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DIVISIN CELULAR: MITOSIS Y MEIOSIS

PRESENTADO POR:
CHARRY CARDOSO DANIELA
VESGA PREZ LISSETH LORENA

PRESENTADO A:
PABLO ENRIQUE PEDRAZA TORRES
DOCENTE DE BIOLOGA CELULAR

UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA


FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA
TUNJA, 18/11/2014

En el transcurso de la vida, muchas de las clulas que componen nuestro


organismo envejecen y mueren; siendo as constantemente reemplazadas para
que el cuerpo pueda seguir funcionando de manera ptima. Un humano adulto
debe producir muchos millones de nuevas clulas cada segundo, para mantenerse
en estado de equilibrio. Estas clulas se reproducen duplicando su contenido y
luego dividindose en dos.
Sin duda alguna, el medio fundamental a travs del cual todos los seres vivos se
propagan, es el ciclo de divisin celular. Como ya lo sabemos, el ciclo celular es
una secuencia de fases, conocida como la base para la reproduccin de los
organismos; su funcin no es solamente originar nuevas clulas, sino asegurar
que el proceso se realice en forma debida (crecimiento celular, la replicacin del
ADN y la divisin celular) y con la regulacin adecuada.
Todas las entidades vivas tienen caractersticas comunes que los diferencian de
los inertes, entre ellas la ms importante, es que se encuentran formadas por
clulas, siendo sta la unidad bsica que realiza todas las acciones, donde la
clula se divide para dar origen a dos ms genticamente idnticas.
En los organismos que se reproducen sexualmente, se pueden distinguir dos tipos
de clulas; las somticas, que son las que conforman los tejidos con material
gentico y las sexuales, las cuales son diferentes en ambos sexos, siendo
haploides, es decir, que tienen la mitad del material gentico de las somticas
transmitido a sus generaciones posteriores.
La gran mayora de las clulas tambin doblan su masa y duplican todos sus
orgnulos citoplasmticos en cada ciclo celular, de este modo los complejos de los
procesos citoplasmticos y nucleares tienen que coordinarse unos con otros. Por
todo ello, si hoy en da deseamos estudiar los genes y su transmisin a travs de
las descendencias, debemos comprender primero la naturaleza de los
cromosomas y su dinmica dentro de un individuo y su generacin.
La mitosis es el tipo de divisin del ncleo celular diploide por el cual se conservan
los orgnulos y la informacin gentica contenida en sus cromosomas, que pasa a
las clulas hijas resultantes; igualmente es un verdadero proceso de multiplicacin
que participa en el desarrollo, crecimiento y regeneracin del organismo; que tiene
lugar por medio de una serie de operaciones sucesivas.
La meiosis es el segundo tipo ms importante de la divisin nuclear; se asemeja a
la mitosis en muchas maneras, excepto en las consecuencias de las reparticiones.
Si bien la divisin mittica puede ocurrir en casi cualquier clula viva de un cuerpo,
la meiosis se produce slo en las clulas especiales. En los animales se limita a

las que forman los gametos (vulos y espermatozoides); cada especie tiene un
nmero caracterstico de cromosomas por clula somtica.
La meiosis consiste en dos divisiones, I y II; potencialmente puede implicar en la
produccin de cuatro clulas, sin embargo, el ADN se sintetiza slo una vez; las
subdivisiones se denominan como las de la mitosis, profase, metafase, anafase,
telofase, pero como percibiremos en el siguiente informe, los eventos son algo
diferentes.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Apreciar las fases de la mitosis y la meiosis, conocer su importancia en la
transmisin de informacin gentica entre las clulas e investigar las alteraciones
ms frecuentes que ocurren durante estas etapas del ciclo celular.
OBJETIVOS ESPECFICOS

Observar los distintos perodos de la mitosis y la meiosis en un tejido vegetal.

Realizar una tincin especfica de los cromosomas usando orcena actica con
el fin de lograr conocer su estructura.

Identificar mediante observacin microscpica las diferentes fases de la mitosis


en los meristemos de la raz de cebolla.

Aprender a reconocer los principales cambios morfolgicos que se presentan


durante la profase, metafase, anafase, telofase y citocinesis en clulas
meristemticas de las races de cebolla.

Determinar las fases de la meiosis en las clulas germinales de las anteras en


la flor de Agapanto.

Comprender la necesidad de una divisin de reduccin durante el ciclo de la


vida sexual en los seres vivos, junto con las distintas fases de la meiosis I y la II,
describiendo los eventos caractersticos.

Analizar las similitudes y diferencias entre la mitosis y la meiosis.

Evaluar la importancia de la divisin celular en el desarrollo, el crecimiento y la


reposicin de clulas en tejidos desgastados.

Distinguir e investigar las alteraciones ms frecuentes que ocurren durante la


mitosis y la meiosis.

MARCO TERICO
DIVISIN CELULAR
Es una parte muy importante del ciclo celular en la que una clula inicial se divide
para formar clulas hijas y gracias a esto se produce el crecimiento de los seres
vivos. En los organismos pluricelulares este proceso se origina por el desarrollo de
los tejidos y en los seres unicelulares por la reproduccin vegetativa 1.
Los seres pluricelulares reemplazan su dotacin celular gracias a la divisin
celular y suele estar asociada con la diferenciacin celular. En algunos animales la
divisin celular se detiene en algn momento y las clulas acaban envejeciendo.
Las clulas senescentes se deterioran y mueren debido al envejecimiento del
cuerpo. Las clulas dejan de dividirse porque los telmeros se vuelven cada vez
ms cortos en cada divisin y no pueden proteger a los cromosomas como tal 1.
EL CICLO CELULAR2
Cuando una clula se divide en dos, uno ambos productos de la divisin pueden
volver a fragmentarse, establecindose de esta forma un ciclo de divisin celular,
el perodo entre dos mitosis consecutivas, se denomina interfase. El estado normal
de una clula es con los cromosomas en estado de una doble hlice de ADN.
Indudablemente para que una estructura pueda dividirse en dos exactamente
iguales, deben tener todos sus componentes repetidos y separados en estructuras
diferenciadas. El cromosoma antes de dividirse debe pasar a un estado en el que
posea dos cromatidios, genticamente idnticos. La duplicacin del material
gentico ha de ser previo a la divisin celular.

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En la interfase se pueden distinguir tres perodos:


G1: Es un estado que se caracteriza por ser genticamente activo, el ADN se
transcribe y se traduce, dando lugar a protenas necesarias para la vida celular y
sintetizando las enzimas y la maquinaria necesaria para la sntesis del ADN.
Fase S: En ella se duplica por entero el material hereditario, el cromosoma pasa
de tener un cromatidio a tener dos, cada uno de ellos compuesto por una doble
hlice de ADN producto de la duplicacin de la original; como la replicacin del
ADN es semiconservativa, las dos dobles hlices hijas sern exactamente iguales,
y por tanto los cromatidios hermanos, genticamente idnticos.
G2: Durante este perodo la preparacin de todos los componentes de la divisin
celular se produce una seal que dispara todo el proceso de la divisin celular.
La divisin celular se compone de dos partes, la divisin del ncleo y la del
citoplasma. La divisin del ncleo es exacta, se reparte equitativamente el material
hereditario, mientras que la citocinesis puede no serlo, es decir el reparto de
orgnulos citoplsmicos y el tamao de las dos clulas puede no ser equitativo.
Durante la mitosis el ADN va a estar totalmente empaquetado y muy enrollado,
inaccesible a polimerasas y transcriptasas, es por ello que toda su actividad
funcional ha de realizarse en la interfase previa a la cariocinesis. Al final de la
mitosis, la clula entra en interfase, si esa clula ya no se va a dividir ms, entra
en lo que se denomina perodo G0, si por el contrario esa clula va a volver a
dividirse entra de nuevo en el perodo G 1 previo a la sntesis del ADN e inicia un
nuevo ciclo de divisin celular.

Esquema de la divisin celular,


tomado de http://es.wikipedia.org
MITOSIS

Es un proceso que ocurre en el ncleo de las clulas eucariotas y que precede


inmediatamente a la divisin celular, consistente en el reparto equitativo del
material hereditario caracterstico; este tipo de divisin ocurre en las clulas
somticas y normalmente concluye con la formacin de dos ncleos separados
(cariocinesis), seguido de la particin del citoplasma (citocinesis), para formar dos
clulas hijas. La mitosis completa que produce clulas genticamente idnticas, es
el fundamento del crecimiento, de la reparacin tisular y de la reproduccin
asexual.3
LA CARIOCINESIS

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Tambin llamada mitosis astral o anfiastral, es la divisin del ncleo celular;


consiste en la primera fase de la mitosis, que es el proceso por el cual el material
gentico de una clula madre se distribuye de manera idntica entre dos clulas
hijas. En clulas animales poseen un organelo no membranoso llamado centro
celular, formado por un par de centriolos, que al dividirse en profase temprana, se
dirigen hacia los polos opuestos de la clula, formando el aparato del huso
acromtico4.

FASES DEL CICLO CELULAR


La divisin de las clulas eucariotas es parte de un ciclo vital continuo en el que se
distinguen dos perodos mayores, la interfase, durante la cual se produce la
duplicacin del ADN y la mitosis, durante la cual se produce el reparto idntico del
material antes duplicado; la mitosis es relativamente corta en comparacin con la
duracin de la interfase5.

Interfase

Durante esta, la clula se encuentra en estado basal de funcionamiento, es


cuando se lleva a cabo la replicacin del ADN y la duplicacin de los organelos
para tener un duplicado de todo antes de dividirse. Es la etapa previa a la mitosis
donde la clula se prepara para dividirse, en sta, los centrolos y la cromatina se
duplican, aparecen los cromosomas los cuales se observan dobles. La duracin
del ciclo celular en una clula tpica es de 16 horas: Cinco horas para G 1, siete
horas para la fase S, tres horas para G 2 y una para la divisin. Este tiempo
depende del tipo de clula6.

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Profase

Se produce en ella la condensacin del material gentico para formar unas


estructuras altamente organizadas, los cromosomas. Como el material gentico se
ha duplicado previamente durante la fase S de la Interfase, los cromosomas
replicados estn formados por dos cromtidas, unidas a travs del centrmero por
molculas de cohesinas7.

Uno de los hechos ms tempranos de la profase en las clulas animales es la


duplicacin del centrosoma; los dos centrosomas hijos migran entonces hacia
extremos opuestos de la clula. Los centrosomas actan como centros
organizadores de unas estructuras fibrosas, los microtbulos, controlando su
formacin mediante la polimerizacin de tubulina soluble. De esta forma, el huso
de una clula mittica tiene dos polos que emanan microtbulos. En la profase
tarda desaparece el nuclolo y se desorganiza la envoltura nuclear7.

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Prometafase

La membrana nuclear se ha disuelto, y los microtbulos invaden el espacio nuclear,


pudiendo anclar cromosomas a travs de los cinetocoros o interactuar con microtbulos
emanados por el polo opuesto. La membrana nuclear se separa y
los microtbulos invaden el espacio nuclear8.

Cada cromosoma ensambla dos cinetocoros hermanos sobre el centrmero, uno


en cada cromtida. Aunque la estructura y la funcin del cinetocoro (estructura
proteica compleja a la que se anclan los microtbulos) no se conoce
completamente, contiene varios motores moleculares, entre otros componentes.
La prometafase se considera a veces como parte de la profase 8.

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Metafase

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Los cromosomas se encuentran alineados en la placa metafsica. A medida que los


microtbulos encuentran y se anclan a los cinetocoros durante la prometafase, los
centrmeros de los cromosomas se congregan en la en el plano ecuatorial, una lnea
imaginaria que es equidistante de los dos centrosomas que se encuentran en los dos
polos del huso. Este alineamiento equilibrado en la lnea media del huso se debe a las
fuerzas iguales y opuestas que se generan por los cinetocoros hermanos9.

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Anafase

Los microtbulos anclados a cinetocoros se acortan y los dos juegos de


cromosomas se aproximan a cada uno de los centrosomas 10.
Cuando todos los cromosomas estn correctamente anclados a los microtbulos
del huso y alineados en la placa metafsica, la clula procede a entrar en anafase,
que es la fase crucial de la mitosis, porque realiza la distribucin de las dos copias
de la informacin gentica original. Tienen lugar dos sucesos; primero, las
protenas que mantenan unidas ambas cromtidas hermanas (las cohesinas), son
cortadas, lo que permite su separacin. Estas cromtidas hermanas, que ahora
son cromosomas hermanos diferentes, son apartados por los microtbulos
anclados a sus cinetocoros al desensamblarse, dirigindose hacia los
centrosomas respectivos11.

A continuacin, los microtbulos no asociados a cinetocoros se alargan,


empujando a los centrosomas hacia los extremos opuestos de la clula. Estos dos
estados se denominan anafase temprana que viene definida por la separacin de
cromtidas hermanas, y la tarda por la elongacin de los microtbulos que
produce la separacin de los centrosomas. Al final la clula ha conseguido separar
dos juegos idnticos de material gentico en dos grupos definidos, cada uno
alrededor de un centrosoma11.

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Telofase

Es la reversin de los procesos que tuvieron lugar durante la profase y


prometafase. Durante sta, los microtbulos no unidos a cinetocoros continan
alargndose, estirando an ms la clula. Los cromosomas hermanos se
encuentran cada uno asociado a uno de los polos. La membrana nuclear se
reforma alrededor de ambos grupos cromosmicos, utilizando fragmentos de la
clula original. Ambos juegos de cromosomas, ahora formando dos nuevos
ncleos, se descondensan de nuevo en cromatina. La cariocinesis ha terminado,
pero la divisin celular an no est completa 12.

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DIAGRAMA DE LA MITOSIS

Cambios en centrosomas y ncleo de una clula en el proceso de la divisin mittica.


Imagen tomada de es.wikipedia.org

CITOCINESIS
Es un proceso independiente, que se inicia simultneamente a la telofase;
tcnicamente no es parte de la mitosis, sino un proceso aparte, necesario para
completar la divisin celular. En las clulas animales, se genera un surco de
escisin que contiene un anillo contrctil de actina en el lugar donde estuvo la
placa metafsica, estrangulando el citoplasma y aislando as los dos nuevos
ncleos en dos clulas hijas13.
Tanto en clulas animales como en plantas, la divisin celular est dirigida por
vesculas derivadas del aparato de Golgi que se mueven a lo largo de los
microtbulos hasta la zona ecuatorial de la clula; en plantas esta estructura
coalesce en una placa celular en el centro del fragmoplasto y se desarrolla
generando una pared celular que separa los dos ncleos 14.

El fragmoplasto es una estructura de microtbulos tpica de plantas superiores,


mientras que algunas algas utilizan un vector de microtbulos denominado
ficoplasto durante la citocinesis. Al final, cada clula hija tiene una copia completa
del genoma de la clula original que est marcada con la fase M 15.
Mediante el proceso mittico, el material gentico se divide en dos ncleos
idnticos, con lo que las dos clulas hijas que resultan si se produce la divisin del
citoplasma sern genticamente idnticas. Por tanto, la mitosis es un proceso de
divisin conservativo, ya que el ADN se mantiene de una generacin celular a la
siguiente16.

Fases de la divisin celular: profase, prometafase, metafase, anafase, telofase y citocinesis.


Tomada de http://es.wikipedia.org/wiki/Mitosis.

