraccin de protenas plasmticas precipitadas a media saturacin por el sulfato de
amonio originalmente se consider como la fraccin globulina y las restantes que
precipitan con sulfato de amonio a saturacin completa como la fraccin albmina. El
fibringeno, que precipita con la fraccin globulina, como es una protena especial que
interviene en la coagulacin sangunea, se toma como una fraccin aparte. Debido a que la
albmina srica y por lo menos una pequea fraccin de las globulinas se sintetizan en el
hgado, las protenas del suero son afectadas tanto cualitativa como cuantitativamente en
los padecimientos hepticos. En cualquier enfermedad que ocasione alteraciones
hepatocelulares la concentracin de seralbmina estar disminuida. En diversas
hepatopatas las globulinas sricas pueden alcanzar niveles suficientes que basten para
mantener la concentracin total de protenas a niveles normales o elevados, aun en
presencia de una notable reduccin de la albmina. Debido a estas causas, las cifras
cambiantes de albmina srica proporcionan ndices valiosos respecto a la severidad,
evolucin y pronstico de las hepatopatas. Los niveles bajos de albmina y elevados de
globulina en suero, indican origen hapatocelular de la ictericia o de la hepatopata. En la
ictericia obstructiva, los cambios de las protenas del suero se presentan tardamente, una
vez que se han instalado las alteraciones hepatocelulares secundarias. Sin embargo, las
colangitis y la cirrosis biliar ocasionan alteraciones hepticas que pueden no ser percibidas
por alteraciones en las protenas. Ms an, las alteraciones de las protenas sricas pueden
volver a la normalidad antes de que la convalecencia de la hepatitis se haya completado.
Las alteraciones en las protenas sricas se presentan tambin en padecimientos ajenos a los
hepticos. La interpretacin y significado de la determinacin de las protenas sricas
requiere, por lo tanto, un gran cuidado y criterio.

49

OBJETIVO:
Determinar la concentracin de protenas totales y albmina sricas en una muestra
problema mediante la aplicacin de los mtodos de Biuret y Verde de Bromocresol y
correlacionarla con su importancia clnica.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de 13 x 100mm.
Pipetas de 1, 5 y 10 mL.
Micropipeta de Volumen variable
Puntillas para micropipeta
Centrfuga
Espectrofotmetro
Bao de Mara
Termmetro
Kit de Protenas totales y Albmina, ELI-Tech.
Suero sanguneo problema

PROCEDIMIENTOS:
a) Protenas Totales (Mtodo de Biuret)
Las uniones peptdicas reaccionan con el sulfato de cobre en solucin alcalina y producen
un color violeta proporcional a su concentracin.
Longitud de onda............................550 nm (546)
Temperatura.................................... 37 C
Cubeta ............................................. 1 cm. Paso de luz
Leer contra blanco de reactivo
1. Marcar 3 tubos de ensayo blanco, muestra, standard y agregar:

Agua Destilada
Muestra
Standard
Reactivo de Biuret

BLANCO
10L
1.0mL

STANDARD
10L
1.0mL

MUESTRA
10L
1.0mL

2. Mezclar e incubar 10 min.,Determinar las absorbancias del standard y de la muestra con


el blanco. El color es estable por 1 hora.

3. Clculos: Protenas totales (g/dL) =

Absorbancia de la muestra
----------------------------------- x
Absorbancia del standard

50

b) Determinacin de Albmina: (Mtodo Verde de Bromocresol)

La albmina reacciona con el verde de bromocresol y debido al llamado error proteico de


los indicadores, se forma una coloracin verde que es proporcional a la concentracin de la
albmina de la muestra.

Longitud de onda............................620 nm (570-640)


Temperatura.................................... ambiente
Cubeta ............................................. 1 cm. Paso de luz
Leer contra blanco de reactivo

1. Marcar 3 tubos blanco, muestra, strandard y agregar:

Reactivo de albmina
Standard
Muestra

BLANCO
1.0mL
-

STANDARD
1.0mL
25L
-

MUESTRA
1.0mL
25L

2. Mezclar e incubar 3 min. Temperatura ambiente. Determinar las absorbancias (A) de la


muestra y standard con el blanco. El color es estable por 30 min.

3. Clculos:
Verificar la concentracin del standard en la etiqueta del frasco includo con cada kit.
FACTOR = Concentracin standard
Absorbancia Standard
Albmina(g/dl) =Factor x Absorbancia desconocido

NOTAS:
La reaccin es lineal hasta 8.0 g/dl
Para valores superiores, es recomendable diluir (1:3) la muestra con solucin fisiolgica y
determinar nuevamente, multiplicando el resultado por el factor de la dilucin .
51

El valor de las globulinas (g/dL) se obtiene restando de las protenas totales, el valor de la
albmina.
La relacin A/G (albmina/globulina), se obtienen dividiendo la concentracin de la
albmina entre la concentracin de la globulina.

VALORES DE REFERENCIA:

Protenas totales: 6.2 a 8.0 g/dL


Albmina

: 3.5 a 5.0 g/dL

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6. Edicin 1978. Editorial Salvat.
2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
3. Marcus A. Krupp.et.al. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. 8.edicin
1985. Editorial Manual Moderno.
4. Protenas Totales y Albmina. ELI-Tech.

52

REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCIN
La infeccin causada por microorganismos de diversas especies produce entre otros
sntomas una marcada elevacin de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea
causada por Salmonella Typhi, S. enteritis, as como las paratifoideas causadas por S.
paratyphi A y B; y el Tifo causado por el genero Rickettsias. La infeccin por estos
microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la produccin de
anticuerpos que puede ser detectados con el antgeno especfico.
La reaccin de Widal es un mtodo serolgico usado comnmente en el diagnstico de las
fiebres tifoidea, entrica y ondulante, la reaccin mide el ttulo del suero contra la
suspensin de microorganismos conocidos.
El gnero salmonella comprende diferentes bacilos no esporulados aerobios, gram
negativos serolgicamente relacionados, cada uno tiene antgenos flagelares y somticos y
dos o mas organismos pueden tener el mismo antgeno O y varios antgenos H similares,
por lo que la reaccin de Widal no es especfica 100% de fiebre tifoidea, ya que puede ser
positiva en otras salmonelosis, por tanto, se debe considerar como un signo semiolgico
ms de la fiebre tifoidea y tener en cuenta que este tipo de anticuerpo aglutinante, se pone
de manifiesto con intensidad diagnstica, despus del dcimo da de iniciarse la
enfermedad. Existen tres especies clnicamente importantes de Salmonella S. enteritidis, S.
Choleraesuis y S. typhi, resultando tambin en tres sndromes ocasionados por infeccin
por Salmonella: gastroenteritis (forma ms comn), fiebre tifoidea y septicemia.
Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rikettsia sp, el antgeno
empleado para la determinacin de anticuerpos es el de Proteus OX-19 el cual presenta una
reaccin cruzada con bacterias del gnero Rikettsia, dado que posee componentes
antignicos idnticos (glucolpidos). La reaccin se hace positiva a partir del 5-7 da de la
enfermedad, con mayor frecuencia en el da 12; los anticuerpos permanecen elevados
despus durante los primeros 5 meses de la convalecencia y por lo tanto es positiva en
ttulos decrecientes hasta su negativizacin. Las especies de rickettsia son cocobacilos
pequeos pleomrficos que funcionan como parsitos intracelulares. La inmunidad por lo
general es de larga duracin, con algunas excepciones: el tifus endmico puede causar
reacaidas 10 20 aos despus de la aparente recuperacin (enfermedad de Brill Zinsser),
la fiebre de las trincheras se caracteriza por las recadas.
La reaccin de Huddleson es un mtodo serolgico que detecta anticuerpos contra B.
abortus, B. melitensis y B.
suis, agentes causales de la brucelosis tambin conocida como fiebre de malta o fiebre
ondulante por el cuadro febril caracterstico que se presenta; es una enfermedad aguda o
crnica que se manifiesta principalmente por escalofros, fiebre y debiliad.
La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el antgeno
correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin macroscpica.

53

CRITERIOS DE INTERPRETACION DE RESULTADOS EN REACCIONES


FEBRILES, PARA REALIZAR UN DIAGNOSTICO SON:

FIEBRE TIFOIDEA : Ttulos de Ac. Mayores de 1:320 para Ag.Tfico O y mas


de 1:80 para Ag.Tfico H, mas los signos y sntomas clnicos sugestivos de esta
enfermedad.

SALMONELOSIS: Ttulos de Ac. mayores de 1:320 para Ag. O y mas de 1:80


en Ag. paratfico A B., mas los signos y sntomas clnicos sugestivos de esta
enfermedad.

RICKETSIOSIS: Ttulos mayores de 1:320 para proteusOX19, en este caso se


sugiere solicitar los Ac. Anti Ricketsia.

BRUCELOSIS: Cualquier Ttulo Huddleson, con Rosa de Bengala positivo y los


sntomas sugestivos.

OBJETIVO:
Determinar cualitativa y cuantitativamente la presencia de anticuerpos contra los gneros
Salmonella, Riketsia y Brucella en una muestra srica problema mediante el empleo de
reacciones antgeno - anticuerpo, a fin de establecer su correlacin clnica.
MATERIAL Y EQUIPO:
8 Tubos de 10 x 75mm.
1 Micropipeta 10 100 L
Puntillas para micropipeta
1 placa de reaccin
Aplicadores de madera
Vortex
Kit de Antgenos Febriles LICON
Suero sanguneo problema (Preferentemente obtenido en pico febril)
PROCEDIMIENTO
a) Cualitativo
Lleve los reactivos y el suero problema a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.
1. Depositar una gota de suero en cada valo de la placa reactiva.
2. Aadir una de gota de antgeno segn corresponda.
3. Mezclar con ayuda de un aplicador
4. Agitar en un vortex a 120rpm durante 2 minutos.
5. Realizar lectura macroscpica utilizando una fuente de luz directa.
6. Aglutinacin : positiva ; no aglutinacin: negativa

54

b) Cuantitativo
1. Depositar en los valos de la placa: 0.08mL, 0.04mL, 0.02mL, 0.01mL y 0.005mL de
suero problema.
2.Aadir 30L del antgeno respectivo (el gotero incluido, proporciona una gota de 30 40L).
4. Mezclar con ayuda de un aplicador
5. Agitar en un vortex a 120rpm durante 2 minutos.
6. Realizar lectura macroscpica utilizando una fuente de luz directa.
7. El ttulo del suero ser la inversa de la dilucin ms alta en donde se observa una
aglutinacin del 50% , segn:

VOLUMEN DEL SUERO TTULO


0.08mL
1:20
0.04mL
1:40
0.02mL
1:80
0.01mL
1:160
0.005mL
1:320

BIBLIOGRAFIA.

1. Bigaux Diagnostica, S.A. Febriclin, Antgenos Febriles. Instructivo


2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. Editorial Interamericana.
3. Laboratorios Licon, S.A. Antgenos Febriles, Instructivo.
4. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.
5. Gilberto ngel/Mauricio ngel R. Interpretacin Clnica del Laboratorio. 5. Edicin
1998. Editorial Mdica Panamericana.

