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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA


COORDENAO DE PESQUISA

Programa Institucional de Bolsas de Iniciao Cientfica PIBIC

Avaliao da atividade repelente de produtos naturais para


mosquitos (Diptera: Culicidae)

rea de Concentrao: Sade Pblica

Bolsista: Tllio Dias da Silva Maia


Orientadora: Roseli La Corte dos Santos
DMO/CCBS
Relatrio Semestral
Perodo
2011/2012

Este projeto desenvolvido com bolsa de iniciao cientfica


PIBIC/COPES

Resumo
Os mosquitos apresentam importncia peculiar para a sade pblica, seja pelo incmodo
causado pela sua picada, seja pela sua capacidade de transmitir patgenos. Com o intuito
de reduzir o contato entre seres humanos e mosquitos, foram desenvolvidos os repelentes,
que podem ser sintticos ou derivados de produtos naturais. O seguinte trabalho se prope
a analisar o efeito de repelncia de leos essenciais derivados de plantas para mosquitos
da espcie Aedes aegypti, com metodologia baseada na sugerida pela Organizao
Mundial de Sade sendo descrito um experimento piloto com produto a base de DEET a
12,5%. Este trabalho no apresenta dados conclusivos.
Palavras chaves: Mosquitos, leos essenciais, produtos naturais, repelentes.

123-

456-

Sumrio
Introduo.................................................................................................................. 03
Objetivo...................................................................................................................... 06
Materiais e Mtodos.................................................................................................. 06
3.1- Material............................................................................................................... 06
3.1.1- Mosquitos......................................................................................................... 06
3.1.2- leos essenciais................................................................................................ 06
3.2- Mtodos............................................................................................................... 06
3.3- Consideraes ticas.......................................................................................... 08
Resultados parciais e discusso................................................................................ 09
Referncias Bibliogrficas........................................................................................ 11
Anexo 1....................................................................................................................... 13

1- Introduo
Os mosquitos apresentam, h muito, importncia peculiar para a sade pblica e para
a parasitologia, uma vez que so hematfagos e considerados insetos vetores. O hbito de
sugar o sangue geralmente praticado pelas fmeas as quais, ao faz-lo, injetam saliva na
pele do hospedeiro. A saliva desses animais contm protenas que podem causar a algumas
pessoas reaes alrgicas como: pruridos, endemas e eritemas (RUTLEDGE & DAY, 2002).
Alm da sensao de desconforto decorrente da picada do mosquito, h o risco de
transmisso de patgenos como dengue, febre amarela e encefalites (viroses), malria
(protozoose) e elefantase (helmintose) (NEVES, 2005).
O desconforto causado pela picada desses insetos, bem como o avano das
informaes com relao aos patgenos por eles transmitidos, fez com que a sociedade se
atentasse para o uso de produtos com efeito repelente, tanto como uma maneira de aliviar os
efeitos desagradveis das picadas, quanto como medidas profilticas. Repelentes so
substncias que, quando aplicadas sobre a pele, roupas e superfcies, desencorajam a
aproximao de insetos (RIBAS & CAREO, 2010). Embora cada ser humano apresente
maneiras peculiares de atrair esses animais (LOGAN et. al., 2010), h um mecanismo geral
de atuao dos repelentes sobre a pele: formando uma camada de vapor com odor repulsivo
(STEFANI et al., 2008) e inibindo a liberao de odor do cido ltico (presente na
transpirao e nos corpos de seres endotrmicos, como os seres humanos), que uma
substncia atrativa para fmeas de mosquitos, sobretudo do gnero Aedes (PETERSON &
COATS, 2001). Repelentes podem ser originados de produtos sintticos ou extrados de
recursos naturais.
Os produtos sintetizados so compostos basicamente pela substncia N,N-dietilmetatoluamida, tambm conhecida como DEET, que foi descoberta e passou a ser
comercializada nos Estados Unidos a partir da dcada de 1950 (PETERSON & COATS,
2001). Com eficcia historicamente conhecida, o DEET, segundo STEFANI et al. (2008) o
repelente mais eficaz atualmente disponvel, sendo usado em mais de 80 bilhes de
aplicaes. Outro produto sinttico bastante utilizado, principalmente em crianas, o
IR3535 (etil-butil-acetilaminopropionato), que um biopesticida com estrutura qumica
similar ao aminocido alanina e o nico indicado para crianas menores de dois anos de idade
(STEFANI et al., 2008).