ERRORES EN LA MITOSIS
Aunque son poco frecuentes, este proceso puede fallar, especialmente durante las
primeras divisiones celulares en el cigoto. Los errores mitticos pueden ser
especialmente peligrosos para el organismo, porque el descendiente futuro de la
clula madre defectuosa mantendr la misma anomala 17.
Un cromosoma puede no separarse durante la anafase "no disyuncin"; si esto
ocurre, una clula hija recibir dos cromosomas hermanos y la otra se quedar sin
ninguno, dando lugar a que una clula tenga tres cromosomas que codifiquen la
misma informacin gentica, condicin conocida como trisoma; y la otra clula,
que solamente tiene un cromosoma, tendr monosoma. Estas clulas se
consideran aneuploides y aneuploida, siendo frecuentes en cncer 17.
La mitosis es un proceso traumtico, pues la clula pasa por cambios drsticos en
su estructura, algunos orgnulos se desintegran y se reconstruyen en cuestin de
horas, y los microtbulos tiran constantemente de los cromosomas; por tanto, en
ocasiones los cromosomas pueden daarse. Un brazo del cromosoma se puede
romper y perder un fragmento, causando delecin; el fragmento puede
incorporarse incorrectamente a otro cromosoma no homlogo, causando
translocacin. Se puede integrar de nuevo al cromosoma original, pero en una
orientacin inversa, causando inversin, o se puede tratar errneamente como un
cromosoma separado, causando duplicacin cromosmica 18.
Una parte de estos errores pueden detectarse por alguno de los puntos de control
existentes a travs del ciclo celular, lo cual produce una parada en la progresin

celular, dando tiempo a los mecanismos reparadores a corregir el error. Si esto no


ocurre, el efecto de estas anormalidades genticas depender de la naturaleza
especfica del error. Puede variar de una anomala imperceptible a carcinognesis
o a la muerte del organismo18.
LA ENDOMITOSIS
Es una variante de la mitosis sin divisin celular, lo que da lugar a clulas con
muchas copias del mismo cromosoma en el mismo ncleo. Este proceso tambin
se denomina endoreduplicacin y las clulas resultantes endoploides 19.
ANOMALAS CROMOSMICAS20
Constitucionales
Es cuando todos los tejidos tienen la misma anomala; los errores cromosmicos
ocurren en el embrin. Estos pudieron ser antes de la fecundacin, estando
presente en uno de los dos gametos o en el cigoto fecundado. Si la anomala es
desequilibrada el paciente puede presentar dismorfologa, malformaciones
viscerales y/o retraso en el desarrollo psicomotor. Dentro de las anomalas
constitucionales" se incluyen los sndromes cromosmicos innatos, como la
trisoma 21 y el sndrome de Turner entre otros.
Adquiridas
En ellas slo est involucrado un rgano, siendo normales los otros tejidos. El
paciente tiene cncer en el rgano afectado. Dentro de ellas se incluyen los
tumores malignos.
Homogneas
Sucede cuando todas las clulas estudiadas poseen la misma anomala. Por
ejemplo: En un gameto parental ocurre una anomala constitucional que se
encontrar en cada una de las clulas del hijo (trisoma 21 homognea). O en una
leucemia, al encontrar una anomala adquirida (no se observan clulas normales
en el cariotipo) en todas las clulas de la mdula sea estudiadas.
Mosaicos
Cuando slo algunas clulas poseen una anomala mientras que otras clulas son
normales o poseen otra anomala. As, podemos encontrar clones de clulas con
un cambio particular, derivado de una clula original con una anomala primaria.
Por ejemplo, despus de varias divisiones en el cigoto, ocurre un fenmeno de no-

disyuncin donde slo algunas clulas del embrin poseern la anomala (46,
XY/47, XY, +21); o en cambios cromosmicos muy comunes en leucemias y otros
cnceres en el que un porcentaje de las mitosis poseen la anomala, mientras que
las otras clulas son normales, como en la leucemia linfoblstica aguda con un
clon normal, un clon con un cambio especfico, y un tercer clon con cambios
adicionales (46, XY / 46, XY, t(4;11) / 46, XY, t(4;11), i(7q) ).
Numricas
Es cuando existen uno o ms cromosoma en exceso (trisoma) o prdida
(monosoma); en estos casos el cariotipo est siempre desequilibrado.
Estructurales
Acontece cuando existen cambios estructurales en los cromosomas, no
necesariamente acompaado por un cambio numrico. Si no hay prdida o
ganancia de material gentico el cambio est balanceado; si hay delecin y/o
duplicacin de segmentos cromosmicos, el cambio est desequilibrado.

http://atlasgeneticsoncology.org/Educ/PolyMecaSp.html

ALTERACIONES FRECUENTES
Sndrome de Klinefelter21
Es la presencia de un cromosoma X extra en un hombre xyy; son prcticamente
normales pero sus anomalas fenotpicas menores. Afecta a varones que tienen
generalmente una estructura ms elevada que la habitual, tienen defectos

mentales y un comportamiento antisocial, manifiestan una inclinacin mayor hacia


la delincuencia precoz y agresividad.
Este sndrome se presenta en aproximadamente uno de cada 500 a 1.000 bebs
varones. Las mujeres que resultan embarazadas despus de los 35 aos tienen
una probabilidad ligeramente mayor de tener un nio con este sndrome que las
mujeres ms jvenes.

online.mufasser.com

guia.bio.br

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Sndrome de Turner22
Es una afeccin gentica rara en la cual una mujer no tiene el par normal de dos
cromosomas X. Tienen fenotipo femenino, suelen ser de pequea estatura,
poseen membranas cervicales (pliegues de la piel que se extienden desde la
mastoides hasta los hombros) y sus rganos sexuales internos generalmente son
infantiles. No se desarrolla el ovario y falta clulas germinales, no produce la
menstruacin y tampoco se desarrollan las caractersticas sexuales secundarias.
En este sndrome, el cual slo ocurre en las mujeres, a las clulas les falta todo o
parte de un cromosoma X. Lo ms comn es que la paciente femenina tenga slo
un cromosoma X; mientras que otras pueden tener dos cromosomas X, pero uno
de ellos est incompleto.

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Sndrome de Down o mongolismo23


Es un trastorno gentico en el cual una persona tiene 47 cromosomas en lugar de
los 46 usuales.

Defecto en el desarrollo del sistema nervioso central, manifestando retardo mental


y malformaciones mltiples. En los gemelos univitelinos, generalmente ambos
individuos estn afectados, pero en los gemelos bivitelinos solo padece uno la
enfermedad. En la mayora de los casos, ocurre cuando hay una copia extra del
cromosoma 21, en esta forma se denomina trisoma 21. El cromosoma extra
causa problemas con la forma como se desarrolla el cuerpo y el cerebro. Este
sndrome es una de las ms comunes de anomalas congnitas en los humanos.

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todossomosuno.com.mx

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http://www.bioygeo.info/pdf/16_Mutaciones.pdf

MEIOSIS
Es un mecanismo de divisin celular que permite la obtencin a partir de clulas
diploides (2n) de clulas haploides (n) con diferentes combinaciones de genes 24.
Se produce slo en eucariotas; en los animales, que se origina durante la
produccin de gametos y en las plantas, tiene lugar cuando las esporas se
promueven. La Meiosis no ocurre en procariotas, es decir, arqueas y bacterias; se
reproducen por fisin binaria25.

PROFASE I
Es la fase ms complicada de la meiosis; ya que dura ms tiempo en la meiosis
que en la mitosis. Durante esta etapa, los homlogos se unen (sinapsis) a lo largo
de su longitud y el intercambio de ADN. La Profase I se divide en s misma, en
cinco subetapas26.
Leptoteno
En esta primera subetapa de la profase I, los cromosomas han aparecido dentro
de la envoltura nuclear, pero an no estn plenamente condensadas. En el
diagrama de los dos cromosomas de origen paterno se indican en rojo, los de
origen materno, en azul. Cada uno es un delgado hilo de ADN (lepto- en griego
significa delgada y tene es griego para la cinta o banda) a lo largo de la cual los
granos claramente definidas de enrollamiento locales (crommeros) se pueden
ver. Los cromosomas, mientras que tienen esta forma filiforme, se llama
chromatonemata (SING cromonema; nema en griego significa hilo). Los
cromosomas aparecen solo porque las cromtidas hermanas todava estn tan
estrechamente unidos entre s que no pueden ser vistos por separado. Durante
esta etapa los dos telmeros de cada cromosoma se volvieron hacia, y,
probablemente, unidos a la misma regin de la envoltura nuclear 27.

(Gr. Leptos = delgada; tenia = banda / raya) Leptoteno es la primera etapa de la meiosis. Este es tambin el primer paso
en la condensacin de ADN, un fenmeno que procede a travs de toda la profase I. A pesar de el aspecto de hilo de
cromosomas th cada consisten de hecho de cromtidas twee, debido a que el ADN se ha replicado ya durante el
premeiotic S -fase. Tambin las pequeas regiones con engrosamientos (llamados crommeros) surgen en la cromatina en
cada cromosoma, que hacen que se vean como un nacklace perla. Los cromosomas homlogos son todava no apareado.
Obtenido de: http://www.vcbio.science.ru.nl/en/virtuallessons/cellcycle/meiostage/leptotene/.

Zygotene
Durante zygotene homlogos comienzan a unir (sinapsis) al entrar en alineacin
aproximada (zygo- en griego significa unin, fusin, o uncir). Synapsis, el proceso
de fusin que se produce entre homlogos comienza en varios puntos a lo largo
del cromosoma y se extiende hacia el exterior, de la cremallera de la moda, hasta
que se complete. Una vez finalizada la sinapsis, los homlogos fusionados
parecen un nico cromosoma bajo el microscopio ptico, pero en realidad son
dos. La interfaz en la que dos homlogos se unen, el complejo sinaptonmico,

puede ser visto bajo un microcope electrones. En el diagrama de zygotene


temprano a la derecha, las regiones en las que la paterna y materna homlogos
han fusionadas se muestran en prpura. En el siguiente diagrama, que representa
tarde zygotene, ambos pares homlogos se han fusionado sobre toda su longitud
(por lo que se muestra en su totalidad en prpura). Zygotene tambin se conoce
como zygonema28.

Ttradas: Una vez que los pares homlogos sinapsis son llamados
ttradas o bivalentes. Bivalente es el trmino preferido, pero ttrada es, sin
embargo, la palabra ms comnmente utilizada en las clases de biologa ms
introductorias y porque hay nombres equivalentes para otras situaciones. Por
ejemplo, un homlogo no fusionado se llama un univalente. Tres homlogos
fusionados, una situacin comn en las plantas, se denomina trivalente, etc 28.

En zygotene (Gr. Zygon = tocar a otra), el escenario despus de leptoteno, el emparejamiento de los cromosomas
homlogos (sinapsis) comienza. Los cromosomas homlogos se mantengan unido por protenas (complejo synaptomal). A
continuacin, cruzar en off puede ocurrir entre las hlices de ADN de doble molculas de cromosomas homlogos.
Obtenido de: http://www.vcbio.science.ru.nl/en/virtuallessons/cellcycle/meiostage/zygotene/

Paquiteno

Durante pachytene las dos cromtidas hermanas de cada cromosoma se separan


el uno del otro. Esto hace que los cromosomas se vea ms grueso (pachy- en
griego significa gruesa). Homlogos todava estn emparejados en este
punto. Paquiteno tambin se conoce como paquinema 29.

Crossing-over: Cromtidas no hermanas permanecen en contacto a lo largo de


paquiteno y una especie de rotura localizada de la DNA se produce, que es
seguido por el intercambio de ADN entre ellos. Este proceso se
llama cruzar. Cruzando produce "cross-over cromtidas ", cada una compuesta de
bloques distintos de ADN, algunos bloques derivan de la madre, otros del padre 29.

Caracterstico para pachytene (Gr. Pacus = dik), una etapa de la profase I, son el apareamiento completo de los
cromosomas y el revestimiento plano de los cromomeros. Synapsis, que comnmente se desplaza como una postal de los
telmeros a los centrmero, se encuentra ahora en su punto culminante. Los nucleolos son a menudo todava visibles en
pachytene.. Obtenido de: http://www.vcbio.science.ru.nl/en/virtuallessons/cellcycle/meiostage/pachytene/

Diploteno

Al comienzo de esta fase cada cromtidas de cada cromosoma todava se fusiona


con una cromtida de homlogo de ese cromosoma (recordar que las cromtidas
hermanas estn ya separar en este punto). Como diplotene progresa, estos no
fusionadas inicialmente cromtidas hermanas comienzan a separarse el uno del
otro.Sin embargo, no pueden separar completamente debido a que todava estn
conectados por dos hebras de ADN en cada uno de los puntos en los intercambios
tuvieron lugar. En cada uno de estos sitios de cruce, las dos hebras forman una
estructura en forma de x-llamada quiasma. El quiasmas luego comenzar
avanzando hacia los extremos de las cromtidas. Este proceso de deslizamiento
hacia los extremos que se conoce como terminalizacin30.

En ovocitos, una forma especial, extremadamente prolongada de diploteno se


llama dictyotene. El ovocito primario sufre las tres primeras de las subetapas de la
profase I (leptoteno, zygotene, y paquiteno) durante la vida fetal tarda. El proceso
se suspende durante diploteno hasta la pubertad o despus. Por lo tanto, en
dictyotene (y por consiguiente la profase I ) puede durar meses o incluso aos,

dependiendo del tipo de organismo en cuestin. Diplotene tambin se conoce


como diplonema30.

Durante diploteno (Gr. Diplous = en doble) se hace claramente visible que cada cromosoma replicado consta de dos
cromtidas hermanas. Cada bivalente consiste en un haz de cuatro cromtidas homlogas. Los homlogos exhiben una
unin ms dbil y ligeramente divergentes. Las cruces (= quiasmas; quiasma singular, el nombre de la carta lgreek en
forma de cruz chi ) entre la no-hermana-cromtidas son visibles. Cada bivalente muestra, en general uno o ms
quiasmas,
donde
cruce
en
off
se
han
producido.
Obtenido
de:
http://www.vcbio.science.ru.nl/en/virtuallessons/cellcycle/meiostage/diplotene/

Diacinesis

Durante esta, la ltima etapa de la profase I, el nuclolo desaparece, alcanzando


la terminacin junto con los cromosomas bobina con fuerza, y as se hacen ms
cortos y ms gruesos. La envoltura nuclear comienza a desaparecer. Los
centrosomas alcanzan los polos31.

At diakinesis (Gr. dia = apart; Gr. kinein = to move) the chromatides that we in a crossing-over are entangling. Since the
chromatides deiverge the chiasmata become clearly apparent. Nuclear membrane and nucleoli completely disappear. The
spindle arises: from each centrosomes (in animal cells) at the poles microtubules 'grow'. Some microtubules anchor to the
kinetochores of the chromosomes. The shortening and thickening of the chromatides proceeds. Obtenido de:
http://www.vcbio.science.ru.nl/en/virtuallessons/cellcycle/meiostage/diakinesis/

METAFASE I
Despus de la profase I, cruzar-sobre es completa. Las ttradas se mueven a un
plano - llamada la "placa metafsica" - a medio camino entre los dos polos de la
clula. A continuacin, los husillos fibras se adhieren a los centrmeros de
cadacromosoma . Ambos cinetocoros de cadapar de cromtidas hermanas se
volvieron hacia el mismo polo. Como resultado, ambas se unen a los
cinetocoros husillofibras del mismo poste. Esta es una diferencia importante
entre la meiosis y la mitosis . Hace que los dos miembros de cada par de
cromosomas se separen uno de otro durante la siguiente etapa de la meiosis, la
anafase I32.

La primera es una microfotografa de clulas en metafase. Los cromosomas se congregaron (azul)


no se pueden ver por separado y la segunda es un diagrama simplificado de clulas en metafase.

ANAFASE I
Durante esta etapa de la meiosis, la clula empieza a alargarse. Los dos
homlogos de cada par de cromosomas separados y moverse hacia los polos
opuestos, atrados por los microtbulos del huso mittico. Esto contrasta con la
mitosis, donde las cromtidas hermanas de cada homlogo independiente y se
mueven hacia los polos opuestos. En la meiosis en esta etapa, las cromtidas
permanecen juntas como una completa, el cromosoma replicado 33.

Ilustracin obtenida de: http://www.macroevolution.net/images/anaphase-I-200x237.jpg

TELOFASE I

En cada polo, durante esta etapa, hay una completa haploides conjunto de
cromosomas (pero cada cromosoma todava tiene dos cromtidas hermanas).
Aparece un surco de segmentacin, y para el final de esta etapa de la clula
madre se divide en dos clulas hijas. Esta separacin del citoplasma se llama
citocinesis. En algunos organismos sobres nucleares aparecen brevemente en
este punto (esta etapa intermedia se llama intercinesis). Pero en otros, las clulas
hijas comienzan inmediatamente a prepararse para la segunda divisin meitica 34.
CITOSINESIS
A pesar de que es de hecho uno de los pasos en el ciclo celular, citocinesis
(pronunciado si-to-k-NEE-ss) no es una de las fases de la mitosis o la meiosis.
Es la divisin del citoplasma (en oposicin a karyokinesis, que es la divisin del
ncleo). Comienza como la clula empieza a alargarse durante la anafase, y
termina cuando la separacin de las dos clulas hijas se completa al final de la
telofase. La divisin del citoplasma se produce tanto en la mitosis y en la meiosis.
Despus de la mitosis, la clula vuelve a la interfase, que recordar, es la etapa de
crecimiento del ciclo celular entre mitosis sucesivas (interfase es la etapa durante
la cual el ADN de sntesis, o la replicacin, se produce). Los cromosomas han
descondensada una vez ms y ahora se re-encerrado en una envoltura nuclear.
La mitosis es ahora completa35.

Cell division in ameba, Robinson et al. Obtenido en:


http://www.macroevolution.net/cytokinesis.html#.VGjJb_mG_9U

INTERCINESIS
En muchos organismos, especialmente las plantas, las dos clulas
hijas producidas por meiosis I inmediatamente comienzan a prepararse para la
segunda divisin meitica. En otros, sin embargo, los sobres nucleares aparecen
temporalmente y encierran cada uno de los dos separados juegos de
cromosomasentre telofase I y profase II , y hay un perodo de descanso. Este
perodo, durante el cual los sobres son de nuevo visibles, se llamaintercinesis (se
pronuncia "EN-nee-ss-ter k"). Cada cromosoma todava se compone de
dos cromtidas hermanas . El perodo comprendido entre la meiosis I y meiosis II
a veces se llama "interfase", esto es confuso, ya que no es una
verdadera interfasetal como la que se observa entre las rondas de mitosis porque

ningn sntesis se produce (todos los cromosomas tienen doscromtidas en toda


esta etapa)36.
PROFASE II
Comienza con las dos clulas hijas producidas por la primera divisin meitica (ver
figura de la derecha). Al igual que en la profase I, los cromosomas se condensan.
Durante esta etapa de la espermatognesis, las clulas se llaman secundarias
espermatocitos, o durante la ovognesis, secundarias ovocitos. Si haba un
intercinesis, entonces las envolturas nucleares comienzan a descomponerse de
nuevo durante esta etapa. Los centrosomas se han replicado y se mueve hacia los
polos. Una vez ms, los cromosomas todava no estn unidos al huso mittico,
que est creciendo hacia el exterior desde los centrosomas 37.
METAFSE II
En la metafase II, en cada una de las dos clulas hijas producidas por la primera
divisin meitica (que se conocen como clulas germinales secundarias), el husillo
seala nuevamente a los cromosomas en la placa de metafase. Esta vez, a
diferencia de la metafase I, los dos cinetocoros de cada centrmero se unen a
husillo fibras de opuestos polos (como en la metafase mittica). Esto da lugar a la
separacin de las cromtidas hermanas de cada cromosoma durante la siguiente
fase de la meiosis, la anafase II38.
ANAFASE II
Durante la anafase II las cromtidas hermanas de cada cromosoma independiente
y moverse hacia los polos opuestos. Una vez que ya no estn conectados, los
antiguos cromtidas se llaman cromosomas no replicados. Como los cromosomas
son arrastrados por el huso mittico, sus brazos se pueden ver a lo largo de
arrastrar detrs de modo que los cromosomas forman V-formas. Los polos mismos
se mueven ms separados como citocinesis comienza y alarga las clulas (no se
muestra en la figura) 39.
TELOFASE II
Durante la telofase II, los cromosomas llegan a los polos opuestos, la citocinesis
ocurre, las dos clulas producidas por meiosis I se dividen para formar cuatro
haploides clulas hijas, y los sobres nucleares (blanco en el diagrama) formulario.
Cuando las dos clulas se separan por completo y sus membranas nucleares
estn completamente formadas, la meiosis ser completa 40.