55

ANTIESTREPTOLISINAS
INTRODUCCIN
Los estreptococos tipo A, producen una enzima denominada estreptolisina O que tiene la
capacidad de lisar los hemates, comportndose como antgeno. El organismo reacciona
produciendo un anticuerpo neutralizante, antiestreptolisina (ASO), el que aparece entre 8 a
30 das despus del comienzo de infeccin, los valores ms elevados se dan en la tercera
semana de la infeccin y es cuando pueden aparecer las enfermedades secundarias a esta
infeccin (glomerulonefrtis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o una
escarlatina) pero no son especficos de ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una
de ellas por la clnica o por otros estudios diagnsticos.
Ttulos elevados indican que las secuelas por infeccin estreptoccica est presente. Entre
el 80 al 85% de pacientes con fiebre reumtica y el 95% de pacientes con glomerulonefrtis
aguda, presentan ttulos representativos. En endocarditis bacteriana y escarlatina, los ttulos
se modifican.
Ttulos altos no son especficos para determinada enfermedad. Solo indica infeccin por
estreptococo A. Los ttulos se modifican en la convalecencia, siendo inferiores cuando el
tratamiento es acertado. Los niveles altos de beta-lipoprotena dan falsos resultados
elevados por inhibicin de la estreptolisina; los antibiticos y adrenocorticoides, bajos, (son
enmascarados). En amigdalitis, sepsis puerperal y erisipela por estreptococo A, los ttulos
estn elevados.
Los niveles aumentados de ASLO pueden indicar:
Infeccin por estreptococos beta hemolticos del tipo A, glomerulonefrtis, fiebre
reumtica, endocarditis bacteriana, escarlatina, pioderma por estreptococo beta hemoltico
del tipo A.
El no tratar o tratar inadecuadamente una infeccin por el estreptococo beta hemoltico del
tipo A, puede tener las siguientes complicaciones: absceso periamigdalino, fiebre
reumtica, glomerulonefrtis. Escarlatina.
OBJETIVO:
Determinar cualitativa y cuantitativamente la presencia de Antiestreptolisinas en una
muestra srica problema mediante el empleo de reacciones antgeno - anticuerpo, a fin
de establecer su importancia clnica como apoyo al diagnstico de enfermedades
causadas por estreptococos del grupo A.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de 10 x 75mm.
Micropipeta 10 100 L
Puntillas para micropipeta
placa de reaccin
Aplicadores de madera
Vortex
Kit BioAEstrept. MEXLAB.
Solucin salina isotnica
Suero sanguneo problema

56

PROCEDIMIENTO
a) Cualitativo
1. Colocar una gota de suero del paciente (40L) en un valo de la placa, de igual
manera los controles positivo y negativo.
2. Agregar una gota de reactivo ltex a cada uno (30L) mezclar por todo el valo.
3. Agitar la placa en el vortex durante 3 min.
4. Observar macroscpicamente
Interpretacin de resultados:
POSITIVO: presencia de aglutinacin visible por formacin de grandes agregados y un
fondo claro.
NEGATIVO: ausencia de aglutinacin visible.
b) Semicuantitativo

DILUCIONES

1/2

Suero muestra

100 L

Sol. Salina

100 L

1/4

1/8

1/16

100 L

100 L

100 L

100 L

100 L

100 L

50 L

50 L

50 L

De cada dilucin
Colocar en
portaobjetos

50 L

REALIZAR LOS PASOS DEL MTODO CUALITATIVO


TOMAR COMO RESULTADO LA AGLUTINACIN DE LA ULTIMA DILUCIN.
200 X n dilucin
UI/mL

200 x 2

200 x 4

200 x 8

200 x 16

400

800

1600

3200

VALORES:
Los valores normales de antiestreptolisina-O pueden variar con la edad, estacin del ao y
rea geogrfica. El valor normal en nios y jvenes es entre 166 y 250 IU/ml. Un promedio
se ha establecido por debajo de los 200 IU/ml.

BIBLIOGRAFA
1. www.tuotromedico.com/temas/antiestreptolisinas.htm
2. Gilberto ngel/Mauricio ngel R. Interpretacin Clnica del Laboratorio. 5. Edicin
1998. Editorial Mdica Panamericana.
3. Instructivo Estreptoex. Laboratorio LAFON, S.A.de C.V., Mxico, D.F.
57

DETERMINACIN DE PROTEINA C REACTIVA


INTRODUCCIN:
En 1930 Tillet y Francis reportaron una reaccin de precipitacin que poda ser demostrada en el suero de
pacientes que padecan neumona lobar con un extracto de polisacridos provenientes de cepas de
neumococos. El extracto neumococcico era un carbohidrato denominado C y a la protena humana selectiva
capaz de precipitar se le denomin Protena C Reactiva (PCR). Independientemente de la neumona lobar,
la protena C reactiva, se ha asociado a una gran variedad de enfermedades infecciosas, a procesos
inflamatorios no infecciosos y a ciertos procesos inflamatorios malignos, lo cual en la actualidad permite
clasificarla como un reactivo de fase aguda. La demostracin de niveles elevados de protena C reactiva es
una prueba no especfica de inflamacin, la cual es virtualmente positiva en todas las infecciones agudas
bacterianas, en algunos estados neoplsicos y en varios tipos de destruccin de tejidos como el infarto al
miocardio. La PCR aparece muy pronto en varias enfermedades, alcanza un mximo en los primeros das y
decrece a niveles no detectables en 8 a 10 das. La prueba es usada frecuentemente para monitorear la
actividad de pacientes con fiebre reumtica y artritis reumatoide. La PCR no se encuentra en sujetos
normales y desaparece cuando se cura el enfermo. La regresin del proceso inflamatorio es acompaado en
forma general por un decremento en los niveles sricos de protena C reactiva. La elevacin de la velocidad
de sedimentacin eritrocitaria (VSG), se acompaa de la presencia de PCR, pero la elevacin de esta ocurre
antes que el aumento en la VSG, disminuyendo antes que la VSG retorne a los niveles normales. La PCR
aparece en el suero en forma de complejo de glicoprotena.

OBJETIVO:
Determinacin cualitativa y cuantitativa de la Protena C Reactiva en una muestra srica problema, a fin de
correlacionar su importancia clnica en los procesos inflamatorios o patologas afines como son: infecciones
agudas bacterianas y aquellas con destruccin de tejidos.

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Vortex
Kit de PCR/CRP ltex, BIO-MEXLAB
Suero problema

TECNICA:
a) Mtodo Cualitativo:
1. Poner a temperatura ambiente los reactivos y homogenizarlos.
2. Colocar una gota del suero en un crculo del portaobjetos (del equipo) sin diluir. Realizar lo mismo con los
controles positivo y negativo.

58

3. Aadir una gota de PCR ltex a un lado de cada una de las anteriores (muestra y
controles).
4. Mezclar con un aplicador de madera extendiendo por todo el crculo.
5. Colocar el portaobjetos en el vortex y agitar por 2 min.
6. Interpretacin: La presencia de aglutinacin (positivo), indica un nivel de PCR igual o
superior a 1.2mg/l00mL en la muestra. La ausencia de aglutinacin indica un nivel de PCR
inferior a 1.2mg/l00mL en la muestra.
b) Mtodo Cuantitativo
Siguiendo la metdica cualitativa, se proceder con diluciones de suero muestra con solucin salina (NaCl
9g/l).

DILUCIONES

1/2

Suero muestra

100 L

Sol. Salina

100 L

1/4

1/8

1/16

100 L

100 L

100 L

100 L

100 L

100 L

50 L

50 L

50 L

De cada dilucin
50 L

Colocar en
portaobjetos

CONTINUAR CON LOS PUNTOS 3, 4, Y 5 DEL MTODO CUALITATIVO


TOMAR COMO RESULTADO LA AGLUTINACIN DE LA ULTIMA DILUCIN.
1.2 X n dilucin
mg/100mL

1.2 x 2

1.2 x 4

1.2 x 8

1.2 x 16

2.4

4.8

9.6

19.2

c) VALORES NORMALES:

Adultos: < 1.2 mg/100mL

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.
2.M.J. Lynch et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin. Editorial interamericana.
3.Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18. Edicin. Editorial Masson.1999.
4. 5. Instructivo PCR Latex. MEXLAB

59

DETECCIN DE FACTOR REUMATOIDE


INTRODUCCIN:
El factor Reumatoide es un anticuerpo circulante que reacciona con algunos componentes
de inmunoglobulinas; es una IgM o IgG con reactividad de anticuerpo para la IgG de
humanos. Se halla presente en la artritis reumatoide, otras enfermedades vasculares de la
colgena, endocarditis infecciosa activa y algunos otros padecimientos como artritis
reumatoide juvenil, Sndrome de Sjgren, esclerosis generalizada progresiva, m
ononucleosis infecciosa y algunos pacientes con poliomiositis, as como una variedad de
enfermedades no asociadas a Artritis Reumatoide, en las cuales es posible detectar
actividad del factor reumtoide. Estas enfermedades son en su mayor parte inflamatorias o
crnicas o ambas cosas, Ejemplos: Enfermedades Infecciosas: endocarditis bacteriana
subaguda, sfilis, enfermedad vrica, hepatitis infecciosa, tripanosomiasis, tuberculosis,
lepra. Enfermedades del Pulmn: bronquitis, asma, asbestosis, silicosis, fibrosis pulmonar
idioptica. Varias: sarcoide, mieloma mltiple, fibrosis del hgado, homoinjerto renal,
infarto de miocardio. El factor reumatoide se detecta en los pacientes por medio de la
mezcla de suero diluido con partculas inertes (latx, bentonita, eritrocitos tratados, etc.)
cubiertas con IgG de humanos y observando aglutinacin.
OBJETIVO:
Determinacin cualitativa y cuantitativa del Factor Reumatoide en una muestra srica problema, a fin de
correlacionar su importancia clnica en los procesos artrticos, inflamatorios o patologas afines con
reactividad al factor.

MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
Gradilla
Pipetas Pasteur
Placa de vidrio con valos
Micropipetas de volumen variable
Puntas para micropipeta
Centrfuga
Vortex
Kit de REUMATEX, Lafon, S.A. de C.V.
Suero problema
TCNICA:
a) mtodo cualitativo
1. Poner en un tubo de ensayo 1mL de sol. Reguladora glicina-salina, (diluida 1:10 a partir
de la solucin concentrada), aadir una gota de suero problema, mezclar y agitar.
2. Colocar una gota de la mezcla anterior en un valo de la placa de vidrio.
3. Agregar una gota de latex-globulina, mezclar con un aplicador.

60

4. Agitar por dos minutos.


5. Interpretacin:
negativo = ausencia de aglutinacin
positivo dbil = aglutinacin visible con pequeos agregados
positivo = aglutinacin visible con agregados grandes y fondo claro
b) Mtodo Cuantitativo
1. Colocar 9 tubos de ensayo en una gradilla y marcarlos del 1 al 9
2. Depositar 1.9mL de sol. Reguladora glicina-salina en el tubo # 1 y 1mL en cada uno de
los tubos restantes.
3. Aadir 0.1mL de suero problema la tubo # 1, mezclar y transferir 1mL al tubo #2
4. Mezclar y transferir de igual modo hasta llegar al tubo # 9,
5. Los valores de las diluciones son:
TUBO No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9

DILUCIN
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280
1:2560
1:5120

6. Colocar una gota de cada dilucin en cada valo de la placa de vidrio y aadir una gota de latex-globulina,
continuar con el mismo procedimiento que para la prueba cualitativa arriba mencionada.

7. Interpretacin . El ttulo del suero corresponder a la ltima dilucin en que se presente


aglutinacin del reactivo latex-globulina.
BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio. 6. Edicin. Editorial Salvat.
2.M.J. Lynch et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin. Editorial interamericana.
3.Marcus a. Krupp. Diagnstico Clnico y de Laboratorio. Manual Moderno. 8. Edicin.
4. Instructivo REUMATEX. Laboratorios Lafon, S.A. de C.V.