Alguns estudos apontam para uma possvel toxicidade desses repelentes sintticos.
Em relao ao DEET, a toxicidade se manifesta quando h o uso do produto em altas
concentraes e por repetidas vezes (RIBAS & CAREO, 2010). Dentre as consequncias da
toxicidade, esto: dermatites, reaes alrgicas, sinais de toxicidade neurolgica ou
cardiovascular como ataxia, encefalopatia, hipotenso e bradicardia (MIOT et al. 2004). Essa
toxicidade uma preocupao no uso de repelente tanto por crianas quanto por gestantes.
Nesses casos, as indicaes so controversas, sendo consenso na literatura a no utilizao do
DEET em crianas menores de dois anos de idade (STEFANI et al., 2008).
Na inteno de buscar novas alternativas de produtos, a cincia tem se voltado para a
pesquisa sobre os produtos naturais, sobretudo os que so derivados de vegetais. A maioria
das plantas possui compostos os quais so usados na preveno ao ataque de fitfagos (Maia
& Moore, 2011). Apesar de as funes primrias de tais compostos serem a defesa contra os
insetos mencionados, muitos so tambm efetivos na preveno picada de mosquitos e
outros dpteros (Pichersky & Gershenzon, 2002). Estudos etnobotnicos mostram que em
algumas comunidades, o uso de repelentes extrados de vegetais que reduzem o contato entre
os vetores e os seres humanos tem sido uma prtica comum (WAKA et al. 2004; KWEKA et
al. 2008a), sobretudo em comunidades rurais tropicais, onde esses produtos so, muitas vezes,
o nico meio de proteo contra a picada dos mosquitos (MOORE et. al., 2006). A
descoberta desses compostos com propriedades repelentes despertou o interesse da
comunidade cientfica devido ao seu baixo custo e toxicidade (MIOT et al., 2004). H vrios
modos de utilizao dos repelentes originados de produtos naturais, como velas e incensos
(PETERSON & COATS, 2001), sendo mais comum o uso dos princpios ativos desses
produtos sob a forma de leos. Esses leos, chamados de leos essenciais, tm importncia
no s na sade pblica, mas tambm na agricultura, uma vez que muitos so utilizados para
o controle natural de pragas agrcolas.
A utilizao de plantas como repelentes de insetos uma prtica bastante antiga,
sendo registrado na literatura greco-romana o uso de losna (Artemisia absinthium L.)
(Compositae) como repelente de mosquitos e pulgas por personalidades como Caio Plnio, o
velho (23-79 a.D.) e o mdico Dioscorides (c. 50- 70 a.D.) (BUENO & ANDRADE, 2009).
Embora ainda existam poucos estudos a respeito, vegetais como a citronela
(Cymbopogon nardus) e a andiroba (Carapa guianesis) devido a seu efeito repelente para
mosquitos em seres humanos tm gerado vrios produtos com eficincia inferior ou

inicialmente at similar ao DEET ou ao IR3535 (MIOT et al., 2004; ANDRADE, 2005;


2008), e permitido patentes registradas na Frana, Japo, Unio Europia e Estados Unidos
(BUENO & ANDRADE, 2009).
Outras espcies como o eucalipto-limo (Eucaliptus citriodora) e o alecrim-de-cheiro
(Rosmarinus officinalis L.) (BUENO & ANDRADE, 2010); espcies de Verbenacea (AMER
& MEHLHORN 2006; GILLIJ et al. 2008); Lippia citriodora (GILLIJ et al., 2008); L.
junelliana e L. integrifolia (GLEISER et al., 2011) demonstraram efeitos repelentes sobre
espcies de culicdeos.
Apesar dos resultados promissores, h ainda a desvantagem no uso desses repelentes,
pois a maioria deles possui alta volatilidade, sendo ineficazes por longos perodos de tempo,
necessitando de frequentes reaplicaes (KWEKA et. al, 2008b; LOGAN et. al., 2010).
Uma vez que a maioria dos repelentes, tidos como uma alternativa eficaz para evitar o
contato com insetos vetores, sobretudo mosquitos, encontrados no mercado tm alto custo e
toxicidade, se comparados aos leos essenciais derivados de plantas com efeito repelente, o
presente estudo se faz necessrio no sentido de testar novas alternativas de produtos com o
mesmo efeito repelente, que possam ser utilizados diretamente ou que sejam promissores
para o desenvolvimento de novos produtos.