La meiosis (divisin de reduccin) de una langosta macho. Obtenida de:


http://www.vcbio.science.ru.nl/image-gallery/show/labels/AN0098/

Ilustracin 1 este esquema resume la variacion en el numero cromosmico y en la cantidad de


ADN a lo largo de la meiosis. El esquema est referido a la espermatognesis. Obtenido de:
http://es.slideshare.net/maicol1383/practica-de-meiosis

Paniagua R. (2007). Ciclo celular, Esquema de evolucin de cromosomas homlogos en la


meiosis. Biologia celular 3 edicin, editorial interamericana, pagina 375.

Paniagua R. (2007). Ciclo celular, Esquema de evolucin de cromosomas homlogos en la


meiosis. Biologia celular 3 edicin, editorial interamericana, pagina 375.

Esquema de la evolucin de los cromosomas homlogos en la meiosis. Para


simplificar, se representan nicamente tres pares: A, B y C. En el ejemplo, entre
los cromosomas A se establecen dos quiasmas, ambos a un mismo lado del
centrmero. Entre los cromosomas B hay dos quiasmas, uno a cada lado del
centrmero. Entre los cromosomas C hay un solo quiasma41.
CAMBIOS CROMOSMICOS NUMRICOS: MUTACIONES GENMICAS
Cada especie biolgica se caracteriza por su cariotipo, en el que el nmero y la
morfologa de los cromosomas es constante. En la mayora de los organismos
superiores, las clulas somticas son diploides y los gametos (forma- dos por
meiosis) son haploides. La mitosis y la meiosis (con la consiguiente fecundacin)
son los mecanismos biolgicos que aseguran la constancia en el nmero de
cromosomas de las clulas, sin embargo, si se producen anomalas en cualquiera
de estos dos procesos se pueden formar clulas que presentan un nmero
anormal de cromosomas.
La euploida es una alteracin del nmero de cromosomas que afecta a juegos
completos. Los organismos que presentan ms de dos juegos completos de
cromosomas se denominan poliploides. La poliploida puede deberse a la unin de
genomas de una misma especie, en cuyo caso se conoce como autopoliploida, o
a la unin de genomas de especies diferentes, conocido como alopoliploida.

Existen varios mecanismos de formacin de autopoliploides pero los ms


frecuentes son la fecundacin de un vulo por ms de un espermatozoide y la
formacin de gametos diploides por un error durante la meiosis. En los animales la
autopoliploida es rara, y suele conllevar la muerte del individuo. En los vegetales
sin embargo es rela- tivamente frecuente y los individuos poliploides son de mayor
tamao y ms vigoroso que los normales diploides.
La aneuploida es una anomala numrica que afecta a uno o varios cromosomas,
pero no a todo el genoma. La aneuploida se origina por la no disyuncin de una o
varias parejas de cromosomas homlogos durante la meiosis.
Algunos de los gametos resultantes tendrn cromosomas de ms y otros, en
cambio, los tendrn de menos. Al ser fecundados estos gametos por otros
normales originarn cigotos con cromosomas de ms o bien con cromosomas de
menos. Los organismos aneuploides presentan, generalmente, anomalas
fenotpicas caractersticas y son poco viables. Los casos ms frecuentes de
aneuploidia son aquellos en los que aparece un cromosoma sin hom- logo
(monosoma) y los que presentan un cromosoma extra en una pareja
cromosmica (trisoma)(tambin se conocen casos de individuos tetrasmicos,
doble trismicos y nulismicos). Algunos ejemplos de aneuploidas en el hombre 42:
Sndrome de Patau
Descrito en 1960, presenta una incidencia de 1/20.000 nacidos vivos.
Manifestaciones clnicas: En ms del 50% de los casos presentan; retraso mental,
retraso pondoestatural, microcefalia, hipertelorismo, microftalmia, orejas bajas y
malformadas, labio leporino, fisura palatina, micrognatia, cuello corto,
hemangiomas capilares, polidactilia, defectos articulares en los dedos, uas
hiperconvexas, pliegue de flexin palmar nico, cardiopata, criptorquidia, bazos
supernumerarios, y malposicin intestinal. En menos del 50% de los casos
hipertonia o hipotonia, convulsiones, epicantus, estrabismo, coloboma del iris,
anoftalmia, cataratas, pabellones auriculares bajos, sindactilia, retroflexin del
pulgar, hiperplasia de uas, dedo gordo en martillo, pie equino varo, calcneo
prominente, arco en S plantar, anomalas de caderas, esternn corto, hernias,
malformaciones pulmonares, cerebrales y urogenitales, defectos del cuello
cabelludo y onfalocele.
Desde el punto de vista anestsico, puede presentar intubacin difcil, cardiopatas
congnitas asociadas principalmente comunicacin interventricular, y por la gran
cantidad de anormalidades asociadas se considera de mal pronstico; siendo el
mximo de mortalidad (50%) durante el primer mes de vida; el 86% de los casos
fallecen antes del ao de edad43

Trisoma 18 (Sndrome De Edward)


Tiene una incidencia de 1/8.000 nacidos vivos con predominio para el sexo
femenino. Es la trisoma ms comn entre los recin nacidos muertos con
malformaciones.
Manifestaciones Clnicas: En ms del 50% de los casos presenta: retraso mental y
pondoestatural, hipertonia, occipucio prominente, orejas bajas y malformadas,
micrognatia, cuello corto, implantacin distal y retroflexin del pulgar, hipoplasia de
uas, defectos articulares de los dedos, dedos de manos montados, pie equino
varo, calcneo prominente (pie en mecedora), abduccin limitada de caderas,
esternn corto, cardiopata y criptorquidea En menos del 50% de los casos se
acompaa de hipotonia, epicantus, microftalmia, defectos oculares, fisura labial y
palatina, hemangiomas capilares, polidactilia, sindactilia, hernias y malformaciones
renales.
Desde el punto de vista anestsico se debe predecir una difcil intubacin y tener
especial precaucin por las drogas con excrecin renal. El pronstico es muy
grave ya que la supervivencia es corta, por el conjunto de malformaciones
viscerales graves asociadas; el 50% fallecen antes de los dos meses, y el 75%
antes de los tres meses. En las supervivencias prolongadas se pone de manifiesto
el intenso retraso psicomotor y los defectos esquelticos posturales. En los casos
de trisomas parciales por lo general la clnica se atena y la supervivencia es
prolongada44.
Trisoma 21 (Sndrome De Down)
Se da por la presencia de un cromosoma 21 en exceso, que podr estar libre (47
cromosomas), translocado sobre otro cromosoma (46 cromosomas), o formar
mosaicos (46/47). La incidencia es de 1 / 650 recin nacidos vivos, favorecido por
la edad aumentada de la madre.
Hoy en da los nios con este sndrome tienen una gran expectativa de vida, hasta
la edad adulta, y son sometidos durante este lapso de tiempo a una serie de
cirugas, que aunado a la gran cantidad de anormalidades congnitas asociadas,
tendr importantes implicaciones anestsicas, teniendo un mayor riesgo que
cualquier otro paciente, lo que implica que el manejo perioperatorio debe ser
esencial para obtener un ptimo resultado.
Se encuentran casi todos los sistemas con algn tipo de compromiso, como el
general, cardiovascular, gastrointestinal, respiratorio, nervioso, musculo
esqueltico, inmune, hematolgico y endocrino 45.

METODOLOGA
MITOSIS

MEIOSIS: PROCEDIMIENTO

RESULTADOS
MITOSIS
Logramos visualizar las diferentes fases tempranas y tardas que se encuentran
en la mitosis como la interfase, profase, metafase, anafase y telofase; junto con
sus clulas determinadas por la especie con su ncleo y nmero especfico de
cromosomas. Adems comprendimos que cada cromosoma est formado por dos
estructuras llamadas cromatinas, que se unen por el centromero y cada cromatina
tiene dos brazos. A continuacin presentamos algunas de las imgenes
observadas en la prctica de laboratorio.
MEIOSIS
A partir de este experimento, logramos observar todas las fases meiticas que
atravesaban los microsporocitos de las anteras de flor agapanto, con la cual se
trabajo.
Profase I: Los cromosomas comienzan a condensarse, su ADN se alinea. Metafase I:
Los cromosomas homlogos se alinean en el ecuador de clulas para formar ttradas.
Anafase I: Los cromosomas se tiran a cada lado de la clula en divisin; uno de cada par
hacia cada polo. Telofase I: La envoltura nuclear puede formar de nuevo .
Citocinesis: Dos clulas hijas se forman. Profase II: Dispersa envoltura nuclear.
Meiosis II: Los cromosomas se ordenan entre los polos. Anafase II: Las cromtidas
se segregan. Telofase II: Despus de la citocinesis, se forman cuatro clulas hijas.

DISCUSIN
DIVISIN CELULAR: MITOSIS
El ciclo de la divisin es el medio fundamental a travs del cual todos los seres
vivos se propagan, cada divisin de la clula produce un nuevo organismo; en las
especies pluricelulares se requieren muchas secuencias para crear un nuevo
individuo, pero tambin es necesaria en el cuerpo adulto para remplazar las
clulas perdidas por desgaste, deterioro o por muerte celular programada. As, un
humano adulto debe producir muchos millones de nuevas clulas cada segundo
simplemente para mantener el estado de equilibrio y, si la divisin celular se
detiene, el individuo morira en pocos das (Robertis, 1967).
El ciclo celular comprende el conjunto de procesos que una clula debe llevar a
cabo para cumplir la replicacin exacta del DNA y la segregacin de los
cromosomas replicados en dos clulas distintas. La gran mayora de las clulas
tambin doblan su masa y duplican todos sus orgnulos citoplasmticos en cada
ciclo celular, de este modo los procesos citoplasmticos y nucleares tienen que
coordinarse unos con otros (Clement L, 1971).
Robert Hooke en 1665, observa por primera vez las clulas, en cortes finos de
corcho. Brown en 1831, descubri la presencia del ncleo en todas las clulas
adems de diferenciar por primera vez los dos compartimientos principales, el
citoplasma y el ncleo. Waldeyer en 1888, le llam cromosomas a las partes ms
importantes del sistema celular.
Morales en 1996, manifest que los cromosomas de la clula estn constituidos
por cromatina y contienen informacin gentica de su especie, la cual es
necesaria para el funcionamiento de sus clulas, la morfognesis de los
organismos, como su reproduccin. Francisco Sez y Horacio Cardoso,
expresaron que los cromosomas contienen la informacin necesaria de los
cambios del material gentico contenido en ellos la variacin, mutacin y seleccin
de los seres vivos.
Gracias a todas estas investigaciones se atribuye lo que hoy en da sabemos,
apoyndonos junto con las indagaciones de la actualidad, para as lograr evitar en
lo posible las enfermedades que se podran propagar hereditariamente. Los
cromosomas sexuales, en el curso de la evolucin se han especializado para la
determinacin del sexo.
Las plantas y los animales estn formados por miles de millones de clulas
individuales organizadas en tejidos y rganos que cumplen funciones especficas,
todas ellas han surgido a partir de un ovulo fecundado por un proceso de divisin.
La mitosis es la divisin nuclear asociada a la divisin de clulas somticas, que

no van a convertirse en clulas sexuales. En las clulas analizadas en el


laboratorio se observaron las diferentes fases de la mitosis.
Segn el estudio realizado en la Universidad de San Carlos de Guatemala,
facultad de biologa por mucho tiempo los citlogos se preocuparon por el perodo
de divisin y la interfase era considerada como una fase de reposo (Johnson,
2006). Hoy da con los avances cientficos y el desarrollo de nuevas tecnologas
para ver ms all del grado microscpico han permitido distinguir y analizar an
ms cada fase e interpretar los resultados en la bsqueda de respuestas al
proceso generador de la vida (Prescott 2004).
DIVISIN CELULAR: MEIOSIS
Una clula meitica se divide y forma dos clulas hijas idnticas, cada una de las
clulas contiene un juego de cromosomas idntico al de la clula parental.
Despus cada una de las clulas hijas vuelve a dividirse de nuevo, y as continua
el proceso. Salvo en la primera divisin celular, todas las clulas crecen hasta
alcanzar un tamao aproximado al doble del inicial antes de dividirse. En este
proceso se duplica el nmero de cromosomas y cada uno de los juegos
duplicados se desplaza sobre una matriz de microtbulos hacia un polo de la
clula en divisin, y constituir la dotacin cromosmica de cada una de las dos
clulas hijas que se forman (Curts, 1987).
A partir del experimento, se pudo observar los microesporocitos en distintas fases
meiticas; primero distinguimos dos grandes fases, la meiosis I, que tambin se
conoce como una divisin reduccional, as como la meiosis II conocida como una
divisin ecuacional anloga a la mitosis, segn vemos en el libro de Biological
Science de Freeman y Scott.
Observamos e identificamos que cada una de estas fases se subdividen en:
profase I, la ms larga de la meiosis, ya que consiste en varias etapas; la primera
es la del leptoteno, tambin conocida como Leptonema, de las palabras griegas
que significan "hilos delgados", nos dice Snustad en su obra Principios de la
gentica, en donde tambin se menciona la siguiente etapa, el zygotene, llamada
como zygonema, que significan hilos pareados; a continuacin el paquiteno
conocida como paquinema (hilos gruesos); siguindole a esta, encontramos a el
diploteno, tambin llamada como diplonema, de las palabras griegas que
significan "dos hilos".
Snustad tambin menciona como en el feto humano todos los ovocitos en
desarrollo, entran en suspensin antes del nacimiento. Esto se conoce como la
etapa dictyotene y permanece as hasta la ovulacin; la siguiente fase en la
Profase I, es la diacinesis en donde los cromosomas se condensan an mas,
Snustad habla sobre el significado a partir de las palabras griegas de esta etapa,
"moverse a travs de".

Luego continuamos con la metafase I, donde el par de cromosomas homlogos


se alinea a lo largo de la placa de la metafase en doble fila. La formacin de
quiasmas antes son para ayudar a mantener los pares juntos y posicionar los
pares de tal manera que slo un lado del centrmero de cada homlogo se
enfrenta hacia fuera, hacia los polos de la clula. Por lo tanto los microtbulos del
cinetocoro se unen a un solo lado de cada centrmero; Biological Science (3rd
ed.) de Freeman, Scott.
En la anafase I, se observa como los microtbulos cinetocoro se acortan y pares
homlogos estn tirando aparte. En el libro Biological Science (3rd ed.) de
Freeman, Scott, se menciona como los cromosomas homlogos duplicados van a
los otros polos; las cromtidas hermanas no se separan. Esto est en contraste
con la mitosis, donde homlogos duplicados se alinean de forma individual en la
placa de la metafase, los microtbulos del cinetocoro de polos opuestos de la
clula se unen a los lados opuestos del centrmero de un homlogo, y las
cromtidas hermanas se separan en la anafase.
Freeman menciona a continuacin a la telofase I, y describe como los homlogos
separados forman un grupo en cada uno de los polos de la clula, la membrana
nuclear y re-formas alrededor de cada ncleo de la clula hija. Puede producirse la
citocinesis. Las dos clulas resultantes tienen la mitad del nmero de cromosoma
como la clula original. Cada cromosoma se encuentra todava en el estado
duplicado y se compone de dos cromtidas hermanas, pero cromtidas hermanas
no son idnticos porque cruzar se ha producido.
Durante la profase II, Freeman menciona como es que se forma un nuevo aparato
del huso en cada clula y la membrana nuclear se rompe y desaparece. En la
metafase II, un aparato de husillo completa est en su lugar en cada clula. El
cromosoma que consiste de las cromtidas hermanas se uni a los centrmeros
se alinea a lo largo de la metafase lugar en cada clula. Ahora los microtbulos del
cinetocoro de polos opuestos se unen a lado opuesto de la misma centrmero.
Cuando los microtbulos estn acortando en la anafase II, los centrmeros se
dividen y las cromtidas hermanas se tira a los polos opuestos de las clulas. En
la telofase II, las membranas nucleares se vuelven a formar en torno a cuatro
grupos diferentes de cromosomas. Despus de la citocinesis, cuatro clulas
haploides son productos. No hay dos clulas son iguales debido a la
recombinacin gentica (crossing over) que se produjeron durante la profase I.
Para mayor informacin ver en Biological Science (3rd ed.), pginas. 249250 de
Freeman, Scott.