61

PRUEBA DE EMBARAZO
INTRODUCCIN:
El termino prueba de embarazo es de hecho un termino errneo, ya que la mayora de estos
procedimientos lo que miden es la presencia de gonadotropina corinica humana (HCG) y
no la de un feto. La HCG es una glucoprotena producida por las clulas trofoblsticas del
blastocisto en desarrollo despus de aproximadamente 10 das de la concepcin, mas tarde
se produce en el corin y la placenta.. Es un dmero compuesto de subunidades y . Las
subunidades no son especficas, siendo compartidas con las de la hormona luteinizante
(LH), la hormona estimulante del folculo (FSH) y la hormona estimulante del tiroides
(TSH). Las subunidades son especficas de la placenta.
Despus de la concepcin, se produce un rpido aumento en la cantidad de HCG en la orina
aproximadamente a las 5 semanas de gestacin (5 semanas despus del ltimo perodo
menstrual), que alcanza los niveles mximos en un tiempo aproximado de 10 semanas de
gestacin. Las semanas de gestacin se refieren a las semanas transcurridas despus del
ltimo perodo menstrual ms que a las semanas despus de la concepcin, ya que sta
fecha es ms difcil de determinar con certeza. A medida que la produccin de estrgeno y
progesterona por la placenta aumenta durante el segundo trimestre, los niveles de HCG
descienden. Este nivel constituye la medida ms lgica para la pronta confirmacin de un
embarazo; por el contrario, el estriol es ms til para la evaluacin de problemas del feto
durante el tercer trimestre.
La eliminacin de la HCG se incrementa a parte del embarazo en la mola idatiforme y en el
coriepiteloma hasta cifras enormes. Los quistes lutenicos dan aumentos menores. En el
varn, en ciertos teratomas y en tumores malignos testiculares. Disminuye en los casos de
peligro de aborto o el aumento es muy lento. En el embarazo ectpico, despus de un
ascenso la .HCG permanece en valores de meseta, o curva plana.1,3,4

Niveles urinarios de gonadotropina corinica humana (HCG), estriol y pregnadiol durante


el embarazo.
62

OBJETIVO.
Determinar cualitativa y cuantitativamente la presencia de la hormona gonadotropina
corinica humana (HCG) en muestras problema de sangre y orina a fin de correlacionar su
importancia clnica.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensayo de 13 x 100mm
Gradilla
Pipeta de 5mL
Pipetas Pasteur
Embudo de cristal
Torundas de algodn
Papel filtro
Agitador de vidrio
Acido clorhdrico
Acetona
Solucin fisiolgica
Alcohol desnaturalizado
Kit Prenatest Beta Monoclonal
Centrfuga
Suero sanguneo y Orina de 24hs.
PROCEDIMIENTOS:
a) Determinacin Cualitativa de HCG. (Inhibicin de hemaglutinacin)3
1.Enfriar la orina (precipitacin del material insoluble)
2. Filtrar o centrifugar (3000 a 4000 rpm) la orina x 5 a 10 min.
3. En un tubo de ensayo poner dos gotas de suero Anti-HCG monoclonal.
4. Agregar 2 gotas de orina y mezcle.
5.Dejar caer en el fondo del tubo una gota de eritrocitos HCG previamente resuspendidos y
mezclar.
6. Colocar en una gradilla y poner en un lugar libre de vibraciones y calor excesivo.
7. Observar los resultados positivos en una hora y los negativos en 1 a 2 Hs.

POSITIVO

NEGATIVO

63

b) Determinacin Cuantitativa de HCG. (Inhibicin de hemaglutinacin)3


Preparacin del Suero:
1.Colocar 1mL de suero problema en un tubo de ensayo.
2. Agregar 0.17mL de HCl 0.5N y mezclar.
3. Con una pipeta ponga 4mL. de acetona bajo el nivel del suero, homogenizando
perfectamente.
4. Filtre la mezcla a travs de papel filtro para retener precipitados finos. Lave el tubo de
ensaye con otros 2mL de acetona y fltrela a travs del mismo embudo. Espere unos
minutos a que se evapore la acetona y no haya restos visibles de humedad. Es
recomendable incubar a 37C durante unos minutos para eliminar la humedad.
5. Raspe el precipitado depositndolo dentro de un tubo de ensaye limpio y agregue 1mL de
solucin salina fra. Mezcle bien con un agitador de vidrio.
6. Una vez disuelto clarifique perfectamente por centrifugacin. El sobrenadante obtenido
queda preparado para la cuantificacin de la HCG.
Preparacin de la Orina:
1. Mida el volumen total de la orina de 24hs. Proporcionada por el paciente, vigilando que
la colecta se haga en un recipiente libre de detergente o sustancia qumicas.
2. Enfre una pequea porcin de la orina ( 5-8mL) para precipitar la materia insoluble.
3. Centrifugue la orina a 3000 4000 rpm de 5 10 min., o bien fltrela. La orina queda
preparada para la cuantificacin.
Procedimiento para la cuantificacin:
1. Colocar 0.1mL de solucin salina en 8 tubos de ensayo proporcionados en el equipo.
2. Agregar 0.1mL de la muestra problema preparada (orina o suero) en el primer tubo.
Mezclar bien y transferir 0.1mL al segundo tubo y homogenizar. Continuar con la misma
operacin hasta llegar al octavo tubo, deschese 0.1mL del ltimo tubo. Las diluciones
obtenidas son respectivamente 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, contenidas en
un volumen de 0.1mL.
3. Con un gotero agregar 2 gotas de suero anti-gonadotropina corinica humana (0.1mL) a
cada uno de los 8 tubos.
4. Agite bien los eritrocitos recubiertos por HCG y agregue en forma vertical una gota a
cada uno de los 8 tubos, cuidando que la gota caiga al centro del tubo.
5. Mezcle bien y coloque la gradilla en un lugar exento de vibraciones y calor. Haga la
lectura entre 1:30 a 2:00 Hs.
6. Resultados: La lectura deber considerar como la dilucin final al promedio de aquella
que se encuentre entre la que inhibe totalmente la aglutinacin formando un anillo y la que
da un patrn homogneo en el fondo del tubo.

64

7. Interpretacin. (Ejemp.)

1:2
1:4
dilucin final 1:48

1:8

1:16

1:32

1:64

1:128

CALCULOS:
Sensibilidad del reactivo: detecta desde 1000 U.I./litro
En orina: H.C.G. (U.I./mL) = vol. De orina de 24 Hs (mL) X reciproco de la dilucin final
X sensibilidad del reactivo.
En suero: : H.C.G. (U.I./mL) = dilucin final X sensibilidad del reactivo.

BIBLIOGRAFA:
1. Todd-Sanford. Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6. Edicin 1978. Editorial Salvat.
2. M.J. Lynch. et.al. Mtodos de Laboratorio. 2. Edicin 1977. editorial Interamericana.
3. Laboratorios Lafon, S.A. de C.V.. Prenatest Beta Monoclonal..
4. .Alfonso Balcells. Ka Clnica y el Laboratorio 18a. Edicin 1999. Editorial Masson.

65

COPROPARASITOSCPICO
INTRODUCCIN.La parasitologa estudia los seres que viven momentneamente o permanentemente sobre
otros organismos vivientes o dentro de ellos y obtienen de los mismos sus alimentos, as
como las relaciones entre dichos seres y sus huspedes.
La gran mayora de las enfermedades parasitarias que se conocen desde la antigedad no
han logrado ser erradicadas, a diferencia de otros padecimientos infecciosos, por la
ignorancia, negligencia e indiferencia humana que han impedido la visualizacin del grave
problema de Salud Pblica que constituyen.
El examen de heces tiene su mxima indicacin clnica en las diarreas crnicas, y en
general interesa en aquellos procesos que cursan con insuficiencia digestiva o en aquellos
en que se busca el germen parsito de la enfermedad.
Comprende la observacin directa, macroscpica y el anlisis parasitolgico de la
deposicin.
CARACTERES MACROSCPICOS:
a). CONSISTENCIA.- Normalmente debe ser slida y formada, es decir, cilndrica y
consistente. Los estreidos eliminan deposiciones pequeas, duras y a menudo en bolas o
caprinas. Las falsas diarreas de los constipados se caracterizan por la deposicin mixta,
compacta la primera parte y pastosa la final. Son fluidas, pastosas o lquidas las heces en
las diarreas. En el clera se han comparado con la sopa de arroz, y en la tifoidea con el
pur de guisantes. En los enfermos con insuficiencia gstrica descompensada parece una
papilla. Es cremosa y pegajosa, como mantequilla, en las esteatorreas de origen biliar,
pancretico o entrico. En el caso de las melenas ( hemorragias digestivas altas) las heces
son pegajosas y oscuras como el alquitrn. Espumosa en la llamada dispepsia de
fermentacin. Pueden apreciarse restos toscos de alimentos en la lientera por trnsito
rpido, especialmente en la insuficiencia gstrica.
b) COLOR.- Normalmente y con dieta mixta, la deposicin es de color pardo ms o
menos oscuro en el adulto, oscurecindose a medida que pasa el tiempo expuesta al aire.
Con la dieta lctea y en los lactantes es de color amarillo canario. Con dieta crnica se
torna de color castao oscuro. Una alimentacin rica en verduras tie las heces de color
verdoso, en tanto que, si predominan las patatas y el pan las heces se aclaran hacia un
castao amarillento. En general las heces duras de los estreimientos son ms oscuras de
lo normal, y las deposiciones diarreicas suelen ser mas claras. En la acolia de las ictericias
obstructivas las heces son de color blanco grisceas. Son de color amarillento en las
diarreas de fermentacin, en las esteatorreas del esprue, en la insuficiencia pancretica. Son
rojizas las que contienen sangre no transformada de origen bajo (hemorroides, tumores de
colon, etc.). La hematina y rifampicina pueden dar una coloracin pardo-rojizo a las
heces. Negruzcas son las heces en las melenas (hemorragias digestivas altas) o por la
ingesta de alimentos como morcilla, moras, uvas, vino tinto, etc. O bien por ingestin de
preparados de carbn, hierro, bismuto, sales de plata, etc.

66

c). OLOR. El olor fecal, caracterstico, se hace ftido en todos los procesos que cursan con
putrefaccin de las protenas ingeridas o endgenas (lo cual puede ocurrir, aunque no
siempre, en pacientes con insuficiencia gstrica, biliar o pancretica, colitis, cncer, etc.), y
sobre todo en las melenas, en el cncer de colon,
en el absceso abierto en el intestino grueso. En la acolia es desagradable, pero no
hediondo. El olor rancio, agrio es de las diarreas de fermentacin con trnsito rpido a
partir del ciego. Inodoras se vuelven las deposiciones durante las curas con antibiticos
intestinales. De olor amoniacal son las diarreas urmicas y en las fstulas rectovesicales.
Entre los parsitos ms comnmente encontrados en el humano se hallan:
ASCARIS LUMBRICOIDES
Nematodo que se adelgaza en cono hacia los extremos, de color rosado-nacarado. Vive en
el intestino delgado del hombre, que es su husped exclusivo, ya sea libre en la luz
intestinal o bien fijos a la mucosa. Los huevecillos de los scaris no estn embrionados
cuando son expulsados con las materias fecales, pueden permanecer viables por mucho
tiempo en la tierra hmeda, a cubierta de los rayos directos del sol, sin que les afecte al
parecer el fro, la putrefaccin y la accin de algunas sustancias qumicas. El hombre se
infecta al ingerir estos huevos maduros a los que, al llegar al duodeno, son atacados por los
jugos intestinales. Las larvas comienzan a moverse en forma activa en el interior del huevo,
hasta que emergen por una pequea hendidura. Penetran activamente a la mucosa intestinal,
caen a la circulacin portal, atraviesan el hgado y llegan al corazn derecho. Desde aqu,
las larvas son impulsadas al pulmn, donde quedan atrapadas en los capilares pulmonares.
En este sitio, siguen el proceso de maduracin, hasta que rompen el
endotelio capilar y alveolar, pasando al aparato respiratorio, por el cual ascienden hasta
franquear la epiglotis. Llegan a la faringe, son deglutidas y vuelven as hasta su punto de
partida, el duodeno. Una vez en el intestino delgado, las larvas completan su maduracin.
La invasin de organismo humano por scaris, bien sea como adulto o como larvas, es la
ascariasis, la que puede ser causa de lesiones y trastornos de magnitud variable.

