MDULO V.

OBTENCIN DE MATERIAS PRIMAS PARA LA PRODUCCIN DE

MEDICAMENTOS
PRACTICA 4: RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Cruz Hernandez Erandi, Mendieta Gonzalez Marisela, Ramirez Ceja Karen Arlette,
Valtierra Gomez Nelly Elizabeth

INTRODUCCIN
Metabolitos Primarios:
Son
los
productos
qumicos
necesarios para la vida, resultantes
del metabolismo vital de todo ser
vivo, son: los carbohidratos, los
lpidos, las protenas y los cidos
nucleicos.
Metabolitos Secundarios:
Otros
compuestos
llamados
metabolitos
secundarios
son
subproductos de rutas metablicas
normales que ocurren en ciertas
especies, siendo particulares dentro
de un grupo taxonmico, estado de
vida o tejido presentando una
distribucin restringida dentro del
Reino Vegetal dando origen a la
quimiotaxonoma.
Su
ocurrencia
depende de condiciones externas
tales como ataques de patgenos,
predadores, cambios trmicos o
lumnicos, deficiencias nutricionales o
presencia de otros organismos intra o
interespecficos. El metabolismo
FENILPROPANOS

secundario es una caracterstica

fundamental de la especializacin, es
decir que el compuesto resultante,
puede no ser importante para la
clula pero s para el organismo
como un todo. Los metabolitos
secundarios pueden ser bioactivos,
pero no jugar un papel esencial en los
procesos fisiolgicos del organismo.
Algunos metabolitos secundarios son
residuos bioqumicos, es decir,
productos de actividad enzimtica de
substratos no apropiados o productos
de destoxificacin o desecho de
importancia para la supervivencia y la
buena condicin de los organismos.
Con
pocas
excepciones,
los
metabolitos
secundarios
pueden
clasificados dentro de cinco grupos,
de acuerdo con su base biosinttica:
fenilpropanos,
acetogeninas,
terpenoides, esteroides y alcaloides.

Son
sustancias
naturales
ampliamente distribuidas en los
vegetales caracterizadas por un anillo
aromtico unido a una cadena de 3
carbonos y derivados sintticamente

del cido shikimico, la cadena lateral

puede presentar varios estados de
oxidacin e insaturacin. El anillo
aromatico
generalmente
esta
sustituido en los carbonos 3,4 y 5
siendo estos sustituyentes grupos
hidroxilo o metoxilo principalmente.

ACETOGENINAS

combinacin de cidos grasos de

cadena larga (C33 o C34), con una
unidad de 2-ptopanol en el carbono 2
para formar una lactina.

Las acetogeninas de anonceas, son

sustancias cerosas que resultan de la

Las acetogeninas pueden ayudar en

la regeneracin celular ya que en
nuestro cuerpo las clulas se
regeneran a cada segundo. La
Graviola o guanbana es una planta
de la cual puede aprovecharse no

slo el fruto que contiene abundantes

nutrientes y vitaminas, sino tambin
las propiedades medicinales de sus
diferentes partes, sobre todo las
hojas.

TERPENOIDES

metabolismo del isopreno abarcan a

los terpenos, los carotenos, las
vitaminas, los esteroides, etc. La
biognesis de los terpenoides se
puede dividir en cuatro etapas
generales, que son:

Los terpenoides son a menudo

llamados isoprenoides teniendo en
cuenta que el isopreno es su
precursor biolgico. Presentan una
gran variedad estructural, derivan de
la fusin repetitiva de unidades
ramificadas de cinco carbonos
basadas en la estructura del
isopentenilo,
son
monmeros
considerados
como
unidades
isoprnicas y se clasifican por el
nmero de unidades de cinco
carbonos que contienen en mono,
sesqui, di, tri, tetraterpenos,. Los
productos
que
provienen
del

Etapa
1:
Sntesis
del
isopentenilpirofosfato (IPP): Va cido

mevalnico (MVA) o va no de cido

mevalnico o va de 1-desoxi-Dxilosa-5-fosfato (DOXP).