2- Objetivo
Avaliar a eficcia de produtos naturais na proteo contra a picada de mosquitos da
espcie Aedes aegypti.
3- Materiais e Mtodos
3.1- Material
3.1.1- Mosquitos
Estabelecimento das colnias
Os mosquitos utilizados nos experimentos so provenientes de colnia livre de
infeco, mantida no insetrio do Laboratrio de Parasitologia da Universidade Federal de
Sergipe. Est sendo utilizada a cepa Rockefeller (ROCKE), considerada padro de
suscetibilidade a inseticidas. Para o estabelecimento da colnia ROCKE, tm sido utilizados
ovos cedidos pelo Laboratrio de Fisiologia e Controle de Artrpodes Vetores (LAFICAVE)
do Rio de Janeiro, de linhagem criada por muitos anos no laboratrio. Em laboratrio, os
ovos so depositados em bandejas brancas de polietileno com dimenses de 35x20x6 cm
previamente limpas apenas com gua contendo 1L de gua desclorada. As larvas so criadas
nessas mesmas bandejas e a alimentao feita diariamente com rao triturada de gato
devidamente esterilizada. Ao atingir o estgio evolutivo de pupa, elas so transferidas para
gaiolas de alumnio cuja dimenso 30 cm x 30 cm x 30 cm, onde emergem os adultos. Os
mosquitos adultos recebem alimentao de gua aucarada, que fica disponvel nas gaiolas
at uma hora antes dos experimentos, quando a soluo retirada.
3.1.2- leos essenciais
Os leos essenciais so fornecidos pelo Departamento de Qumica, sendo produtos
que j esto em testes com relao a outros potenciais de uso (Costa et al., 2011).
3.2- Mtodos
Os experimentos sero realizados no Laboratrio de Parasitologia da UFS, utilizando
os parmetros contidos no guia para avaliar a eficcia de produtos repelentes sobre a pele
humana da Organizao Mundial de Sade, com algumas modificaes (WHO, 2009).

Cada experimento conta com seis voluntrios, sendo eles indivduos adultos, trs do
sexo masculino e trs do sexo feminino, com idade entre 18 e 30 anos, que no possuam
alergia a picadas de insetos ou repelentes. Os voluntrios no podero fazer uso de nenhum
produto de fragrncia, como perfumes, repelentes ou serem fumantes.
As mos e antebraos dos voluntrios so lavados com sabonete sem odor e, em
seguida, enxaguados. Aps esse procedimento, as mos e antebraos so tratados com
soluo de lcool a 70%, sendo, logo aps, secos com uma toalha e as mos protegidas por
luvas.
Os antebraos direito e esquerdo recebem tratamentos diferenciados, sendo o direito
controle e o esquerdo experimental. Apenas o antebrao esquerdo ser utilizado mais de uma
vez, utilizando vrias concentraes dos produtos analisados.
Durante o teste, so analisadas as atividades de sondagem e pouso dos mosquitos
sobre o antebrao tratado. Os insetos so criados em gaiolas contendo aproximadamente 100
fmeas no alimentadas, sendo ento realizadas observaes captando as quantidades de
pouso.
O experimento se d da seguinte maneira: 1 mL do lcool utilizado para diluir os
produtos com potencial de repelncia aplicado uniformemente, usando uma pipeta, em
aproximadamente 250 cm da pele do antebrao entre o pulso e o cotovelo. O brao , ento,
inserido na gaiola e depois realizada a contagem dos nmeros de mosquitos que pousam
nele. O voluntrio deixa o brao na gaiola por 30 segundos, evitando moviment-lo durante
esse tempo. Para que o teste tenha validade, necessrio que o nmero de pousos ou
sondagens seja maior ou igual a 10 no perodo de 30 segundos. Em seguida, o mesmo brao
tratado com o produto diludo em lcool, deixando-o secar e ento o procedimento de colocar
o brao na gaiola por 30 segundos repetido. No recomendvel que haja um tempo longo
entre uma sesso e outra. A cada sesso, aumenta-se a concentrao de repelente, devendo
haver cinco sesses alm da sesso controle. No antebrao esquerdo, o teste baseia-se em
dosagens sucessivas e com concentraes cada vez maiores, sendo realizadas cinco
aplicaes sucessivas. Os mesmos mosquitos so utilizados para cada voluntrio durante o
experimento.
Aps o fim da etapa com o brao esquerdo, o brao direito tratado com lcool a 70%
e o processo de inserir na gaiola contendo os mosquitos pelo perodo de 30 segundos