ASCARIS LUMBRICOIDES: Huevo fertilizado.

67

TRICHURIS TRICHIURA (Tricocfalo)


El cuerpo de los gusanos de esta especie tiene la forma de un ltigo, con una porcin
posterior, fusiforme, que corresponde al cuerpo y la otra anterior que es larga y delgada,
filiforme, que corresponde a la cabeza. Los huevecillos tienen forma caracterstica de tonel
con dos polos, prominentes obturados por taponcillos mucosos incoloros y traslucidos, su
cscara es gruesa de color pardo; y en general tienen aspecto de panecillos o bolillos. Su
hbitat es el ciego, en condiciones naturales, el nico husped es el hombre, en cual se
infecta por va oral al ingerir huevos larvados del helminto que contaminan alimentos o
bebidas contaminados o indirectamente por juguetes, animales domsticos o polvo. En el
intestino delgado la larva escapa del huevo y penetra en las criptas de Lieberkhn. Despus
de un corto perodo, la larva vuelve al lumen intestinal y migra a la regin cecal,
alcanzando su estado adulto, sin pasar por los pulmones como ocurre con otros nematodos
intestinales. El tiempo requerido entre la ingestin de huevos larvados el crecimiento de los
gusanos y la aparicin de los huevos en las heces de los huspedes, se ha calculado
alrededor de un mes . La longevidad del tricocfalo se ha estimado entre 7 y 10 aos. La
gran mayora de las infecciones por tricocfalos son asintomticas. Los variados sntomas
que a veces se imputan a la presencia del gusano, pueden corresponder a otras diversas
etiologas. La aparicin de sintomatologa est condicionada por la carga parasitaria, de ah
que slo tengan inters clnico la tricocefalosis masiva, que se presenta en nios
desnutridos entre los 2 y 5 aos. Lo ms llamativos son los sntomas digestivos,
caracterizados por crisis disentricas repetidas, con deposiciones mucosanginolentas, pujo,
tenesmo, dolores abdominales, meteorismo y prolapso rectal. Pueden presentarse nauseas y
vmitos que impiden la alimentacin, contribuyendo a la deshidratacin del enfermo.

TRICHIRIS TRICHIURA. Huevecillo

68

ENTEROBIUS VERMICULARIS U OXYURIS VESMICULARIS


Pequeo nematodo blanquecino y delgado como un hilo de forma fusiforme, es de difcil
erradicacin conocido vulgarmente como pidulle, produce una infeccin habitualmente
de tipo familiar, con molestias entre las que se destaca el prurito anal y perturbaciones
nerviosas. La invasin del intestino por enterobius puede ser causa de la formacin de
pequeos focos inflamatorios y an lceras en los puntos en que se implantan los parsitos.
La presencia de los oxiuros en la cavidad del apndice, lo que acontece con frecuencia,
puede producir una reaccin inflamatoria que semeja a los sntomas de la apendicitis y es
posible que sea punto de partida de una verdadera apendicitis. Viven en el ciego, en el
apndice y en las porciones contiguas al leon y colon ascendente. Emigran hacia el recto,
del que salen activamente atravesando el ano, independientemente de las materias fecales.
En la piel perianal se fijan con su boca y vaca su tero, dejando en una sola puesta varios
millones de huevecillos, adheridos entre s con una sustancia viscosa que los adhiere
tambin a la piel en el lugar en que fueron puestos o a la ropa que estuvo en contacto con
aquella porcin; esta migracin de las hembras y la postura de huevos ocurre en la ultimas
horas de la tarde y de la noche. Para el diagnstico es comn emplear el mtodo de
Graham, mediante la prueba de la cinta adhesiva de papel transparente. Los huevos
atrapados en ella se conservan largo tiempo y se pueden observar fcilmente en el
microscopio.

ENTEROBIUS VERMICULARIS. Huevecillo

GIARDIA LAMBLIA
Protozoario flagelado predominante en los nios y caracterizado por la produccin de
cuadros gastrointestinales agudos y crnicos, de intensidad variable, en los adultos
comnmente es asintomtico. Se adquiere como consecuencia de las malas condiciones de
saneamiento ambiental (calidad de los medios de eliminacin de excretas y de basura, la
populacin de moscas, los grados de contaminacin del agua de bebida y de riego, con la
subsiguiente contaminacin de alimentos). Puede encontrarse en las heces como trofozioto
o quiste, el primero tiene forma semejante a una pera partida longitudinalmente, mientras
que los quistes tienen forma elipsoidal, tiene una membrana lisa y delgada, que envuelve al
citoplasma, incoloro y finamente granuloso en cuyo seno estn cuatro o ms ncleos.
Habita en el intestino delgado del hombre, sobre todo en el duodeno, se nutre por
imbibicin a travs de su membrana . Se le encuentra en la fase de trofozoito en las
materias fecales diarreicas y en la de quiste en las pastosas o formadas. Este parsito es
cosmopolita y es el ms comn de los flagelados intestinales del hombre, se le encuentra
69

entre el 5 y 54 % de las personas. Los quistes pueden ser capaces de resistir la accin de
varios factores que seran adversos para los trofozoitos. As los quistes permanecen viables
durante varios das en el agua potable, an en la que ha sido tratada corrientemente con el
cloro, pueden vivir en el intestino de las moscas por lo menos durante 24hs., en las
cucarachas viven hasta por doce das.

Trofozoito y Quiste de Giardia Lamblia

ENTAMOEBA HISTOLYTICA
Amiba que puede encontrarse en las heces bajo las formas de trofozoito, prequiste y quiste;
el trofozoito es la forma vegetativa activa, posee un ectoplasma que deriva en pseudpodos,
de aspecto hialino, ancho y transparente, posee un ncleo excntrico nico. Los prequistes
son clulas incoloras redondas u ovales ms pequeas que el trofozoito pero mayores que el
quiste, carecen de inclusiones de alimento. La formacin de seudpodos es bastante lenta y
el parsito no se desplaza. Los quistes son redondos u ovales, ligeramente asimtricos,
hialinos, con una pared lisa y refringente. El quiste inmaduro tiene un solo ncleo, mientras
que el maduro posee cuatro ncleos pequeos. La E. Histolytica es parsito obligatorio del
hombre. Habita en el colon en su luz y en el espesor de sus paredes, es ms abundante en el
ciego, en la porcin inicial del colon ascendente y en el recto. Se le puede encontrar
tambin en las dems porciones del intestino grueso, en la terminal del ileon y en el
apndice. Tambin puede vivir y multiplicarse en los tejidos del hgado, pulmones, cerebro,
vsceras y en la piel. La amiba absorbe sus alimentos en los tejidos disueltos por sus
enzimas citolticas e ingiere glbulos rojos, hemoglobina, sustancias parcialmente
sintetizadas parcialmente por el husped, fragmentos de tejido, todos ellos por inclusin de
un seudpodo. Puede ingerir bacterias y fragmentos de materias fecales del intestino. La
infeccin con E. Histolytica de cepas virulentas produce en el humano respectivo un
conjunto de lesiones y trastornos varios que se hacen patentes como enfermedad, la
amibiasis, mas comnmente en forma de colitis amibiana o amibiasis intestinal la cual
puede ser aguda, subaguda, y crnica. La infeccin amibiana del hgado y de otros rganos
suscita en ellos procesos patolgicos que a menudo conducen a la formacin de focos
70

necrticos o de o abscesos, la invasin de la piel, con esta especie, es causa de ulceracin


con caracteres peculiares. La infeccin se realiza por la ingestin de quistes maduros que
son relativamente resistentes a las inclemencias del medio externo, los cuales pueden llegar
al hombre por el agua, legumbres contaminadas por heces infectantes, por alimentos
contaminados por las moscas o las manos de quienes los manipulen y estn enfermos, o por
transmisin directa de portadores de quistes.

E. HISTOLYTICA. Quistes teidos con lugol.

TAENIA SOLIUM
La forma del cuerpo es la tpica de los cestodos, es decir, la de una cinta segmentada
transversalmente, de color blanco o levemente amarillenta, de longitud de 2 a 4 metros, por
lo general, an cuando puede llegar hasta 7 metros. Los huevecillos de los cestodos son
esferoidales u ovoidales y estn formados por el embrin u vulo fecundado, envuelto en
una membrana interna y en otra externa. Esta especie de tenia vive en las porciones
iniciales del intestino delgado, adherida a la mucosa mediante el rostelo con sus ganchos y
sus ventosas, por lo comn hay un solo parsito en cada husped, a lo que se debe el
nombre vulgar de solitaria, que se le ha dado a esta especie, pero en algunos casos se han
encontrado varios, hasta doce, en un solo individuo. El hombre es el nico husped
definitivo normal para la especie. El fecalismo humano es la principal circunstancia de
contaminacin del ambiente externo con elementos infectantes para los cerdos, sus
huspedes intermediarios normales. La costumbre de ingerir cruda o insuficientemente
cocida la carne de cerdo, cierra el ciclo para la infeccin humana por las tenias adultas, as
como la falta de higiene de frutas, verduras, manos o la presencia de vectores, dan ocasin
al riesgo de cisticercosis humana.

71

TAENIA SOLIUM. Huevo

HYMENOLEPIS NANA
Los cestodos que forman esta familia se caracterizan por sus progltides que son casi
siempre ms anchos que largos, sus poros genitales son unilaterales y es escolex lleva una
sola corona de ganchitos. Los huevecillos son esferoidales u ovoidales envuelto en dos
membranas una interna y delgada con abultamiento en cada polo, del que emanan de 6 a 8
filamentos largos y ondulados, y la otra externa, gruesa y lisa. Habita en el tercio superior
del ileon, vive varias semanas. Los huspedes definitivos naturales son el hombre, los
ratones y las ratas. La transmisin depende del contacto directo, ya que los huevecillos,
poco resistentes, son sensibles al calor y a la desecacin y no puede sobrevivir fuera del
husped. Se transmite directamente de mano a boca y con menos frecuencia por agua y
alimentos contaminados, y tal vez por insectos como huspedes intermediarios. Los hbitos
poco higinicos de los nios pequeos favorecen la persistencia del parsito, en los grupos
de menor edad. La humanidad es la fuente principal de infeccin, pero en ocasiones puede
provenir de roedores. Generalmente no hay lesiones en la mucosa intestinal pero puede
producirse una enteritis, por infeccin masiva, las infecciones ligeras no ocasionan
sntomas o solo trastornos abdominales vagos. En infecciones masivas, los nios pueden
sufrir anorexia, dolores abdominales con diarrea o sin ella, vmitos y vrtigo.

TAENIA ENANA. Huevo de Hymenolepis nana.

72

STROGYLOIDES STERCOLARIS
Nematodo filariforme, pequeo, incoloro, semitransparente, con cutcula finamente
estriada, los gusanos se encuentran mas frecuentemente en duodeno y parte proximal de
yeyuno pero en infecciones intensas, tambin pueden ser afectados ploro, intestino delgado
y grueso, y vas biliares proximales y pancreticas. Esta especie se puede presentar en dos
formas distintas, la de vida libre y la parasitaria. La primera vive en el suelo y se la
considera como la forma natural en los lugares en que las condiciones del ambiente, sobre
todo la temperatura y humedad, son propicias para su vida y multiplicacin, se alimentan de
materia orgnica y se transforman en una larva filariforme, que es la forma infectante para
el hombre, permaneciendo en el suelo por perodos cercanos a los 50 das y, puesta en
contacto con la piel la penetra y alcanza la circulacin general por los vasos venosos y
linfticos; puede llegar a corazn derecho y pasar a pulmn, asciende por el rbol
respiratorio a travs de los bronquolos, los bronquios, la trquea, y la laringe, alcanza la
faringe, donde es deglutida, pasa al tubo digestivo, descendiendo hasta llegar al intestino
delgado, penetra la mucosa intestinal en donde comienza la postura de huevos,
completando as el ciclo biolgico. En los puntos por donde penetran las larvas en la piel,
producen prurito seguido de una pequea ppula y edema; a su paso por pulmn provoca la
formacin de pequeos focos de neumonitis; en el intestino puede producir inflamacin y
lcera superficial.

