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UNIVERSIDAD DE ORIENTE

NÚCLEO DE ANZOÁTEGUI
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS
SECCIÓN DE FARMACOLOGÍA

CAMBIOS HISTOLÓGICOS AGUDOS CAUSADOS POR EL
VENENO DE Tityus zulianus (SCORPIONES, BUTHIDAE)
EN RIÑONES DE RATONES C57BL/6

Asesores

Trabajo de Grado presentado por

Adolfo Borges-Strauss
Leonardo De Sousa

Hurtado Boada, Wilfredo José
Silva Álvarez, Leonardo José
Velásquez González, Adriana de los Ángeles

Como requisito parcial para optar al título de Médico-Cirujano

Barcelona, mayo de 2012

UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NÚCLEO DE ANZOÁTEGUI
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
COMISIÓN TRABAJO DE GRADO

DECLARACIÓN JURADA
El Trabajo de Grado presentado por los Estudiantes Universitarios Hurtado Boada, Wilfredo
José C. I. № V-16.667.116, Silva Álvarez, Leonardo José C. I. № V-18.450.607 y Velásquez
González, Adriana de los Ángeles C. I. № V-16.478.207, titulado “CAMBIOS
HISTOLÓGICOS AGUDOS CAUSADOS POR EL VENENO DE Tityus zulianus
(SCORPIONES, BUTHIDAE) EN RIÑONES DE RATONES C57BL/6”, ha sido aprobado
por los miembros del Jurado Evaluador, quienes lo han encontrado correcto en su contenido y
forma de presentación; asimismo, declaran que los datos presentados son responsabilidad
exclusiva de los autores, en fe de lo cual firman:

Prof.
Miembro Principal

Prof.
Miembro Principal

Prof. Adolfo Borges-Strauss
Miembro Principal Asesor

Prof. Leonardo De Sousa
Miembro Principal Asesor

Profa. Rosibel Villegas

Coordinadora Comisión de Trabajos de Grado
Escuela de Ciencias de la Salud

MAYO 2012
RESUMEN
CAMBIOS HISTOLÓGICOS AGUDOS CAUSADOS POR EL VENENO DE Tityus
zulianus (SCORPIONES, BUTHIDAE) EN RIÑONES DE RATONES C57BL/6
Hurtado Boada, Wilfredo José; Silva Álvarez, Leonardo José y Velásquez González, Adriana
de los Ángeles. Asesores: Borges-Strauss, Adolfo y De Sousa, Leonardo. Laboratorio de
Toxinología, Grupo de Investigación en Toxinología Aplicada y Animales Venenosos, Escuela
de Ciencias de la Salud, Núcleo de Anzoátegui, Universidad de Oriente.
En ratones hembras C57BL/6 se administró por via intraperitoneal una DL50 de veneno de
escorpión T. zulianus, equivalente a 14,13 µg.g-1 de ratón. Luego fueron evaluados durante
sesenta minutos, obteniendo una frecuencia de sobrevivencia de 50% (n = 2). El curso
temporal de aparición de los signos de toxicidad aguda experimental inducida por el veneno se
inició con hiperactividad seguida de sialorrea escasa y posteriormente piloerección. En el
espectro medio de toxicidad, moderadamente grave se observó sialorrea abundante, temblores
generalizados, defecación pastosa, convulsiones y signo de Straub; seguidamente
bradipnea/apnea e hipotonía del tren anterior y finalmente la muerte o sobrevivencia de los
animales. Los ratones sobrevivientes fueron sacrificados para evaluar los cambios histológicos
en el tejido renal causados por efecto tóxico del veneno de T. zulianus sobre los riñones.
Los animales tratados con el veneno de T. zulianus presentaron alteraciones histológicas del
parénquima renal. Cambios degenerativos generalizados, tanto en corteza como médula renal.
Los corpusculos renales presentaron capilares dilatados con material fibroso en la capsula de
Bowman; la cual se observó aumentada de tamaño con engrosamiento de la lamina parietal.
Los túbulos distales mostraron algunos cambios degenerativos. Los contorneados proximales
estuvieron poco afectados, conservando su ribete en cepillo. No se observó respuesta
inflamatoria.

