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Guas de gentica

Juan B. Lpez.

DROSOPHILA MELANOGASTER
De los diversos organismos utilizados como modelos experimentales, Drosophila
melanogaster, es uno de los mas empleados en gentica, se ha constituido en un
elemento crucial en la biologa del desarrollo, y por sus caractersticas genotpicas y
fenotipicas ha sido el organismo ms estudiados en el campo de la gentica para el tema
de las mutaciones.
En el estado salvaje es una pequea mosca diploide cuyo tamao es aproximadamente
de 2-3 mm y con peso aproximado de 0.8-1.5 mg segn sea macho o hembra
respectivamente. El ciclo de vida del dptero Drosophila melanogaster incluye las
etapas de huevo, larva pupa y adulto, a partir del huevo, los primeros hechos
embrionarios producen en estado larvario conocido como I instar, con un crecimiento
rpido; la larva muda 2 veces (II , III instar), y entonces se forma el estado de pupa, en
el cual la cutcula de la larva es remplazada por las estructuras adultas . Una mosca
adulta emerge de la cscara de la pupa lista para aparearse, en el caso del macho.
(Strickberger, 1978).
Drosophila melanogaster posee cuatro pares de cromosomas, de los cuales: el par I es
sexual siendo en la hembra (XX), largo y telocntrico, mientras que en el macho, uno
largo y telocntrico (X) y otro corto y acrocntrico; los pares II y III, son Largos y
metacntricos;
y
el
par
IV,
corto
y
telocntrico.
La asignacin de cromosomas X y Y en el cariotipo de D melanogaster fue realizada
por Wilson y Stewens, quienes vieron en la hembra dos cromosomas largos X, en el
macho uno solo y un cromosoma corto Y (Puertas, 1992)

Fig,.2 Cromosomas D. m.

Se ha determinado el sexo homogamtico a la hembra por la presencia de dos gametos


iguales (XX) y heterogamtico al macho, que solo posee un cromosoma X. En especies

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con machos heterogamticos como Drosophila los descendientes machos poseen el
cromosomas X solamente de sus madres y el Y del padre (Strickberger, 1988)
Drosophila melanogaster tiene un nmero
cromosmico bajo (2n = 8) y sus larvas presentan cromosomas gigantes en sus
glndulas salivares por lo que es de gran utilidad para estudiar la morfologa
cromosmica y la evolucin cariotpica. Adems se cuentan con gran cantidad de lneas
mutantes que producen fenotipos claros tales como los que muestran diferencias en
forma, color y tamao de diversas partes de su cuerpo entre otras.
Por tales motivos, Drosophila melanogaster es un organismo ideal para la demostracin
de muchos principios biolgicos y el anlisis de ciencia descriptiva, bioqumica y
molecular, se utiliza para estudiar problemas de desarrollo y nutricin fisiolgicas y
conducta animal, comportamiento, reacciones en el apareamiento y respuestas a la luz
de diversos colores.
Dada la variacin de mutaciones que presenta la Drosophila melanogaster se ha
escogido como material biolgico preferido para estudiar el fenmeno de la herencia. Y
gentica del desarrollo. Existen varios factores que contribuyen a su eleccin como
organismo adecuado para la demostracin de muchos principios genticos en eucariotas,
como son:










Es muy abundante y fcil de capturar


facilidad de cultivo.
pequeo tamao del organismo adulto.
tiempo de generacin muy rpido (10 das a 25C y 20 das a 18C).
produce gran cantidad de descendientes, lo que facilita la comprobacin
estadistica de los resultados.
solo tiene cuatro cromosomas y es sencillo el cartografiado de sus genes en
mapas citolgicos en cromosomas politnicos de las glndulas salivares.
existen cromosomas balanceadores letales homozigticos con mltiples puntos
de ruptura que impiden la recombinacin con los que se mantienen poblaciones
en heterozigosis de letales recesivos.
se han obtenido moscas transgnicas con gran facilidad
existen mutantes para casi cualquier proceso biolgico reconocible