Etapa 2: Isomerizacin del IPP a

dimetilalilpirofosfato
(DMAPP),
adicin repetitiva de IPP y DMAPP.
Etapa 3: Elaboracin de molculas de
prenilpirofosfato.
Etapa 4: Modificaciones enzimticas
de los esqueletos.

ESTEROIDES

RECONOCIMIENTOS
METABOLITOS:

Los esteroides, son lpidos simples no

saponificables, en su mayora de
origen eucarionte, derivados del
ciclopentanoperhidrofenantreno.
Este grupo de compuestos presentan
variadas acciones fisiolgicas de gran
importancia de un sistema de anillos
fusionados que forman un esqueleto
comn a todos los compuestos
esteroidales.

DE

El reconocimiento de metabolitos
secundarios se realiza por medio de
pruebas fitoqumicas preliminares, las
cuales son una prueba qumica de
caracterizacin consistente en una
reaccin qumica que produce
alteracin rpida en la estructura
molecular de un compuesto, por
ejemplo, la modificacin de un grupo
funcional, la apertura de un sistema
anular, la formacin de un aducto o
un complejo, lo cual da por resultado
una manifestacin sensible como el

cambio de un color, la formacin de

un precipitado o el desprendimiento
de un gas, dndonos indicios de la
presencia o ausencia de un
metabolito secundario en particular.
Reconocimiento de Alcaloides:
Los alcaloides son sustancias bsicas
que contienen nitrgeno en un anillo
heterocclico, son derivados de
aminocidos, presentan distribucin
taxonmica limitada y se encuentran
en plantas superiores como sales de
un cido orgnico.

Reconocimiento de Flavonoides:
Los Flavonoides son compuestos
polifenlicos con quince tomos de
carbono, cuya estructura consta de 2

anillos de benceno unidos por una

cadena lineal de tres carbonos. El
esqueleto de los flavonoides se
representa por el sistema C6 C3
C6.

CATEQUINA

Reconocimiento de Cardiotnicos:
Una
aglicona
cardiotnica,
estructuralmente est constituida por
el sistema anular esteroidal (ciclo
pentano perhidrofenantreno) con los
grupos metilos C18 y C-19, un grupo
hidroxilo en el carbono 3 y un anillo
lactnico - insaturado de cuatro
carbonos unido al carbono 17 del
ncleo esteroidal.
Reconocimiento de Saponinas:
Las saponinas son un grupo de
glicsidos solubles en agua, que

tienen la propiedad de hemolizar la

sangre y disminuir la tensin
superficial del agua, formando
espuma abundante. Las saponinas
por hidrlisis se desdoblan en
carbohidratos y una aglicona llamada
sapogenina. La sapogenina puede
tener el sistema anular esteroidal o el
de un triterpeno pentacclico. Los
anillos E y F de la saponina
estereoidal conforman el llamado
sistema espirostanal. El en lace
glicosdico siempre se forma con el
oxgeno del carbono 3.

Reconocimiento de Cumarinas:
Las cumarinas son un grupo muy
amplio de principios activos fenlicos
y tienen en comn la estructura
qumica de 1 -benzopiran-2-ona. Se
caracterizan porque presentan

fluorescencia bajo la luz ultravioleta a

365 nm.

Reconocimiento de Taninos:
Los taninos son productos de
excrecin
de
muchas
plantas,
involucrados en mecanismos de
defensa de las mismas, contra
organismos parsitos. Se encuentran
ms comnmente en hojas, ramas y
debajo de la corteza. Qumicamente
los taninos son polmeros de

polifenoles, sustancias con alto peso

molecular (comprendido entre 500 a
3000), se clasifican en:
Taninos Hidrosolubles o Piroglicos:
Son steres fcilmente hidrolizables
formados por una molcula de azcar
(en general glucosa) unida a un
nmero variable de molculas de
cidos fenlicos (cido glico o su
dmero, el cido elgico). Son
comunes de observar en plantas
Dicotiledneas.
Taninos
no
Hidrosolubles
o
Condensados: Tienen una estructura
qumica similar a la de los
flavonoides. Por hidrlisis dan azcar
y cido elgico, algunos taninos
condensados son conocidos como
pro -antocianidinas porque por
hidrlisis
cida
producen
antocinidinas y leucoantocinidinas.

