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INFORME N°7: Técnicas de cultivo de microorganismos

:
 Características de crecimiento en medio de cultivo
 Aislamiento y recuento en placas
PROFESOR: Ramos Chaupín, Roberto Raúl
MESA: 5

INTEGRANTES:

- Aldon Pizarro, Belén
- Olortegui Pajuelo, Thalía
- Salas Chambi, Yuli Mónica
- Cabrera Montes, Pedro Luis

2014

I.

INTRODUCCIÓN:

Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para
que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas de
siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades del
microorganismo. Una condición básica de la siembra es que se realice bajo
condiciones rigurosas de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de
gérmenes del ambiente en el cultivo.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es
imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio; en este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas
sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios contienen un
producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero
no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de
cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar
algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian
de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan
catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan
gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado
Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro.
Cuando encontramos más de un tipo de microorganismo se llama entonces cultivo
mixto. El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se denomina
aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de
varias formas,
dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.
II.

OBJETIVOS:

Observar las características de crecimiento de los microorganismos al
trasplante en medios de cultivo líquido y sólido.

Separar colonias individuales a partir de una mezcla de microorganismos
utilizando técnicas de aislamiento.

III.

MARCO TEÓRICO

Un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios. caldo nutritivo.) o de un cultivo microbiano a otro. se denomina cultivo puro o axénico. etc. entonces si se quiere cultivar una especie de la muestra se debe realizar “técnicas de aislamientos” que permitan obtener cultivo axénicos o puros. si la realizamos de un cultivo a otro se denomina “subcultivo” o “repique”. aparición de película o sedimento en el tubo. La población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Se añade al tubo desde el fondo de la superficie de este. Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. etc. Así se observaran en las colonias su intensidad de enturbiamiento. Agar Mc Conkey. pus. una masa de células fácilmente reconocibles o visibles que recibe el nombre de “colonia”. mayormente se tiene una población mixta.). liquido o aire). también poder determinar un crecimiento móvil o no. etc.). cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. secreciones. ya sea caldo. a) Siembra en tubos por estrías simples: Se toma con asa de siembra previamente esterilizado por flameado una cantidad de muestra adecuada. Un cultivo puro o axénico es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo y que procede de una sola célula. En la toma de muestras de un medio (solido. cosméticos. en medio sólido. suelo. recibe el nombre de “siembra”. procedentes de muestras ambientales (agua. aire. medicamentos. realizando movimientos ascendentes en zig-zag hasta completar toda la superficie del . etc.El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos cultivables en medios de cultivo. Técnicas de siembra de medios de cultivo en tubos Se tiene siembra en medios de cultivo contenido en tubos. otros. puede ser inoculado e inmediatamente incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo. de análisis de control de calidad (alimentos.). Una vez que ha sido preparado un medio de cultivo (Agar Gelatina. agar inclinado. el crecimiento de esta origina. esta operación la podemos realizar a partir de muestras biológicas (orina. aguas. Por otro lado.

por ejemplo. b) Siembra en tubos por picadura: Consiste en introducir la aguja de Kölle en el medio de cultivo semisólidos como por ejemplo. la prueba de la ureasa. Este método es utilizado para conservar cepas durante largos periodos. como.medio. el medio de oxidación fermentación de Hugh-Leiffson. así como para la realización de ciertas bioquímicas. Técnicas de aislamiento .