STROGYLOIDES STERCOLARIS. Larva

73

OBJETIVO.Identificar a los parsitos ms frecuentemente encontrados en heces fecales de humano y


su correlacin con la patologa causada.

MATERIAL Y EQUIPO:
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Aplicadores de madera
Abatelenguas

Cinta scotch
Solucin salina isotnica
Solucin de lugol
Materia fecal.

PROCEDIMIENTOS:

A).- EXAMEN DIRECTO


1. Determinacin de caracteres macroscpicos.

2. Colocar en un portaobjetos limpio una gota de solucin salina y en otro una gota de solucin de lugol.

3.Con ayuda de un aplicador de madera tomar una pequea porcin de material fecal y
mezclarla con las soluciones
4. Colocar cuidadosamente sobre la muestra un cubreobjetos.
5. Observar al microscopio con los objetivos de seco dbil (10/0.22) y seco fuerte (40/0.65).

B).- MTODO DE GRAHAM

74

NOTA:
Conviene hacer esta maniobra al despertar el paciente y antes del aseo matinal. El examen
se efecta diariamente, usando una placa, hasta completar 5 7 das en total.

BIBLIOGRAFA:
1. A. Atas, A. Neghme. Parasitologa Clnica. 2. Edicin 1984.Edit. Mediterrneo. p155.
2. Manuel Matnez Bez. Manual de Parasitologa Mdica 2. Edicin 1979. Edit. La Prensa
Medica Mexicana. p. 162, 165, 270-271.
3. Alfonso Balcells. La Clnica y el Laboratorio. 18. Edicin 1999. Edit. Masson. p 253258, 323
4. H.W. Brown. F.A. Neva. Parasitologa Clnica. 5a. Edicin. Edit. Interamericana. p 142.

75

EXAMEN GENERAL DE ORINA.


INTRODUCCIN:

El anlisis de orina es un mtodo muy usado para la deteccin inicial de alteraciones de


vas urinarias y de tipo general. La normalidad de la orina sugiere la ausencia de alguna
enfermedad grave, en tanto que los datos anormales sugiere la presencia de alteraciones. Es
el ms antiguo y comn de las pruebas realizadas en el laboratorio y nos da informacin
sobre todos los rganos y sistemas del cuerpo. Una correcta evaluacin de este anlisis nos
puede proveer de informacin sobre metabolismo de Carbohidratos, funcin renal,
infecciones del sistema urinario, equilibrio cido-base y condiciones hemolticas.
La orina es un fluido biolgico dinmico, y su composicin depende de tres factores
fundamentales: el estado de nutricin, el estado de los procesos metablicos y la capacidad
del rin para manejar selectivamente las sustancias.
El tiempo y la temperatura son los factores que con mayor frecuencia modifican las
caractersticas iniciales de la orina. De no ser procesado el espcimen en el perodo ptimo
de una hora despus de la miccin las caractersticas pueden variar.
La seguridad de un uroanlisis depende de la calidad de la muestra. Aunque es factible
utilizar cualquier muestra, considerando la informacin siguiente:
Deber proporcionarse al paciente la siguiente informacin segn sea el caso.
1) Si est tomando vitamina C (cido ascrbico) suspenda la toma por lo menos 24 horas
antes de recolectar su muestra o recolecte su muestra por lo menos 24 horas despus de la
ultima vez que tom vitamina C. Avise al personal del laboratorio si est tomando
cualquier otro medicamento.
2) Abstngase de tener relaciones sexuales 3 das antes de proporcionar su muestra al
laboratorio.
3) Si est menstruando o reglando espere a que termine el periodo. Dos das despus podr
recolectar la muestra. En caso de ser necesario que proporcione la muestra a pesar de estar
reglando, es necesario que utilice un tampn (Tampax) para evitar la contaminacin de la
muestra de orina con sangre.
Los parmetros fsicos a determinar incluyen: Color: las variaciones de color de la orina
normal van desde amarillo plido hasta mbar oscuro. Los cambios pueden ser
consecuencia de la dieta, ingesta de frmacos y muchos trastornos metablicos,
inflamatorios e infecciosos as como la concentracin de los componentes de la misma;
Olor: Este es significado en las muestras frescas. Normalmente no es desagradable;
aromtico, debido a cidos grasos voltiles. Hay pocas ocasiones cuando el olor de la orina
tiene algn significado clnico; Aspecto: La orina normal de reciente emisin es
visualmente clara, cualquier orina que no sea clara requiere de una observacin
microscpica para determinar la causa de la turbidez; Densidad: La gravedad especifica de
la orina es definida como el peso de la orina comparada con el peso de un volumen igual de

76

agua destilada a la misma temperatura y est dada por la concentracin de sustancias


disueltas en la orina.
Entre los aspectos qumicos bsicos que contempla el examen qumico de la orina se
hallan:
pH: Normalmente, la reaccin de la orina oscila hacia el lado cido o el alcalino, segn la
composicin de la dieta, alcanzndose en circunstancias extremas cifras de pH que van
desde 4.5 a 8. Como es sabido, la dieta crnica es acidificante, mientras que la vegetariana
es alcalinizante de la orina. El pH alcalino de la orina puede ser consecuencia de: alcalosis
respiratoria, fisiolgica y transitoria al levantarse, o metablica, en el sndrome de Cushing,
carcinoma bronquial, cistitis, lceras gstricas obstructivas, vmitos por estenosis pilrica,
obstruccin intestinal, y en la acidosis tubular renal y en ciertas infecciones urinaria;
mientras que el pH cido es consecuencia de: acidosis metablica diabtica
especficamente- , fiebre, procesos malignos, intoxicacin por alcohol metlico,
insuficiencia renal aguda, en su primera fase, acidosis respiratoria, tuberculosis renal,
pielonefritis, en menor grado en las diarreas graves, en la hipoalimentacin y en la
insuficiencia respiratoria avanzada.
Protenas: Toda orina normal contiene albmina en cantidades insignificantes, se puede
detectar su presencia cuando est alterado el filtrado glomerular, la capacidad tubular de
resorcin es rebasada o alterada por diversos cuadros anormales. Existen varios tipos de
proteinuria: la falsa o por contaminacin, la infrarrenal, la nefroptica, la extrarenal.
La albminuria falsa o por contaminacin, es decir, con protena de procedencia extraa a
la orina, como la que se agrega a ella a partir de: menstruacin, semen, secreciones
perineales, secreciones rectales.
La proteinuria de origen infrarrenal se presenta en: infecciones gonococcicas o venereas de
la uretra, uretritis inespecfica, traumatismo de vas urinarias, prostatitis, cistitis, migracin
de un clculo.
Albuminuria nefroptica, se presenta generalmente en los siguientes cuadros:
glomerulonefritis aguda y crnica o difusa, nefritis focales, sndrome nefrtico de cualquier
etiologa, nefropatas txicas, glomerulo-esclerosis diabtica, litiasis renal, pielitis y
pielonefritis, tuberculosis renal, tumores malignos renales, rin poliquistico.
Albuminuria extrarrenal. Puede ser funcional u orgnica. La funcional aparece
ocasionalmente o intermitentemente entre ellas, las ms frecuentes son: proteinuria
ortosttica, la cual aparece cuando la persona est de pie y desaparece al adoptar la posicin
de decbito. Aparentemente causada por una compresin de la vena renal, originada por
una lordosis lumbar acentuada.
Proteinuria por exposicin prolongada al fro.
Proteinuria por ingesta abundante de protenas.
Proteinuria por actividad fsica excesiva.
La albuminuria extrarrenal de tipo orgnico se presenta principalmente en: coma acidtico,
tumores malignos gastrointestinales, toxemia del embarazo, enfermedad de Hodgkin,
insuficiencia cardaca congestiva.

77

La proteinuria sugiere la presencia de nefropatas como glomeruloesclerosis,


glomerulonefritis aguda o crnica, nefrolitiasis, rin poliqustico, e insuficiencia renal
aguda o crnica.
Glucosa: En el rin sano, despus de que la glucosa ha sido filtrada a travs del
glomrulo, la mayor parte es absorbida en el tbulo proximal. La glucosuria se presenta
cuado es sobrepasado el umbral renal, el cual es variable de persona a persona, sin
embargo, generalmente est situado a nivel de una glucemia de 150 a 180 mg/100mL.
Tambin se presenta glucosuria cuando la resorcin tubular est disminuida a pesar de que
la glucemia sea normal. La causa ms importante de una glucosuria es la diabetes mellitus,
aunque hay otros procesos en los que se
presenta tambin como: embarazo, estrs, traumatismos, afecciones endocrinas,
infecciones, anestesia, glucosuria renal, txica, etc
Cetonas: La presencia de cuerpos cetnicos en la orina es conocida como cetonuria. Los
llamados cuerpos cetnicos de la orina son: El cido aceto-actico, la acetona y el cido
betahidroxibutrico. La cetonuria se presenta cuando la cetonemia esta aumentada a raz de
una movilizacin y consumo exagerado de los lpidos (triglicridos y cidos grasos
principalmente), por falta absoluta o relativa de carbohidratos. De los cuerpos cetnicos, la
acetona se elimina por la respiracin, el cido aceto-actico se acumula en la sangre y una
parte se transforma en acetona por un mecanismo de descarboxilacin y parte se convierte
en cido betahidroxibutrico, el cual constituye del 40 al 70 % del total de cuerpos
cetnicos. En una persona normal, los niveles normales de cuerpos cetnicos en sangre
estn en el rango comprendido entre 0.2mg a 8.0mg%, segn algunos autores y de 0.3mg a
2.0 mg% por otros. Con estas cifras se eliminan de 120 a 125 mg en 24 hs. por la orina,
cantidades que no son posibles de detectar por los medios qumicos habituales en qumica.
Pueden aparecer cuerpos cetnicos en orina de personas normales que tienen una ingesta
deficiente de carbohidratos, durante una exposicin al fro y despus d
e ejercicios intensos y prolongados y en personas sujetas a una dieta de reduccin de peso.
Su presencia es un signo caracterstico de la Diabetes sacarina. Las cetonas tambin pueden
aparecer en casos de inanicin y situaciones en que aumenta las necesidades metablicas,
junto con la disminucin en la ingestin de alimentos como en el caso de diarrea y vomito.
Nitrito: En condiciones normales, la orina que proveniente de la pelvis renal, los ureteros
y la vejiga es estril. Los grmenes (gram negativos) que son responsables de la mayora
de las infecciones de las vas urinarias, reducen el nitrato (obtenidos de la dieta), a nitrito.
Por esta razn, el descubrimiento de cualquier cantidad de bacterias en la orina de ese
origen, denota una anormalidad, la bacteriuria puede presentarse con o sin sntomas de
enfermedad. Por otra parte, la uretra anterior normalmente contiene bacterias en su
superficie mucosa, por lo cual, cuando se trata de corroborar un diagnstico, se empieza por
desechar la orina inicial, se toma la muestra y se desecha tambin la orina final.
Urobilingeno:
Despus que la bilis se excreta en el intestino, la bilirrubina conjugada se reduce por la
accin de las bacterias a mesobilirrubina, estercobilingeno y urobilingeno. El
estercobilingeno y urobilingeno son incoloros y se oxidan para formar los pigmentos
cromados urobilina y estercobilina. Los productos reducidos de la bilirrubina normalmente
78