MATERIALES Y MTODOS
Reactivos y materiales necesarios

150 ml HCl al 5%
1 ml perxido de hidrgeno al
20%

50 ml Acetato de plomo al 4%
con cido actico al 0.5%
2 ml Urea 10M
gotas de FeCl 3 al 10%
2 ml de cido sulfrico al 50%
2 ml de solucin NaOH al 5%
con amoniaco al 2%

R. Dragendorff, Valser, Mayer

y Reineckato de amonio.
R. gelatina-sal
R. Kedde soluciones A y B
200 ml etanol
50 ml diclorometano
5 ml benceno

RECONOCIMIENTO
ALCALOIDES:

DE

Desmenuzar finamente en un
mortero, unos 10 g. de muestra
fresca y colocarlos en un erlenmeyer.
Aadir un volumen suficiente de HCl
al 5% para que toda la muestra est
en contacto con la solucin cida.
Calentar con agitacin al bao mara
durante unos 5 minutos. Enfriar.
Filtrar. Colocar en 4 tubos de ensayo
2 ml de filtrado cido fro. Aadir a
cada uno 2 gotas de los reactivos de
Dragendorff,
Mayer,
Valser
y
Reineckato de amonio. Si se observa
turbidez o precipitados en por lo
menos 3 tubos, se considera que la
muestra contiene alcaloides. Nota:
antes de realizar el ensayo con la
muestra biolgica, ensayar con un
estndar de quinina en solucin
cida.
RECONOCIMIENTO
FLAVONOIDES:

DE

Leucoantocianidinas y Cardiotnicos:
En un erlenmeyer colocar unos 10 g.
de
muestra
fresca
finamente
desmenuzada. Aadir un volumen
suficiente de alcohol etlico que cubra

2 ml anhdrido actico
cido sulfrico concentrado
cido clorhdrico concentrado
5 papeles de filtro
Limaduras de magnesio
Sulfato de sodio anhidro
Centrifuga 2000 RPM y 2 -4
tubos
Cuchillo.

toda la muestra y le confiera fluidez.

Calentar al bao mara durante unos
5 minutos, con agitacin constante.
Enfriar. Filtrar. Si hay presencia de
clorofilas, al filtrado aadirle un
volumen igual de solucin de acetato
de plomo al 4% que contenga cido
actico al 0.5 %, agitar, dejar reposar
15 minutos y filtrar. Con el filtrado
realizar ensayos de reconocimiento
de flavonoides, leucoantocianidinas y
cardiotnicos.
ENSAYO PARA FLAVONOIDES:
Colocar
varias
limaduras
de
magnesio en un tubo de ensayo.
Aadir unos 2 ml del filtrado y por la
pared del tubo, gota a gota dejar caer
varias gotas de HCl concentrado. La
aparicin de colores naranja, rosado,
rojo o violeta es prueba positiva para
la existencia de flavonoides en la
muestra. Nota: antes de realizar el
ensayo con la muestra biolgica,
ensayar con un estndar de rutina o
quercetina
en
solucin
acuo
-alcohlica.
ENSAYO
PARA
LEUCOANTOCIANIDINAS: Colocar
unos 2 ml del filtrado en un tubo de