Con la dilución esperada. donde se mezcla en los tubos la muestra y se diluyen hasta obtener la dilución deseada. que se homogeniza. 10 -3 y 10-4. por ejemplo. Incubar a temperatura precisa durante unas 24 horas y posteriormente recontar. PARTE EXPERIMENTAL: Ejercicio 1: Técnicas de cultivo de Microorganismos: Características de crecimiento en medio de cultivo.Un modo de estudiar un ecosistema microbiano consiste en aislar de él los microorganismos y estudiar sus propiedades en cultivos de laboratorio. Existen muchas variaciones de este método. A continuación se mencionan tres de ellas:  Aislamiento por agotamiento de superficie o estrías: Se tomará con el asa de siembra (previamente esterilizado por flameado) una cantidad adecuada de muestra problema depositando el inoculo en uno de los extremos superiores de la placa. posteriormente son vertidos en placa y se deja solidificar. Repetimos la operación anterior con el tercer tubo y así sucesivamente hasta obtener la dilución deseada. . IV. Hernández (2003) nos dice que se ha desarrollado una serie de técnicas microbiológicas para aislar microorganismo y obtener cultivos puros. a partir de aquí se realizaran movimientos en zig-zag de un extremo a otro de la placa no tomándose en ningún momento nuevo inoculo y no levantándose el asa hasta concluir la siembra de toda la placa. inocular en placas de cultivo una cantidad de inoculo exacta y extender con un asa ce Digrasky previamente estéril. Se adicionara una cantidad de muestra solida o liquida en los tubos sabiendo la cantidad de muestra o inoculo que se añade en el tubo inicial. Una de ellas es hacerlo en medio de cultivo con agar.  Aislamiento por diluciones: Se dispondrá de una serie de tubos con medio de cultivo específico o agua estéril según los casos. Se agitara hasta homogenización. El aislamiento es importante porque se obtienen cultivos para estudios experimentales en el laboratorio y para las aplicaciones en los campos de la biotecnología y la microbiología industrial y ambiental (Madigan. 2009). Con pipeta estéril se tomara una cantidad específica o exacta y se adicionara al segundo tubo.

y con los mismos cuidados anteriores introduzca el asa en el líquido para dejar el inóculo. 2. 4. Asa y aguja de Kölle Mechero Tubos con agar nutritivo inclinado Tubos con agar nutritivo vertical Tubos con caldo nutritivo PROCEDIMIENTO: 1. Se tomó el tubo con agar inclinado y realizamos la siembra depositando el inóculo a lo largo de una sola línea descrita desde la base de la inclinación hasta el extremo. Flamee la boca del tubo antes de volver a taparlo. Se tomó el tubo con agar vertical y realizamos la siembra por picadura profunda del medio. 8. se evaluó el crecimiento y anotamos sus resultados. pero usando esta vez aguja de Kölle. Se tomó el tubo con el cultivo de 18 horas. se retiró el tapón. Ejercicio 2: técnicas de cultivo de microorganismos: Aislamiento y recuento en placas MATERIALES: . 5. 7. usando nuevamente aguja de Kölle. 3. 6. Se rotuló los tubos sembrados y se mandó a incubar a 37°C por 24 horas. Cuando se cumplió el tiempo de incubación. Se repitió el procedimiento 1 para obtener inóculo. Se tomó el tubo con caldo nutritivo. Se esterilizó el asa de Kölle por flameo a la llama. flameando la boca del tubo al mechero y se obtuvo una pequeña porción del cultivo con ayuda del asa de Kölle.MATERIALES:       Cultivo de microorganismos de 18 horas. Homogenizando la mezcla girando el tubo entre las palmas de la mano. 9. Se repitió el procedimiento 1 para obtener más inóculo.