CONCLUSIONES

Gracias a la realizacin de esta prctica de laboratorio, llegamos a comprender


que en la mitosis el material gentico se mantiene idntico entre generaciones,
que se efecta en organismos unicelulares y clulas somticas de
pluricelulares, donde la clula madre se divide una vez y las cromtidas se
duplican en la profase, para que as, el proceso realizado plenamente
proporcione como resultado dos clulas hijas diploides idnticas a la madre.

Llegamos a confrontar que la meiosis contribuye a la variacin gentica, la cual


se ejecuta en clulas sexuales o reproductoras, donde la clula madre se divide
dos veces, las cromtidas buscan su homlogo en la profase, y se originan dos
clulas hijas con la mitad de informacin gentica y para que al final produzcan
cuatro clulas hijas haploides con la mitad de cromosomas procedentes de un
progenitores distintos.

Asimilamos la importancia de la meiosis para el origen y formacin de las


clulas germinales haploides, para que al momento de unirsen las clulas del
hombre y la mujer suministren como resultado una clula diploide con una
variabilidad de material gentico, creando un individuo viable.

Aprendimos a identificar de las distintas fases meiticas segn sus


caractersticas del DNA y la morfologa celular como la interfase, profase,
metafase, anafase y telofase, comprendiendo que la primera etapa mencionada
anteriormente es la ms larga, mientras que la anafase y telofase son las ms
cortas.

Pudimos concluir que el proceso de meiosis pasa por dos ciclos, el I y el II,
adems como la variacin gentica se contabiliza en la meiosis I debido al
Crossing Over que ocurre en la fase del paquiteno de la profese I.

Logramos estudiamos e identificar de manera prctica y con total lucidez las


diferentes fases de la mitosis y la meiosis que se presentaron en las clulas
vegetales examinadas (cebolla y agapanto).

Examinamos que todas las clulas de cualquier planta o animal, surgieron a


partir de una nica clula inicial por un proceso de divisin, para luego derivar el
crecimiento celular, la replicacin de ADN, la distribucin de los cromosomas
duplicados en las clulas hijas y por ltimo la divisin celular con sus
respectivas fases.

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ANEXOS

Hoja de trabajo del laboratorio de Divisin Celular, Mitosis realizado el 4 de


Noviembre de 2014 por Charry Cardoso Daniela.

Hoja de trabajo del laboratorio de Divisin Celular, Meiosis realizado el 11 de


Noviembre de 2014 por Charry Cardoso Daniela.

Hoja de trabajo del laboratorio de Divisin Celular, Mitosis realizado el 4 de


Noviembre de 2014 por Vesga Prez Lisseth Lorena.

Hoja de trabajo del laboratorio de Divisin Celular, Meiosis realizado el 11 de


Noviembre de 2014 por Vesga Prez Lisseth Lorena.

Artculo de revisin sobre la Mitosis y la Meiosis: Ahumada, R. et al.


Caracterizacin cariotpica en mitosis y meiosis del robalo blanco Centropomus
Undecimalis (pisces: centropomidae). Biologa Tropical; SciELO.

Artculo Original sobre Mitosis: Bou, V. et al. Estudio de los mecanismos de


apoptosis y mitosis en el globo ocular. Modelo experimental del sndrome txico
gestacional. Sociedad Espaola de Oftalmologa; SciELO.

Artculo Cientfico experimental e investigativo sobre Meiosis: Gil, A. CardonaMaya, W. & Cadavid, . Muerte embrionaria temprana: Tiene influencia el
factor masculino? Espaoles de Urologa; SciELO.

Rev. biol. trop vol.59 n.2 San Jos Jun. 2011

Revista de Biologa Tropical


Print version ISSN 0034-7744

CARACTERIZACIN CARIOTPICA EN MITOSIS Y MEIOSIS DEL ROBALO


BLANCO CENTROPOMUS UNDECIMALIS (PISCES: CENTROPOMIDAE) 46
Lenin Arias-Rodriguez1, Jeane R. Indy1, 2, Rosa I. Ahumada-Hernndez1, Helen Barragn-Cupido1,
Antonieta A. valos-Lzaro1 & Salomn Pramo-Delgadillo1
1. Divisin Acadmica de Ciencias Biolgicas, Universidad Jurez Autnoma de Tabasco (UJAT),
C.P. 86150, Villahermosa, Tabasco, Mxico; leninariasrodriguez@hotmail.com,
rosaiselaahumada@hotmail.com,helenbarragan@hotmail.com,
abisag_avalos@hotmail.com;salomonparamo@hotmail.com
2. Faculty of Fisheries and Marine Sciences, Sam Ratulangi University, Kampus Bahu, (UNSRAT).
P.O. 95115. Manado, Indonesia;jeanerimberindy@yahoo.com
ABSTRACT

Karyotypic characterization in mitosis and meiosis of the common snook


Centropomus undecimalis (Pisces: Centropomidae). The common snook
Centropomus undecimalis inhabits marine, brackish and freshwater habitats in the
Western Central Atlantic Ocean, including the Gulf of Mexico. Common snook is an
economically important fish in many localities, nevertheless the number of studies
on its biology and genetics are still few. The present study attempts to establish the
cytogenetic profiles of the specimens collected in Paraiso Municipality Tabasco,
Mexico. Tissue of five females and eight male organisms were processed by
conventional cytological techniques to obtain chromosome slides of high quality in
order to assemble the karyotype. The results from the kidney tissue analysis
showed that 85.1% of 288 mitosis had a 2n=48 chromosomes, and 52.8% of 104
meiosis exhibited the haploid number 1n=24. The diploid karyotype showed 48
monoarmed chromosomes of the telocentric (T) type. There was no chromosome
heteromorphism between females and males. The diploid karyotype was very
similar to that observed in the majority of marine fishes. Rev. Biol. Trop. 59 (2):
683-692. Epub 2011 June 01.
Key words: karyotype, chromosome, common snook, Centropomus undecimalis.
RESUMEN
El robalo blanco Centropomus undecimalis, vive en hbitats marinos, salobres y
dulceacucolas en el ocano Atlntico occidental, incluyendo el golfo de Mxico. La
especie, es econmicamente importante en varias localidades, no obstante los
estudios sobre su biologa y gentica son hasta el momento pocos. El presente
estudio tiene como propsito, la caracterizacin citogentica de especmenes
recolectados en el municipio de Paraso, Tabasco, Mxico. Cinco hembras y ocho

machos fueron procesados por tcnicas citolgicas convencionales para la


obtencin de preparaciones cromosmicas de buena calidad para elaborar el
cariotipo. Los resultados del anlisis del tejido del rin, mostraron que 85.1% de
288 mitosis tienen 2n=48 cromosomas y 52.8% de 104 meiosis exhiben el nmero
haploide de 1n=24. El cariotipo diploide mostro 48 cromosomas monorrmeos de
tipo telocntrico (T). No se observ heteromorfismo cromosmico entre hembras y
machos. El cariotipo diploide fue similar a los observados en la mayora de peces
marinos.
Palabras clave: cariotipo, cromosoma, robalo blanco, Centropomus undecimalis.
INTRODUCCIN
Los robalos, como se les conoce coloquialmente a los miembros de la familia
Centropomidae, han sido recientemente clasificados en un slo gnero:
Centropomus (Nelson 2006). De acuerdo con Rivas (1986) y Nelson (2006), los
Centropomus han sido descritos como un grupo compacto de peces que es muy
homogneo, gran parte de su vida se da en los mares del continente Americano y
un periodo reducido en cuerpos de agua dulce, por ello tienen un alto grado de
diferenciacin, si se les compara con los miembros de la familia hermana Lates y
Psammoperca de la regin Indo-Pacifico y frica. De revisiones taxonmicas
previas (Rivas 1986) y bioqumicas actuales (Tringali et al. 1999), se ha logrado
demostrar que ni una sola de las especies deCentropomus que habitan en el
ocano Atlntico viven en el ocano Pacifico o viceversa.
Los robalos en el continente Americano, estn representados por 12 especies
nominales (Rivas 1986, Nelson 2006). Seis especies de robalo (C. medius, C.
nigrescens, C. viridis, C. unionenses, C. armatus y C. robalito) son reconocidas en
el Pacifico oriental y su rango de distribucin est contemplado desde el Golfo de
Baja California en el norte de Mxico hasta las costas de Per en Sudamrica
(Rivas 1986, Nelson 2006). Por otro lado, seis especies han sido reconocidas para
el Atlntico occidental, C. pectinatus, C. undecimalis, C. poeyi, C. parallelus, C.
mexicanus y C. ensiferus (Rivas 1986), con un rango de distribucin general como
grupo, entre la pennsula de Florida en los Estados Unidos de Norte Amrica y en
Sudamrica hasta las costas de Brasil, incluyendo las islas Antillas (Marshall 1958,
Volpe 1959, Chvez 1963, Rivas 1986, lvarez-Lanjonchre & Suzuki 2008). La
mayora de las especies de robalo del continente Americano, tienen distribucin
amplia a lo largo de las aguas del ocano Pacifico y Atlntico, siendo C. poeyi, la
nica especie con rango reducido de distribucin tan slo a lo largo de las costas
del Golfo de Mxico en la sonda de Campeche del Ocano Atlntico (Chvez
1963).
En general, todas las especies de robalo son consideradas como peces de alto
valor econmico, principalmente por el precio que alcanzan en los mercados

debido al sabor de la carne y al tamao que alcanzan en etapa adulta (Tucker Jr.
1987, Tringali et al. 1999, Perera-Garca et al. 2008). El robalo blanco C.
undecimalis, es una de las especies de mayor importancia econmica debido a los
volmenes de captura que se registran a lo largo del ao (Tucker Jr. 1987, Tringali
et al. 1999, Perera-Garca et al. 2008).
Aunque los centropmidos, son uno de los peces con mayor importancia
comercial, la informacin sobre su biologa y gentica es muy limitada (Marshall
1958, Volpe 1959, Chvez 1963, Rivas 1986, Miller et al. 2005, lvarezLanjonchre & Suzuki 2008, Perera-Garca et al. 2008). La mayora de los
estudios en el grupo, se han realizado bsicamente sobre aspectos de taxonoma,
distribucin (Rivas 1986, Tucker Jr. 1987, Chvez 1963) y recientemente sobre el
estado actual de sus pesqueras (Perera-Garca et al. 2008). En los estudios de
taxonoma y distribucin, se ha detectado un alto grado de traslape tanto en los
caracteres mersticos y morfomtricos empleados para la separacin de las
especies, como tambin de los hbitats, sitios de reproduccin y reas de
migracin (Rivas 1986, Miller et al. 2005), lo que sugiere la posibilidad de
hibridacin o presencia de genotipos especiales que pueden ser atribuidos a razas
o variedades de inters biolgico y acucola que pueden ser asociados a slo un
nmero reducido de autnticas especies.
Los estudios recientes de gentica en el grupo (Tringali et al. 1999, PeregrinoUriarte et al. 2007), muestran de igual modo un probable traslape entre los loci
proteicos y moleculares (p.e. ADNm y microsatelital) que probablemente son
indicadores que sugieren presencia de especies hbridas. Sin embargo, las
evidencias no han sido lo suficientemente circunstanciales para probar la citada
hiptesis, debido a la carencia de estudios citogenticos y experimentos de
hibridacin artificial, la cual esta limitada por la carencia de metodologas que
permitan la reproduccin controlada en el grupo.
Las evidencias de tipo citogentico, son pocas en los robalos y solo existen bajo el
contexto de literatura gris, con poco acceso a los datos y anlisis reportados, entre
ellos se encuentra el trabajo de citogentica de Barreto-Neto (2001), para C.
mexicanus y C. undecimalis. En suma debido a los argumentos anteriores, el
objetivo principal de este trabajo fue el de caracterizar por el mtodo convencional
de citogentica los cromosomas en mitosis y meiosis de la poblacin de robalo
blanco C. undecimalis que habita en la regin costera del Golfo de Mxico en
Tabasco, Mxico.
MATERIALES Y MTODOS
Recolecta de especmenes e identificacin taxonmica: Cinco hembras y ocho
machos de robalo blanco (25.18.9cm, 90.99.2g) en edad adulta, fueron
recolectados durante los meses de octubre-noviembre del 2008 en la laguna

costera Mecoacn, que se encuentra ubicada en el municipio de Paraso,


Tabasco, en el sureste de Mxico. La identificacin taxonmica, sigui los
caracteres mersticos y morfomtricos clsicos que recomienda Rivas (1986) y
Miller et al. (2005).
Procedimiento citolgico y elaboracin de preparaciones cromosmicas: Los
especmenes fueron tratados con ligeras modificaciones conforme al
procedimiento empleado por Arias-Rodriguez et al. (2007, 2008, 2009), como se
describe a continuacin: Los especmenes, fueron tratados con una solucin
acuosa de colchicina (28g/g de peso) disuelta en citrato de sodio al 0.1%,
inyectada en la aleta dorsal y en la regin intraperitoneal (50%/50%). Treinta
minutos despus, los tejidos de inters: branquias, rin y gnadas fueron
removidos y transferidos a colchicina disuelta al 0.1% en citrato de sodio al 0.1%.
Despus, fueron incubados a 37.01.0C durante cinco horas. Posteriormente,
disgregados, hidratados (37.01.0C) por 60min en citrato de sodio al 2.0% y
prefijados (durante 96hrs/4C) por adicin (en proporcin similar a la del agente
hidratante 1:1) del fijador preparado a partir de una mezcla de metanol (4C) con
cido actico (4:1).
Los tejidos, fueron fijados reemplazando el prefijador por el fijador 4:1, mediante el
centrifugado a 6000r.p.m. durante 15 minutos a 4C (Eppendorf Centrifugue 5810R); dicha operacin fue repetida hasta que los tejidos tomaron coloracin
blanquecina, inmediatamente fueron colocados a 4C y desde ese momento solo
se emplearon durante un mes.
La solucin celular (a 4C) derivada de cada tejido, fue goteada sobre series de
portaobjetos que fueron colocados en etanol absoluto a 4C y desde 1.70m. Las
preparaciones cromosmicas, fueron secadas con la flama de un mechero de
alcohol y teidas conforme a las recomendaciones de Denton (1973) y Kligerman
& Bloom (1977) con giemsa al 10% por 30min.
El sexo de los especmenes, se determin por la tcnica de aplastado de una
porcin de gnada, tincin con solucin madre de giemsa y observacin bajo el
microscopio con los objetivos 10X y 40X (Arias-Rodriguez et al.2008, 2009).
Anlisis microscpico y elaboracin del cariotipo: El anlisis y seleccin de
las mejores dispersiones cromosmicas, se realiz con los objetivos 40X y 100X
del microscopio Zeizz Axiostar-Plus. Las mejores dispersiones cromosmicas (con
cromosomas menos encimados y bien dispersos) fueron foto-digitalizadas con una
cmara Sony Cybershot (DSC-W30).
El nmero cromosmico modal diploide, se estim con base en el anlisis de
frecuencia de cromosomas mostrado en las imgenes digitalizadas, fotos
impresas en alta resolucin y por conteo directo con el microscopio ptico. Nueve

fotografas en estadio mittico y tres en estadio meitico, se ampliaron e


imprimieron en alta resolucin para emplearse como base para elaborar el
cariotipo.
El arreglo y clasificacin del cariotipo en meiosis y mitosis, tuvo como referencia la
propuesta metodolgica de Levan et al. (1964), para ello se tomaron las medidas
de longitud total del brazo q (brazo largo) de cada cromosoma en micrmetros
(m), se calcul tambin el valor medio, la desviacin estndar y la longitud
relativa de cada par de cromosomas [longitud de cada par de cromosomas
q/longitud total del complemento cromosmico diploide (100)]. Los cromosomas
individuales, del cariotipo representativo en ambos estadios celulares (mitosis y
meiosis), fueron recortados electrnicamente con el programa Photoshop CS 8.0.1
(Adobe) y ordenados manualmente con base en su longitud.
Los datos, de las medidas promedio de cada par cromosmico (en m) de los
cariotipos en mitosis y meiosis, fueron evaluadas por las pruebas de normalidad y
homocedasticidad (p<0.05) (Zar 1984). Posteriormente, los pares cromosmicos
entre los cariotipos mitticos y meiticos fueron comparados por un anlisis de
varianza (ANVA) de dos vas a p<0.05 de significancia (Zar 1984). Las diferencias
en longitud (m) de cada par de cromosomas (brazo largo q) entre estadios
(mitosis/meiosis) se estim por la comparacin mltiple de Tukey (p<0.05) (Zar
1984). El nmero fundamental (NF), se estableci conforme al nmero de brazos
cromosmicos del complemento cromosmico diploide y el arreglo del ideograma
en mitosis y meiosis se fundament en la longitud de brazos q en m (Denton
1973).
RESULTADOS
Ciento veinte preparaciones cromosmicas, con dispersiones metafsicas de
buena calidad, fueron elaboradas de muestras de tejido gonadal (30) y rin (90)
de trece especmenes de robalo blanco C. undecimalis (cinco hembras y ocho
machos). Las preparaciones elaboradas con tejido de las branquias, no mostraron
metafases mitticas suficientes y de calidad por lo que fueron descartadas para el
estudio.
Se contabilizaron un total de 392 metafases, siendo 288 de los campos
cromosmicos mitticos (rin) y 104 meiticos (gnadas). Del anlisis de
frecuencias de las metafases observadas, los datos mostraron que el 85.1% (245
metafases) de las dispersiones mitticas corresponde a una moda de 2n=48
cromosomas (Fig. 1A). Mientras el anlisis de 104 campos cromosmicos en
meiosis qued representado por la moda haploide de 1n=24 cromosomas, misma
que correspondi al 52.8% (55 metafases) de campos observados (Fig. 1B). En el
anlisis de frecuencias de los campos meiticos fue evidente la presencia de
clulas con 2n=48 cromosomas que correspondi al 20.1% (21 metafases) del