Fig,.1

Guas de gentica
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Los primeros estudios acerca de los mecanismos de la herencia, son atribuidos a
Gregorio Mendel quien por primera vez utiliza diferentes variedades del tipo de
guisantes para formular toda una experimentacin cuantitativa basado en un
procedimiento cientfico capaz de darle explicacin a las observaciones cotidianas que
apuntaban a la existencia de un proceso complejo de herencia. Sus trabajos fueron
redescubiertos en 1900, son la base fundamental de la Gentica Moderna, pues
constituyen la primera aproximacin lgica, descriptiva y racional del estudio de los
mecanismos de la herencia.
Mendel formul dos grandes leyes; la primera expone que los miembros de la pareja
gentica se distribuyen separadamente entre los gametos (segregan), de forma que la
mitad de los gametos llevan un miembro de la pareja gnica y la otra mitad llevan el
otro miembro de la pareja gnica. Las proporciones fenotpicas que obtuvo Mendel para
la segunda generacin filial fueron de 3:1.(Griffiths, 1995, p.27)
En su segunda Ley, Mendel propone que: "Durante la formacin de los gametos, la
segregacin de los alelos de un gen se produce de manera independiente de la
segregacin de los alelos de otro gen". Las proporciones fenotpicas para la segunda
generacin filial fueron 9:3:3:1.(Griffiths, 1995, p.30.)
A Mendel se le atribuye haber establecido las reglas bsicas del anlisis gentico, ya
que su trabajo permiti conocer la existencia de unidades hereditarias, que contenan la
informacin hereditaria que se transmita de una generacin a otra. Los trminos
dominante y recesivo fueron acuados por Mendel, los mismos se mantienen en la
actualidad;
a
las
unidades
hereditarias
las
denomin
factores
En 1912 Sutton y Boveri, propusieron la teora cromosmica de la herencia, que
estableci que los factores de Mendel eran los genes ubicados en una estructura definida
llamada cromosoma y que estos los genes, estaban ubicados sobre los cromosomas. Los
trabajos de estos investigadores fueron reforzados y esclarecidos por los trabajos de
Morgan quien estudi los mecanismos de la herencia, utilizando mutaciones en
Drosophila melanogaster como marcadores genticos, que le permitieron observar y
entender estos procesos.
No obstante, mientras Mendel Solo necesit obtener 34 variedades de semillas, Morgan
tena que generar sus propias variedades de organismos. Morgan esperaba que
diferentes variedades o mutantes del tipo silvestre aparecieran y as cruzar las
suficientes cantidades de moscas. En un ao aproximadamente, y entre miles de moscas,
encontr su primer mutante, tena ojos blancos, en lugar de rojos como era la normal.
Posteriormente T.H. Morgan, en 1910, present pruebas de que un carcter especfico
de Drosophila melanogaster, ojos blancos, se hallaba ligado a la herencia del sexo y
muy probablemente asociado a un cromosoma determinado, el cromosoma X. Segn los
datos de Morgan en un cultivo normal de moscas de ojos rojos haba apreciado que un
macho de ojos blancos que entonces fue cruzado con sus hermanas de ojos rojos, todos
los individuos de la F1 de dicho cruzamiento presentaban los ojos rojos con excepcin
de tres machos con ojos blancos que Morgan atribuy a mutaciones posteriores. Lo que
presentaba un inters especial era el hallazgo de que al cruzar entre s las moscas con
ojos rojos de la F1 daban lugar a hembras con los ojos blancos.
Sin embargo, aparecan hembras con los ojos blancos al efectuar el cruzamiento
retrgrado de las hembras con ojos rojos de F1 con el progenitor masculino de ojos

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blancos, este ltimo tipo de cruzamiento dio lugar a cuatro clases de descendiente,
hembras y machos de ojos blancos, hembras y machos de ojos rojos.
Para dar explicacin a estos resultados Morgan propuso que las hembras de la F1 de
ojos rojos eran heterocigotas para el carcter ojos blancos, recesivo. De este modo la
aparicin de hembras de ojos blancos solo poda darse en las hembras homocigotas para
el gen white. Por otra parte, un descendiente masculino tena la misma probabilidad de
tener los ojos rojos que blancos si su madre era un heterocigoto sin reportar el genotipo
de su padre. Estos resultados se relacionan con los hallazgos de Wilson, Stevens y otros
de que el macho slo tena un cromosoma X y la hembra dos.
Segn esto, el macho original de ojos blancos tena un gen white localizado en un
cromosoma X nico, aunque white es recesivo ese macho presentaba de todas formas
los ojos blancos a causa de la ausencia de otro cromosoma X normal. Sin embargo, en
las hembras el color de los ojos depende de los genes presentes en los dos cromosomas
X y slo pueden presentarse ojos blancos cuando ambos cromosomas X llevan el gen
recesivo white.
Un factor de gran inters en el estudio de la gentica, son las mutaciones, segn
Griffiths (1995) "las mutaciones son cambios que se dan en los organismos de un estado
hereditario a otro". Las mutaciones han constituido una herramienta
fundamental en el estudio gentico, pues se han convertido en verdaderos marcadores
especiales que permiten seguir los procesos biolgicos y se pueden utilizar con dos
propsitos (1) para estudiar el proceso de mutacin por si mismo y (2) para analizar una
funcin biolgica desde un punto de vista gentico. Las mutaciones ms fciles de
detectar son las mutaciones morfolgicas, que afectan al color o la forma de cualquier
rgano de un animal o planta, pues son rpidamente visibles y medibles.(Puertas, 1992).
Los estudios de mutaciones han permitido evidenciar situaciones en las cuales las Leyes
de Mendel se ven alteradas en las proporciones fenotpicas, como lo son las
interacciones allicas que se dan entre alelos de un mismo gen, por ejemplo la
codominancia la dominancia incompleta, pleiotropa, dominancia completa, y las
interacciones no allicas que surgen entre alelos de diferentes genes como las epstasis.
Otro tipo de situaciones que afectan las proporciones fenotpicas de Mendel son las
referidas a la existencia de ligamientos fsicos absolutos y parciales. El ligamiento es
una concepcin que surge del estudio de ubicacin y observacin de los genes en los
cromosomas, estableciendo que si dos genes se encuentran en un mismo cromosoma
estarn ligados fsicamente por lo cual no podrn segregar de forma independiente uno
del otro tal como lo expona Mendel. El ligamiento constituye entonces un mecanismo
que permiti explicar aquellas situaciones donde las leyes de Mendel no podan explicar
los procesos de la herencia.
Con el estudio detallado de los procesos de herencia y el establecimiento de los
procesos de Mitosis y Meiosis, se determin que durante la Meiosis los cromosomas
homlogos eran capaces de intercambiar material gentico, proceso al que se denomin
recombinacin, y que se ve evidenciado en la formacin de estructuras visibles llamadas
quiasmas. Para que ocurra la recombinacin debern acontecer una serie de procesos
que lleven a la formacin del complejo sinaptonmico, que mantendr unidos a los
cromosomas homlogos y permitir el intercambio de material gentico entre estos.
La hembra en Drosophila melanogaster, constituye el sexo homogamtico, puede
recombinar ya que presenta ligamiento que le permiten poder romper porciones del
cromosoma y establecer quiasmas para el intercambio de material gentico. En el
macho, que constituye el sexo heterogamtico, existe un ligamiento absoluto que impide