AGRADECIMIENTO
iii
A la Universidad de Oriente y Escuela de Ciencias de la Salud, Núcleo de Anzoátegui, por ser
nuestra segunda casa y brindarnos la oportunidad de formar parte de su gran Comunidad
Académica.
Al Laboratorio de Toxinología y Grupo de Investigación en Toxinología Aplicada y Animales
Venenosos, Secciones de Fisiología, Bioquímica y Farmacología, Departamento de Ciencias
Fisiológicas, Escuela de Ciencias de la Salud, Núcleo Anzoátegui, por permitirnos el
desempeño y elaboración de nuestro Trabajo de Grado.
A nuestros tutores Dr. Adolfo Borges-Strauss y Dr. Leonardo De Sousa por su dedicación,
colaboración, apoyo, paciencia, sabiduría, conocimientos, inteligencia y pedagogía en la
elaboración de nuestro proyecto de investigación.
A la Dra. Iraida Daboin por su incalculable ayuda en el desarrollo de este trabajo.
A la Dra. María Josefina Moreno de Marval por su especial colaboración en la culminación de
esta tesis.
Al personal de apoyo, Profesores Mercedes Matos, Aleikar Vásquez-Suárez y Stefano Bónoli,
Laboratorio de Toxinología, Grupo de Investigación en Toxinología Aplicada, Secciones de
Bioquímica y Fisiología, Departamento de Ciencias Fisiológicas, Escuela de Ciencias de la
Salud, Universidad de Oriente, Núcleo Anzoátegui.
Este trabajo fue parcialmente financiado por el Fondo Nacional de Ciencia, Tecnología e
Innovación (FONACIT) a través del Proyecto de Investigación en Red Nacional de
Producción de Antivenenos Nº 2007000672: Subproyecto 1, “Caracterización epidemiológica
de los envenenamientos ofídicos y escorpiónicos en Venezuela, con taxonomía de las especies
asociadas y bancos de venenos” y Subproyecto 2, “Bioensayos para el estudio de la diversidad
de toxinas de la fauna venenosa del país”, de los cuales esta propuesta forma parte.
A todas aquellas personas que de una u otra forma contribuyeron en la realización del presente
trabajo, nuestros agradecimientos con mucho aprecio. Fueron días de angustias, noches de
desvelo; pero al final lo logramos.

Wilfredo José Silva Álvarez. RESUMEN DEDICATORIA DEDICATORIA DEDICATORIA AGRADECIMIENTOS LISTA DE TABLAS LISTA DE FIGURAS iii iv v vi vii viii ix vii INTRODUCCIÓN JUSTIFICACIÓN OBJETIVOS General Específicos MATERIALES Y MÉTODOS Fuente del veneno de escorpión Extracción y purificación parcial del veneno Designación de una DL50 como controlada del veneno de Tityus zulianus Evaluación de los signos de toxicidad aguda experimental y su curso temporal de aparición Descripción de los cambios histopatológicos agudos en riñones de ratones C57BL/6. causados por la inyección intraperitoneal del veneno de Tityus zulianus RESULTADOS Curso temporal de toxicidad aguda experimental Hallazgos histológicos Descripción histológica del tejido renal posterior a la inyección de una DL50 del veneno de Tityus zulianus en ratones de la cepa C57BL/6 DISCUSIÓN Cepa C57BL/6 como modelo funcional para evaluar los venenos de escorpiones del género Tityus Cambios histopatológicos encontrados en el riñón de los ratones hembra C57BL/6 Alcances de los resultados y su contribución a la elaboración del mapa de letalidad de la escorpiofauna venezolana de importancia médica CONCLUSIONES 1 6 7 7 7 8 8 8 9 10 11 12 12 15 17 21 21 21 26 27 .Hurtado Boada. Adriana de los Ángeles ÍNDICE Pág. Leonardo José Velásquez González.

