ALP

Fosfatasa alcalina
p-Nitrofenilfosfato. Cintico. DGKC
Determinacin cuantitativa de fosfatasa alcalina (FAL)
IVD
Conservar a 2-8C
PRINCIPIO DEL MTODO
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrlisis del p-nitrofenilfosfato
(pNPP) a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, segn la siguiente
reaccin:
FAL

p-Nitrofenilfosfato + H2O p-Nitrofenol + Fosfato

La velocidad de formacin del p-Nitrofenol, determinado
fotomtricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de
1,2
fosfatasa alcalina en la muestra ensayada .
SIGNIFICADO CLNICO
Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en
casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en
huesos, hgado, placenta, intestinos y rin.
Tanto el aumento como la disminucin de los niveles en plasma, tienen
significado clnico.
Causas ms probables de aumento del nivel de FAL:
Enfermedad sea de Paget, obstrucciones hepticas, hepatitis,
hepatotoxicidad por medicamentos y osteomalacia.
Causas ms probables de disminucin del nivel de FAL:
Cretinismo y dficit de vitamina C1,5,6.
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clnicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R1
Tampn

R2
Substrato

Dietanolamina (DEA) pH 10,4

Cloruro de magnesio
p-Nitrofenilfosfato (pNPP)

1 mmol/L
0,5 mmol/L
10 mmol/L

PREPARACIN
Reactivo de trabajo (RT):
Ref: 1001130
Disolver ( ) una tableta de R 2 Substrato en un vial de R 1 Tampn.
Ref: 1001131
Disolver ( ) una tableta de R 2 Substrato en 15 mL de R 1 Tampn.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el

cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto
(A/min).
CLCULOS
A/min x 3300 = U/L de FAL
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1
mol de substrato por minuto, en condiciones estndar. La concentracin se
expresa en unidades por litro (U/L).
Factores de conversin de temperaturas
Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:
Temperatura
de medicin
25C
30C
37C

MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 405 nm.
- Bao termostatable a 25C, 30C 37C ( 0,1C)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS
1
Suero o plasma heparinizado .
Suero libre de hemlisis, separado de los hematies lo antes posible.
Estabilidad: 3 das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . . .405 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 25C / 30C / 37C
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
RT (mL)
Muestra (L)

Factor para convertir a

30C
1,22
1,00
0,75

37C
2,64
1,33
1,00

CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
revisar el instrumento, los reactivos y la tcnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA1
25C
30C
37C
Nios (1-14 aos)
< 400 U/L
< 480 U/L
< 645 U/L
Adultos
60 -170 U/L
73 - 207 U/L
98 - 279 U/L
Factores que pueden afectar los valores de referencia son: ejercicio, periodos
de crecimiento en nios y embarazo.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERSTICAS DEL MTODO
Rango de medida: Desde el lmite de deteccin 4,26 U/L hasta el lmite de
linealidad 825 U/L.
Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisin:
Media (U/L)
SD
CV (%)

Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

Estabilidad: 21 das a 2-8C o 5 das a temperatura ambiente.
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a
2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin.
No usar las tabletas si aparecen fragmentadas.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partculas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 405 > 1,30.

25C
1,00
0,82
0,61

Intraserie (n= 20)

175
393
2,28
5,48
1,30
1,40

Interserie (n= 20)

176
410
4,60
10,4
2,61
2,53

Sensibilidad analtica: 1 U/L = 0,0003 A/min.

Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS
El fluoruro, oxalato, citrato y EDTA inhiben la actividad de la fosfatasa
alcalina, por lo que no deben ser utilizados como anticoagulantes.
La hemlisis interfiere debido a la elevada concentracin de fosfatasa
1,2
alcalina en los hematies . Se han descrito varias drogas y otras
3,4
substancias que interfieren en la determinacin de la fosfatasa alcalina .
NOTAS
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de
este reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFA
1.
Wenger C. et al. Alkaline phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1094-1098.
2.
Rosalki S et al. Clin Chem 1993; 39/4: 648-652.
3.
4.
5.
6.

Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

PRESENTACIN
Ref: 1001130
Ref: 1001131

Cont.

20 x 3 mL
10 x 15 mL

1,2
20

4. Mezclar, incubar 1 minuto.

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