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la recombinacin por no darse los procesos de rompimientos cromosmicos, esenciales
para el intercambio de material gentico.
La recombinacin es un proceso que puede influir en la herencia, los estudios han
determinado que los gametos que resultan de la recombinacin siempre sern en
frecuencia menor a los que llevan genes donde no se ha dado la recombinacin, es decir,
los parentales. Sturtevant, propuso la existencia grosso modo de la siguiente
proporcionalidad: conforme mayor es la distancia entre genes ligados, mayor es la
probabilidad de que ocurra un entrecruzamiento entre cromtidas no hermanas en la
zona que separa esos genes y, por lo tanto, mayor la proporcin de recombinantes que
se producen. En el estudio experimental y terico de los procesos de la herencia, se ha
desarrollado mtodos matemticos y estadsticos que tienen como objeto realizar
comprobaciones de fenmenos en estudio, tal es el caso de cruces experimentales en
Drosophila melanogaster.

Descripcin De Drosophila melanogaster


El numero especies conocidas del genero Drosophila es muy alto, pero la mas utilizada
en estudios genticos generales es D. melanogaster ampliamente extendida por todo el
mundo y abundante en frutales, principalmente sobre uvas, pltanos y ciruelas, por lo
que se la conoce por mosca de la fruta , especialmente si sta est en fermentacin,
ya que aparte de los jugos de las frutas, la levadura constituyen una parte importante de
su dieta
1. Clasificacin sistemtica
Philum...................... ARTHROPODA
Clase......................... HEXAPODA
Orden........................ DPTERA
Familia...................... Drosophilidae
Gnero................ ...... Drosophila
Especie...................... melanogaster
2. Ciclo De Vida
D. melanogaster tiene metamorfosis complicada. Su ciclo biolgico, desde la
fecundacin hasta el adulto, pasa por cuatro estados de desarrollo: huevo - larva - pupa imago o adulto. (Fig. 3).
El desarrollo embrionario tiene lugar en el huevo, tras la fecundacin y formacin del
cigoto.
La hembra pone huevos incluso sin estar fecundada. La ovoposicin comienza en la
hembra adulta al 2 da despus de su emergencia, pudiendo llegar a poner hasta 50-75
huevos por da, llegando hasta 400-500 en 10 das. Lgicamente slo aquellos huevos
que han sido fecundados se desarrollarn. La hembra despus del apareamiento acumula
el esperma en un receptculo espermtico y los huevos son fecundados posteriormente
conforme pasan a travs del oviducto hacia el orificio de salida (placa vaginal).

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Fig. .3 ciclo de vida de D. melanogaster. La meiosis en el huevo se desencadena por la


penetracin del espermatozoide.

HUEVO.
Los huevos son ovoides con unas dimensiones de 0.19x 0.5 mm, son blancos y estn
recubiertos de una fuerte envoltura con dos apndices delgados en el extremo anterior
(Fig. 4). En el extremo anterior del huevo hay un poro diminuto por donde penetra el
espermatozoide para fecundar el proncleo femenino, mientras el huevo se encuentra en
el tero. En condiciones ambientales ptimas el huevo es puesto en el momento en que
los dos proncleos se unen, cariogmia, aunque en las condiciones de mantenimiento
en el laboratorio siempre existe un porcentaje de hembras que pueden retenerlos por un
tiempo indeterminado. El desarrollo embrionario comienza inmediatamente despus de
la fertilizacin y, como en la mayora de los insectos, se distinguen dos periodos: el
perodo embrional que transcurre dentro del huevo y comprende desde la fertilizacin
hasta que emerge la larva, y el perodo postembrionario, que se inicia con la eclosin
del huevo y comprende la: etapas de larva, pupa e imago o insecto adulto.
El huevo tiene dos membranas que permiten nicamente intercambios gaseosos del
embrin con el medio: la membrana cortnica o cortn en el exterior, y la membrana
vitelina situada debajo de la anterior. Se presume la existencia de una tercera membrana
de tipo celular.
El ncleo diploide formado tras la cariogamia se sita en el tercio anterior del huevo
(Fig. 4) y se divide mitticamente al cabo de 20 minutos, a partir de este momento se
origina un sincitio donde los ncleos comparten un mismo citoplasma. Los ncleos se
dividen peridica y sincrnicamente cada 10 minutos, con una fase S de 3,5 minutos.
Durante estas divisiones existe un origen de replicacin cada 3,7 Kb de DNA.

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A partir de la sptima divisin, los ncleos, que estn homogneamente repartidos por
el citoplasma, empiezan a migrar a la periferia del embrin, migracin que termina
despus de la novena divisin, momento que coincide con la aparicin de las primeras
clulas polares, precursoras de las clulas germinales, en el polo posterior del embrin.
En este momento se inician las primeras transcripciones de mRNA en los ncleos
perifricos. La sntesis de protenas anterior a este momento se haca a partir de mRNA
de procedencia materna.
Desde la dcima hasta la decimotercera divisin, el embrin es un blastema (o
blastodermo
sincitial),
y
sus
divisiones,
an

Fig. 4 Embriogenesis de D. melanogaster.