ensayo. Aadir 1 ml de cido

clorhdrico concentrado. Calentar en
bao de agua hirviendo durante 15
minutos. La aparicin de coloraciones
rojas es prueba positiva de la
existencia de leucoantocianidinas en
la muestra.
ENSAYO PARA CARDIOTNICOS:
En un tubo de ensayo colocar 1 ml
de filtrado. Aadir 0.5 ml de Reactivo
de Kedde (mezclar 1 ml de solucin A
con 1 ml de solucin B para preparar
este reactivo antes de su uso). La
aparicin de coloraciones violetas o
prpuras es prueba positiva de la
existencia de cardiotnicos en la
muestra.
ENSAYO PARA SAPONINAS:
Desmenuzar con ayuda de un
mortero unos 10 g de muestra fresca,
con ayuda de unos pocos ml de agua.
Filtrar. Agitar en un tubo de ensayo
tapado, unos 4 ml de filtrado acuoso,
vigorosamente durante un minuto. La
formacin de una espuma abundante
y estable es prueba presuntiva de la
presencia de saponinas en la
muestra.
ENSAYO PARA TANINOS:
Desmenuzar con ayuda de un
mortero unos 10 g de muestra fresca,
con ayuda de unos pocos ml de agua.
Filtrar. Tomar 1 mL de filtrado acuoso
en un tubo de ensayo. Aadir 1 ml del
Reactivo Gelatina -Sal. Si se forma
un precipitado, centrifugar a 2000
RPM durante 5 minutos. Des echar el
sobrenadante.
Redisolver
el
precipitado en 2 mL de Urea 10M.
Aadir 2 -3 gotas de solucin de

cloruro frrico al 10%. La formacin

de precipitado al agregar el reactivo
de gelatina, y la aparicin de colores
o precipitados verdes, azules o
negros e s prueba positiva de la
presencia de taninos en la muestra.
ENSAYO PARA TRITERPENOIDES
Y/O ESTEROIDES:
Moler la muestra vegetal seca.
Agregar un volumen suficiente de
cloroformo o diclorometano y extraer
por agitacin. Filtrar. Si el filtrado es
turbio contiene humedad, secarlo
agregando sulfato de sodio anhidro y
filtrar. En un tubo de ensayo limpio y
completamente seco, colocar 1 ml de
filtrado orgnico. Aadir 1 ml de
anhdrido actico. Por la pared del
tubo y con mucha precaucin, dejar
resbalar 1-2 gotas de cido sulfrico
concentrado. La formacin de colores
azules, violetas, rojos o verdes es
prueba positiva de que la muestra
contiene
Esteroides
y/o
Triterpenoides.
ENSAYO PARA QUINONAS:
Ensayo directo: Colocar 5 g de
muestra fresca ( 1 g de muestra
seca y molida), en un sistema de
reflujo, agregar 25 ml de HCl 5%.
Reflujar 5 minutos. Dejar enfriar y
filtrar. Con el filtrado acuoso proceder
como se describe para el ensayo con
una fraccin acuosa.
RECONOCIMIENTO
ANTOCIANINAS

DE

En un erlenmeyer colocar unos 100 g.

de
muestra
fresca
finamente
desmenuzada. Aadir unos 200 ml de

agua. Calentar a ebullicin durante

unos 5 minutos. Filtrar.
Ensayo: En un tubo de ensayo
colocar 2 ml de filtrado. Aadir 1 ml
de NaOH diluido. Observar el color
formado. En otro tubo de ensayo
colocar otros 2 ml de filtrado. Aadir
unas 6 gotas de un cido mineral
diluido. Observar el color formado. Las antocianinas se reconocen por
producir diferentes color es a
diferentes pH.
RECONOCIEMIENTO
CUMARINAS

DE

En un tubo de ensayo grande colocar

1 g de material vegetal fresco y
macerado
y
agregar
cantidad

suficiente de etanol comercial que

cubra el material vegetal. Cubrir la
boca del tubo de ensayo con un papel
filtro blanco y sujetarlo con unas
pinzas para tubo de ensayo o con
una banda elstica. Agregarle unas
gotas de NaOH diluido en el papel
filtro que cubre la boca del tubo de
ensayo. Calentar hasta ebullicin el
tubo de ensayo por 5 minutos, enfriar
y retirar el papel filtro. Observar bajo
luz ultravioleta a 365 nm la aparicin
de una coloracin fluorescente que
puede ser: verde, amarilla, roja en el
papel filtro.
Nota: El papel filtro
normalmente
se
observa
azul
fluorescente bajo la luz ultravioleta de
365 nm.