2009). 25 . 1 Comparación de los cambios histológicos agudos observados en riñones de ratones C57BL/6 inyectados con una DL50 del veneno de Tityus zulianus (este trabajo) y una DL50 del veneno de Tityus discrepans (Salomón.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 28 LISTA DE TABLAS Pág.

por vip. con el veneno de Tityus tenuicauda mostrando algunos signos de toxicidad aguda 14 4 Tejido renal correspondiente a un ratón control C57BL/6 15 5 Sección de corteza renal correspondiente a ratón control C57BL/6 16 6 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus 17 7 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus 18 8 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus 19 9 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus 20 10 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus nororientalis 23 11 Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus nororientalis 24 9 . 1 xiii Determinación de la dosis letal cincuenta (DL50) del veneno de Tityus zulianus por vip en ratones de la cepa C57BL/6 2 Curso temporal de aparición de los signos de toxicidad aguda experimental inducidos por el veneno de Tityus zulianus administrado por vip en ratones C57BL/6 13 3 Comparación de un ratón C57BL/6 control con uno sobreviviente inyectado.LISTA DE FIGURAS Pág.

Borges y De Sousa. 1996.INTRODUCCIÓN Los escorpiones pertenecen al Phylum Arthropoda. 1989). 2009. 2000. islas del Caribe y Suramérica hasta el norte de Argentina) han producido casos graves y fatalidades.. Este orden está conformado por 20 familias agrupando más de 1500 ix especies (Prendini y Wheeler. en el continente americano. 2005). 1998. al mismo tiempo. debido a que su veneno es capaz de provocar la muerte en humanos (Lourenço y Cuellar. 1995. . De Sousa y col. solo cinco están presentes (Buthidae. Chactidae. 2005). 2007) representando un problema de salud pública en México (Dehesa‐ Dávila. Así. 2009. 1999. Borges y col. especialmente en niños. De Sousa y col. dos géneros de importancia clínico‐epidemiológica. incluyendo 17 géneros y 202 especies descritas hasta el año 2008 (Rojas‐Runjaic y De Sousa.. debidos a envenenamiento escorpiónico (Borges.. 1996).. 2004) y Venezuela (Borges. algunos taxa pertenecientes a Centruroides Marx (México y sureste de Estados Unidos de América) y Tityus Koch (parte de Centroamérica. 2002.. Lourenço y col.. de las 20 familias existentes en el Orden Scorpiones (Prendini y Wheeler. 2006. 2006). Hemiscorpiidae y Scorpionidae). la cual cuenta con 80 géneros. 2000. En este territorio. Clase Arachnida. Brasil (Biondi‐Queiroz y col. 1996). tiene la mayor distribución geográfica mundial y. 2006. posee las especies de mayor importancia médica.. 2010a). 1996. 2007. Spirandeli-Cruz. Colombia (Otero y col. 2000.. Borges y De Sousa. 2009). Biodi-Queiroz y col. Euscorpiidae. De Sousa y col.. Gómez y col. Otero y col... La familia Buthidae. Gómez y Otero. Borges y De Sousa. 2000. Dentro de los bútidos existen. De Sousa y col. Saldarriaga y Otero. 1996. Borges y De Sousa. Venezuela es uno de los países de Sur América con mayor incidencia de escorpionismo (Borges y De Sousa. 1996. De Sousa y Borges.. Orden Scorpiones (González-Sponga.

De Sousa y col. pittieri González‐Sponga. De Sousa y col. once han sido incriminados como responsables de accidentes graves y/o fatales.. nororientalis González‐Sponga. De Sousa y col.. 1999. De Sousa y col. González‐Sponga 1996. 2008a. T. caripitensis Quiroga et al. De los 58 Tityus venezolanos. 1996. quirogae De Sousa et al. 1995. 2006). occidente del estado Zulia). es el más diverso. 2010b). valerae Scorza (Región Andina y sur del Lago de Maracaibo). T. en las regiones más densamente pobladas del país: T.. T. Borges y De Sousa 2006.. 2005. De Sousa y col. De Sousa y col. 2008). T.... en el Macizo Coriano). 2000) y de comprobada trascendencia en el país (Mota y col. 1 falconensis González‐Sponga (Región Centro‐Occidental. T. 1997. Rojas‐Runjaic y Becerra. isabelceciliae González‐Sponga. 2010a).. De Sousa y col. con 58 especies (Borges y De Sousa 2006. 1994. Guinand y col. Borges y col.. 2007. De Sousa y col.. T. perteneciente a la familia Buthidae (Fet y Lowe.. breweri González‐Sponga (Borges y col. Rojas‐Runjaic y De Sousa 2007. discrepans Karsch (Región Centro‐ Norte Costera). Porras y col.. El género Tityus. 2 2004.... Mejias y col. . 2000. a los cuales se suma recientemente T.b).. neoespartanus González‐Sponga (Región Nororiental e Insular) (Borges y De Sousa. 2002. T. T. Rojas‐Runjaic y Becerra 2008. T.. y T. De Sousa y col. 1994. Borges y col..2 2007. perijanensis González‐Sponga (Sierra de Perijá. 2007. zulianus González‐Sponga. 2006.