sincrnicas, se van alargando progresivamente. Durante estas cuatro divisiones el


perodo S se va alargando, el nmero de unidades de replicacin disminuye,
aumentando correspondientemente su tamao, y aparecen invaginaciones membranosas
que, sin envolver totalmente a los ncleos, empiezan a definir los compartimentos del
embrin.
Despus de la decimotercera divisin, el nmero de ncleos perifricos se eleva a 6.000.
Cuando se inicia la nueva fase S empieza la celularizacin (150 minutos despus de la
fertilizacin), que se completa en 30 minutos. Coincidiendo con la fase S (unos 20
minutos) se activa por primera vez la transcripcin del rDNA. Con la celularizacin
desaparece la sincronizacin mittica; los posteriores ciclos tendrn una hora de
duracin.
Doscientos minutos despus de la fertilizacin empieza la formacin de la grstula. Son
visibles dos invaginaciones, una ventro-lateral en el lmite posterior del primer tercio
del cuerpo (surco ceflico) y otra a lo largo de la regin ventral de los dos tercios
posteriores (surco ventral). A partir de ellas, especialmente de la ltima, se originan los
procesos organogenticos que conducirn a la formacin y emergencia de la larva al
cabo de 22 horas.
LARVAS.
El huevo eclosiona, por tanto, al cabo de un da, y de l sale una larva blanca, con
mandbulas negras y un par de espirculos con funcin traqueal en cada extremo. Las

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larvas viven dentro del medio de cultivo, son muy activas y voraces, creciendo muy
rpidamente. Pasan por tres estadios larvarios (instars). Los cuales se muestran en la
figura 1 con dos mudas. Al final del 3 estadio, la larva llega a alcanzar una longitud de
4,5 mm.
PUPA
Tras unos cuatro das y dos mudas las larvas abanonan el medio de cultivo, o algn otro
soporte, y se fijan comenzando el estadio de pupa. Los espirculos se transforman en
antenas pupales, disminuye la lorgitud de su cuerpo y se vuelve ms oscura para
formar puparium. Esta prepupa puede considerarse como el cuarto estadio larvario,
que termina con una muda, comenzando a partir de entonces el perodo de pupa o
crislida. La cutcula, que al principio es blanca y flexible (Estadio de prepupa), se va
oscureciendo y endureciendo progresivamente. Inmediatamente despus de pupar los
tejidos de la larva se histolizan y las estructuras embrionarias, denominadas discos
imaginales crecen y producen secciones del organismo adulto. Por tanto, el
metabolismo pupal se centra en la sustitucin de tejidos larvarios por los del adulto,
utilizando los tejidos de desecho de la larva como materia y energa, para esta funcin.
Al cabo de unos 5 das de iniciada la pupacin aparece el adulto (imago).
El ciclo total de desarrollo, a una temperatura ptima 25 C, suele tener una duracin de
aproximadamente 10 u 11 das. A temperaturas superiores se producen fenmenos de
esterilidad y a temperaturas ms bajas el ciclo se alarga.
ADULTO
o imago. Aparece, tras romper el puparium, con el cuerpo muy plido y sin desplegar
las alas. stas se despliegan al cabo de una hora, y tras otras pocas horas alcanza la
pigmentacin corporal normal, un color amarillo pajizo. Los adultos pueden llegar a
vivir un mes o poco ms. Los adultos tienen la morfologa bsica de los Dpteros. El
gnero Drosophila se separa de los gneros prximos p: la arista provista de dos filas
de pelos que posee - el extremo de la antena. (Ver Figs. 5. y 6)

fig. 5. Aspecto de los individuos adultos D.


melanogasrer. Macho a la derecha y hembra a la
izquierda

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El cuerpo est dividido en: cabeza, trax y abdomen.
CABEZA
Con antenas; dos grandes ojos compuestos de forma redondeada, formada por cientos
de omatidios de color rojo mate situados en posicin lateral; tres ojos simples ocelos en
posicin dorsal, carina, palpo y probscide y una serie de quetas o cerdas (fig. 6)

Fig. 6 Aspectos de los individuos adultos de Drosophila melanogaster.

TORAX
Dividido en mesonoto y escutelo, recorrido por una serie de filas de microquetas
alineadas antero-posteriormente poseyendo tambin varios grupos de macroquetas (o
quetas simplemente) en posicin dorsal (dorsocentrales y es cutelares) y lateral. Poseen
tres pares de patas compuestas de: coxa, trocnter, fmur, tibia, tarsos y ua Los machos
poseen en el tarso del primer par de patas ur peine sexual compuesto de pelos gruesos
y cortos Existen tambin dos halterios o balancines y un par de alas transparentes
formadas por pequesimas celdillas que tienen 5 venaciones longitudinales y dos
transversales (Fig. 10.4).
ABDOMEN
Consiste en tergitos en la parte dorsal y esternitos en la parte ventral donde hay un par
de orificios en cada uno de ellos: espirculos. La parte final del abdomen es diferente en
machos y hembras. En aqullos es de forma redondeada con la parte dorsal
completamente oscura (negra) y la ventral portando el pene y el arco genital (Fig. 7). En
las hembras termina en forma ms puntiaguda, menos amplia la franja oscura dorsal y la
parte ventral con la placa vaginal. En general el tamao de la hembra es mayor que el de
los machos.

Fig. 7. aspecto de la parte ventral del abdomen de un macho,


parte izquierda y una hembra parte derecha de D. melanogaster.