RESULTADOS
Reconocimiento de alcaloides
Ensayo de Boldo
Se observ turbidez en los dos tubos
de ensayo que se prepararon con el
reactivo de Drandorff y Meyer

Imagen 2

Imagen 1

Reconocimiento de Flavonoides,
Leucoantocianidinas y Cardiotnicos
Ensayo con ptalos de rosa
a) Flavonoides; la presencia de
color rosa indico que la prueba
fue positiva y que hubo
presencia de flavonoides en
nuestra materia prima.
b) Leucoantocianidinas
se
present una ligera coloracin

roja lo que determin que la

prueba fue positiva.
c) Cardiotnicos hubo presencia
de coloracin purpura y la
prueba fue positiva.

Ensayo de pltano
Hubo presencia de coloracin, lo que
indico que la prueba fue positiva y la
muestra de pltano tenia metabolitos
de taninos.

Imagen 3

Ensayo de saponinas
Ensayo de penca de sbila
Se present espuma abundante de
color blanco y eso indico que hubo
presencia de saponinas en la muestra
de sbila.

Imagen 5

Imagen 6

Imagen 4

Ensayo
para
y/esteroides

Triterpenoides

Ensayo de olivo
Ensayo de Taninos

Se formaron colores azules, lo que

determin que la prueba es positiva

Imagen 8

Reconocimiento de Cumarinas
Ensayo de ptalos de rosas

Imagen 7

El resultado que se debi obtener era

una coloracin fluorescente de color
verde, amarilla o roja.

Reconocimiento de Antocianinas
Ensayo de uvas
El primer filtrado con el NaOH diluido,
presento un color caf claro, como se
observa en la imagen 8 (tubo
derecho).
El ensayo con el cido mineral diluido
tuvo, un color entre rojo-rosado.

Imagen 9

El ensayo nos indic que hubo

presencia de antocianinas en las
uvas.
ANLISIS DE RESULTADOS
Los alcaloides identificados del boldo,
presentaron turbidez en los tubos,
con los reactivos que haba
disponible en el laboratorio, que
fueron Dragendorff y Meyer. Lo que
permiti
identificar
que
haba

alcaloides.
Los
flavonoides
identificados de los ptalos de rosa,
fueron los leucoantocianidina y
cardiotnico, identificndose colores
rosa, rojo y purpura. La sbila
presento saponinas, y se obtuvo
espuma color blanco dando positivo
el ensayo. El ensayo de taninos fue

un poco tardado, debido a que no

haba centrifuga en el laboratorio, lo
que se tuvo que dejar en
sedimentacin para que despus se
decantara el sobrenadante y poder
continuar con el ensayo. Y el pltano
dio positivo en prueba de taninos ya
que hubo aparicin de color en el
tubo. El olivo mostro que tiene
presencia
de
esteroides
o
triterpenoides debido a su coloracin
azul. El ensayo de quinonas no se

llev a cabo debido a que no hubo

muestra.
Las
antocianinas
se
presentaron en el ensayo con uvas,
donde se pudo observar dos distintas
coloraciones que fue un rojo, rosado
y un caf claro indicando que hay un
pH distinto, por presencia de una
base y un cido. El reconocimiento de
cumarinas no pudo ser concluida, por
falta de tiempo y se dej a la mitad y
ya no se pudo observar el papel filtro
con la luz ultravioleta.

CONCLUSIN

esteroides, y antocianinas, de las

cuales en todas se obtuvo positivo en
el
reconocimiento,
finalmente
cumarinas, la cual no se concluy por
falta de tiempo y no se logr observar
con la luz ultravioleta. La prctica se
realiz correctamente y se obtuvieron
los resultados esperados.

El reconocimiento de metabolitos
secundarios es una prueba sencilla
aunque se lleva un poco de tiempo en
preparar las plantas de acuerdo a
cada reconocimiento, se realizaron
las
pruebas
para
reconocer
alcaloides, flavonoides, saponinas,
taninos,