repetido. Caso o nmero de pousos ou sondagens seja inferior a 10, o resultado do teste deve
ser descartado.
A Tabela 1 abaixo resume os procedimentos adotados.
Tabela 1. Sequncia de eventos em uma sesso de avaliao de produto com potencial
de repelncia para mosquitos (Diptera: Culicidae).
Sequncia de aplicao

Concentrao da soluo Quantidade acumulada


de repelente para ser de repelente (mg/250
aplicada
em
1mL cm )
(mg/mL)
Pr-tratada com lcool
Controle do brao esquerdo
apenas
1
1
Brao esquerdo dose 1
1
2
Brao esquerdo dose 2
2
4
Brao esquerdo dose 3
4
8
Brao esquerdo dose 4
8
16
Brao esquerdo dose 5
Pr-tratada com lcool
Controle do brao direito
apenas
Fonte: Guidelines for Efficacy Testing of mosquito repellents for human skin. WHO, 2009.

No caso de muitas sondagens ou pousos, o teste pode ser realizado em trs sries de
cinco segundos e o resultado multiplicado por dois, estimando, dessa forma, o nmero de
mosquitos que pousariam durante os 30 segundos.
Para expressar a proteo apresentada para cada produto avaliado (p), considera-se a
proporo mdia do nmero de pousos sobre o brao tratado (T) em relao proporo
mdia do nmero de pousos no brao controle (C) do mesmo indivduo:






3.3- Consideraes ticas


Os voluntrios deste projeto tm sido selecionados entre docentes, funcionrios e
alunos da UFS, sem relao de hierarquia com a pesquisadora responsvel, o que exclui todos
os estagirios, alunos de mestrado e funcionrios do Laboratrio de Parasitologia. Os
participantes so questionados sobre doenas febris recentes, histrico de alergia a picadas de
insetos e medicamentos. So alertados sobre o desconforto relacionado picada dos insetos e
o prurido subseqente e assinam o termo de consentimento livre e esclarecido (Anexo 1).
Aps o experimento, os voluntrios que desejam, recebem loo ps-picada para alvio das
reaes que possam manifestar. O projeto foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa
envolvendo seres humanos do Hospital Universitrio, protocolo CEP 319/2011 e N CAAE
0280.0.107.000-11.

5- Resultados parciais e Discusso


A primeira etapa do projeto foi destinada ao levantamento bibliogrfico e estudo da
metodologia a ser empregada. Inicialmente foi realizado experimento piloto para
padronizao tcnica. O experimento foi realizado no insetrio do Laboratrio de
Parasitologia da Universidade Federal de Sergipe. Foi voluntrio um indivduo do sexo
masculino que no utilizava nenhum produto de fragrncia ou nicotina. Aps a higienizao
das mos e antebraos, foi realizado o experimento.
Por se tratar de um procedimento piloto, houve diferenas na metodologia a ser
utilizada. Utilizou-se uma quantidade menor de mosquitos (aproximadamente 30 fmeas de
Aedes aegypti) que a prevista pela metodologia (100), sendo consideradas as propores, ao
invs de nmeros absolutos, para a anlise dos dados. O produto com potencial repelente
utilizado foi um comercial composto de DEET a 12,5%, para evitar o desperdcio de leo
essencial.
No incio, o voluntrio colocou o brao esquerdo no tratado dentro da gaiola, de
maneira que a superfcie dorsal do antebrao se mantivesse encostada no fundo. Foi
observada a atividade de pouso dos mosquitos sobre a superfcie exposta (ventral) desse
antebrao (Figura 1). Aps 30 segundos de exposio, o voluntrio retirou o brao e foram
aplicados os cinco tratamentos consecutivos, sendo realizadas as contagens. Aps os
tratamentos do brao esquerdo, foi inserido o brao direito sem tratamento (controle).