4.      Tubos de caldo conteniendo una mezcla de microorganismos Tubos con 12 ml de agar nutritivo licuado y mantenido a 50 °C Placas Petri estériles Placas con agar Manitol Placas con agar Mac Conkey Asa . Se observaron el desarrollo de colonias individuales y describimos sus características de forma. Esterilizamos el asa a la llama . consistencia. Se tomó la placa con agar Manitol con la mano izquierda y con ayuda de los dedos pulgar e índice levante hacia un lado la tapa. Con la aguja cargada de inóculo. Cierre la placa. 5. No descubrimos por completo la placa. Diferenciamos las características de las colonias desarrolladas en el medio selectivo-diferencial. se retiró el inóculo. elevación. Se mandaron las placas en incubación a 37°C por 24 horas. procurando trazar una última estría sobre toda la superficie del medio. 6. B) Aislamiento por diluciones 1. Tomamos un primer tubo de agar licuado y mantenido a 50 °C y transfiriendo asépticamente el inóculo. Se esterilizó el asa a la llama nuevamente. así se procuró evitar mayor contaminación. 2. Se repitieron los pasos 2 y 3 para la placa con agar Mac Conkey. aguja de Kölle PROCEDIMIENTO: A) Aislamiento por estrías 1. bordes. se hizo estrías sobre toda la superficie del medio. procurando trazar una última estría en un espacio libre. procurando que la parte expuesta se encuentre bajo la influencia del mechero. etc. Se tomó el tubo de caldo conteniendo la mezcla de microorganismos y con ayuda del asa de Kölle retirando inóculo. 2. Se tomó el tubo de caldo que contiene la mezcla de microorganismos y con ayuda de la aguja de Kölle previamente esterilizada a la llama. 3.

Haga un recuento de colonias. RESULTADOS: Muestra: Staphylococcus sp. Con el tubo cerrado mezcle el inóculo con el medio. 5. del mechero. si el estimado no es inferior a 30 ni superior a 300. antes de ser transferido a la placa que le correspondía. Incubar las placas a 37 °C por 24 horas. Repetir la operación anterior para obtener una mezcla homogénea. V. de la segunda disolución. a Crecimiento en estrías sobre agar inclinado : Cantidad: Ninguna Distribución Ninguna de la superficie: Forma de crecimiento: Ninguna Consistencia Ninguna b del crecimiento: Pigmentación: Ninguna Crecimiento en agar vertical por picadura profunda: . Identificar cada dilución. sin embargo. 4. Describa las características diferenciales de las colonias observadas. La idea era transferir una asada del agar mezclado con el inóculo hacia un segundo tubo de agar licuado. solo tuvimos resultados de la primera incubación porque se solidificó el agar licuado. 6.3. Verter el contenido de cada tubo por separado en dos placas Petri estériles y rótelas lentamente para distribuir el medio de manera uniforme. haciéndolo girar entre las palmas de las manos. Examinar el crecimiento de las colonias en las placas.

c Crecimiento en caldo nutritivo: Cantidad: Ninguna Apariencia o tipo: Ninguna Técnicas de Aislamiento y recuento: .línea la Crecimiento: Limitada a la de inoculación o picadura y en superficie.

a) Aislamiento por estrías: Se observó un crecimiento de colonias. Borde: entera Forma: circular Se observó crecimiento de colonias Borde: entera Forma: puntiforme b) Aislamiento por dilución: .

 De acuerdo a ECOLOGIA. VI. ya que estos se desarrollaron muy bien tanto en la superficie del medio de cultivo como en la profundidad. Sin embargo no se encontró ningún crecimiento bacteriano de Staphylococcus sp. equinulado.UNALM.Se observaron pequeñas colonias (de menor diámetro) y muy unidas entre sí. DISCUSION: A) Caldo nutritivo  El crecimiento de las bacterias en medios líquidos se hace con el objetivo de observar la respuesta que tienen las bacterias con respecto al oxígeno. debido por la gran cantidad de bacterias depositadas en el agar licuado. se manifiesta por la aparición de turbidez o sedimento. B) Agar inclinado  Según la guía de laboratorio Microbiología (2000) las formas que se presentan son las siguientes arborescente. velo en la superficie del medio y olor característico. no verás muchos tubos .  Después de haber sembrado los microorganismos en agar vertical se confirmó que los géneros que formaban parte de la mezcla de bacterias son anaerobios facultativos. Sin embargo no se encontró ningún crecimiento bacteriano de Staphylococcus sp. rizoide y filiforme. granulado. a menos que tengas un cultivo fresco de 24 horas directo de la incubadora. C) Agar vertical En los resultados de en agar vertical el crecimiento fue limitado a la línea de inoculación o picadura y en la superficie.