son resorbidos por la circulacin portal, para se excretados por el hgado. Parte del
urobilingeno y del estercobilingeno resorbidos se excreta por la orina junto con el
mesobilirrubingeno. La urobilina, forma oxidada del urobilingeno, tambin se encuentra
en la orina normal.
La orina no deber ser expuesta a la accin de la luz solar. De esta manera se eliminan
resultados demasiados bajos o falsos negativos debido a la oxidacin. Resultados
demasiados altos o falsos positivos pueden ser causados por medicamentos que se tien de
rojo en la zona cida.
Bilirrubina: La bilirrubina es el resultado de la degradacin de la hemoglobina en el
sistema retculoendotelial. En los microsomas de los hepatocitos se conjuga la bilirrubina
con el cido glucurnico, formando el glucuronato de bilirrubina (bilirrubina directa), el
cual se excreta junto con la bilis al intestino en donde se transforma en estercobilingeno.
La bilirrubina conjugada o directa es susceptible de eliminarse por la orina, en tanto que la
bilirrubina indirecta no lo es. Normalmente en un individuo sano, no debe aparecer
bilirrubina en la orina, ya que la presencia de sta sugiere obstruccin parcial o completa
del sistema biliar intra o extra heptico y dao hepato-celular. La eliminacin de
bilirrubina en la orina, puede apreciarse en varios trastornos tales como diversas formas de
ictericia obstructiva (intra y extra heptica, as como en la parenquimatosa); en la hepatitis
aguda crnica, en la cirrosis heptica, colelitiasis, ictericia idioptica del embarazo,
carcinoma de la cabeza del pncreas, sndrome de Dubln-Johnson, y en algunas
intoxicaciones. La presencia de grandes cantidades de Vitamina C puede dar lugar a
resultados demasiados bajos o falsos negativos. La orina no deber ser expuesta a la luz
solar.
Sangre: En las personas sanas, normalmente se encuentran en la orina algunos eritrocitos,
los que entran en ella probablemente por diapdecis. La aparicin brusca de sangre o sus
pigmentos en la orina siempre es grave y por lo tanto, no deben omitirse esfuerzos para
determinar su origen y naturaleza. En trminos generales, la sangre se manifiesta en la
orina bajo 3 formas: Hematuria, Hemoglobinuria y Mioglobinuria. La hematuria es la
presencia de eritrocitos intactos en la orina; y se presenta bajos dos formas: Microhematuria
(no visible a simple vista) y Macrohematuria (visible a simple vista). La macrohematuria
puede ser inicial (origen uretral), completa (origen renal), final (de origen vesical) y su
presencia en la infancia sugiere: nefritis, pielonefritis, infeccin aguda o tumor del rin o
de vas urinarias, mientras que en los adultos sugiere: tumor, clculos, traumatismos,
tuberculosis. La hemoglobinuria se refiere al hallazgo en la orina de hemoglobina libre o
sus derivados qumicos inmediatos, los que son excretados por el rin. Se presenta cuando
existe una extensa o rpida destruccin de eritrocitos circulantes, de tal modo, que el
sistema reticuloendotelial es incapaz de metabolizar o almacenar las cantidades excesivas
de hemoglobina libre como en los casos: quemaduras extensas, traumatismo por
aplastamiento, transfusiones por sangre incompatible, paludismo, anemia hemoltica
congnita o adquirida. La mioglobinuria denota la presencia de mioglobina en la orina y se
presenta cuando los niveles plasmticos de 15 a 20mg% son rebasados; en general es
causada por lesiones o enfermedades que afectan los msculos estriados como: extenso
aplastamiento muscular, necrosis muscular, postquirrgico muscular, post-ejercicio intenso
en personas no entrenadas, dermatomiositis. En cuanto a la presencia de sangre en orina,
los valores normales indicados en el perfil urinario se refieren a eritrocitos intactos. El
79

lmite para 5 a 10 eritrocitos/ l, es valido igualmente para Hb proveniente de esa cantidad


de eritrocitos. Resultados falsos positivos pueden ser causados por restos de detergentes
fuertemente oxidantes en el recipiente de la orina.
Otro parmetro de importancia en el Examen General de orina es el anlisis microscpico
del sedimento urinario. En trminos generales, se recomienda que la orina por analizar sea
fresca, ya que existen una serie de elementos o componentes que varan con el transcurso
del tiempo. Normalmente, en estado de salud el sedimento revelar que existen algunos
eritrocitos, leucocitos y cilindros en muy pequeas cantidades. Es muy importante saber
diferenciar en un momento dado el tipo de elementos que se presentan, ya que existen unos
factores de error como: fragmentos de algodn, fibras de diversas clases, levaduras, gotas
de grasa, materia fecal en el caso de fstulas recto vesicales, grnulos de almidn,
secreciones vaginales, espermatozoides, diversos tipos de cristales, etc.
Clulas.-Entre las clulas presentes en la orina se encuentran eritrocitos (hemates o
glbulos rojos), leucocitos (glbulos blancos) y clulas epiteliales provenientes de
cualquier punto del tracto urinario, desde los tbulos hasta la uretra, o como contaminantes
procedentes de vagina o vulva. Pueden encontrarse en la orina como consecuencia del
desprendimiento normal de clulas viejas. Un incremento indica inflamacin de la porcin
del tracto urinario donde proceden. Se conocen 3 tipos fundamentales de clulas epiteliales:
- Tubulares
- De Transicin
- Pavimentosas
Eritrocitos.- Normalmente no aparecen hemates en la orina; sin embargo, la presencia de
1-2 hemates por campo de gran aumento por lo general no se considera anormal.
Leucocitos.- En promedio, la orina normal puede contener hasta 2 glbulos blancos por
campo de gran aumento. Son de mayor tamao que los eritrocitos, pero mas pequeos que
las clulas del epitelio renal. El aumento de leucocitos en la orina esta asociado con
procesos inflamatorios en el tracto urinario o en sus adyacencias. La presencia de gran
nmero de leucocitos en la orina, en especial cuando se encuentran en cmulos, es muy
sugestiva de infeccin aguda como pielonefritis, cistitis, uretritis.
Cristales.- Por lo general no se encuentran cristales en la orina recin emitida, pero
aparecen dejndola reposar durante un tiempo. Cuando la orina esta sobresaturada con un
compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de ste se
encuentran alteradas, el resultado es la formacin de cristales. En algunos casos esta
precipitacin se produce en el rin o en el tracto urinario y puede dar lugar a la formacin
de clculos urinarios (piedras).
La formacin de cristales depende del pH: En orinas cidas los cristales ms comunes que
se pueden encontrar son: de cido rico, oxalato de calcio y los uratos amorfos; con menor
frecuencia cristales de sulfato de calcio, uratos de sodio, cido hiprico, cistina, leucina,
tirosina, colesterol y sulfamida. En orinas alcalinas los cristales encontrados incluyen:
fosfato triple ( fosfato amonico-magnesico), fosfatos amorfos, carbonato de calcio, fosfato
de calcio y biuratos de amonio, tambin llamados uratos de amonio.
80

Cilindros.- Se forman en la luz de los tbulos del rin por precipitacin o gelificacin de
la mucoprotena de Tamm-Horsfall, por agrupamiento de clulas o de otros materiales
dentro de una matriz proteica, por adherencia de clulas o de material a la matriz, o por
conglutinacin de material en el interior de la luz tubular. Algunos cilindros pueden
contener protenas plasmticas.
Los cilindros se disuelven en orinas alcalinas, en orinas neutras de densidad 1.003 o menos.
La presencia de cilindros en la orina se acompaa con proteinuria. Pueden estar presentes
en casos de dao glomerular, dao tubular, inflamacin renal, infeccin renal. Entre los
diversos tipos se encuentran: cilindros hialinos, eritrocitarios, leucocitarios, epiteliales,
granulosos, creos y grasos.
Estructuras Diversas.- Otras estructuras que pueden aparecer en la orina son: bacterias,
hongos, cilindroides, espermatozoides, moco, grasa, cristales de almidn, fibras, gotitas de
aceite.
Parsitos.- Ocasionalmente pueden encontrarse parsitos en la orina, ya sea porque el
tracto urinario ha sido contaminado por heces fecales o por contaminacin vaginal. Entre
los parsitos ms comunes se encuentran: Trichomonas vaginalis, Enterobius vermicularis,
Schistosoma haematobium, huevos de este mismo.

OBJETIVO:
Realizar el examen general de orina (fsico, qumico y microscpico) de una muestra
problema a fin de establecer la importancia clnica de cada uno de sus parmetros.
MATERIAL Y EQUIPO:
Tubos de ensaye de 13x100mm
Probeta de 100 mL
Probeta de 50 mL
Portaobjetos
Pipeta Pasteur
Cubreobjetos
Densmetro
Refractmetro
Centrfuga
Microscopio
Tiras reactivas Combur 10 Test
Orina problema.

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PROCEDIMIENTOS:
I.- DETERMINACIN DE PARMETROS FSICOS:
a) Determinacin del color.
El espcimen deber ser examinado bajo buenas condiciones de luz y a travs del recipiente
contra un fondo blanco. La coloracin se reporta por la escala de VOGEL , siendo vogel I
el color amarillo plido, vogel II el color amarillo claro, vogel III el color mbar claro, y as
sucesivamente hasta llegar al color ms oscuro.

b) Determinacin del aspecto :


La muestra bien mezclada deber ser examinada a travs de un recipiente claro, el cual se
observa frente a una fuente de luz. Determinar la presencia o no de turbidez.

c) Determinacin del olor :


Cualquier olor inusual deber ser escrito en la forma de reporte. Los olores amoniacales son
los ms comunes debido a la degradaci6n bacteriana de la urea y pueden indicar un

82

espcimen viejo o una infeccin en el tracto urinario, as como un olor frutal sugiere una
diabetes sacarina.
d) Determinacin de la Densidad o Gravedad Especfica (GE)
1. Uso del Densmetro
Vierta aproximadamente 40 ml de orina en una
probeta.
Descienda suavemente el Densmetro en la orina y
sultelo.
Espere a que el Densmetro se detenga.
No deber tocar las paredes, ni el fondo de la
probeta.

Lase la Gravedad especfica (GE) que


indique la escala del Densmetro en la
superficie de la orina (punto ms inferior
del menisco).

2. Uso del Refractmetro


Deposite una pequea gota de orina en la superficie del prisma, con ayuda de una pipeta
Pasteur.
Coloque la cubierta sobre la gota y oriente el prisma hacia una fuente de luz.
Observe en la escala de la derecha y determine la lectura ajustando el ocular.

Depositar una gota


de orina

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VALORES DE REFERENCIA:
GE normal: 1,020 (variacin normal: 1,010~1.025).
GE baja: menos de 1,010 (trastornos renales o endocrinos).
GE elevada: superior a 1,025 (glucosuria, proteinuria).
Una cifra reducida carece de importancia si el paciente ha ingerido una gran cantidad de
lquidos antes del ensayo.

II. DETERMINACIN DE LOS PARMETROS QUMICOS:


Para la determinacin de estos parmetros se utilizan las tiras reactivas, basadas en una
escala colorimtrica que permite la identificacin y cuantificacin de los mismos. Para ello
se recomienda emplear orina fresca y sin centrifugar.
Procedimiento:

Sumerja la tira reactiva brevemente


en la orina.

Al retirarla rasar, el canto lateral en


el borde del tubo para eliminar el
exceso de orina.
Toque con el borde de la tira la
superficie de un material absorbente
(gasa), sin tocar las reas reactivas.

84

Al cabo de 30-60 segundos compare el


color de la tira reactiva con la escala
cromtica que aparece en la etiqueta del
tubo.

Resultados:
Los resultados de las tiras reactivas son obtenidos en unidades clnicamente significativas
por comparacin directa con la carta de color cuando las tiras se usan visualmente. Podr
existir variabilidad clnica bajo ciertas condiciones.