total de dispersiones cromosmicas analizadas. Por otro lado, se notaron algunas


variaciones del nmero de cromosomas observados en estadio mittico y
meitico, dicha variacin oscil de 2n=40, 44 y de 1n=20, 27, 41 cromosomas
respectivamente (Fig.1A,B).
La longitud del complemento cromosmico promedio del cariotipo en mitosis de C.
undecimallis, vari de 4.820.89m en el primer par de cromosomas y hasta
1.620.27m en ltimo par veinticuatro (Cuadro 1). Mientras, las medidas
promedio del complemento cariotpico haploide bivalente en meiosis, mostr en el
primer par cromosmico 2.600.46m y en el ltimo par veinticuatro 0.800.17m
(Cuadro 1). El analisis de varianza, mostr que existen diferencias significativas
entre las longitudes promedio de los pares cromosmicos, mismos que fueron
clasificados en tres grupos basado en las diferencias estadsticas (p<0.05)
identificadas, como sigue: cromosomas mayores (par 1-4), medios (par 5-19) y
menores (par 20-24) del cariotipo promedio en mitosis (Cuadro 1). El complemento
cariotpico promedio en meiosis, se clasific en grupos similares al del cariotipo en
mitosis y solo con variaciones en los nmero de pares correspondientes, como se
muestra a continuacin: cromosomas mayores (par 1-4), medios (par 5-20) y
menores (par 21-24) (Cuadro 1). Adicionalmente, el analisis de varianza, permiti
el establecimiento de diferencias significativas entre las medidas promedio de los
pares cromosmicos del cariotipo global entre la mitosis y meiosis (Cuadro 1).
El cariotipo caracterstico del robalo blanco C. undecimalis tuvo como N.F a 48
brazos cromosmicos y fue clasificado como primitivo por estar integrado en
estadio mittico (2n=48) y meitico (1n=24) por cromosomas monorrameos de tipo
telocntrico (T) (Fig. 2). El ideograma del complemento cromosmico promedio
por par cromosmico de los cariotipos en mitosis y meiosis reflejan
esquemticamente las diferencias en longitud (m) entre ambos estadios
celulares. Comparativamente, dichas diferencias representan aproximadamente el
doble de las longitudes en micrometros observadas en el cariotipo en mitosis
cuando ste se contrasta con el del estadio en meiosis (Fig. 3). Por otro lado, no
se lograron observar diferencias en tamao y forma entre los cromosomas que
integran las dispersiones cromosmicas de hembras y machos de la especie
analizada.

DISCUSIN
En los estudios de citogentica, que se han realizado en varios grupos
taxonmicos que integran a los peces se ha observado con frecuencia un efecto
diferencial del alcaloide colchicina sobre los rganos y tejidos blancos que son
ricos principalmente en clulas epiteliales con alto ritmo de divisiones celulares
(Denton & Howell 1969, Denton 1973, Kligerman & Bloom 1977, Gold 1979,
Ramrez 1980, Thorgaard & Disney 1990). Dicho efecto diferencial se ha
observado por presencia de dispersiones cromosmicas o metafases en slo
algunos de los tejidos del pez (p.e. tejido branquial, rin y gnadas) (Denton &
Howell 1969, Denton 1973, Kligerman & Bloom 1977, Gold 1979, Ramrez 1980,
Thorgaard & Disney 1990). En el caso de la especie de que trata este estudio, slo
fue posible observar dispersiones cromosmicas de calidad y con nmero
suficiente en el tejido rin y gnadas, probablemente por que las clulas
epiteliales de las branquias presentan efecto refractario hacia el alcaloide
colchicina (razn por la que no fue posible observar metafases a partir del tejido
branquial) como ha sido observado en otras especies de peces para otros tejidos
(Denton & Howell 1969, Denton 1973, Kligerman & Bloom 1977, Gold 1979,
Ramrez 1980, Thorgaard & Disney 1990).
El nmero cromosmico de 2n=48 y 1n=24, identificado para el robalo blanco C.
undecimalis, es similar al estudio de Barreto-Neto (2001), para C. mexicanus y C.
undecimalis. El nmero cromosmico reportado para los Centropomidos por
Barreto-Neto (2001) y el presente estudio de 2n=48 (y 1n=24) cromosomas
coinciden con el valor de 2n=48 cromosomas, propuesto como nmero
cromosmico ancestral para la mayora de peces perciformes (Denton 1973, Ohno
1974, Galetti Jr. et al. 2000). Por otro lado, varios estudios recientes en peces
marinos han demostrado que la mayora de especies analizadas desde el punto
de vista citogentico muestran 2=48 cromosomas monorrmeos de tipo
telocntrico (T) (Galetti Jr. et al. 2000, Ruiz-Carus 2002, Accioly & Molina 2008);
por lo que se ha considerado dicho carcter citogentico, como una condicin
biolgica que es compartida por los peces marinos.
La presencia de cromosomas sexuales en peces, es una condicin biolgica que
se ha observado muy pocas veces en alrededor de 7 000 especies vivientes con
hbitat marino (Galetti Jr. et al. 2000, Ueno & Takai 2008). En el caso de C.
undecimalis, no fue posible identificar heteromorfismo cromosmico entre las
dispersiones cromosmicas de hembras y de machos, por ello se descarta la
presencia de cromosomas sexuales en la especie y probablemente dicha
condicin es compartida por el resto de especies que comprenden a la familia
Centropomidae. La constitucin cromosmica observada, tambin sugiere que la
determinacin sexual en el robalo blanco no se establece al momento de la
fertilizacin (singamia) por heterocromosomas. Dicha condicin biolgica permite
que el cigoto tenga el potencial de desarrollarse en hembra o macho (o
inversamente) en cualquiera de las etapas del ciclo de vida, siguiendo un patrn

similar al de una dosis hormonal compensatoria, basada en una represin


transcriptacional parcial de genes que regulan el sexo (Dawes et al. 1999).
El aspecto prctico de la conjetura anterior ha sido tambin observada en dos
especies de peces serranidos (Epinephelus guttatus y Thalassoma bifasciatum)
(Ruiz-Carus 2002). En el robalo blanco, los especmenes silvestres durante las
primeras etapas de vida primero maduran como machos y posteriormente se
desarrollan hacia hembras (Peters et al. 1998). El potencial dado por la carencia
de cromosomas sexuales, se ha comprobado en experimentos de reversin sexual
hacia hembras de juveniles macho de C. undecimalis empleando el esteroide 17-
estradiol (Vidal-Lpez 2009). Sin embargo, estudios adicionales de gentica
bsica siguen siendo importantes para el buen manejo del recurso y su aplicacin
en sistemas de cultivo.
AGRADECIMIENTOS
El presente documento tuvo financiamiento del proyecto de repatriacin 76305
(CONACYT) otorgado al primer autor (LAR). Los autores agradecen a Ulises
Hernndez Vidal (DACBiol-UJAT) y Juan M. Vidal Lpez (DACBiol-UJAT) por el
apoyo brindado.
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CR, 2060, 2511-5500, 2511-5550
rbt@biologia.ucr.ac.cr

Archivos de la Sociedad Espaola de Oftalmologa


Versin impresa ISSN 0365-6691
Arch Soc Esp Oftalmol v.83 n.1 Madrid ene. 2008
http://dx.doi.org/10.4321/S0365-66912008000100008

ARTCULO ORIGINAL
ESTUDIO DE LOS MECANISMOS DE APOPTOSIS Y MITOSIS EN EL GLOBO
OCULAR. MODELO EXPERIMENTAL DEL SNDROME TXICO
GESTACIONAL47
STUDY OF APOPTOSIS AND MITOSIS MECHANISMS IN THE EYE.
EXPERIMENTAL MODEL OF GESTATIONAL TOXIC SYNDROME
Pons-Vzquez S.1, Vila-Bou V.2, Zanon-Moreno V.1, Iborra F.J.3, Gallego-Pinazo R.4, Melo P.M.3,
Garca-Medina J.J.2, Pinazo-Durn M.D.2
Unidad Investigacin Oftalmolgica Santiago Grisola. Valencia. Weatherhall Institute of Molecular
Biology, Radcliffe Hospital, University of Oxford (UK) e Institute of Molecular and Cell Biology,
University of Porto (Portugal). 1Licenciado en Biologa. 2Doctor en Medicina. 3Doctor en Biologa.
4
Licenciado en Medicina.
Este trabajo ha sido subvencionado por un proyecto de investigacin FIS-FEDER (P1020191) del
Instituto de Salud Carlos III (Investigador Principal Dra. Pinazo-Durn) y beca de formacin en
investigacin oftalmolgica asociada a este proyecto otorgada a Sheila Pons Vzquez, y por un
proyecto de investigacin Fundaao para a ciencia e tecnologia, Portugal (praxis XXI/BD/3395,
praxis P/SAU/12287/1998) (Investigador Principal Prof. Tavares) y beca de formacin en
investigacin oftalmolgica asociada a este proyecto otorgada a Pedro M Martins de Almeida Melo .

RESUMEN
Objetivo: Profundizar en los conocimientos de los mecanismos de diferenciacin y
proliferacin celular durante el desarrollo de la retina, estudiando los mecanismos
de mitosis y apoptosis en un modelo de exposicin prenatal al alcohol en la rata.
Mtodo: Se utilizaron ratas Wistar (200 g peso) y su descendencia, en dos grupos
alimentados con dieta lquida: 1) el grupo expuesto al etanol (5% etanol
peso/volumen como 35% caloras diarias totales) y 2) un grupo control isocalrico
(carbohidratos como 35% caloras diarias totales). Se obtuvieron los globos
oculares el da 21 de gestacin para incluirlos en parafina y realizar la
inmunodeteccin de clulas apoptticas (TUNEL) y mitticas que se fotografiaron
a microscopa confocal, realizando anlisis morfolgico y morfomtrico para
estudiar estadsticamente los datos.
Resultados: Las microfotografas revelaron un aumento significativo de perfiles
apoptticos (p<0,05) y paralelamente un descenso de procesos mitticos en el
grupo expuesto al etanol frente al control. Las clulas ganglionares y los
fotorreceptores presentaron ms diferencias en estos dos procesos que el resto de

fenotipos celulares retinianos. Los datos obtenidos sugieren anomalas en los


procesos de diferenciacin y proliferacin celular de la retina causados por la
exposicin al alcohol.
Conclusiones: El abuso de alcohol durante la gestacin altera el desarrollo de la
retina por inducir anomalas en los procesos mitticos y apoptticos. El aumento
de apoptosis y disminucin de las mitosis pueden deberse a cambios en la
expresin de genes reguladores, as como en las vas de sealizacin de ambos
procesos en estadios precoces del desarrollo.
Palabras clave: Alcohol, intoxicacin crnica, neurotoxicologia, apoptosis, mitosis.
ABSTRACT
Objective: To improve knowledge of the mechanisms of cellular differentiation and
proliferation during retinal development, by studying cellular and molecular damage
in a rat model of prenatal ethanol exposure.
Methods: Female, juvenile Wistar rats (200g body weight) and their offspring were
divided into two groups, which were fed a liquid diet: 1) ethanol-exposed group (5%
ethanol weight/vol as 35% of daily total calories) and 2) isocaloric control group
(maltose/dextrin as 35% of daily total calories). Eyeballs were obtained at 21 days
of gestation, embedded in paraffin, and immunodetection procedures performed on
apoptotic (TUNEL) and mitotic profiles, which were observed and photographed
using a confocal microscope.
Results: Analysis of the microphotographs revealed a statistically significant
increase of apoptotic profiles and a decrease in mitotic profiles in the ethanol
exposed group compared to controls (p<0.05). Ganglion cells and photoreceptors
showed more changes than other retinal cell phenotypes. These findings suggest
that abnormalities in the differentiation and proliferation processes of the retina
were caused by the alcohol exposure.
Conclusions: Alcohol abuse during pregnancy alters development of the visual
system by inducing developmental changes in the mitotic and apoptotic processes
of the retina. These latter changes may be the result of changes in the expression
of regulatory genes as well as the result of alteration in signalling pathways for both
differentiation-proliferation and apoptotic events (Arch Soc Esp Oftalmol 2008; 83:
37-44).
Key words: Ethanol, chronic intoxication, neurotoxicology, apoptosis, mitosis.
INTRODUCCIN
El diagnstico de los sndromes txicos gestacionales (STG) se ha efectuado a lo
largo de la historia basndose en antecedentes del abuso del agente txico
(drogas ilcitas o alcohol) por la mujer gestante. Las descripciones coinciden con la

presentacin de una facies caracterstica y un recin nacido de bajo peso,


nacido de madres que han consumido alcohol o drogas. Aunque los efectos
nocivos del abuso de alcohol sobre el organismo en desarrollo haban sido
sospechados a lo largo de la historia, la trada patognomnica: malformaciones
crneo-faciales, retraso mental y dficit en el crecimiento, fue establecida en 1973
y denominada sndrome alcohlico fetal (SAF) por Jones y Smith (1). A partir de
entonces surgieron diversos trabajos epidemiolgicos y experimentales que
analizaban las consecuencias de la exposicin gestacional al alcohol (2-6). El
examen oftalmolgico de los nios que padecan SAF demostr la disminucin
significativa de agudeza visual, elevada incidencia de defectos de refraccin,
estrabismo, anomalas de los segmentos anterior y medio y alteraciones del fondo
ocular, cuando los nios con diagnstico del SAF se compararon con controles de
la misma edad y sexo nacidos de madres que no haban ingerido bebidas
alcohlicas durante el embarazo (7-10).
Sin embargo an no se han demostrado las bases celulares de los efectos del
alcohol y otros agentes teratognicos, sobre el sistema nervioso. Es bien conocido
que durante el desarrollo del sistema visual tanto los procesos de diferenciacin y
proliferacin celular como la muerte programada de los elementos
supernumerarios o daados, conocida como apoptosis, desempean una funcin
primordial para la organizacin citoarquitectural de los tejidos neurales y para el
correcto establecimiento de la funcin visual. Si se analiza el porcentaje de
eliminacin de las clulas ganglionares retinianas de la rata, aproximadamente un
90% de stas mueren durante la primera semana tras el nacimiento, de manera
que aquellas que consiguen sobrevivir realizan las sinapsis con sus elementos
diana que a su vez aportarn los factores trficos necesarios para inhibir las vas
de sealizacin de la apoptosis, permitiendo que sobrevivan.
Puesto que se ha descrito con anterioridad que el abuso crnico de alcohol
interfiere con el metabolismo y la sealizacin de diversos procesos esenciales
para el mantenimiento de la salud (11) y se han definido las vas de sealizacin
de la apoptosis en relacin a diversas patologas oftalmolgicas (12), en el
presente trabajo postulamos que el alcohol, como agente teratgeno puede inducir
dao celular irreversible en estadios precoces del desarrollo de la retina,
compatibles con las caractersticas oftalmolgicas que presentan los nios con el
sndrome txico gestacional, realizando los experimentos para evaluar los
procesos de diferenciacin-proliferacin celular y apoptosis en un modelo de
exposicin pre- y postnatal en la rata.
SUJETOS, MATERIAL Y MTODOS
Animales: grupos, dietas y obtencin del tejido

El modelo experimental se llev a cabo en la rata Wistar (5,13-16) y se ajust a los


requerimientos de la CE para este tipo de estudios de investigacin animal. ocho
ratas hembras de la raza Wistar y en edad juvenil (200 g de peso) se aclimataron
a las condiciones estndar de laboratorio durante una semana y fueron divididas
en dos grupos: 1) cuatro ratas que recibieron una dieta lquida en las que el etanol
(5% peso/volumen) aport el 35% de las caloras diarias (GETOH) 2) cuatro ratas
que fueron alimentadas con dieta lquida conteniendo maltosa-dextrina en la
misma proporcin que el etanol en el grupo anterior y que se consider como
grupo control nutricional paralelamente alimentado (GCN).
Las ratas se mantuvieron con esta alimentacin durante 6 semanas, anotando
diariamente su ingesta y peso corporal. La alcoholemia se midi en la sangre
obtenida de la cola, antes y durante la gestacin, y se analiz por cromatografa
de gases (5). Luego se aparearon y se llev un control estricto durante toda la
gestacin. El da 21 de gestacin (G21) dos ratas de cada grupo fueron
sacrificadas por decapitacin para obtener los fetos. stos fueron examinados,
pesados, determinada su alcoholemia y clasificados de acuerdo a sus
caractersticas y edad. Cuatro fetos de cada rata, de ambos grupos, fueron
decapitados para obtener los globos oculares y nervios pticos. Unos se
destinaron a mediciones para obtener diversos parmetros del desarrollo mediante
microscopa ptica y otros se procesaron para tcnicas de inmunocitoqumica a
microscopa confocal.
Los ojos de los fetos fueron fijados con paraformaldehdo 4% durante toda la
noche. Despus se lavaron con PBS para incluir las muestras en parafina y
realizar los cortes y as observar las caractersticas histolgicas que no se podan
apreciar de forma ptima cuando se microseccionaba directamente con criostato.
Para la inclusin en parafina se utiliz el procedimiento estndar, incluyendo las
muestras en parafina y realizando los cortes y desparafinando los mismos antes
de empezar con las tcnicas inmunohistoqumicas.
Protocolo para la identificacin y recuento de clulas apoptticas
Protocolo de la tcnica TUNEL [terminal dUTP nick end labeling (TUNEL)]. Las
secciones transversales del espesor de la retina se pretrataron con 0,02% Tritn
X-100 en PBS-tween 20 (0,01%) durante 30 minutos y se preincubaron con
tampn de reaccin TdT durante 10 minutos. A continuacin se incubaron, dos
horas en una cmara hmeda a 40-45C, con TdT reaction mixture que est
formado por: enzima TdT 4l, tampn TdT 992l, biotina 16 dUTP 4l.
Rpidamente se lav en el mismo tampn que en la preincubacin durante 10 min.
Para parar la reaccin se lav tres veces durante dos minutos con PBS-Tween 20
(0,01%). Seguidamente se incub con FITC-Avidin D de Vector Labs (1:50) en
PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente. Despus se lav tres veces
durante dos minutos con PBS-Tween 20 (0,01%). Se realiz el contraste con PI