es por ello la coloración amarilla que presento. aerobios y anaerobios facultativos.con turbidez. por ello la técnica más utilizada en los laboratorios de microbiología que permite que cada bacteria viable (viva) sea aislada en la superficie del medio sólido es esta. De esta manera se desarrollará hasta formar un cúmulo de bacteria. para su posterior investigación. aportan los nutrientes necesarios para . Este fue uno de los posibles causantes de la variación en los resultados con las discusiones pues. Después de esto se formará un anillo o una película en la superficie del tubo.). ya que en el medio de cultivo. Al pasar el tiempo observara si se forma en los tubos el fenómeno de precipitación.originando la proliferación de bacterias osmoresistentes.5%). Una vez completo este paso. dando golpes. debido a las bacterias tienden a depositarse cuando se refrigeran por varios días. también se observa en las colonias eran pequeñas y de color amarillo. mezcla las bacterias agitando.  Se utilizó el agar Mac Conkey para el aislamiento de Gram negativas de fácil desarrollo. Rodríguez (2007) menciona que el agar manitol es un medio de cultivo altamente selectivo pues al contener cloruro de sodio NaCl (7. Aislamiento y recuento de placas A) Por estrías o agotamiento en superficie:  Para esta técnica se usa una mezcla de bacterias (E. y la presencia de manitol evidencia la fermentación que hubo. hay un mayor crecimiento microbiano en el agar Manitol. contabilizándose como unidades formadoras de colonias. según Gamazo (2005) los microorganismos se encuentran en comunidades complejas en la naturaleza. al ser un cultivo viejo como se explicó no se podría apreciar muy bien las características propias de la bacteria.coli. como consecuencia solo creció las cepas de género Staphylococcus sp. y Bacillus sp. que se hace visible como una colonia aislada. o una apariencia de hilo dentro del caldo. pues son las únicas que cumplen estas dos condiciones. Una vez mezclado. Staphylococcus sp. floculación. aumenta la presión osmótica . rodando el tubo en la palma de tu mano. García (1994). podrá observar turbidez. las peptonas.  En nuestros resultados se observa que en las placas Petri.

En la primera dilución las colonias eran pequeñas y estaban muy juntas lo cual se hacía difícil de contar. ya que cada bacteria da lugar a una colonia diferente. y luego se cuenta el número de colonias que se han desarrollado (recuento viable).el desarrollo bacteriano y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable (Food and Drug Administration. hay crecimiento microbiano en el agar Mac Conkey. Este agar es de tipo selectivo debido a la mezcla de sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de gran parte de flora Gram positivas. según De la Rosa (2003). . 1995)  Se observa que en las placas Petri. 1995)  En el agar Mac Conkey las poblaciones eran grandes y de color violeta debido a que eran Gram negativas. para que el aislamiento sea exitoso y para evitar posibles contaminaciones externas en nuestro medio de cultivo. (Food and Drug Administration. Es necesario trabajar con las suficientes medidas de asepsia y esterilidad. para llevar a cabo la preparación de los medios de cultivo. porque de estos dependen el crecimiento de los distintos microorganismos. Esta técnica sirve para diferenciar que tipo de microrganismos estamos trabajando y mantenerlo fresco.   CONCLUSIONES: Es importante tener bien claro el procedimiento. puede ser en un determinado volumen o determinando el número de bacterias vivas existente. VII. se podía contar eran 12 colonias. se quiere hacer el recuento de bacterias para determinar el número de bacterias existentes en una muestra o cultivo. B) Por diluciones:  En este caso. en la secunda dilución eran pocas colonias y de aspecto brilloso. En cambio en el agar Manitol eran varias colonias muy pequeñas y de color amarillo y con mal olor debido a que había fermentado el manitol.