2009). 2010. 3 En general. durante el día se ocultan en sitios oscuros y en una variedad de microclimas. 2001. Monagas. Trujillo. y. (6) la Deltana (estado Delta Amacuro). Clínicamente.. Las consecuencias clínicas seguidas del envenenamiento humano por Tityus dependen de la especie de escorpión involucrada (Borges y col. GonzálezSponga. Estas características condicionan un incremento del posible contacto con el hombre. 2003). De Los Ríos. Trujillo y zona sur del lago de Maracaibo. 2000. Miranda. insuficiencia . Vargas y Distrito Capital). 1997.Existen estados potencialmente peligrosos como Anzoátegui. estados Miranda. Carabobo. predominan los signos y síntomas colinérgicos y en la esfera cardiovascular el tono adrenérgico: en los casos graves el tono adrenérgico evoluciona a la instalación de tono colinérgico (indicando mal pronóstico). Monagas y Sucre.. Sucre. Mérida. Gómez y col. (4) la macroregión Nororiental [conformada por los estados Anzoátegui. Lara y Distrito Capital (Borges. en especial con los niños. Falcón. en el envenenamiento por escorpiones.. por lo cual se desarrolla la complicación más temible (por ser eventualmente irreversible) que es el desarrollo de bradiarritmias. (3) la Centro-Norte-Costera (norte de los estados Carabobo y de Aragua. 2005). Mérida. mientras que en la noche salen a capturar su alimento (Manzanilla y De Sousa. Táchira.. 1996. finalmente (7) la GuayanoAmazónica. (2) la Centro-Occidental (estados Lara y Falcón). De Sousa y col. 2006. 2010. los escorpiones poseen mayores hábitos nocturnos que diurnos. De Sousa y colaboradores (2000) y Borges y De Sousa (2006) han sugerido la existencia de grandes áreas (macroregiones) endémicas de escorpionismo debidas al género Tityus: (1) la Andina (estados Táchira.. 1996. 2000). abarcando los estados Amazonas (Subregión Amazónica) y Bolívar (Subregión Guayanesa). Gómez y Otero. 2004a). (5) la Serranía de Perijá (estado Zulia). abarcando el macizo Oriental (sistema montañoso de Paria y la serranía de Turimiquire. Gómez y col. 2007.. De Sousa y col. En el hábitat domiciliario humano se localizan en sitios equivalentes a los de sus refugios en la naturaleza (Reyes-Lugo y Rodríguez-Acosta. De Sousa y col. con sus áreas de piedemonte) e Insular (estado Nueva Esparta). Zulia. y fundamentalmente al inicio de la estación lluviosa (Machado-Allison y Rodríguez-Acosta. Otero.