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Juan B. Lpez.
4. PRINCIPALES MUTANTES DE Drosophila melanogaster.
A continuacin se relacionan algunos de los mulantes de D. melanogaster ms usados
en prcticas de Gentica. Se indica el nombre de cada mutante, su denominacin
abreviada, y una descripcin del fenotipo caracterstico.
Genotipo
ap

Nombre
apterus

black

Bar

Bd

Beaded

bw

brown

curved

ca

claret

cn

cinnabar

ct

cut

cu

curled

Cy

Curly

dp

dumpy

ebony

ey

eyeless

forked

garnet

gl

glass

Hairless

Fenotipo
Sin alas
Cuerpo, tarso de las patas y venas de las
alas de color negro.
Ojos reducidos a una estrecha barra
vertical en los machos y en las hembras
homocigticas. Intermedio en las hembras heterocigticas. Buena viabilidad.
Alas en forma de cinta. Letal en
homocigosis.
Ojos oscuros de color vino que se
tornan a prpura con la edad.
Alas divergentes y curvadas hacia
abajo.
Ojos color rub claro. Alas ligeramente
puntiagudas.
Ojos de color rojo vivo
Alas recortadas en punta. Ojos
pequeos y arrionados.
Alas curvadas hacia arriba y afuera
Asociado a la inversin Curly en el
brazo izquierdo del cromosoma II. Las
alas estn fuertemente curvadas hacia
arriba y lados. El homocigoto es letal.
Alas truncadas y reducidas a 2/3 de su
longitud.
Cuerpo que se vuelve negro
gradualmente con la edad.
Ojos reducidos y de tamao variable,
incluso en una misma mosca; pueden
llegar a estar ausentes. Influenciado por
la temperatura.
Quetas y cerdas acortadas, nudosas, bifurcadas o retorcidas.
Ojos ppura claro que se oscurecen con
la edad.
Omatidios redondeados y juntos en
superficie plana. Ojos pequeos, en la
hembra amarillo-rosados y en el macho
barmelln punteados.
Ausencia de quetas postverticales,
dorso-centrales anteriores y

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abdominales. Los homocigotos son
letales.

lz

Lozenge

miniature

Pm

Plum

pr

Purple

px

Plexus

ri

radius
incompletus

Sb

Stubble

sc

scute

se
st

sepia
scarlet

vermilion

vg
w

vestigial
white

wa

white-apricot

yellow

Ojos ms estrechos que el normal, con


reas rugosas y suaves a causa de sus
omatidios anormales y fusionados. El
ojo es de color rojo con reas oscuras y
brillantes.
Alas pequeas que no sobresalen del
abdomen.
Ojos prpura con manchas oscuras.
Letal recesivo.
Ojos prpura-rosado.
Venas extras en las alas, sobre todo en
los mrgenes.
Segunda vena longitudinal del ala interrumpida.
Quetas diminutas y en forma de maza.
Letal en homocigosis.
Faltan quetas, sobre todo las escutelares
posteriores, las ocelares y las postverticales.
Ojos oscuros de color sepia.
Ojos rojo brillante
Ojos color bermelln. Junto al gen bw
produce ojos blancos
Alas y balancines muy reducidos.
Ojos blanco nieve.
Ojos rosa-amarillentos en los machos y
ms amarillentos en las hembras.
Cuerpo de color amarillo

A continuacin se muestran los grupos de ligamientos en Drosophila melanogaster.


GRUPOS DE LIGAMIENTO EN Drosophila melanogaster
Cromosoma X

Cromosoma II

Cromosoma III

0,0

0,0 nert

0,0 roughoid

0,0 aristaless

0,2 veinlet

0,0+ suppessor of sable 0,1 expanded

20,0 Moir

0,0+cubitus
interruptus
0,0+ groveless

0,0+ scute

1,3 Star

26,0 sepia

0,0+ sparkling

0,6 broad

4,0 heldout

26,5 hairy

0,2 eyeless

yellow

0,0+ silver

0,6 6-fosfogluc. Deshi. 6,1 Curly

35,5 eye-gone

0,8

36,8 esterasa 6

prune

1 1 ,0 echinoid

Cromosoma IV
0,0 shaven

Guas de gentica
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1 ,5

white

12,0 fat(yGull)

37,0 rotated

3,0

facet

13,0 dumpy

40,4 Dichaete

5,5

echinus

16,5 clot

40,5 Lyra

7,5

ruby

41,4 Glued

13,7 crossveinless

20,0 Bgalactosidasa
31,0 dachs

18,9 carmine

41,0 Jammed

43,4 fosfoglucomutasa

19,9

fumarasa

44,0 abrupt

44,0 scarlet

20,0

cut

47,0 nubbin

46,0 Wrinkled

21,0 singed

48,5 black

47,0 radius ncompletus

23,1

ocelliless

50,1 lcoholdeshid. 47,7 proboscipedia

27,7

lozenge

53,9 hook

48,0 pink

32,8

raspberry

54,5 purple

48,5 tetraltera

33,0

vermillon

54,8 Bristle

48,7 blistery

35,7

RNA polimerasa 55,0 light

49,2 octanol-deshidrog

36,1

miniatura

55,1 straw

50,0 curled

36,4

tiny

55,4 apterus

52,0 karmoisin

38,3

furrowed

55,9 tarsi irregular 52,4 rosy

41,9

wavy

56,0 lightoid

58,2 Stubble

57,5 cinnabar

58,5 spineless (y
aristapedia)
58,8 bithorax

44,4 garnet
45,2

narrow abdomen 62,0 engrailled

43,2 thread

51,5 scalloped

67,0 vestigial

63,1 glass

56,7

forked

67,7 waxy

62,0 stripe

57,0

Bar

71,1 comb-gap

64,0 kidney

59,2 outstretched

72,0 Lobe

66,2 Delta

59,4

Beadex

75,5 curved

69,5 Hairless

62,5

car

83,0 abero

70,7 ebony

63,0 Glucosa 6
fosfato
desh.
64,0 shortwing

95,5 rRNASS

75,7 cardinal

100,5 plexus

76,2 white ocelli

64,8

maroonlike

104,5 brown

79,1 bar-3

66,0

bobbed

107,0 orange

91,1 rough

107,4 bailn

93,8 Beaded
100,7 claret
104,3 brevis

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Fig.7 . Ala normal de D. melanogaster, y aspecto de las dos mutantes: radius incompletas (izquierda) y crossveinless
(derecha). Se han indicado /os nombres de las celdillas del ala. L1 a L5 y M sealan respectivamente las venas
longitud/nales 1 a 5 y la vena marginal; A y P sealan las venas transversales anterior y posterior respectivamente.