3 ¿Qué factores influenciarán en la abundancia de crecimiento en caldo. de este modo nos permite visualizar de manera objetiva las colonias. CUESTIONARIO: Ejercicio n° 1 1 ¿Por qué algunos microorganismos desarrollan en caldo un característico crecimiento tipo célula? ¿Qué factores sustanciales podrían alterar la formación de una película superficial? Presentan este tipo de crecimiento porque es un medio de cultivo líquido. si son aerobias facultativas en el medio y si son anaerobias se sedimentarán en el fondo. El cultivo en caldo nutritivo permite observar el crecimiento de la cepa en presencia o ausencia de oxígeno. mediante la estriación que poco a poco dará lugar a colonias formadas por organismos únicos que se van desarrollando en el Agar. por eso se usa la aguja de Kölle y no el asa. Solo se pica el agar con un movimiento uniforme y recto. 2 Cuando utiliza tubos de agar inclinado para el estudio de las características de crecimiento es preferible inocular con aguja de Kölle y no con asa ¿Por qué? Es preferible que el instrumento de inoculación sea retirado a lo largo del mismo camino que se usó para atravesar inicialmente el medio. es mediante el aislamiento por estrías. las bacterias según su forma de crecimiento invadirán todo el caldo si es posible. El agar Manitol es un medio de cultivo selectivo y diferenciado para las cepas de genero Staphylococcus y agar Mc Conkey para los E. Mediante las técnicas de aislamiento se pueden separar colonias individuales partiendo de una mezcla de microorganismos como se realizó en la práctica.     Con la práctica se demuestra que uno de los métodos de cultivos de organismo puros más sencillos de usar y aun así muy efectivo. tal como se puede observar en la placa con agar Mc Conkey. El factor que podría alterar la formación de la película es el oxígeno. VIII. ya que si son bacterias aerobias tendrán la película en la superficie. El medio de cultivo sólido permite una selección y diferenciación entre el crecimiento de las bacterias presentes en la mezcla. coli. agar inclinado y agar vertical? .

En cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH. dependiendo del rango de pH del medio. dependiendo del tipo de respiración que presenta el microorganismo de la muestra. sembrando la muestra en un medio que contenga determinado nutriente. El crecimiento óptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que la mayoría de las veces están relacionadas con la de su hábitat natural. el potencial de óxido reducción. Con este mismo propósito durante la incubación se deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismo en estudio. por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecerá el crecimiento del microorganismo de interés y la obtención del cultivo. presenta un menor número de colonias aisladas. En el caso de aislamiento por diluciones. lo que facilita recogerla y sembrarla en un medio adecuado para su desarrollo y posterior identificación. o regulando los niveles de oxígeno. 3. al que sólo responde este tipo de microorganismo. Plantee una . una de ellas es el pH. 2. ya que aún cuando la mayoría de los microorganismos crecen mejor en pH neutro. ¿Qué factores limitan el tamaño de las colonias en una placa de cultivo? Existen diversos factores que limitan el tamaño de las colonias en un placa de cultivo. podría hacerse. La comprobación de que las cepas obtenidas pertenecen a las colonias aisladas. algunos requieren de pH alcalino o ácido. el contenido de agua. ¿Qué procedimiento seguiría a continuación del desarrollo en estos ejercicios para obtener el cultivo puro de cada cepa contenida en la muestra? ¿Cómo podríamos comprobar que estas cepas obtenidas finalmente corresponden a las colonias aisladas? Sería tomar muestras de las colonias aisladas que deben formarse al final de las estrías y ponerlas en medios de cultivo para su desarrollo y posterior identificación. Suponga que recibe una muestra de leche en polvo y se le pide determinar el número total de colonias por gramo. el contenido nutricional presente en el medio cultivo. influenciar en la forma y tamaño de la colonia. Ejercicio n° 2: 1. debe tomarse la muestra de la placa que luego de varias diluciones. los constituyentes antimicrobiales y las estructuras biológicas.

