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¿por qué el estudio de la inhibición enzimática?

Investigación básica: 
‰

Los inhibidores enzimáticos son una herramienta útil para 
distinguir entre los posibles mecanismos que puede seguir 
una reacción, en especial en el caso de las multisustrato.

‰

El estudio de las afinidades relativas de distintos inhibidores 
competitivos de una enzima proporciona información sobre la 
estructura del centro activo y contribuye a comprender el 
mecanismo catalítico.

‰

La inhibición enzimática constituye una de las formas de 
regulación de la fisiología y del metabolismo celular, 
fundamentalmente la inhibición alostérica.

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

Investigación aplicada:
¾

Aplicaciones comerciales (agricultura): insecticidas, herbicidas.

¾

Aplicaciones biomédicas: fármacos, o medicamentos, en general.

Blancos moleculares de la acción de los fármacos

enzimas 47%

DNA 1%
integrinas 1%
otras dianas 2%
otros receptores 4%

GPCRs 30%

canales iónicos 7%

transportadores 4%
receptores nucleares
de hormonas 4%

Distribución por familias de los blancos de fármacos comerciales de pequeño tamaño (<500 Da)
Nature Reviews Drug Discovery (2002)

Elena Bogonez Pelaez, UAM, Madrid

INHIBIDORES REVERSIBLES Æ la unión del inhibidor a la enzima es
débil.
INHIBIDORES PSEUDOIRREVERSIBLES Æ la unión del inhibidor a la
enzima es fuerte.
INHIBIDORES IRREVERSIBLES Æ la unión del inhibidor a la enzima es
prácticamente irreversible, generalmente covalente (inhibidores
suicidas).

2. INHIBICIÓN REVERSIBLE Los inhibidores reversibles son sustancias que forman complejos “dinámicos” o reversibles con la enzima (Æ interacciones de tipo débil) y que presentan propiedades catalíticas diferentes a las de la enzima libre. Cumplen las condiciones impuestas al Substrato para la deducción de la ecuación cinética de M&M: La concentración inicial de inhibidor [I0] >> [E0] .

Inhibición Reversible .

 levitra Acetazolamida Gleevec Metotrexato (THF) HMG‐CoA reductasa ACE* Proteasa VIH Fosfodiesterasa GMPc Anhidrasa carbónica Bcr‐Abl‐quinasa Dihidrofolato reductasa Hipercolesterolemia  Hipertensión SIDA Disfunción eréctil Glaucoma Cáncer Cáncer *enzima convertidora de angiotensina Elena Bogonez Pelaez.A. Madrid . enalaprilo Saquinavir.Ejemplos representativos de inhibidores reversibles con aplicación farmacológica: (Fuente: R. UAM. indinavir Viagra. 2005) COMPETITIVOS Compuesto Enzima blanco Indicación clínica Estatinas Captoprilo. Copeland “Evaluation of Enzyme Inhibitors in Drug Discovery”.

 infecciones bacterianas Metabolismo de xenobióticos Cáncer Enfermedades inflamatorias Compuesto Enzima blanco Indicación clínica Nevirapina. CI‐1040 Esteroide 5α‐reductasa Topoisomerasa II Acetilcolinesterasa MAP quinasa quinasa (MEK) Hiperplasia benigna de próstata    Cáncer Enfermedad de Alzheimer Cáncer MIXTOS Elena Bogonez Pelaez. Madrid . efavirenza Transcriptasa inversa VIH SIDA  TF‐505 Etopósido Tacrina PO0325901. UAM. cáncer  Finasterida Metotrexato (NADPH) Ácido valproico Campotecina Ciglitazona Esteroide 5α‐reductasa Dihidrofolato reductasa UDP‐glucuronosiltransferasa Topoisomerasa I 15‐hidroxiprostaglandina deshidrogenasa Hiperplasia benigna de próstata    Cáncer.ACOMPETITIVOS Compuesto Enzima blanco Indicación clínica Ácido micofenólico IMP deshidrogenasa Inmunosupresión.

.