. cuya estimulación determina la producción. entre 6 500 y 9 000 de masa molar (Borges y De Sousa.. De Sousa y col. 2009).. la coagulopatía intravascular diseminada con hemorragia pulmonar bilateral puede presentarse como causa de muerte (De Sousa y col. consiste en una mezcla de compuestos peptídicos de baja masa molar. 2004a. de los neurotransmisores acetilcolina y noradrenalina. Borges y col. La composición del veneno de los escorpiones es compleja. Borges y col. 2006. 1997.. 1997. Este último. 2007).. 2004b. Becerril y col. Raramente puede manifestarse como un cuadro neurológico grave (cursando con afasia y hemiparesia. 2005). 2006b). Borges y col. 2006b.. La administración precoz del antiveneno disminuye la posibilidad de instalación de manifestaciones cardiovasculares graves (Borges y De Sousa.. Barona y col. 1995. 2006. comprende los sistemas nerviosos simpático y parasimpático. Excepcionalmente.. Borges y Rojas-Runjaic. Harvey y col.cardiaca congestiva con edema agudo de pulmón y shock cardiogénico intratable (especialmente aquellos pacientes que no reciben a tiempo el tratamiento específico con el suero antiescorpiónico) (Mazzei de Dávila y col. siendo éstos sus blancos de acción molecular (Borges y col. 1998. Tsushima y col. Arocha‐Sandoval y Villalobos‐Perozo. respectivamente. una elevada cantidad de aminoácidos aromáticos y la ausencia de metionina.. Estas proteínas constituyen uno de los compuestos más potentes que se han aislado del veneno de estos organismos y son herramientas esenciales para entender la dinámica de los canales iónicos. 2003).. tanto en humanos. Leipold y col. El sistema nervioso en vertebrados es el principal blanco de las toxinas escorpiónicas y se divide en: Sistema Nervioso Central y Sistema Nervioso Autonómico o Periférico. 2002. Borges y col. como en animales de experimentación. 1974) o diabetes tóxica (Ghersy de Nieto y col.. a nivel de sus terminaciones pre y post-ganglionares. se atribuye principalmente a las proteínas básicas que 4 contienen entre 58 y 78 aminoácidos unidos por cuatro puentes disulfuro.. o como un accidente cerebrovascular isquémico con déficit motor o una polineuropatía tóxica) (De Sousa y col. o como miocarditis (López‐Nouel y Trejo‐Bastidas. Su toxicidad.. 2008).. cuya acción modula el ritmo .. 2004). 1999.. Borges y col. 2007. 2006. 1990.. 2006a. Borges y col.

2006). Los datos de la evaluación de la pancreatotoxicidad inducida por Tityus zulianus en ratones BALB/c. las regiones Nororiental y Andina poseen el más alto nivel de mortalidad. Borges y Rojas-Runjaic. Tsushima y col. Borges y col. 2004a... 1999.. 1999). Becerril y col. en Venezuela. lo que en consecuencia produce tal liberación de neurotransmisores (Possani y col. Actualmente. y en el Laboratorio de Toxinología Grupo de Investigación en Toxinología Aplicada y Animales Venenosos (GITAAV). Borges y col. 2008). y particularmente el estado Mérida. 5 De las siete macroregiones endémicas de escorpionismo identificadas en Venezuela. 2004. Facultad de Medicina. 2004a). Universidad Central de Venezuela (UCV). 2006b. Instituto de Medicina Experimental. se estudia la diversidad de toxinas producidas por el género Tityus.. 1990. Los componentes más letales de los venenos de escorpión de importancia médica actúan a nivel de las membranas de los tejidos excitables. 1999 . encabeza la casuística nacional de fatalidades por escorpionismo. 2007.. se optimiza un método para determinar la actividad biológica del veneno de varias especies de escorpiones. donde prevalece la especie Tityus zulianus (De Sousa y col.. produciendo despolarización sostenida a consecuencia de un aumento en la permeabilidad para Na+ y K+. Becerril y col. Borges y col. 1997... 1995.. Borges y De Sousa. en el Laboratorio de Biología Molecular Sección de Biomembranas. Universidad de Oriente. 2000.. La región Andina. Borges y col. Harvey y col. El envenenamiento por Tityus zulianus puede producir paro respiratorio y la muerte por edema agudo de pulmón (Borges y De Sousa. los cuales pueden estar relacionados con las complicaciones respiratorias asociadas al cuadro clínico del envenenamiento por Tityus zulianus (Borges y col. Núcleo de Anzoátegui. 2006)... .. Barona y col.. revelaron la presencia de componentes con elevada toxicidad a nivel pancreático de estos mamíferos. 1998. Barona y col. Borges y col.fisiológico de los tejidos inervados por ambos sistemas (Borges y col. 2004b. 2006..