en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo. pues fue la tercera dilución. ¿En qué consiste la técnica del número más probable y qué usos tiene? El método del número más probable (NMP). se examinan los tubos. puede emplearse para determinar la contaminación del agua potable. De la mezcla. se realiza el conteo de las colonias en la placa que haya menor número de éstas y el resultado se multiplica por 10. se pondrán turbios. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. se transfiere 1 mL a otro tubo. se vierte 1 mL de cada tubo en tres placas Petri y se procede a incubarlas a 30 °C por 24 horas. 1 mL de esta solución y se le transfiere a otro tubo con 9 mL de solución salina. El NMP requiere la realización de una serie de diluciones seriadas al décimo de la muestra de cultivo. Tomamos una muestra de un gramo de leche en polvo y la diluimos en aproximadamente 10 mL de medio de cultivo. aunque cinco tubos por dilución se consideran como una relación apropiada entre la precisión y la economía. También se usa para determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido determinado. La precisión del número más probable aumenta con el número de tubos que se usan. 4. se procede a homogenizar y se toma finalmente. Posteriormente. Por ejemplo. El método del NMP se utiliza para contar microorganismos que son difíciles de cultivar en medio sólido. se alcanzará un punto en el cual algunos tubos contendrán tan sólo un organismo y otros. A continuación. Posteriormente. Transcurrido el tiempo. Estas bacterias probablemente sean Escherichia coli provenientes de aguas . Una vez que ha pasado suficiente tiempo como para que crezca el microorganismo. Al determinar la probabilidad de que los tubos no recibieran ninguna célula.metodología cuantitativa basada en diluciones sucesivas para resolver el problema. se incuban las muestras de dichos tubos problema. el cual contenga 9 mL de una solución salina. mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. se puede determinar el número más probable de microorganismos presentes en la muestra original. Aquellos tubos que fueron inoculados con una o más células microbianas a partir de la muestra. nos proporciona un recuento de viables. utilizando para ello una tabla estadística. determinando el número de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. A medida que se aumenta el factor de dilución. ninguno.

se recuperan subiendo la temperatura. que es un proceso suave. ¿De qué manera se pueden preservar cepas puras por largos períodos? A) Métodos de elección o de conservación a largo plazo . o bien porque la cepa microbiana no resiste los tratamientos de la conservación por estos métodos. no hay crecimiento. B) Métodos alternativos: Son los que se utilizan cuando no se pueden emplear los métodos de elección. por evitarse la aparición de generaciones sucesivas. bien por carecer de los equipos necesarios. estas células no pueden . sino que se recomienda conservar el microorganismo empleando varios de estos métodos. con lo que el agua se congela. Cuando se quiere trabajar con las células así conservadas. pero a veces no tanto como en la congelación. pero éstas no han muerto. porque la liofilización se consigue por sublimación del hielo de las células. a) Conservación por transferencia periódica: La cepa microbiana se guarda en forma de cultivo activo en el medio de cultivo en el que ha crecido. Son los mejores porque en ellos se paraliza el crecimiento de las células microbianas. 5. Sin embargo. Conviene tener en cuenta que nunca se debe usar un único método alternativo. coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación. Así se garantiza al máximo la estabilidad genética. De esta forma.residuales contaminadas. Este es el mejor método de conservación desde todos los puntos de vista. b) Conservación por liofilización: Tampoco se da crecimiento en las células conservadas por este método. y la presencia de E. al no disponer las células de agua en forma líquida. pero tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales. Con ello la estabilidad genética es alta. puesto que se les ha quitado el agua mediante la liofilización. a) Conservación por congelación: Se congelan las células en suspensión en un líquido con un agente crioprotector y se guardan a temperaturas inferiores a cero grados centígrados.