Counterstain Solution" por 30 min, y se volvi a lavar con PBS durante cinco
minutos. Las secciones fueron montadas para posterior visualizacin al
microscopio confocal Olympus BX 51 (Olympus, Tokio, Japn).
Protocolo para la identificacin y recuento de clulas mitticas
Las secciones transversales de la retina de las ratas se sumergieron en Tritn 1%
diez minutos, y se lavaron con PBS para sumergir de nuevo con PBBSA (PBS +
Bovine Serum Albumin) durante 30 minutos. Se incubaron con el anticuerpo
primario Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) 2,5% en BSA durante una hora,
y se lavaron con PBS tres veces de cinco minutos. A continuacin se aadi el
anticuerpo secundario Cy 3 (Jackson Inmuno Research) al 0,5% en PBBSA
durante una hora, y se lav con PBS tres veces durante cinco minutos.
Seguidamente se aadi TOPRO 3 iodide (Molecular Probes T3605) 0,02% en
PBS durante cinco minutos y se lav con PBS cinco minutos. A continuacin las
secciones fueron montadas para posterior visualizacin al microscopio confocal
Olympus BX 51.
ANLISIS ESTADSTICO
Para validar las caractersticas del modelo experimental de exposicin prenatal al
alcohol, se determin la concentracin de alcohol en la sangre de la cola tanto a
las madres gestantes (primera, segunda y tercera semana de la gestacin) como a
los fetos, se determin la ingesta de comida y el aumento de peso corporal y se
registraron los datos analizando la media y desviacin estndar, expresadas en
gramos, conforme a nuestros estudios previos (15-17). Se pesaron los globos
oculares de los fetos, inmediatamente tras la extraccin, utilizando una balanza de
precisin Metzler y se anotaron los datos respectivos para analizar la media y
desviacin estndar, expresadas en miligramos. Las micrografias de los nervios
pticos se analizaron mediante los datos correspondientes a los dimetros mayor
y menor de la seccin transversal y se hall el rea de la seccin aproximando al
rea de una circunferencia (que se asemeja a la apariencia morfolgica del nervio
ptico en el animal inmaduro) siguiendo nuestros estudios anteriores (17-20),
registrando los datos para analizarlos hallando la media y desviacin estndar de
la muestra, expresados en micras cuadradas. Las micrografias de las retinas se
examinaron y se hallaron las medias y desviacin estndar de las medidas de la
seccin transversal incluyendo todas las clulas del espesor total del tejido,
siguiendo nuestros trabajos publicados con anterioridad (18-20).
Todos estos datos se han expresado como la media y desviacin estndar de 4-6
microfotografias por rata.
En cuanto a la inmunodeteccin de las clulas apoptticas o mitticas, segn cada
tcnica empleada se contabilizaron las clulas de tincin positiva para cada caso

respecto el rea medida en m2 y se expresaron como densidad de clulas


apoptticas y/o densidad de clulas mitticas, utilizando para ello 4-6 micrografas
por cada animal y tejido analizado.
Todos los datos fueron registrados en una hoja diseada para este fin mediante el
programa Excel para Windows (Excel for Windows, Illinois, USA) y fueron
analizados estadsticamente mediante el programa SPSS 11.0 (SPSS for
Windows, SPSS Inc, Chicago, USA). Las diferencias entre grupos fueron
analizadas mediante el test t de Student y alternativamente con el test de
Kolmogorov-Smirnov.
RESULTADOS
El modelo experimental en la rata demostr la disminucin del peso y tamao de
los animales expuestos al etanol frente a los controles durante el perodo de
desarrollo prenatal, as como del tamao y peso del globo ocular durante la fase
final de la gestacin (en G21: 18 DE 4 vs 10 DE 2 mg). De forma similar, el
espesor de la retina prenatal fue significativamente menor en los animales
expuestos al txico (en G21:128 DE 23 vs 81 DE 14 m), as como el rea de la
seccin transversal del nervio ptico (en G21:50.000 DE 8.000 vs 31.000 DE
9.000 m2) fue significativamente inferior en el grupo expuesto al alcohol que en
el grupo control.
Por otra parte, la realizacin de las inmunodetecciones en las secciones
transversales de la retina tratadas con la tcnica del TUNEL y el anlisis
pormenorizado de las fotos de la retina en fetos de rata de 21 das confirma la
utilidad de la tcnica para estudiar los fenmenos de apoptosis en la retina en el
periodo prenatal, lo que puede ser tenido en cuenta tanto para los estudios del
desarrollo retiniano como para los trabajos relacionados con la neurotoxicologa
del desarrollo.
Los perfiles de clulas en proceso de apoptosis quedan reflejados por la
inmunotincin en verde. Los datos del experimento muestran aumento significativo
estadsticamente de las clulas apoptticas respecto al rea (m 2) en el grupo
expuesto al etanol, frente a los controles, como se puede observar en la figura 1y3.

Cuando se analizaron las inmunodetecciones en el microscopio confocal


correspondientes a las secciones transversales de la retina con la tcnica de
identificacin de perfiles mitticos se observa un descenso notable de los
procesos mitticos en el grupo expuesto al etanol, frente al grupo control, aunque
no llega a ser significativo estadsticamente conforme se puede observar en la
figura 2 y 4.

DISCUSIN
Las mujeres que ingieren bebidas alcohlicas de forma abusiva o presentan
dependencia de psicotropos durante el embarazo corren el riesgo de tener hijos
que muestren un patrn de malformaciones que pueden oscilar desde anomalas
menores (reconocidas mundialmente como defectos de recin nacido asociados al
abuso de alcohol y drogas drug and alcohol related birth defects) hasta
manifestaciones multiorgnicas severas, las cuales en su mxima expresin
constituyen el sndrome alcohlico fetal (1-4) y el sndrome fetal de la cocana y
metamfetamina (21,22). La frecuencia estimada de estos sndromes txicos es
similar en los pases industrializados, oscilando entre 1 a 2/1.000 nios nacidos
vivos para el alcohol (23,24). Sin embargo, la falta de reconocimiento de los signos
patognomnicos de estos sndromes, unido a la ausencia de trabajos
epidemiolgicos en nuestro pas, nos permite incidir en el tema, puesto que no

creemos que estos datos sean muy diferentes en el resto de


(25). Sin embargo, el desconocimiento de los cuadros tpicos
nios sean diagnosticados como posible sufrimiento fetal
congnita de origen desconocido y frecuentemente como
hiperactivos por educadores y psiclogos.

pases de Europa
hace que muchos
y/o malformacin
nios difciles o

Por un lado, teniendo en cuenta la especial vulnerabilidad del sistema visual


durante el desarrollo, la exposicin al txico durante la embriognesis y perodo
perinatal explicara per s la alteracin en los patrones de morfognesis ocular.
Durante las primeras 8 semanas tras la concepcin, todos los rganos y sistemas
vitales han comenzado a desarrollarse, de manera que la placa neural comienza a
formarse en la tercera semana y el macizo facial y el primordio ocular aparecen
alrededor de la cuarta semana. El desarrollo del embrin contina y existe otro
perodo vital para el desarrollo del SNC y estructuras relacionadas con l, y que
abarca desde el tercer trimestre de gestacin hasta el nacimiento y perodo
perinatal en el cual se desarrollan las clulas neuroglales y se produce la
mielinizacin axonal.
Basndonos en estos hechos, podramos especular que los efectos teratognicos
del alcohol y de otros txicos similares, comienzan probablemente durante el
perodo embrionario precoz y continan a travs de toda la gestacin, lo cual
hemos podido comprobar con el modelo experimental de SAF en la rata, donde
hemos constatado la disminucin en el peso y tamao del animal, as como la
disminucin en tamao y peso del globo ocular durante todo el desarrollo, en los
ojos expuestos pre y postnatalmente al etanol, resultados que coinciden con otros
previos de nuestro grupo de investigacin en neurotoxicologa del sistema visual
(15-22).
La formacin del globo ocular requiere una serie de hechos con la interaccin de
diversos tejidos. Los estadios iniciales implican una muerte celular extensa
asociada al propio proceso de morfognesis. Un poco ms tarde, la supresin de
la muerte celular programada es fundamental para la diferenciacin del tejido en el
adulto. Hay estudios que describen que la supresin de la apoptosis en clulas del
cristalino por factores de crecimiento (FGF) es uno de los principales componentes
de sus acciones durante el desarrollo del cristalino (26). La apoptosis inducida es
esencial en determinados momentos del desarrollo, por ejemplo durante la
reabsorcin de la vascularizacin primitiva. Sin embargo, la aparicin de mayor
densidad de perfiles apoptticos en la retina del animal expuesto al etanol frente al
control, demuestra que existe un aumento de la muerte celular programada
inducida por la exposicin al txico. Estos hechos, junto a la disminucin de los
perfiles mitticos, demuestran una inhibicin de la proliferacin celular junto al
aumento de la muerte de las clulas retinianas, lo cual coincidira con las
descripciones de un nervio ptico hipoplsico, similar al descrito por nosotros con
los parmetros morfolgicos y morfomtricos utilizados con el modelo
experimental que venimos utilizando para nuestros estudios (17-20).

En resumen, la induccin de apoptosis y la disminucin de la mitosis subsecuente


a la exposicin prenatal al alcohol en periodos crticos del desarrollo podra
explicar la reduccin del tamao de la retina y nervio ptico y la disminucin de la
densidad celular que acontece en la hipoplasia del nervio ptico (20),
patognomnica de los nios nacidos de madres alcohlicas.
Con este y otros trabajos similares demostramos que ningn perodo de la
gestacin escapa a la accin del alcohol, por lo que recomendamos que las
madres gestantes no consuman bebidas alcohlicas (tanto las de menor o mayor
contenido de alcohol) durante todo el periodo gestacional con el fin de
salvaguardar el desarrollo del sistema visual de sus hijos. A raz de nuestras
investigaciones nos permitiramos aconsejar a las autoridades sanitarias incluir las
advertencias pertinentes a este respecto en las bebidas alcohlicas y en los
refrescos con contenido alcohlico, tal y como ocurre en otros pases occidentales.
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Direccin para correspondencia: Sheila Pons Vzquez


Unidad Investigacin Oftalmolgica Santiago Grisola
Valencia - Espaa E-mail: pons_she@gva.es
Archivos Espaoles de Urologa (Ed. impresa)

versin impresa ISSN 0004-0614


Arch. Esp. Urol. v.60 n.9 Madrid nov. 2007
http://dx.doi.org/10.4321/S0004-06142007000900002

UROLOGA EXPERIMENTAL
E INVESTIGACIN

MUERTE EMBRIONARIA TEMPRANA: TIENE INFLUENCIA EL FACTOR


MASCULINO?48
EARLY EMBRYO DEATH: DOES THE MALE FACTOR PLAY A ROLE?
Aura Mara Gil Villa, Wlter Daro Cardona-Maya y ngela Patricia Cadavid Jaramillo.
Grupo Reproduccin. Sede de Investigacin Universitaria (SIU). Universidad de Antioquia.
Medelln. Colombia. Este trabajo fue financiado por la Universidad de Antioqua (CODI). WCW es
becario de COLCIENCIAS.

RESUMEN
Objetivo: Discutir el efecto que puede tener el factor masculino sobre la muerte
embrionaria temprana.
Mtodo: Se hace una revisin de literatura de diferentes componentes del
espermatozoide que pueden tener algn papel en la muerte embrionaria
temprana.
Resultados: Antes que ocurra la fusin entre la membrana plasmtica del
espermatozoide y la del oocito, ambos gametos deben sufrir un proceso de
maduracin que permita la fecundacin y el desarrollo embrionario exitosos. El
estudio de las parejas con muerte embrionaria temprana, usualmente se aborda
desde el factor femenino por la obvia relacin de la mujer con su producto en
desarrollo, pero no es ilgico suponer que una alteracin gentica o epigentica
en el espermatozoide, tenga un papel importante en estas prdidas por su
importancia en el desarrollo placentario y embrionario. El espermatozoide posee
algunas caractersticas como el empaquetamiento del ADN, la apoptosis y los
antioxidantes en el plasma seminal, que protegen la integridad estructural y
funcional de la clula germinal, permitiendo que el espermatozoide fecunde al
oocito y contribuya al desarrollo embrionario. Sin embargo, alteraciones
epigenticas como el remodelamiento de la cromatina y la consecuente
perturbacin de los eventos relacionados con la impronta genmica podran ser
causas de origen paterno que pueden tener alguna representacin en las muertes
embrionarias tempranas como tambin lo son la ausencia o alteracin del
centrosoma, el acortamiento telomrico y la ausencia de RNA espermtico.
Conclusiones: El conocimiento de la intervencin espermtica en el desarrollo
embrionario proporcionar bases para el entendimiento y el posible diagnstico y
tratamiento de diversas alteraciones reproductivas masculinas que puedan estar
ocasionando fallas en el desarrollo posterior del embrin.

Palabras clave:
embrionaria.

Oocito.

Espermatozoide.

Impronta.

Fecundacin.

Muerte

SUMMARY
Objective: To discuss the possible role of the male factor in early embryo death.
Method: A detailed bibliographic review has been put together to establish which
alterations in spermatozoa can be associated with early embryo death.
Results: Before the fusion between plasma membranes of the sperm and the
oocyte occurs, both germ cells must undergo a maturation process that allows
successful fertilization and embryo development. The study of couples with early
embryo loss is usually approached from the side of the woman due to the obvious
relationship that exists between the female and the developing embryo. However, it
is not illogical to suppose that a genetic or epigenetic alteration of the sperm could
have important consequences on these losses due to the necessary contribution of
the male gamete not only to embryonic but also to placental development. On the
other hand, spermatozoa have certain characteristics such as a highly compact
DNA, they undergo apoptosis and the seminal plasma contains antioxidants that
protect the structural and functional integrity of the germ cell. These factors assure
fertilization and embryo development. Nevertheless, epigenetic alterations of the
sperm such as altered chromatin packing, mistakes in imprinting, absence or
alteration of the centrosome, telomeric shortening and absence of sperm RNA,
could affect functions leading to early embryo loss.
Conclusions: Knowledge concerning sperm intervention previous to embryo
development will provide the basis for better understanding and for possible
diagnosis and treatment of diverse reproductive alterations in men that could
impede embryo development.
Key words: Oocyte. Spermatozoa. Imprinting. Fertilization. Embryo loss.
INTRODUCCIN
La prdida del producto de la gestacin es una complicacin que afecta del 15 al
20% de los embarazos clnicamente diagnosticados en mujeres en edad
reproductiva. Se han descrito diferentes causas de muerte embrionaria temprana
como genticas, anatmicas, endocrinas, inmunolgicas, microbiolgicas,
trombticas, sicolgicas e iatrognicas, pero persiste ms del 50% de causa
idioptica (1). El estudio de las parejas con muerte embrionaria temprana,
usualmente se aborda desde el factor femenino por la obvia relacin de la mujer
con su producto en desarrollo, pero poco se tienen en cuenta los factores paternos
como causa de prdida o alteracin del embarazo. En los protocolos de estudio de
las parejas con aborto recurrente, escasamente se consideran las alteraciones
cromosmicas, principalmente las translocaciones balanceadas, como posible