En gran parte de la macrorregión endémica de escorpionismo en el piedemonte andino del lago de . adicionalmente se localizan varias especies de Tityus de relevancia médica por ser los responsables de envenenamientos humanos graves asociados fundamentalmente a complicaciones del sistema cardiorrespiratorio (Borges. 1996. 2008. Borges y De Sousa. Machado-Allison y RodríguezAcosta. 2009. se utilizaron los órganos de ratones hembra de la cepa C57BL/6.. 2008). 2006. ubicado fundamentalmente en la franja norte del país. De Sousa y Borges. De Sousa y col. 2010a). como dosis controlada del veneno de Tityus zulianus. El escorpionismo es de carácter endémico y un problema de salud pública regionalizado.... en ella. 2006. 2000. Para tal fin. De Sousa y col. causados como efecto tóxico del envenenamiento agudo experimental con el veneno de Tityus zulianus (macroregión Andina). donde se sitúa una alta densidad poblacional humana y. 2007.. 1996. 6 JUSTIFICACIÓN El veneno de los arácnidos amerita interés médico y de investigación en nuestro país (Borges.Este estudio tuvo como objetivo determinar los posibles cambios histopatológicos in vivo en riñones de ratones de la cepa C57BL/6. 2000. Kiriakos y col. Borges y col. Borges y De Sousa. De Sousa y col. previamente inyectadas por vía intraperitoneal con una DL50 determinada (en trabajos previos) por el método secuencial de Dixon y Mood (1948) modificado por Sevcik (1987) en ratones hembra C57BL/6 (Cova. 2009). 1997. Borges y De Sousa.

como dosis controlada. por lo cual. 7 OBJETIVOS Generales Evaluar los cambios histológicos agudos en riñones de ratones hembra.. . el estudio de su veneno adquiere trascendencia para establecer el cuadro de toxicidad de los escorpiones de importancia médica en el país. El desarrollo de este trabajo se justificó con base en la inexistencia de investigaciones experimentales previas sobre la evaluación de alteraciones histológicas agudas desarrolladas en tejido renal de ratones C57BL/6. como consecuencia del efecto tóxico del envenenamiento agudo experimental con el veneno de Tityus zulianus. Por este motivo fue de gran interés para el Laboratorio de Toxinología del GITAAV. Determinar la DL50. la realización del presente proyecto.Maracaibo se distribuye Tityus zulianus (De Sousa y col. Borges y De Sousa. del veneno de Tityus zulianus para la cepa de ratón C57BL/6. de la cepa C57BL/6. inyectado por vía intraperitoneal. en la adquisición de un valioso cuerpo de información en el área histopatológica que permitiría comprender de forma integral el escorpionismo en la región centro-norte-costera venezolana. 2006). 2000. Específicos 1. causados como respuesta de toxicidad aguda experimental a una dosis controlada del veneno de Tityus zulianus.

Evaluar. 8 METODOLOGÍA Fuente del veneno de escorpión Para la ejecución de la presente investigación se capturó la especie Tityus zulianus en la localidad de Santa Cruz de Mora y sus alrededores (8º22´N. Durante el día los escorpiones fueron localizados bajo troncos. T. en el interior de troncos en proceso de descomposición y en la base de plantas de cafeto (Coffea arabica). inducidos como efecto tóxico de la inyección intraperitoneal de una dosis controlada de veneno de Tityus zulianus. 3. municipio Antonio Pinto Salinas. en la cepa de ratón C57BL/6. estado Mérida. piedemonte andino del lago de Maracaibo. en el interior de la corteza parcialmente desprendida de los árboles. discrepans y el de T. durante sesenta minutos. 622 msnm). Determinar los cambios histológicos agudos como efecto de toxicidad aguda experimental del veneno de Tityus zulianus en riñones de ratones C57BL/6. los signos clínicos de toxicidad aguda experimental y su curso temporal de aparición. ayudado con lámparas portátiles de luz ultravioleta. Durante la noche se siguió el procedimiento de captura similar. 71º43¨W. Comparar en la cepa C57BL/6 los cambios histológicos observados en tejido renal entre el veneno de Tityus zulianus. 4. Los escorpiones fueron . nororientalis.2.