Figura 1: Antebrao esquerdo tratado com face ventral exposta em gaiola com aproximadamente 30 fmeas de
Aedes Aegypti.

Para maior segurana no resultado, duas pessoas devidamente instrudas observaram


as atividades de pouso dos mosquitos sobre o antebrao tratado do voluntrio, sendo levado
em conta o nmero maior. O resultado obtido est expresso abaixo na Tabela 2:

Tabela 2. Proteo apresentada por um produto repelente a base de DEET 12,5% para Aedes
aegypti (Diptera: Culicidae), segundo quantidade aplicada.
Aplicao

Controle brao
esquerdo
Tratamento 1
Tratamento 2
Tratamento 3
Tratamento 4
Tratamento 5
Controle brao
direito

Quantidade
aplicada de
repelente
-

Quantidade
acumulada de
repelente
-

Nmero de pousos

Proteo
(%)

12

1 mL
1 mL
2 mL
4 mL
8 mL
-

1 mL
2 mL
4 mL
8 mL
16 mL
-

4
0
0
0
1
1

66,67
100,00
100,00
100,00
91,67
-

Observou-se que o nmero de pousos no brao direito foi inferior a 10% (quantidade
mnima de pousos para validar o experimento), sendo assim, de acordo com a metodologia
empregada, seria necessrio anular o experimento. Porm, deve-se ponderar que o produto
utilizado no experimento possui eficcia j comprovada e supe-se que tenha influenciado no
resultado do controle do brao direito, pois possui forte odor e, como previa o procedimento,
foi utilizado repetidas vezes na mesma gaiola, inibindo, mesmo que no absolutamente, como
visto no Tratamento 5, a ao dos mosquitos sobre a pele do voluntrio. Sendo assim, essa
possibilidade ser considerada caso algum dos leos demonstre atividade repelente com
proteo similar.
Durante o experimento, o voluntrio alegou no sentir dor, nem sequer picadas,
embora tenha havido pousos. Sendo assim, foi avaliado que o tempo de 30 segundos,
sugerido na metodologia, pertinente nesse tipo de teste. O forte odor emitido pelo produto
sugere que, por medida de segurana, o experimento seja realizado em local em que o contato
com outras gaiolas seja mnimo ou ausente, a fim de no alterar o comportamento dos
mosquitos nelas contidos. Por ser difcil a visualizao dos mosquitos que pousam nas
laterais dos antebraos, ser desenvolvida estratgia de proteo do antebrao, deixando
exposta apenas a rea, de aproximadamente 250 cm, em que sero realizados os tratamentos.
A partir deste experimento, foi elaborado protocolo, o qual ser utilizado para os
experimentos com os leos essenciais no prximo semestre.

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Anexo 1
Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