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Practica
OBJETIVOS.

Determinar los diversos fenotipos de D. melanogaster


Realizar diferentes cruces con el fin de comprobar o refutar las leyes de Medel
Identificar en cada generacin las mutaciones y sus proporciones
Determinar si las mutaciones son ligadas o no al sexo.

MATERIALES
Organismos
Se utilizar normalmente una cepa silvestre de Drosophila melanogaster y otra cepa mutante
para uno o varios caracteres, en algunos casos ambas cepas a usar sern de tipo mutante.

Productos y equipos

Como material para el manejo y observacin de Drosophila melanogaster se utilizar:

esteriomicroscopio o lupa binocular,


anestesiador (cloroformo, eter o CO2)
ter sulfrico,
reetificador, placa petri de cristal,
lpiz graso o etiquetas adhesivas para marcar las botellas,
botellas y tubos con alimento (ver composicin en el Anexo ),
pincel pequeo (n. 0) y suave para mover las moscas,
papel de filtro esterilizado.
frasco cementerio con tapa, de boca ancha, conteniendo alcohol de 70 para introducir las
moscas desechadas.
Embudo.
Algodn

PROCEDIMIENTO
1.

Anestesiamiento y reconocimiento de cepas

Para la observacin, clasificacin y recuento de las moscas es preciso anestesiarlas previamente con ter,
a esta operacin se le llama anestesiado o eterizacin. Se procede de la siguiente forma
Golpear la botella de cultivo sobre una almohadilla de algodn corcho o goma-espuma para que
caigan las moscas al fondo del medio de cultivo.

Guas de gentica
Juan B. Lpez.

Quitar el tapn de la botella, y en su lugar colocar el eterificador. Invertir las posiciones de modo que
la botella de cultivo queda arriba.
Sacudir los lados de la botella de modo que todas las moscas caigan dentro del frasco anestesiador.
Tapar el frasco.

Mantener las moscas expuestas a los vapores del ter hasta que se duerman. El tiempo que tardan las
moscas en dormirse es variable y depende de la edad (alrededor de un minuto). Hay que tener cuidado
pues una exposicin prolongada al ter puede producir su muerte, lo que se notar porque las alas
aparecer perpendiculares al cuerpo.
Si el medio de cultivo no est debidamente solidificado, puede desprenderse y matar las moscas. En este
caso no se debe invertir la botella de cultivo sobre el anestesiador, sino inclinar ste hacia un foco de luz y
esperar a que las moscas entren en l (Drosophila melanogaster es fototrpica positiva y geotrpica
negativa).
Una vez anestesiadas, sacar las moscas y alinearlas sobre una cartulina blanca y llevarlas al
estereomicroscopio para su observacin.
Normalmente una mosca anestesiada permanece inmvil durante 5 o 10 minutos. Si empiezan a moverse
mientras se las est observando se pueden volver a anestesiar utilizando el reeterificador, pulverizando
suavemente con ter en la cmara formada por una caja petri invertida colocada sobre las moscas, o bien
adosando un pequeo algodn impregnado de ter en la cara interior de la placa. Figura X
Para mover las moscas de un lado a otro se utiliza un pincel de pelo de camello o nio recin nacido con
el que se pueden empujar y trasladar.
Una vez examinados, hechos los recuentos, o seleccionados determinados fenotipos, puede ser que se
tengan que pasar a un nuevo frasco de cultivo o que se hayan de desechar determinados individuos; si las
tenemos que pasar a un nuevo medio, colocarlas dentro de un pequeo embudo de papel que se depositar
sobre la papilla, o tumbar la botella que la contiene y colocar las moscas sobre su pared hasta que se
despierten (hay que tener cuidado de que la pared est seca). Si se han de desechar, echarlas en el frasco
cementerio.
Otro aspecto que hay que cuidar es el de no mantener abiertas las botellas de cultivo para evitar que las
moscas se escapen o entren otras y el cultivo se contamine. Igualmente, hay que tener cuidado de que no
quedan moscas en el anestesiador antes de poner las nuestras. No dejar abierto el anestesiador ni la botella
de ter, ya que el ter es muy voltil e inflamable.
ALTERNATIVAS DE ANESTESIADO
Alternativamente se puede usar dixido de carbono y helio para
anestesiar las moscas, para esto se pone con las moscas de costado
tapado con papel aluminio en otro frasco se ponen tres Alka
Seltser con agua (aproximadamente 20 ml ) y se conecta mediante

Guas de gentica
Juan B. Lpez.
una manguera al frasco con las sepas, procurando tapar con papel aluminio los frasco minimizando lo
mejor posible las fugas, cuando las moscas paren de moverse se quita la tapa y se vacan en una caja de
petri que esta sobre un plato con hielo, se observan y se clasifican segn los requerimientos.

2.

AISLAMIENTO DE HEMBRAS VRGENES

Cuando se han de hacer cruzamientos entre genotipos diferentes es estrictamente necesario que las
hembras no se hayan cruzado con machos de su mismo genotipo. Para asegurarnos que son vrgenes
existen diversos procedimientos:
Por identificacin del sexo y aislamiento de hembras adultas de no ms de 6 horas de edad. Seis
horas es el tiempo que requieren las hembras para adquirir la madurez sexual y poder ser fecundadas. Si
eliminamos los adultos de una botella, todas las hembras que recojamos de esta botella en un perodo de 4
o 5 horas sern vrgenes.
Por seleccin de moscas adultas recin emergidas: se reconocen por no haber desplegado an sus alas
y tener su cuerpo alargado y la quitina blanda y plida. En este caso hay que tener mucho cuidado de no
daarles las alas.
Las hembras se pueden separar de los machos en el estado de pupa madura, ya que en este estado se
pueden distinguir los peines sexuales de los machos como dos puntos entre las manchas de las alas. Las
pupas se pueden extraer de la botella con un pincel hmedo con el que posteriormente se limpiarn para
facilitar su observacin. De estas pupas aisladas en una botella emergern obviamente hembras vrgenes.
En cualquier caso hay que extraer del medio de cultivo todas las moscas adultas asegurndose de que no
quede ninguna.
3.