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III. DETERMINACIN DE PARMETROS MICROSCPICOS:


Antes de realizar la observacin del sedimento urinario es necesario conocer las
caractersticas fsicas y qumicas de la orina, ya que esto provee informacin acerca de las
estructuras que se pueden encontrar en ella.
1. Mezcle la orina y llene las partes de un tubo de ensayo de 13 x 100mm.
2. Centrifugue durante 5 minutos a una velocidad de 1500 a 2000 rpm.
3. Decante el sobrenadante.
4. Resuspenda el sedimento y deposite una gota entre un portaobjetos y un cubreobjetos.
5. Observar al microscopio con el objetivo a seco fuerte (40x/0.65).
6. Tratar de identificar las diversas estructuras segn lo siguiente:

Eritrocitos:
a) Intactos: pequeos discos
amarillentos,
ms
obscuros en los bordes
(8m).
b) Festoneados: con bordes
espinosos y dimetro
reducido (5 6 m)
c) Henchidos: crculos de
poco espesor y dimetro
aumentado (5 6 m)

Leucocitos (glbulos blancos)


Se pueden hallar
a) Intactos: discos claros y
granulosos de 10 15 m
(los ncleos pueden ser
visibles)
b) Degenerados:
deformes,
encogidos, menos granulosos
c) Como pus: racimos de
numerosas clulas (piocitos).

86

Levaduras:
No se deben confundir con eritrocitos
Tamao: 5 a 12 m
Forma: Cuerpos redondeados u ovales
de varios tamaos, que se hallan juntos.
Se pueden observar brotes.
No son solubles en cido actico.

Tricomonas:
Tamao: 15 m
(equivalente a 2
eritrocitos)
Forma: Redonda, globular.
Movilidad: mviles en la orina fresca
(giran y se vuelven)
Membrana ondulante: lateral
Flagelos: 4 flagelos ms o menos visibles

Espermatozoides
Cabeza: muy pequea (5 m)
Flagelo: largo y flexible 50 m
Movilidad: mviles en la orina muy
fresca

Clulas Epiteliales:
Clulas Epiteliales Escamosas:
Grandes y rectangulares: provienen
de la descamacin
(desprendimiento de clulas del
epitelio de los conductos y rganos
urinarios)
Se originan en el urter o la vagina

87

Clulas de la vejiga urinaria:


Voluminosas, frecuentemente en
formas romboides y un ncleo
claramente visible.

Clulas de la pelvis renal:


De tamao mediano (equivalente al de 3
leucocitos) granulosas con cierta especie
de cola.

Clulas del urter y pelvis renal:


Ovales de tamao mediano con
ncleos claramente visibles.
Si son abundantes y se encuentran
junto con leucocitos y filamentos es
probable que provengan del urter.
Si son escasas y no se acompaan
de leucocitos, pueden ser clulas de
la pelvis renal

Clulas renales:
Las clulas renales son pequeas
Aprox. Del doble de un leucocito.
Son granulosas, sus ncleos
refractan la luz y son claramente
visibles. Casi siempre se
encuentran con protenas
urinarias.

88

Cilindros:
Se forman durante las enfermedades de los tbulos renales, son estructuras alargadas que
pueden contener eritrocitos, leucocitos, clulas y depsitos de sustancias qumicas.

Cilindros hialinos:
Son transparentes y refractan ligeramente
la luz; los extremos pueden ser
redondeados o delgados. Se pueden
encontrar en individuos sanos despus de
esfuerzos musculares intensos.

Cilindros granulosos:
Estos cilindros son ms bien cortos,
llenos de grnulos voluminosos, de
color amarillento y extremos
redondeados. Los grnulos
provienen de clulas epiteliales
degeneradas de los tbulos renales.

Cilindros de grnulos finos:


Los grnulos de estos cilindros son
ms pequeos y no llenan la
estructura completamente.

Cilindros sanguneos:
Estos cilindros se encuentran llenos
de eritrocitos ms o menos
degenerados, de color acastaado.

89

Cilindros de pus:
Los
verdaderos
se
llenan
completamente
de
leucocitos
degenerados (a). Los cilindros hialinos
pueden contener algunos leucocitos (b)

Cilindros de clulas epiteliales:


Se encuentran llenos de clulas epiteliales
de color amarillo plido.

Cilindros grasos:
Son raros, refractan intensamente la luz,
son de color amarillento, bordes mellados
y claramente visibles de extremos
redondeados. Se encuentran en casos de
enfermedades renales graves.
Falsos cilindros:
No se deben confundir con cilindros.
Acumulaciones de cristales de
fosfatos que son pequeas y
claramente
delimitadas
(a).
Acumulaciones de moco translcido,
cuyos extremos se adelgazan hasta
tomar forma de hilos (b).
Diversas sustancias extraas:
El empleo de recipientes o
portaobjetos sucios, muestras
expuestas al aire, favorecen el
hallazgo de:
gotas de aceite que refractan la luz
(a), grnulos de almidn de color
negro-azulado (b), granos de polen
(c), pelos (d), fibras de algodn (e),
burbujas (f).

90

Huevos y larvas de parsitos:


Huevos
de
Schistosoma
haematobium.
Microfilarias de W. Brancrofti: la
orina es blanquecina y turbia.

Cristales:
Oxalato de calcio:
Forma: semejan sobres de correo (a),
de1020m.
Forma: semejante a cacahuates enteros
(b), de 50 m, refractan intensamente la
luz.

cido rico:
Forma: variada ( cuadros, rombos, cubos
o formas de rosas), de 30 150 m, de
color: amarillo o rojo pardo.

Fosfatos triples:
Forma: rectangulares (1), o semejantes a
hojas de helecho o estrellas (2), de 30
150 m ,incoloros, refractan la luz.

Uratos:
Forma: semejan cactos (1) o haces de
agujas (2), de 20 m, de color amarillo,
refractan la luz.

91

Cristales poco frecuentes:


Fosfato clcico (a), Carbonato de calcio (b)
cristales sumamente pequeos agrupados
en pares, semejan granos de mijo o maz
estrellado. Sulfato de calcio (c) prismas
alargados u hojillas, separados o formando
haces.

Fosfatos amorfos:
Grnulos pequeos, blanquecinos,
frecuentemente dispersos.

Uratos amorfos:
Grnulos muy pequeos, de color
amarillento, agrupados en
racimos compactos.

Cristales rara vez encontrados en orina:


Cistina:
Llaminillas hexagonales de 30 a 60
m. incoloras, refractan intensamente
la luz. Slo se encuentran en orinas
frescas.

92

Colesterol:
Laminillas cuadradas con escotaduras
en un lado, de 50 a 100 m, incoloras,
refractan intensamente la luz

Bilirrubina:
Cristales sumamente pequeos,
cuadrados, esfricos o en agujas de 5 m.
De color castao.

BIBLIOGRAFA:
1. Argeri Lopardo.- Anlisis de Orina. Fundamentos y Prctica. Editorial mdica
Panamericana. Mxico 1993.
2. Clinitek., Manual del Usuario, Mxico 1999.
Graff.-Analisis de Orina.-Atlas a color. 1 Reimpresin Editorial Mdica Panamericana.
Mxico 1987.
3. Iovine Selva Iovine.- El Laboratorio en l Diagnostico de la enfermedad. 10
Reimpresin Editorial Mdica Panamericana. Argentina 1988.
4. Iovine Selva Iovine.- El Laboratorio en la clnica.- 3 Edicin Editorial Mdica
Panamericana. Argentina 1985.
5. Organizacin Panamericana de la Salud.- Manual de Tcnicas Bsicas para un
Laboratorio de Salud.- Serie paltex para tcnicos medios y auxiliares. Publicacin
Cientfica No. 439 # 2. Washington D.C. E.U.A. 1983.
6. Hamilton/M.B. Rose. Diagnostico Clnico.- 1 Edicin Editorial Interamericana, Mxico
1985.
7. Kova Glastic Slide.- Instructivo.- Bayer de Mxico. 1999.

93

ANEXOS

I.- CONSIDERACIONES GENERALES PARA EL TRATAMIENTO


MUESTRAS DE DESECHO Y LAVADO DE MATERIALES.

DE

1. Use guantes durante la manipulacin de muestras y lavado de materiales.

2. Antes de desechar cualquier muestra, aada solucin de hipoclorito de sodio (Cloro) en


una proporcin del 25% con relacin a la misma.
3. Deseche los slidos en los botes respectivos y los lquidos en la tarja.
4. Lave los materiales empleando detergente, escobilln o fibra segn el caso.
5. Coloque los materiales en el escurridor o gradilla segn el caso.
6. Mantenga limpias las tarjas, mesas y en orden los utensilios de limpieza.
7. Lvese las manos antes de salir del laboratorio.

94

II. SEPARACIN Y ENVASADO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO INFECCIOSOS DE


ACUERDO A SUS CARACTERSTICAS FSICAS Y BIOLGICAS INFECCIOSAS.

TIPO DE RESIDUOS
SANGRE.
La sangre y los componentes de
sta, slo en forma lquida, as
como los derivados no
comerciales (hemoderivados)
Recipientes desechables que
contengas sangre lquida (bolsas
de transfusin, jeringas, etc.).
Material de curacin, empapado,
saturado o goteando de
sangre/lquido sinovial,
pericrdico, lquido pleural,
cefalorraqudeo o peritoneal.
CULTIVOS Y CEPAS DE AGENTES
INFECCIOSOS.

Utensilios desechables usados


para contener, transferir, inocular
y mezclar cultivos de agentes
infecciosos.
PATOLGICOS.
Tejidos, rganos y partes que se
extirpan o remueven durante las
necropsias, la ciruga o algn otro
tipo de intervencin quirrgica
que no se encuentren en formol.

ESTADO
FSICO
Lquidos

COLOR

Recipientes
Hermticos

ROJO

Bolsa de Polietileno

Slidos

Bolsa de Polietileno

Slidos

Bolsa de Polietileno AMARILLO

Lquidos

RESIDUOS NO ANATMICOS.

Materiales desechables que


contengan esputo, secreciones
pulmonares y cualquier material
generado por pacientes con
sospecha o Dx de TB o de otra
enfermedad infecciosa.
OBJETOS
PUNZOCORTANTES.
Tubos capilares, navajas, lancetas,
agujas desechables, agujas
hipodrmicas de sutura, bisturs,
etc.

ENVASADO

ROJO

Recipientes
Hermticos
Bolsa de Polietileno

ROJO

Slido
Lquido

Recipientes
Hermticos

Slidos

Recipientes rgidos
de Polipropileno

ROJO

95

III. EXTRACCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS


La sangre consta de una parte liquida, el plasma, en donde estn en suspensin los glbulos
blancos, los glbulos rojos y las plaquetas.
Su anlisis abarca una extraordinaria extensin y las investigaciones pueden efectuarse
sobre la sangre total, en el plasma, en el suero o en los elementos morfolgicos de la
misma.
El tipo de estudio, el estado y la edad del paciente son los factores que rigen la obtencin de
una muestra adecuada de sangre, el sitio de toma y la tcnica seguida. En la mayor parte de
todos los anlisis se necesita una muestra de sangre venosa; la puncin en una vena debe
hacerse con gran cuidado para evitar hemlisis o hemoconcentracin de la muestra, que se
forme un hematoma o que las venas sufran lesin.
Se necesita elegir un sitio para la puncin venosa y el mas usado es el pliegue anterior del
codo; otros sitios son la mueca, el dorso de la mano o el pie.
PROCEDIMIENTO:
Haga que el paciente se siente
paralelamente a la mesa de trabajo
donde se har la extraccin de sangre.
Ponga el brazo del paciente sobre la
mesa de trabajo apoyndolo en un
pequeo cojn dispuesto bajo el codo,
con la palma de la mano vuelta hacia
arriba.