causa de origen paterno y para esto se ordena un cariotipo en clulas de sangre


perifrica.
Por su parte, el factor masculino, particularmente el estudio de los parmetros
seminales, s se estudia en las parejas que consultan por infertilidad y se calcula
que un 50% de las causas puede ser por alteraciones espermticas (2). Diversas
variaciones en las clulas espermticas podran conducir a fallas reproductivas en
el hombre que abarcan una amplia gama que va desde la incapacidad para
fecundar, hasta malformaciones que pueda presentar el recin nacido atribuibles a
factores paternos; por esto no es ilgico suponer que un dao en el gameto
masculino pueda tener un papel significativo en las prdidas tempranas.
Tradicionalmente, se ha considerado que el espermatozoide es slo el vehculo
que entrega el complemento gentico paterno al oocito (3, 4) pero tambin los
mecanismos epigenticos del espermatozoide contribuyen en la formacin de un
nuevo individuo al regular la expresin de genes, protenas y estructuras
necesarias para el desarrollo placentario y embrionario (5-7). A pesar que el
espermatozoide puede estar sometido a diferentes condiciones externas que
pueden alterar su integridad estructural y funcional durante su maduracin y
desplazamiento por ambos tractos reproductivos, tambin posee algunas
caractersticas que lo protegen de este dao como son empaquetamiento del
ADN, apoptosis y antioxidantes en el plasma seminal, las cuales permiten que el
espermatozoide fecunde al oocito y contribuya al desarrollo embrionario (8); sin
embargo, se ha sugerido que la alteracin en el remodelamiento de la cromatina
(9) y la consecuente perturbacin de los eventos relacionados con la impronta
genmica (7) podran ser causas de origen paterno que pueden tener algn papel
en las muertes embrionarias tempranas como tambin lo son la ausencia o
alteracin del centrosoma (10), el acortamiento telomrico (11) y la ausencia de
RNA espermtico (6).
Antes que ocurra la fusin del espermatozoide con la membrana plasmtica del
oocito, ambos gametos deben haber sufrido un proceso de maduracin que
permite la fecundacin y el desarrollo embrionario exitosos (12, 13). A continuacin
se describir con ms detalle estos eventos para poder entender con mayor
propiedad la importancia que tienen la integridad estructural y funcional no slo del
oocito sino tambin del espermatozoide en el desarrollo embrionario y cmo las
alteraciones en el gameto masculino podran llevar a la muerte embrionaria
temprana que es el objetivo principal de esta revisin.
Maduracin del oocito
En la maduracin del oocito, las vas de c-mos y MAP quinasa (protena activada
por mitgeno) regulan la formacin del huso meitico que se inicia en el centro y
migra, a lo largo del eje longitudinal, hacia la periferia del oocito, asegurando que

muy poco citoplasma se pierda cuando ocurra la primera divisin de reduccin


(14). Finalmente, la meiosis procede y el primer cuerpo polar es liberado (13).
El ciclo celular meitico de los oocitos en los mamferos (excepto los oocitos de los
caninos que se detienen en la profase de la meiosis I) se bloquea en la metafase II
de la meiosis despus de la ovulacin y el ciclo se reinicia despus de la
fecundacin, debido a la presencia del factor promotor de la maduracin activo
(MPF), el cual es un modulador del ciclo celular que est compuesto por las
subunidades p34cdc2 quinasa y ciclina B1 y, es responsable de inducir el
ensamble del huso meitico, la condensacin de la cromatina y la desintegracin
nuclear (12). Durante el bloqueo de la metafase II, el MPF permanece activo
debido a la presencia del factor citosttico CFS que est compuesto, al menos en
parte, por las protenas c-mos, MAP quinasa, p90Rsk y Emi 1, lo cual previene la
degradacin de la ciclina B1 (12, 15).
Maduracin del espermatozoide
Durante la maduracin, la mayor parte del citoplasma del espermatozoide es
eliminado pero se conservan las vesculas que darn lugar al acrosoma, algunas
mitocondrias, la cola y el ncleo, que es rodeado por una estructura del
citoesqueleto conocida como teca perinuclear, lo cual es fundamental para la
estabilizacin de las estructuras espermticas (16). As, el espermatozoide maduro
se compone de: la cabeza que contiene el ncleo con una cromatina altamente
condensada y el acrosoma que posee las enzimas necesarias que facilitan la
travesa del espermatozoide a travs de la zona pelcida; la pieza intermedia
donde se encuentran las mitocondrias, y la cola o la pieza principal que se origina
de los centrolos, produciendo el axonema (17, 18).
El eyaculado humano est compuesto por el plasma seminal y los
espermatozoides. Diferentes estructuras del tracto genital masculino aportan
componentes al plasma seminal: la vescula seminal contribuye con fructosa,
aminocidos, cido ctrico, fsforo, potasio y hormonas; la prstata aporta cido
ctrico, fosfatos cidos, calcio, sodio, zinc, potasio, albmina y enzimas y,
finalmente las secreciones de las glndulas uretrales ybulbouretrales le
proporcionan la contextura espesa, color claro y propiedad lubricante (19).
La integridad del ncleo del espermatozoide humano es fundamental para lograr la
fecundacin y el adecuado desarrollo embrionario (20, 21). La experimentacin en
animales ha proporcionado evidencia sobre las consecuencias desfavorables en el
desarrollo embrionario y en la presentacin de enfermedades en la descendencia
cuando el ADN presenta algn dao en la lnea germinal paterna (3). Aunque este
dao puede ocurrir en el testculo, en el epiddimo o despus de la eyaculacin,
los espermatozoides disponen de 3 mecanismos protectores: el empaquetamiento
del ADN, la apoptosis y los antioxidantes presentes en el plasma seminal para
proteger sus estructuras de dao (8).

Empaquetamiento del ADN


La espermatognesis es la diferenciacin de las clulas germinales desde
espermatogonias a espermatozoides; comienza en la pubertad y es un proceso
caracterizado por un estado premeitico llamado espermatogoniognesis, un
estado meitico y otro postmeitico o espermiognesis (22). El empaquetamiento
del ncleo espermtico ocurre durante la espermiognesis y es diferente al que
ocurre en las clulas somticas: la mayora de las histonas que son las protenas
encargadas del empaquetamiento de la cromatina en las clulas somticas, son
removidas y sustituidas con protenas de transicin (TP1 y TP2), las cuales son
reemplazadas posteriormente por protenas nucleares denominadas protaminas
(P1 y P2) (17, 23, 24). Adicionalmente, en este estado y en la maduracin
epididimal se forman puentes disulfuro entre estos residuos proteicos, haciendo al
ADN unas seis veces ms compacto, con un volumen 40 veces menor que el de
una clula somtica, lo que implica un espermatozoide transcripcionalmente
inactivo; este empaquetamiento le permite al ncleo espermtico tener una
estabilidad adicional que es necesaria para asegurar el transporte y la integridad
del material gentico masculino durante su desplazamiento en el tracto
reproductivo femenino (24, 25).
En los mamferos, el ncleo del espermatozoide completamente maduro es muy
resistente a tratamiento qumico y a estrs fsico, debido a las uniones cruzadas
por puentes disulfuro de las protaminas nucleares. Cuando los espermatozoides
se someten a congelacin y descongelacin, sin crioproteccin, se altera la
integridad de las membranas plasmticas y de otras estructuras, pero el ncleo
espermtico mantiene las propiedades esenciales para dar comienzo al desarrollo
embrionario, lo que se demuestra por inoculacin de estos espermatozoides
alterados en el oocito (26).
Mecanismo de la apoptosis
Una de las vas involucradas en la apoptosis de los espermatozoides es la de FasFas ligando; las clulas de Sertoli expresan Fas ligando y sealan la destruccin
de clulas germinales Fas positivas limitando, de esta manera, el tamao de la
poblacin celular germinal a un nmero que ellas pueden soportar (27, 28).
Los espermatozoides con fragmentacin en las cadenas de ADN son normalmente
eliminados durante la espermatognesis, como un mecanismo de control, pero
pueden persistir en el eyaculado debido a una falla en el proceso de apoptosis, lo
que podra resultar en una fecundacin con desarrollo embrionario anormal y
posterior muerte del embrin (29).
Antioxidantes en el plasma seminal

En androloga bsica se ha dado gran importancia a las especies reactivas del


oxgeno (ERO) como fuente de alteracin de la integridad de la membrana y del
ADN en el espermatozoide. Las ERO son agentes de oxidacin altamente
reactivas que actan sobre lpidos, amino cidos y carbohidratos y pueden causar
mutaciones en el ADN, debido a que las bases y las columnas fosfodister de este
ltimo son muy susceptibles a la peroxidacin (30). Las fuentes principales de las
ERO en los eyaculados humanos son los leucocitos y los espermatozoides
morfolgicamente anormales, o espermatozoides sometidos a condiciones de
isquemia o hipoxia cuando se presentan alteraciones vasculares en el tracto
reproductivo masculino (30, 31).
La membrana plasmtica del espermatozoide en los mamferos presenta una
composicin lipdica altamente especfica con un alto contenido de cidos grasos
poliinsaturados, plasmalgenos y esfingomielinas; esta estructura es responsable
de la flexibilidad y de la capacidad funcional de los espermatozoides pero
constituye el principal sustrato para la peroxidacin, lo cual puede dar lugar a
severos desrdenes funcionales en el espermatozoide (30, 31). De hecho, los
espermatozoides tienen niveles despreciables de antioxidantes debido
probablemente a su poco contenido de citoplasma (32), hacindolos incapaces de
reparar el dao inducido por las ERO ya que pierden los sistemas enzimticos
citoplasmticos que se requieren para cumplir con esta reparacin, y por este
motivo son nicos en su susceptibilidad a la ofensa oxidativa (24, 33).
Afortunadamente, en el plasma seminal existen antioxidantes tanto de sistemas
enzimticos como no enzimticos, entre los que se encuentran: glutatin,
superxido dismutasa, catalasa, glutatin peroxidasa, glutatin reductasa, atocofenol, -caroteno, ascorbato, urato, transferrina, lactoferrina, vitaminas E y C y
cidos mercaptricos como taurina e hipotaurina, que protegen al espermatozoide
frente a la ofensa oxidativa (17, 30, 31, 34).
La capacidad antioxidante del plasma seminal parece ser un buen indicador para
determinar la etiologa de la infertilidad masculina y potencialmente, la aparicin
de mutaciones en la lnea germinal a partir de espermatozoides con dao del ADN
(30). Incluso, el lavado de los espermatozoides y la subsiguiente remocin del
plasma seminal elimina el potencial protector suministrado por ste; esta situacin
puede agravarse si las clulas son lavadas y resuspendidas en soluciones
contaminadas con metales de transicin, que aumentan la produccin de las ERO
y la generacin de fracturas en el ADN (35).
En condiciones fisiolgicas, en el tracto reproductivo masculino se presenta un
balance entre la generacin de las ERO y los mecanismos antioxidantes del
plasma seminal y slo permanece la cantidad mnima de las ERO necesaria para
regular algunas funciones de los espermatozoides como la capacitacin
espermtica, la reaccin acrosomal y la fusin espermatozoide-oocito (36, 37). Sin
embargo, la produccin excesiva de las ERO, lo cual est relacionado con

anormalidades del tracto reproductivo masculino, puede alterar todas las


estrategias de defensa antioxidante del plasma seminal cuando stas exceden los
niveles crticos, causando un estado de desbalance oxidativo y la subsiguiente
lipoperoxidacin de la membrana plasmtica de los espermatozoides, como
tambin un incremento significativo en el dao del ADN, tales como
fraccionamiento de cadena sencilla y doble, modificacin de bases, produccin de
sitios libres de base, delecciones, cambios en el marco de lectura, uniones
cruzadas y rearreglos cromosmicos (34, 38-40).
En el ncleo del espermatozoide persiste algn nivel de reparacin del ADN, pero
las lesiones de cadena simple que finalmente permanezcan en el espermatozoide,
deben ser reparadas en el oocito fecundado y de esta manera no deberan ser
letales. Sin embargo, si el espermatozoide que fecunda tiene fracturas de tamao
significativo en cualquiera de las dos cadenas del ADN, puede ser difcil para el
oocito repararlo, conduciendo a posibles fallas en el desarrollo embrionario
preimplantatorio, interrupcin de la gestacin y un incremento en la morbilidad de
la descendencia (21, 30, 40).
Fusin espermatozoide-oocito
La fecundacin requiere de una secuencia coordinada de eventos entre el
espermatozoide y el oocito para formar un zigoto y posteriormente un nuevo
individuo. As, los procesos que debe sufrir el espermatozoide para poder fecundar
al oocito e iniciar el desarrollo son: capacitacin espermtica, unin especfica del
espermatozoide con el acrosoma intacto a la zona pelcida, reaccin acrosomal o
exocitosis celular del espermatozoide, paso a travs de la membrana extracelular
del oocito, penetracin al espacio perivitelino, fusin del espermatozoide con la
membrana plasmtica del oocito, y aporte de los componentes celulares
espermticos para el inicio de la divisin celular del zigoto (18, 41).
Despus de la fusin del espermatozoide a la membrana del oocito, la envoltura
nuclear espermtica se desintegra, la teca perinuclear que rodea el ncleo es
removida y la cromatina sufre un proceso de descondensacin. Esta ltima se
inicia en la regin posterior y progresa hasta la porcin anterior de la cabeza del
espermatozoide con la reduccin de las uniones disulfuro por la presencia de
glutation reducido en el citoplasma del oocito y la sustitucin de las protaminas por
histonas derivadas del mismo (42, 43).
La cola del espermatozoide tambin entra al oocito y las mitocondrias
espermticas se disocian de la pieza media pero permanecen juntas y en
agregados en el citoplasma del oocito (44); sin embargo sufren destruccin
mediada por proteasoma debido a que las protenas mitocondriales son marcadas
durante la espermatognesis con ubiquitina (45). De esta manera, las
mitocondrias paternas no persisten ms all del estado de preimplantacin
embrionaria y slo las de origen materno son heredadas (46).

En la mayora de los mamferos, excepto en los ratones, el centrolo espermtico


es el responsable de la organizacin del ster espermtico dentro del citoplasma
del oocito, una estructura de microtbulos que se requiere para la generacin de la
cadena microtubular que es importante en la migracin pronuclear (5). Finalmente,
la mayora de los elementos estructurales restantes de la cola espermtica
desaparecen rpidamente despus de la incorporacin en el oocito (44).
Activacin del oocito en los mamferos
Durante la fecundacin, la unin del espermatozoide a la membrana plasmtica
del oocito induce la liberacin de calcio intracelular en el oocito, lo cual interrumpe
el bloqueo en la metafase II de la meiosis, debido a que se pierde la actividad del
factor citosttico CFS, haciendo que el factor MPF se inactive y ocasione la
degradacin de la ciclina B1 y de c-mos mediada por el proteasoma; el anterior
evento ocurre simultneamente con la descondensacin de la cromatina
espermtica en el citoplasma del oocito (13, 47, 48).
El ciclo celular es controlado por un balance de las actividades quinasas y
fosfatasas que modulan la actividad de las protenas celulares y los cambios
morfolgicos observados durante la reanudacin meitica que incluyen rotacin
del huso metafsico (en algunas especies), entrada a la anafase y liberacin del
segundo cuerpo polar, lo cual hace que el genoma originado del gameto femenino
se convierta en haploide (13, 48).
En los mamferos, la concentracin de calcio intracelular oscila repetidamente por
un perodo que puede durar varias horas despus de la fusin espermatozoideoocito (49). Las elevaciones en el calcio intracelular causan la exocitosis de
grnulos que se localizan en la regin cortical del oocito debajo de la membrana
plasmtica, los cuales contienen enzimas que se liberan en el espacio perivitelino,
dando origen a modificaciones de la zona pelcida del oocito que previenen la
unin y la penetracin de espermatozoides adicionales a la misma (48).
Otra protena quinasa importante en la regulacin del ciclo celular meitico es la
MAP quinasa, la cual fosforila protenas cromosmicas importantes para mantener
a la cromatina en un estado condensado durante la transicin de meiosis I a
meiosis II y prevenir la formacin de la envoltura nuclear por la fosforilacin de las
lminas nucleares (50). Durante la activacin del oocito, la actividad de la MAP
quinasa comienza a disminuir despus de la reduccin de la actividad del factor
MPF y esta disminucin se requiere antes que ocurra la formacin de la envoltura
pronuclear (50).
Los principales cambios en el patrn de sntesis de protenas ocurren durante la
activacin del oocito y se originan en parte por el reclutamiento de los mARN
maternos que estn presentes en el citoplasma del oocito pero que no traducen

antes de la activacin del mismo y por otra parte, por las modificaciones
postraduccionales de protenas existentes (48).
Formacin pronuclear y primera divisin mittica del embrin
Varias horas despus de la fusin del espermatozoide al oocito cesan las
oscilaciones de calcio, el proncleo femenino comienza a formarse y la cabeza
espermtica se descondensa formando el proncleo masculino (13). Debido a que
el ster crece desde el centrmero masculino para capturar y arrastrar juntos a los
proncleos masculino y femenino, el proncleo masculino rota sobre el femenino
para alinear la cromatina en el huso que se formar entre ambos proncleos, lo
cual asegurar que todos los cromosomas estn sobre el huso para la siguiente
divisin mittica (13).
Despus del alineamiento de los proncleos, las membranas nucleares se
desintegran y el huso rota de manera perpendicular al eje definido por el segundo
cuerpo polar, donde la posicin de este ltimo, define el plano de divisin o el eje
polar del embrin murino (48, 51); la cromatina se condensa en los cromosomas
que se organizan sobre un huso mittico comn para dar comienzo a la primera
divisin mittica, produciendo un embrin de dos clulas (12, 13, 48). Finalmente,
ocurre un proceso denominado activacin gnica del cigoto, que comienza con la
transcripcin y la traduccin de protenas codificadas por el genoma embrionario
recin formado en el estado de una clula en los murinos y ms adelante, durante
el desarrollo embrionario preimplantatorio, en los humanos (48).
Es posible que muchos de los eventos anteriormente mencionados no se lleven a
cabo adecuadamente cuando se presentan alteraciones epigenticas en el
espermatozoide. Sobre esta base, a continuacin se describir la influencia que
podra tener el gameto masculino en la muerte embrionaria temprana:
Alteracin en el remodelamiento de la cromatina
En la compactacin subptima de la cromatina espermtica, se han encontrado
proporciones alteradas de las protaminas, completa ausencia de las mismas (52) o
inapropiada formacin de las uniones disulfuro debido a una inadecuada oxidacin
de tioles en estos residuos proteicos y por lo tanto, durante el trnsito epididimal
de los espermatozoides, el ADN sera ms vulnerable al dao (53).
En la espermiognesis, las P1 sufren modificaciones postraduccionales limitadas y
las P2 son el resultado de un procesamiento proteoltico de un precursor ms
grande (54). La haploinsuficiencia causada por la alteracin de un alelo de las P1
o P2 produce una cantidad reducida de la protena respectiva, procesamiento
anormal de la P2 y previene la transmisin gentica del alelo mutante y del
silvestre (53). El uso de espermatozoides deficientes para la P2 en reproduccin
asistida mediante la inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides 1.062 (ICSI)