OBSERVACIN Y DESCRIPCIN DEL TIPO SILVESTRE

En Drosophla melanogaster se han descrito ms de mil mulantes diferentes. Bridges y Brehme (1944) y
Braver (1956) fueron los pioneros de la descripcin y localizacin gnico-cromosmica de gran parte de
los mutantes conocidos en esta especie. Continuamente se describen nuevos genotipos en la revista
Drosophila Information Service.
Es conveniente familiarizarse con el fenotipo silvestre, normal para todos sus caracteres, por lo que se
trata de estudiar las partes del cuerpo en donde puede haber mutaciones morfolgicas utilizables en los
problemas que se desarrollarn en las prcticas siguientes:
3.1. Alas: Sobrepasan del abdomen en una tercera parte de su longitud. Su borde
es redondeado y terminado en una ligera punta. (Figs. 3.1y 4.1, 7). Tienen 5
venas longitudinales sobre su superficie y 2 venillas transversales, con lo que
el ala queda dividida en: regiones llamadas celdas. Su superficie es plana y
su color blanco transparente. Los mutantes de alas que se utilizarn lo son
para los siguientes caracteres: borde, color, curvatura, longitud forma,
posicin y venacin.

Fig. 3.1 D. m.
Silvestre

3.2. Ojos: Los ojos estn compuestos por cientos de omatidios colocados regularmente en filas y
columnas, su superficie es mate su color rojo oscuro, su tamao y forma grande y redondeada
respectivamente. Los mutantes ms importantes son para el color, tamao, forma y textura.
3.3. Cerdas o quetas. Sirven como rganos de los sentidos. Hay dos tipos de quetas, unas ms
largas llamadas macroquetas otras de 1/3 respecto a la longitud de las primeras y ms finas
llamadas microquetas (Fig. 6). Refirindose a las primeras, en la cabeza y alrededor de los
ojos hay 3 pares de quetas vertica les (anteriores y posteriores), por delante de los ocelos hay
1 par de postverticales. En la parte dorsal del trax hay un par de presuturales (anteriores y
posteriores) y 2 pares de postalares (anteriores y posteriores). Hacia el borde del dorso del
torax hay 2 pares de quetas notopleurales y en su zona central 2 pares de quetas
dorsocentrales (anteriores y posteriores). Sobre el esternn del segundo par de patas hay 3
pares de quetas esternopleurales. Entre las dorsocentrales anteriores hay 8 filas de

Guas de gentica
Juan B. Lpez.
microquetas acrosticales. En el margen del escutelo hay 2 pares de quetas escutelares
(anteriores y posteriores). Los mutantes que se utilizan lo son para cambios en el nmero y
forma de las quetas de la cabeza, trax y escutelo.

5. MODO DE REALIZAR Y LLEVAR A CABO LOS EXPERIMENTOS CON DROSOPHILA


INTRODUCCIN
Las prcticas que siguen consisten en una serie de cruzamientos entre diferentes mutantes de Drosophila
melanogaster o con genotipos silvestres, con el fin de observar diferentes tipos de herencia.
El desarrollo de una de estas prcticas, en el que se deben estudiar las generaciones F1 y F2 de un
cruzamiento, ha de estar en relacin con el ciclo biolgico normal del animal. En el cuadro 5.2 se
resumen todas las operaciones a seguir en una prctica de este tipo. Las operaciones a seguir durante la
prctica deben hacerse concordar con el estado de desarrollo de los cultivos y no con los das tericos
indicados en la segunda columna y que sirven slo para condiciones ambientales ideales.
A la labor experimental, realizada en el laboratorio, sigue una labor de registro e interpretacin de los
resultados en la que se incluirn pruebas de anlisis estadsticos para comprobar el tipo de herencia
MATERIALES
Organismos
Se entregar a cada equipo de alumnos un tipo de problema consistente en el cruzamiento de dos
genotipos de Drosophila melanogaster, ambos homocigticos. Hay que recordar que los machos son
aquiasmticos.
Productos y equipos
La generacin parental se entregar en un tubo con medio y, en su momento, se dar a cada equipo al
menos una botella con medio para pasar a los individuos de la F1 y obtener la F2. El resto del equipo se
ha descrito anteriormente.
Observaciones
Hay que asegurarse adecuadamente que las hembras de la generacin parental sean vrgenes. En otros
cruzamientos tambin se requieren hembras vrgenes, si los alumnos no tienen suficiente experiencia en
diferenciar las hembras vrgenes, es conveniente que los profesores de prcticas supervisen la seleccin
de hembras y la realizacin de tos cruzamientos.