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% inhibición:  depende de Ki y [I]  Elena Bogonez Pelaez. UAM. Madrid .

⎛ [I ] ⎞ α = ⎜1 + ⎟ Ki ⎠ ⎝ Elena Bogonez Pelaez. Madrid . UAM.

Vmax [ S ] v= α K M + [S] Elena Bogonez Pelaez. Madrid . UAM.

Razón entre la velocidad en presencia de I y en ausencia.Algunos inhibidores de este tipo suelen tener aplicaciones medico-farmacéuticas. [I ] εi = ⎛ [S ] ⎞ [I ] + K i ⎜ 1 + ⎟ KM ⎠ ⎝ Vi a= V εi = 1 − a . ¿Cuáles serán los mejores? Æ aquellos que tengan un valor de KI pequeño Cálculo del grado de inhibición.. a εi: Grado de inhibición es un valor entre 0-1 .

Capítulo III Elena Bogonez Pelaez. Madrid .Segel. UAM. “Enzyme Kinetics”.

Madrid . UAM.Hanes-Woolf: rectas paralelas ⇒ inhibidor competitivo Elena Bogonez Pelaez.

UAM.Km’ frente a [I] Vmax’ Km Ki Vmax Elena Bogonez Pelaez. Madrid .

KI: constante de disociación del complejo ESI Elena Bogonez Pelaez. UAM. Madrid .

Elena Bogonez Pelaez. Madrid . UAM.

UAM. Madrid .Elena Bogonez Pelaez.

UAM. Madrid .Identificación del tipo de inhibición y determinación de parámetros cinéticos: Elena Bogonez Pelaez.

Madrid .Hanes-Woolf: ordenada en el origen común ⇒ inhibidor acompetitivo Elena Bogonez Pelaez. UAM.

UAM.Representaciones secundarias: Elena Bogonez Pelaez. Madrid .

Madrid .Elena Bogonez Pelaez. UAM.

UAM.Elena Bogonez Pelaez. Madrid .

Elena Bogonez Pelaez. Madrid . UAM.

Elena Bogonez Pelaez. Madrid . UAM.

UAM. Madrid .Hanes-Woolf: pendientes y ordenadas en el origen crecen con [I] ⇒ inhibidor mixto Elena Bogonez Pelaez.

Madrid .Inhibidor mixto. UAM. no-competitivo Elena Bogonez Pelaez.

UAM. Madrid .Representaciones secundarias: Elena Bogonez Pelaez.

increasing [S] favors the inhibition by [I]. [I] binds to [ES] complex only. increasing [S] overcomes Inhibition by [I]. Increasing [S] can not overcome [I] inhibition. and competes with [S]. Juang RH (2004) BCbasics . [I] binds to free [E] or [ES] complex.Enzyme Inhibition (Mechanism) Equation and Description Cartoon Guide I Competitive I Non-competitive Substrate S E S E I Compete for Inhibitor active site S I I S Uncompetitive E X I I Different site S I E + S← → ES → E + P + I ↑ ↓ EI E + S← → ES → E + P + + I I ↑ ↑ ↓ ↓ EI + S →EIS E + S← → ES → E + P + I ↑ ↓ EIS [I] binds to free [E] only.

Enzyme Inhibition (Plots) I Competitive I Non-competitive Direct Plots Vmax vo vo I Double Reciprocal Km Km’ I [S]. mM Vmax unchanged Km increased Vmax decreased Km unchanged Both Vmax & Km decreased 1/vo 1/vo 1/vo Intersect at Y axis 1/Km I I I Two parallel lines 1/ Vmax 1/[S] Intersect at X axis 1/Km 1/ Vmax 1/[S] 1/ Vmax 1/Km 1/[S] Juang RH (2004) BCbasics . mM Km = Km’ I Uncompetitive Vmax Vmax Vmax’ Vmax’ [S]. mM I Km’ Km [S].

com/2011/12/enzyme-inhibitionanimation.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/animations/ enzyme_inhibition/index.html http://biology-animations.http://www.blogspot.html .