Nome da Pesquisa
Avaliao da atividade repelente de produtos naturais para mosquitos (Diptera: Culicidae)
Pesquisadores responsveis
Orientadora: Roseli La Corte dos Santos (79) 2105.6626 rlacorte@ufs.br
Graduando, bolsista PIBIC: Tllio Dias da Silva Maia (79)9972-9763
Instituio responsvel pela pesquisa
Universidade Federal de Sergipe (UFS) Departamento de Morfologia (DMO)
Informaes aos voluntrios
Voc est sendo convidado(a) para participar de uma etapa da pesquisa Avaliao da
atividade repelente de produtos naturais para mosquitos (Diptera: Culicidae). Sua
participao no obrigatria. A qualquer momento, voc pode desistir de participar e retirar
o seu consentimento, sem que haja qualquer prejuzo em sua relao com os pesquisadores ou
com a Universidade Federal de Sergipe.
O objetivo deste trabalho avaliar a eficcia dos produtos naturais na proteo contra
a picada de mosquitos. Os leos essenciais a serem testados no possuem, comprovadamente,
ao txica sobre a pele.
Sua participao nesta etapa da pesquisa consistir na aplicao de uma soluo de
lcool a 70% em seu antebrao esquerdo. Esta rea tratada ser exposta dentro de uma gaiola
de madeira contendo 100 fmeas sadias do mosquito Aedes aegypti. Aps o tratamento com
lcool, o mesmo antebrao ser tratado com produtos com potencial de repelncia em cinco
diferentes concentraes. A cada novo tratamento, ser repetido o processo de expor a rea
tratada na gaiola. Aps essa etapa, o antebrao direito ser tratado com lcool 70% e
realizado o mesmo procedimento ocorrido com o brao esquerdo. No total, sero sete sesses
de exposio dos antebraos tratados, sendo o esquerdo exposto em seis sesses (um
tratamento com lcool e cinco com as diferentes concentraes dos repelentes) e o direito em
apenas um sesso (um tratamento com lcool 70%), contendo, cada uma, 30 segundos de
durao. Os mosquitos sero provenientes de colnia mantida no insetrio do Laboratrio de
Parasitologia. Os insetos utilizados so isentos de doena, no havendo nenhum risco de
transmisso de patgenos. Os riscos antecipveis em decorrncia da participao na pesquisa
restringem-se ao aparecimento de vermelhido no local da aplicao e eventuais reaes
alrgicas devido sensibilidade ao leo ou picada. Neste caso, o voluntrio que apresentar
reaes de sensibilidade ser afastado do ensaio. Devido irritao que ocorre aps a picada,

se assim o desejar, ser aplicada sobre a pele do voluntrio uma loo ps-picada, que
ameniza o incmodo causado pelo prurido.
Para a participao nesta pesquisa os voluntrios devem apresentar idades entre 18 e
30 anos, no possuir alergia a picadas de insetos ou repelentes. No podero fazer uso de
nenhum produto de fragrncia, como perfumes, repelentes ou serem fumantes.
A pesquisadora Roseli La Corte dos Santos ser responsvel por quaisquer despesas
decorrentes de reaes ou danos aos voluntrios relacionados ao ensaio.
As informaes obtidas atravs desta pesquisa sero confidenciais e asseguramos o
sigilo sobre sua participao.
Voc receber uma cpia deste termo onde constam os telefones dos pesquisadores,
podendo tirar dvidas sobre o projeto e sua participao em qualquer momento.

Eu: ___________________________________________________________________ RG:


______________________, abaixo assinado, tendo recebido as informaes no verso e
ciente dos meus direitos abaixo relacionados, concordo em participar como voluntrio
da pesquisa citada.
1- A garantia de receber a resposta a qualquer pergunta ou esclarecimento a qualquer
dvida a cerca dos procedimentos, riscos, benefcios e outros, relacionado com a
pesquisa e o tratamento a que serei submetido(a);
2- A liberdade de retirar o meu consentimento a qualquer momento e deixar de participar
do estudo;
3- A segurana de que no serei identificado(a) e de que ser mantido o carter
confidencial da informao relacionada com a minha privacidade;
4- O compromisso de me proporcionar informao atualizada durante o estudo, ainda
que esta possa afetar a minha vontade de continuar participando;
5- A disponibilidade de tratamento mdico e a indenizao que legalmente tenho direito,
por parte da Instituio, Sade em caso de danos que sejam comprovados como
diretamente causados pela pesquisa;
6- Que se existirem gastos adicionais, estes sero absorvidos pelo oramento da
pesquisa;
7- Que se ocorrerem reaes adversas na pele (como alergia, irritaes e outras),
decorrentes da aplicao local das diferentes formulaes, ou pela picada dos
mosquitos, os voluntrios sero afastados do ensaio.
Tenho cincia do exposto acima e desejo colaborar com a pesquisa.
So Cristovo,_____ de _______________ de __________.
__________________________________________
Assinatura do voluntrio