Puntos para la extraccin de sangre:


El sitio ms adecuado es la vena que se
encuentra en el pliegue anterior del codo, en
el punto donde sea ms gruesa y fcilmente
visible, aprovechando, de preferencia, una de
las ramas que forman una E inmediatamente
arriba del lugar donde se juntan (1).
Si fuera necesario se pueden usar los puntos
2, 3 4.

96

Monte la aguja en la jeringa, sin tocar ms


que la base de la aguja. Pruebe aguja y
jeringa para cerciorarse de que no est
obstruida y la jeringa es hermtica.
Tpela de nuevo.

Aplique el torniquete firmemente


alrededor del brazo y sujete los
extremos con una mano.

Con firmeza y con la otra mano


tire de un extremo, cruzndolo.

97

A continuacin introduzca este


extremo por debajo de la parte
principal del torniquete. El torniquete
se deber ajustar solo lo suficiente para
aminorar la corriente sangunea y
dilatar las venas, sin apretarlo tanto
que reduzca el paso por las arterias.

Pida al paciente que abra y cierre la


mano varias veces, para favorecer la
dilatacin de las venas.
El torniquete no debe permanecer
ms de 1 minuto ya que provocara
hemoconcentracin.

Con la yema del dedo palpe la vena


ubicando la trayectoria de la misma.

98

Desinfecte la piel con una torunda de algodn


alcoholada.

Tome la jeringa con la mano derecha,


colocando la yema del dedo ndice sobre la
base de la aguja y con el bisel hacia arriba.
Oriente la aguja hacia la trayectoria de la
vena.

Haga entrar la aguja a lo largo de la vena


1 1.5 cm siguiendo la trayectoria y de
un solo movimiento. Aydese con la otra
mano para fijar la vena.

Importante:
Nunca se intente puncionar una vena por
un lado.
Nunca se introduzca la aguja con el bisel
hacia abajo.

99

Se sentir que la aguja atraviesa la piel


que es resistente, inmediatamente
despus la pared de las venas, que es
menos resistente.

Con la mano izquierda tire hacia atrs


el mbolo de la jeringa muy lentamente.

Retire el torniquete tirando


del extremo doblado.

Aplique una torunda de algodn sobre la


parte donde se encuentra oculta la punta
de la aguja e inmediatamente retire con
un movimiento rpido por debajo de la
pieza de algodn.

100

Pida al paciente que presione


firmemente la torunda de algodn
durante 3 minutos, con el brazo
extendido.
En la actualidad no se recomienda
que se flexione el brazo con la
torunda de algodn (a causa del
riesgo de que se forme un
hematoma).
NOTA: Vace por las paredes, sin tardanza alguna y con gran cuidado la sangre en el tubo
de ensayo adecuado.

101

TOMA DE SANGRE CAPILAR:


Mediante ella se obtendr sangre sin modificar. El lugar de eleccin es el lbulo de la oreja,
el taln o la yema del dedo.
Se limpiara perfectamente con alcohol la zona elegida.

Se deja secar y se realiza la puncin con la lanceta desechable.

102

La sangre debe fluir libremente, se desecha la primera gota, secndola con una torunda de
alcohol y se hace la toma.

Esta sangre es de gran utilidad para determinar recuento y formula leucocitaria,


hemoglobina, grupo sanguneo, recuentos de plaquetas entre otros.

BIBLIOGRAFA:
1. Aiquel. F. Analisis clinicos.-4 edicin, editorial mdica panamericana.1977.
2. Guerrero garca rafael.- manual de laboratorio de hematologa. Primera edicin.
Universidad veracruzana. Mxico, 1997.
3. Oppenheim.-manual para tecnicos de laboratorio.-1 reimpresin. Editorial mdica
panamericana. 1982.
4. Organizacin panamericana de la salud.- manual de tcnicas bsicas para un laboratorio
de salud.- serie paltex para tcnicos medios y auxiliares. Publicacin cientfica no. 439 # 2.
Washington D.C. E.U.A. 1983.

103

IV. NORMATIVIDAD PARA LA UNIDAD DE APRENDIZAJE: LABORATORIO


CLNICO
A.- REGLAMENTO:
1. Asistir con puntualidad. (tolerancia 10 min)
2. Usar bata siempre que se acuda al laboratorio a realizar prcticas.
3. Leer las instrucciones de la prctica antes de asistir al laboratorio y despejar dudas
4. Seguir las recomendaciones dadas por el maestro, a fin de obtener un mejor resultado
de la prctica y para evitar prdida de tiempo, desperdicio de materiales y reactivos o
bien algn accidente.
5. Las prcticas no son sustituibles, reprogramables o recuperables por inasistencia.
6. Traer la (las) muestra (s) biolgica (s) por estudiar segn la patologa y prueba (s) en
cuestin.
7. Evitar los juegos y bromas en el interior del laboratorio.
8. Todo material roto por descuido, deber ser repuesto por el causante.
9. No introducir alimentos en el laboratorio.
10. Aplicar las consideraciones generales establecidas para el tratamiento de muestras
de desecho y lavado de materiales, (consultar manual).
11. Aplicar las normas de separacin y envasado de residuos peligrosos biolgico
infecciosos de acuerdo a sus caractersticas fsicas y biolgicas infecciosas, (consultar
manual).
12. Al trmino de la prctica, limpiar y ordenar las mesas, materiales y bancos.
B.-EVALUACIN:
La Unidad de Aprendizaje, se evaluar con el reporte de cada prctica segn la lista de
rbrica adjunta, equivalente al 25%, la evaluacin de la prctica segn la lista de cotejo
establecida equivalente al 55% (consultar manual); calculndose un promedio al
trmino de todas las programadas en las subcompetencias, mismo que ser sumado a lo
obtenido en un examen escrito parcial correspondiente al 20% restante
complementando as la nota final.

104

C.-LISTA DE COTEJO
NOMBRE DE LA PRCTICA:_______________________________________________
GRADO:___________GRUPO:_________FECHA:_______________________________
No. NOMBRES
1.
2.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
C.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 C

PUNTUALIDAD ...................... 2 PUNTOS.


INTEGRACIN GRUPAL ................................ 2
CONDUCTA ....................................................... 1
APORTACIN DE MUESTRAS ...
19
SEGURIDAD E HIGIENE ................................ .. 19
DESARROLLO DE LA METODOLOGA ..... 19
MANEJO DE EQUIPO ...................................... 19
LIMPIEZA DE MATERIAL.... 19
CALIFICACIN

AFECTIVA
5%

PRCTICA
95%

C.- NOTA IMPORTANTE:


Artculo 57 del Reglamento General de Alumnos
En las unidades de aprendizaje, en las que atendiendo a lo establecido previamente en el
plan de estudios y en el programa especfico, la asignacin de la calificacin durante el
curso dependa de la entrega de trabajos, realizacin de prcticas o demostracin de
habilidades y conocimientos, la calificacin final se integrar con el promedio de las
evaluaciones parciales que se efecten para cada una de esas actividades. Si el promedio de
estas evaluaciones es igual o superior a 7.0, la calificacin final del alumno ser este
promedio y se considerar aprobada la unidad de aprendizaje. Si este promedio es menor de
7.0, se considerar no aprobada, lo que implicar que los alumnos debern volver a
cursarlas. Para efectos de este artculo ser aplicable la consideracin enunciada en la
fraccin I del artculo 60.
Artculo 60. El examen ordinario concluye el proceso de evaluacin de la unidad de
aprendizaje o asignatura. Tendr derecho a presentarlo el alumno que:
I. Acumule un 80% de asistencias del nmero total de clases impartidas.

105

D.- REQUERIMIENTOS DEL REPORTE DE PRCTICAS DE LABORATORIO


DEBER INCLUIR LOS SIGUIENTES APARTADOS Y CARACTERISTICAS:
1.- PORTADA GENERAL Nombre de la Institucin; Nombre de la Facultad o escuela,
Programa Acadmico, Nombre de la Unidad de Aprendizaje, Nombre de la Prctica,
Nombre del Alumno, Grado y Grupo Fecha en la que se realiz la prctica.
2.- INTRODUCCIN Investigacin documental con citas referenciales y bibliogrficas
sobre los datos necesarios para entender la prctica, los resultados y su importancia. La
investigacin documental va desde lo general hasta lo particular, puede incluir esquemas,
imgenes, tablas, grficos (todo de manera concreta).
3.- JUSTIFICACIN Descripcin de cul es la importancia, el para qu de la prctica, el
impacto de esta prctica en su formacin, el desarrollo cientfico y /o la sociedad.
4.- METODOLOGA. MATERIAL: Descripcin detallada del material, equipo, reactivo y
muestras utilizados. MTODO: Descripcin del mtodo o procedimiento realizado, paso a
paso e indicando lo necesario para que en otra ocasin lo pueda reproducir exactamente
igual.
5.- RESULTADOS. Descripcin detallada de los resultados obtenidos en la prctica segn
el orden de los procedimientos. Es obligatorio incluir imgenes, tablas, clculos y grficos
segn se hayan obtenido y que sean originales, es decir no se deben bajar imgenes de
internet o de otros autores.
6.- DISCUSIN. Discusin generada de acuerdo a los resultados obtenidos y la
informacin contenida en la introduccin, es un contraste de la informacin a fin de llegar a
puntos de acuerdo que servirn para el siguiente apartado que es la conclusin.
7.- CONCLUSIN (ES). Puntos de acuerdo obtenidos en la discusin y que se redactan de
manera sinttica.
8.- BIBLIOGRAFA. Esta se citar a estilo libre homogneo.

106

E.-RBRICA DE CALIFICACIN PARA EL REPORTE DE PRCTICA DE LABORATORIO CLINICO


CRITERIOS
INTROCDUCCIN

5
Muestra ideas principales que hacen que
despierte el inters por leer (antecedentes,
contexto, procedimiento)

4
Se aportan pocas ideas que llaman la
atencin e invitan a seguir leyendo, el
contexto, procedimiento y
antecedentes
Se centra en la utilidad del trabajo y
la importancia de realizar la prctica
y est bien redactada.

JUSTIFICACIN

Expresa el porqu de la importancia de


realizar la prctica, se analizan los pros,
contras y factibilidad.

METODOLOGA

Se realiza una descripcin organizada


secuencialmente por etapas, detallada pero
clara y concreta, respondiendo al qu?,
cmo? Y porqu?

Se describe el procedimiento de
manera organizada y secuencial, poco
comprensible y justificable.

RESULTADOS

Se presentan los hallazgos obtenidos en la


prctica, se emplean ilustraciones,
clculos, tablas, etc..

Se citan los resultados y


procedimiento de los mismos. Se
incluyen escasas ilustraciones.

CONCLUSIN

Se contrasta la teora con los resultados de


la prctica, se cumplen objetivos y se
reflexiona personalmente.

Se contrasta la terica con los


resultados de la prctica, con poca
comprensin y cumplimiento de
objetivos; reflexin escueta.

3
Tiene ideas centrales muy
breves y poco claras, carece
de antecedentes, contexto y
procedimiento.
Refleja la importancia que
tiene la elaboracin de la
prctica, pero el texto no es
muy comprensible.
Se describe el procedimiento
con escasa secuencia y
coherencia, carece de
informacin relevante y
justificacin.
Se muestran resultados
breves, no incluyen
ilustraciones, clculos y
tablas.
Se expresa teora y
resultados sin contraste y
reflexin.

2
No establece ideas principales del
contenido, no despierta inters,
carece de elementos descritos.
No menciona la utilidad del
trabajo, solo se describen cosas
sin semejanza alguna.
Carece de claridad, se cantinflea,
no hay procedimiento y
justificacin.

No se describen los resultados de


la prctica, o estn incompletos

Las ideas presentadas no son tan


importantes, no guardan relacin
contextual y adems se presentan
a manera.

PUNTAJE
25
20
15
10
NOMBRE DE LAP RCTICA:____________________________________________EQUIPO:______GRUPO:________FECHA:_____________________

107