PROCEDIMIENTO
1. Identificar los fenotipos. Observar cuidadosamente ambos prentales con objeto de determinar

2.
3.
4.
5.
6.

en qu carcteres se diferencia cada uno de ellos del silvestre (color del cuerpo, forma y
superficie de las alas, forma y longitud de las quetas principales, color y tamao de ojos...) y
anotar las diferencias fenotpicas entre ambos sexos.
Cruzar 4 o 5 parejas de moscas para obtener la generacin F1; observar unas 30 moscas de
ambos sexos de esta generacin. Anotar el fenotipo de cada uno de los sexos.
Pasar unas 10 o 15 parejas de moscas a una botella con medio para obtener la F2.
En su caso, realizar un cruzamiento prueba usando hembras vrgenes de la F1 y machos de la
cepa mutante, o viceversa. En el cuadro 5.2 se indican los pasos generales en todo el proceso.
Observar la F2, o la descendencia del cruzamiento prueba, y anotar los fenotipos observados
en cada sexo. Tomar datos de unos 300 individuos.
Comprobar la bondad de los resulados observados en las dos generaciones segregantes por
comparacin con los esperados mediante la prueba estadstica de significacin de X2 (Pearson,

Guas de gentica
Juan B. Lpez.
1898). El X2 es la suma de los cuadrados de las desviaciones entre los valores observados (O)
y los esperados (E) divididos por el valor esperado:

2
(
0 E)
=

2
(
n 1)S X
=

X2

Es importante tener en cuenta que el X2 debe aplicarse con valores absolutos y no con
porcentajes. Una vez calculado el X2 se buscar en la tabla de distribucin de X2 (ver tabla 5.1)
la probabilidad P de obtener una desviacin igual o mayor que la observada, correspondiente a
su grado de libertad (nmero de clases fenotpicas menos uno). Considerar la desviacin
significativa para valores de P menores de 5 %; para valores menores del 1 % altamente
significativa; en ambos casos se acepta que estadsticamente la segregacin observada no se
ajusta a la esperada.

7. En caso de que se sospeche ligamiento, calcular el X2 correspondiente, y en su caso estimar la


frecuencia de recombinacin p.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Indicar mediante un esquema el tipo de herencia obtenida atendiendo a los siguientes detalles:
1. Generacin parental: observacin de machos y hembras y descripcin fenotpica de ambos.
2. Generacin FI: observacin de al menos 30 individuos, y descripcin fenotpica de machos y
hembras.
3. Generacin F2 o cruzamiento prueba: observacin de al menos 300 individuos y descripcin de sus
fenotipos y sexos.
4. Hiptesis y aplicacin de las correspondientes pruebas estadsticas para su comprobacin.
5. Presentar los resultados rellenando las lneas adecuadas del cuadro 5.3.

Grados de
libertad

Probabilidad
0,95

0,80

0,50

0,30

0,10

0,05

0,01

0.001

0,004

0,06

0,46

1,07

2,71

3,84

6,64

10,83

0,10

0,45

1,39

2,41

4,60

5,99

9,21

13,82

0,35

1,01

2,37

3,66

6,25

7,82

11,34

16,27

0,71

1,65

3,36

4,88

7,78

9,49

13,28

18,47

1,14

2,34

4,35

6,06

9,24

11,07

15,09

20,52

1,63

3,07

5,35

7,23

10,64

12,59

16,81

22,46

2,17

3,82

6,35

8,38

12,02

14,07

18,48

24,32

2,73

4,59

7,34

9,52

13,36

15,51

20,09

26,12

3,32

5,38

8,34

10,66

14,68

16,92

21,67

27,88

Tabla 5.1 Distribucin del chi-cuadrado

Guas de gentica
Juan B. Lpez.

Das

Desarrollo

Adultos

F1

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

F2

Huevos

A
Pupas

Eliminar generacin P
F1

Imagos

14

F1XF1

15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26

Huevos

15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26

Medios

Larvas

13

14

Procedimiento
Introducir 4-5 parejas en un tubo
(A)

Observar 30 individuos de
ambos sexos, separar vrgenes
()
Introducir unas 10 parejas en la
botella b
B

Larvas

Pupas

F2

Eliminar la F1

Imagos
Cruzamiento prueba
huevos

Observar 300 individuos


Cruzar () recesivos
vrgenes F1 (C)

Larvas

Pupas

Eliminar los progenitores

Imagos

Observar 300 individuos

Cuadro 5.2 procedimiento para el desarrollo de las practicas con drosophila melanogaster

Guas de gentica
Juan B. Lpez.
Grupo
Alumno/s
FENOTIPO DE LOS PARENTALES
Machos
Hembras
FENOTIPO DE LA F1
No. De individuos observados
Machos
Hembras
FENOTIPOS DE LA F2
No. De individuos
Machos

Hembras

Total

Fenotipo 1
Fenotipo 2
Fenotipo 3
Fenotipo 4
Fenotipo 5
Fenotipo 6
Fenotipo 7
Fenotipo 8
Fenotipo 9
ESTIMACION DE LOS VALORES X2 (X2 machos- hembras (1 grado de libertad))
Esperados (N/2)

observados

(O-E)2/E

Machos
Hembras
Calcular

x2 =

(O E ) 2
E

X2 =

Realizar para cada uno de los fenotipos si es necesario.


X2 PARA CADA CARCTER
CARCTER:
Observados

Esperados

(O-E)2/E

Dominantes
Resecivos
X2 =
X2 DE INDEPENDENCIA TOTAL (X2 total)
observados

esperados

Fenotipo 1
Fenotipo 2
Fenotipo 3
Fenotipo 4
X2 =
2

X de ligamiento = X total X

m1

-X

m2

(O-E)2/E

Guas de gentica
Juan B. Lpez.
Observaciones

Calcular X2 para cada pareja de loci cundo sea necesario


Indicar el coeficiente de coincidencia en su caso.
En caso de retrocruzamiento prueba usar las casillas correspondientes a la descripcin de los
parentales y de la F2.
Usar tantas hojas como sean necesarias

Cuadro 5.3 esquema para representar los datos obtenidos en los distintos tipos de cruzamientos