b) Desecación en suelo. se pueden poner en suspensión trocitos de agar con el crecimiento del hongo. porque al seguir activas excretan productos tóxicos del metabolismo que se acumulan. pero a los que es necesario recurrir a la hora de conservar grupos de microorganismos muy determinados que no resisten bien la liofilización o la congelación. Se utiliza un papel bastante absorbente (Whatmann nº 3) que se impregna con una solución muy densa de células y se deja secar al aire (en condiciones estériles). Rhodospirillum. silicagel. b) Conservación por suspensión en agua destilada o en agua de mar estéril: Es un método alternativo muy utilizado y que da altos porcentajes de viabilidad en diversos tipos de microorganismos. Para los hongos filamentosos que no esporulan. como por ejemplo los géneros bacterianos Spirillum. Se pueden preparar en criotubos de los anteriormente mencionados. la suspensión se hace en agua de mar diluida.permanecer indefinidamente en el mismo tubo. arena. En el caso de microorganismos marinos. Consiste en suspender en agua estéril unas cuantas células del cultivo que se quiere conservar. por lo que es necesario transferirlas a otro tubo con medio de cultivo fresco. Los cuatro métodos que vamos a citar se basan en la paralización del crecimiento por eliminación del agua disponible para las células. En este caso la concentración celular no debe ser superior a 10 4-105 células/ml en el caso de bacterias y levaduras. También es posible desecarlos por el procedimiento que se llama desecación líquida (L-Dry) porque se utiliza para ello el liofilizador. . tanto hongos filamentosos como levaduras y algunas bacterias. etc. provocando el envejecimiento y muerte celulares. etc. C) Métodos restringidos: En este grupo se engloban métodos no empleados habitualmente. pero sin que haya habido congelación previa de las células. a) Desecación en papel de filtro.

San José. es transparente. En la tapa hay un manómetro con el que medimos la presión interna. Primera edición. Otra manera es bombeando CO2 o N2 libre de 02 al medio. Éste es un procedimiento bastante eficaz. Los microorganismos productores de esporas se pueden conservar durante bastante tiempo por este método. Debido a la higroscopicidad de la sal. Editorial EUNED. En medio sólido. Las células se encuentran en una matriz de alginato y la eliminación del agua se hace por tratamiento con soluciones hipertónicas sucesivas y posterior desecación al aire hasta que se pierde un 70% de su contenido en agua. En condiciones aeróbicas. se emplean jarras de anaerobiosis o jarras de Gas-Pak. Para conseguir la anaerobiosis. pero sino. Su tamaño es similar al de un termo. A. 6. que contienen NaCO3 y borohidruro de sodio. Para verificar la anaerobiosis hay un indicador. En su interior se colocan las placas Petri invertidas. pero las células dejan de multiplicarse por ser insuficiente el nivel de agua disponible. Estos agentes son cisteína o tioglicolato. Al añadir agua al sobre. añadimos al medio de cultivo agentes reductores que toman el O2 disuelto en el agua y forman H2o. ¿Qué técnicas de cultivo se emplean para aislar microorganismos anaeróbicos? Para el cultivo de microorganismos anaerobios estrictos: En medio líquido. . introducimos sobres de anaerobiosis. ya que se están desprendiendo CO2 y H2. que consiste en una tira de papel impregnada con azul de metileno. por ejemplo. se libera H2 y CO2.Se añaden las células a estos sustratos que las protegerán al desecar. El recipiente se cierra con una tapa hermética. d) Desecación en sal gorda para halobacterias. Costa Rica. En la parte inferior hay un catalizador de paladio. la desecación no es total. El oxígeno presente se reduce a agua. Microbiología industrial. BIBLIOGRAFÍA:  HERNANDEZ. mediante burbujeo. la tira es azul. c)Desecación en bolitas de alginato. Para su conservación por este método se mezclan las células con sal y se dejan desecar espontáneamente. 2003. IX.

2003. GARCIA MARTOS. Brock.et al. Pearson-Prentice Hall Editorial. Editorial Harcourt. 12ª edición. España. P. M. Segunda Edición.2007. Tercera Edición. Compendio de Microbiología Médica. España. Biología de los microorganismos. Madrid GAMAZO. Microbiología Clínica Práctica. Segunda edición. Editorial Elsevier. 2005. Madrid. C. Manual Práctico de Microbiología. Microbiología en ciencia de la Salud. . 1994. RODRIGUEZ. España. Servicio Publicaciones UCA. DE LA ROSA.     MADIGANM. Editorial Masson. G. 2009.