a oocitos murinos en metafase II, mostr que la mayora de los oocitos se


reactivaron, pero slo unos pocos fueron capaces de desarrollarse hasta el
estado de blastocisto (9). De acuerdo a estos resultados, la P2 podra ser
esencial para el mantenimiento de la integridad de la cromatina del
espermatozoide y como consecuencia del desarrollo embrionario temprano.
De otro lado, los ratones nulos para los genes que codifican las protenas de
transicin, TP1 (55) o TP2 (56) son infrtiles con un procesamiento anormal de la
P2 y una condensacin nuclear insuficiente. Shirley y colaboradores, observaron
que la tasa de fecundacin fue tres veces menor comparada con los ratones
silvestres y que pocos embriones preimplantados se desarrollaron hasta el estado
de mrula-blastocisto (57).
Errores en la impronta
El mecanismo de la impronta reside en la modificacin epigentica diferencial de
secuencias que regulan la expresin de genes especficos en el espermatozoide y
en el oocito para originar una sola copia heredada del gen improntado para su
expresin en el embrin. Las copias parentales de las regiones improntadas
difieren con respecto a la metilacin del ADN, la modificacin de las histonas y
como consecuencia en la expresin gnica. Es decir, para los genes improntados
paternalmente, el alelo paterno es epigenticamente modificado para prevenir la
transcripcin, asegurando que el embrin tenga slo una expresin monoallica
de la copia heredada de la madre; lo opuesto es lo que sucede con los genes
improntados maternalmente, cuando se da slo la copia heredada del padre (58).
La impronta genmica (al menos la metilacin del ADN) se establece durante la
gametognesis. Despus de la fecundacin, durante el desarrollo embrionario
temprano, las improntas parentales se borran en las clulas germinales
primordiales y se reponen durante la gametognesis masculina y femenina (59).
El genoma paterno en los murinos es significativa y activamente demetilado a las
6-8 horas despus de la fecundacin, antes del comienzo de la replicacin del
ADN, mientras que el genoma materno es demetilado despus de varias
divisiones celulares (60). Esta activa demetilacin del genoma paterno puede estar
asociada con el remodelamiento epigentico de la cromatina del espermatozoide
para establecer programas del desarrollo paterno-especficos durante la
embriognesis temprana (60).
El hecho que genes particulares sean diferencialmente expresados, de acuerdo a
su origen parental, significa que durante el desarrollo, los genomas parentales no
son funcionalmente equivalentes (61) y por consiguiente, los errores en la
impronta pueden originar un desarrollo anormal, muerte embrionaria o fetal o
enfermedades en la descendencia despus del nacimiento (62). Cerca de 100
genes en los gametos masculino y femenino de mamferos, podran estar

improntados apropiadamente de manera parental-especfica para permitir un


desarrollo embrionario normal. As, algunos de los genes expresados del padre
como PLAGL1 (gen adenoma pleiomrfico tipo 1), PEG1 /MEST (gen 1 expresado
paternalmente/ transcripto especfico de mesodermo), IGF2 (factor insulinoide de
crecimiento tipo II) y PEG3 (gen 3 expresado paternalmente), mejoran el
crecimiento fetal y placentario, mientras que los genes expresados de la madre
como IGF2R (receptor del factor insulinoide de crecimiento tipo II), GRAB10
(protena de unin a la microglobulina alfa 2 relacionada con protena G), H19 (gen
H19), CDKN1C (inhibidor de quinasa dependiente de ciclina 1C), TSSC3
(candidato del fragmento gnico 4 transferible subcromosmico de supresin de
tumor), MASH2 (factor de transcripcin bsica hlice-asa-hlice) y MEG3 (gen 3
expresado maternalmente), lo restringen. De esta forma por ejemplo, el bajo peso
fetal podra ser causado por la prdida de la expresin paterna de un gen
promotor del crecimiento o por la activacin alterada de un alelo paterno de un gen
que restringe el crecimiento y que est normalmente silenciado (62).
Uno de los mecanismos mejor explicado, por el cual el dao del ADN derivado del
padre puede llevar a la prdida del embarazo podra involucrar la alteracin
especfica de genes que son esenciales para el desarrollo normal de la unidad
feto-placentaria (58). El alelo paterno del gen H19, el cual est normalmente
metilado y silenciado en la lnea germinal paterna, es frecuentemente hipometilado
en los casos de infertilidad masculina (7).
La consecuencia anticipada de este evento de hipometilacin es la transcripcin
activa del gen H19 y, como consecuencia, la inactivacin del gen materno IGF2
recprocamente improntado. Debido a que IGF2 est ntimamente involucrado en
la placentacin, se esperara que su inactivacin altere el desarrollo embrionario
(7). Lo anterior se explica ya que en clulas germinales normales, el sitio de unin
a CTCF (protena dedo de zinc que se une a varios sitios en la regin de control
improntada sin metilar y es esencial para potenciar el bloqueo) est sin metilar en
el cromosoma materno y la unin de CTCF a este sitio promueve la activacin del
gen H19 y el silenciamiento del gen IGF2. Por el contrario, en el cromosoma
paterno, el sitio de unin a CTCF est metilado, es incapaz de unirse con CTCF y
como consecuencia, IGF2 es activado y H19 es silenciado. De esta manera,
podra predecirse que la transmisin de un alelo paterno sin metilar conduce a la
presencia de dos alelos de IGF2 inactivos y dos alelos de H19 activos en el
embrin y, por lo tanto, retardo en su desarrollo (63).
Para demostrar si una incorrecta impronta genmica paterna podra estar
asociada con la espermatognesis alterada, Marques y colaboradores extrajeron
ADN espermtico de 123 muestras de semen de individuos normozoosprmicos y
de individuos oligozoosprmicos sometidos a anlisis seminal por diagnstico de
infertilidad. Algunos hombres oligozoosprmicos tuvieron espermatozoides con
metilacin defectuosa del sitio de unin a CTCF entre los genes IGF2 y H19 (7).

Ausencia o alteracin del centrosoma espermtico


Como anteriormente se mencion, en muchas especies, el centrosoma proximal
llega a ser el centro del ster espermtico que dirige al proncleo masculino y
femenino al centro del cigoto (64). Actualmente, es claro que la formacin del huso
mittico en la primera divisin embrionaria en humanos, depende de los centros
de generacin de microtbulos derivados del centrosoma del espermatozoide,
ubicado en la cola (10). En un estudio realizado por Moomjy y colaboradores,
usando ICSI, observaron que despus de inyectar slo la cabeza espermtica en
un oocito, se form un proncleo masculino pero las subsiguientes divisiones se
caracterizaron generalmente, por varios grados de mosaicismos como
consecuencia de una disyuncin cromosmica aberrante, sugiriendo que la
presencia de la cola o al menos su centrosoma es importante para el desarrollo
embrionario normal (10).
Los embriones de espermatozoides con centrosomas pobremente desarrollados,
daados o ausentes podran presentar niveles variables de desorganizacin. Esta
correlacin ha sido demostrada por Rawe y colaboradores en un reporte de caso
de un paciente con una forma severa de teratozoospermia caracterizada por una
adhesin defectuosa de la cabeza con la pieza media y espermatozoides
aceflicos, adems de inmovilidad total; adicionalmente, los espermatozoides del
paciente presentaron una morfologa centromrica alterada y una capacidad
reducida para formar steres espermticos. En el intento de fecundacin con ICSI,
el cigoto no progres ms all del estado pronuclear del desarrollo embrionario, lo
que sugiri un defecto de origen paterno ms que materno, ya que en humanos el
centrolo dentro del centrosoma cigtico naciente se deriva de los
espermatozoides. Cuando en paralelo se inyectaron espermatozoides de un
donante frtil, se observ un claro contraste con la obtencin de un alto porcentaje
de steres espermticos completamente desarrollados (65).
Por estas evidencias, los autores sugieren que el centrolo espermtico es
esencial para la fecundacin exitosa, mientras que slo las alteraciones en la cola
que impiden la movilidad espermtica no tienen un papel significativo en este
evento. Este hallazgo enfatiza a) la necesidad de una evaluacin morfolgica
cuidadosa de los espermatozoides para entender mejor la fisiologa de la
fecundacin normal y, eventualmente, trabajar en herramientas pronsticas en
reproduccin asistida y b) estudiar ms a fondo la composicin y el funcionamiento
del centrosoma espermtico para obtener ms informacin acerca de las posibles
causas o consecuencias de su anormalidad en el espermatozoide y en el
desarrollo del embrin.
Acortamiento telomrico
Se ha sugerido que slo los espermatozoides con un tamao telomrico suficiente
progresan a travs de la espermatognesis (66). En un estudio realizado por

Hermann y colaboradores, se encontr una concentracin espermtica


severamente reducida en la tercera generacin de ratones provenientes de
progenitores que carecan del componente de ARN de la telomerasa (66).
En contraste al estudio anterior, Liu y colaboradores, reportaron espermatocitos en
profase I de ratones nulos para la actividad de la telomerasa que posean
telmeros acortados y localizacin anormal, que probablemente estaban
contribuyendo al total de los espermatozoides maduros. Cuando los oocitos
silvestres se inseminaron con espermatozoides de estos ratones nulos para la
telomerasa se produjo disminucin en la fecundacin y en la formacin de
blastocistos, e incremento de fragmentacin y apoptosis embrionarias (11).
Los anteriores estudios (11, 66) proponen que aunque las clulas germinales en
mamferos con telmeros acortados son destruidas tempranamente en el
desarrollo, algunos espermatozoides completan la maduracin, lo cual sugiere que
el presunto punto de control est alterado en los espermatocitos, y los
espermatozoides maduros resultantes podran ser disfuncionales como resultado
del acortamiento telomrico.
Ausencia de RNA espermtico
Existe controversia acerca de la contribucin de los ARN espermticos al
desarrollo embrionario. En un estudio realizado por Ostermeier y colaboradores
evaluaron el papel de ciertos transcriptos espermticos tanto en la fecundacin
como en el desarrollo cigoto-embrionario, usando RT-PCR para determinar cul de
estos transcriptos estaba presente en los espermatozoides humanos pero no en el
oocito en metafase II sin fecundar. Encontraron que durante la fecundacin, el
mARN paterno es depositado en el oocito y que el espermatozoide maduro
contiene mARN que codifica protenas requeridas para la embriognesis temprana
que estn ausentes en el oocito sin fecundar, lo cual hace inferir que el oocito
fecundado podra usar estos transcriptos en la fase inicial del desarrollo
embrionario (6). Los autores identificaron seis candidatos: clusterina, AKAP4 y
Protamina-2, liberados en el proceso de la fecundacin; HSBP1 (CDH13) en
respuesta a estrs; FOXG1B y WNT5A, implicados en embriognesis y
morfognesis (6). FOXG1B es un miembro de los factores de transcripcin que
contiene un dominio forkhead importante en el desarrollo embrionario temprano
pero est restringido al cerebro fetal y a los testculos adultos (67). Los homlogos
de la familia de WNT5A de molculas de sealizacin protooncognica participan
en la diferenciacin celular que est asociada con la morfognesis (68). As,
ambos ARN paternos contribuiran al desarrollo embrionario.
As mismo, se ha descrito un conjunto de 68 secuencias que podran tener un
papel significativo en el silenciamiento gnico a travs de ARN de interferencia
paterno en el oocito fecundado (69). Los anlisis preliminares de estas 68
secuencias mostraron varios blancos potenciales para el mARN en el oocito como
DKK2, una protena en la va de sealizacin tipo wingless, la cual est activa en

el desarrollo embrionario. Lo anterior provee evidencia adicional que los


transcriptos de mARN paterno son benficos para la embriognesis y por lo tanto
son preservados, aunque tambin se ha reportado la presencia de transcriptos
paternos deletreos para el crecimiento embrionario (69).
CONCLUSIONES
Las contribuciones genticas del espermatozoide son importantes para la
embriognesis. De hecho, los estudios mencionados en esta revisin sugieren que
el dao del ADN en el espermatozoide que fecunda es un factor que influye en
cmo un embrin se desarrolla y en cmo el oocito trata de compensar este dao.
Sin embargo, no es claro cunto dao del ADN espermtico es suficiente para
comprometer el desarrollo embrionario, por lo que se requiere cuantificar el
deterioro de un espermatozoide individual e identificar un valor umbral de este
dao que permita un desarrollo normal, lo cual podra emplearse en tcnicas de
reproduccin asistida. Aunque se ha indicado una fuerte asociacin entre el
espermatozoide con dao del ADN y una alteracin en la embriognesis, la
relacin causa-efecto no se ha demostrado an. Hay que tener en cuenta que el
dao del ADN puede ser secundario a otras anormalidades en el espermatozoide
y que es poco probable que esta anomala sea slo el resultado de errores en el
rearreglo de la cromatina o del estrs ambiental.
Como medida preventiva se pudiera promover la reduccin del dao del ADN del
espermatozoide con el uso de antioxidantes en la dieta y una tcnica de seleccin
espermtica que permita la separacin de espermatozoides con niveles tolerables
de deterioro.
Se considera que la organizacin nuclear en las clulas somticas y germinales es
una forma de regulacin gnica-epigentica, aunque se requieren ms estudios
que se enfoquen en investigar el papel especfico de la compactacin del ADN
espermtico en el desarrollo embrionario. Por lo anterior, entre los temas de
investigacin que seran de gran inters estudiar estn:
a) Entender mejor cmo la estructura nucleoprotamina-nucleohistona del ncleo del
espermatozoide lleva la informacin epigentica y controla los eventos embrionarios
tempranos, tal vez identificando si se requiere la metilacin de copias gnicas paternoespecficas durante este estado en el desarrollo y si es as, cules podran ser los genes
implicados;
b) determinar si la reduccin global en la metilacin observada en algunos pacientes (7)
es un factor causal de embriognesis alterada o un signo de pobre espermatognesis que
no tiene ningn efecto directo sobre el desarrollo del embrin;
c) investigar la localizacin de otras regiones especficas del genoma como aquellas que
tienen tramos no codificantes de secuencias repetidas o genes improntados con respecto
a caractersticas especficas de la cromatina;

d) explorar los papeles potenciales de las protenas de transicin en la remocin o


degradacin de histonas, en la direccin de la incorporacin de protaminas, en la
interaccin con regiones cromosmicas especficas y en el reclutamiento de complejos.
Este conocimiento facilitara una luz sobre las consecuencias potenciales epigenticas de
la ausencia o la mutacin de una o ambas protenas de transicin (TP1 y TP2).

Con respecto al ARN espermtico, se ha encontrado que algunos transcriptos


especficos identificados en los espermatozoides se correlacionan con la calidad
espermtica presentada por el individuo, aunque falta identificar si la variacin en
el contenido de mARN est afectando directamente al espermatozoide maduro o
es un indicio de una espermatognesis anormal (70).
Sera interesante verificar si el espermatozoide que transmite patrones de mARN
alterados produce embriones con un potencial disminuido en el desarrollo y
demostrar si el mARN transmitido que codifica o interfiere, tiene actividad en el
embrin.
El tema desarrollado en esta revisin es importante para tratar de entender el
posible papel que tiene el factor masculino en las muertes embrionarias
tempranas, lo cual no se tiene en cuenta de una manera significativa por la
relacin existente entre la mujer y el embrin en desarrollo. Este conocimiento
proporcionara algunas bases para el tratamiento de diversas alteraciones
reproductivas presentadas por los hombres no slo implicadas con la infertilidad
sino tambin con las prdidas gestacionales, producidas tal vez, por dao del ADN
o alteraciones en la regulacin gnica-epigentica del espermatozoide
ocasionados por ofensa oxidativa, alteracin en el remodelamiento de la cromatina
o por cualquiera otra causa an no definida.
Finalmente, la informacin encontrada en la literatura y las nuevas investigaciones
ayudarn en el diagnstico de alteraciones espermticas y en la implementacin
de nuevas estrategias en el manejo de tcnicas de reproduccin asistida; sin
embargo, todava falta mucho por investigar acerca de las posibles causas de
origen paterno implicadas en la muerte embrionaria temprana. Ahora, el
compromiso radica en fortalecer este conocimiento y de esta manera, lograr un
mayor acercamiento en el entendimiento y posible tratamiento a esta situacin que
aqueja a una cantidad significativa de parejas en el mundo.
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Direccin para correspondencia:
Aura Mara Gil Villa
Sede de Investigacin Universitaria (SIU)
Universidad de Antioquia; Calle 62 # 52 - 59 Medelln. (Colombia).
reproduccion@medicina.udea.edu.co