fue suspendido en 1 mL de agua bidestilada y agitado en vortex (Super-Mixer®). transferido a tubos Eppendorf de 1. en agua bidestilada como paso previo a 9 la cuantificación de las proteínas contenidas en el veneno (De Sousa y col. Para detalles del método consultar a De Sousa y col. . para la extracción de su veneno. 2009). DC. Venezuela. 1/10 o 1/20. Instituto de Medicina Experimental.5 mL. Consecutivamente se centrifugó a 14 000 g (Labnet para tubos Eppendorf®. modelo Z180M) por 20 minutos para separar restos celulares de la fase soluble que contiene las proteínas con actividad farmacológica. Sección de Biomembranas. con alimentación e hidratación ad libitum. fue determinada (en trabajos previos) por el método secuencial de Dixon y Mood (1948) modificado por Sevcik (1987) en ratones hembra C57BL/6 (Cova. según técnica descrita por Shulov y Zlotkin (1969). fue liofilizado (a -50ºC y 80 mBar de presión) (Labconco-Freezer DrySistem/Freezone® 4. 2009. Caracas. Posteriormente. Se realizaron diluciones del veneno. Extracción y purificación parcial del veneno El veneno de los escorpiones se obtuvo mediante estimulación manual del telson. Facultad de Medicina...5) y almacenado a -20ºC hasta el momento de su uso. en condiciones de bioterio. 1/5. 2008) (Fig. en el Laboratorio de Biología Molecular de Toxinas y Receptores. Designación de una DL50 como dosis controlada del veneno de Tityus zulianus La DL50 del veneno de Tityus zulianus. 1). El veneno. Universidad Central de Venezuela.mantenidos en cautiverio. para una hora de experimentación.

22) μg. del veneno de Tityus zulianus.13 (13.g-1 de ratón. Determinación de la dosis letal cincuenta (DL 50) del veneno de Tityus zulianus por vip en ratones de la cepa C57BL/6. Evaluación de los signos de toxicidad aguda experimental y su curso temporal de aparición Se escogió al azar.13 µg. El resultado se presenta como la mediana y sus límites (entre paréntesis) para un 95% de confianza: DL50 = 14. cuatro ratones hembra de cada cepa C57BL/6.Figura 1. hidratados y alimentados ad libitum. Ratones hembra cepa C57BL/6 con pesos entre 17.72 g fueron inyectados vip con el veneno de Tityus zulianus. La flecha indica el punto de inflexión e inicio de los datos válidos para el cálculo de la DL50. En tal sentido.36-14. del lote existente. fueron observados meticulosamente durante los 60 minutos de experimentación y tabulados .g-1 de ratón. fueron inyectados por vía intraperitoneal con una DL50.58 y 22. adquiridas en el Bioterio del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC) y disponibles10en el área del Laboratorio de Toxinología. Los signos clínicos expresados como efecto de toxicidad aguda experimental inducida por la inyección intraperitoneal de la dosis controlada del veneno de Tityus zulianus. como dosis controlada. a cada uno de los cuatro ratones C57BL/6 se les administró una dosis de veneno de 14.

2009. por quince minutos.. durante tres días. Finalmente observados en microscopio de luz. Posteriormente se realizó su secado. los animales sobrevivientes fueron elegidos para evaluar los cambios histológicos agudos causados por el veneno de T. fueron sacrificados mediante dislocación cervical. causados por la inyección intraperitoneal del veneno de Tityus zulianus Una vez cumplido el tiempo de sesenta minutos de exposición al tratamiento. el tejido se fijó con xilol (solución 50%-50% v/v de alcohol-xilol) por 15 minutos. Se utilizaron animales testigo a los cuales se les administrará solución fisiológica en volúmenes similares a los del grupo experimental (De Sousa y col. en estufa. se procedió a la separación de los riñones (envenenados y controles) para colocarlos individualmente en cajetillas de inclusión para su posterior tratamiento. entre 50 y 55°C durante 20 a 30 minutos. zulianus. De Sousa y col. Posteriormente se deshidrataron con etanol. Posteriormente. y se fijaron mediante inmersión en formalina al 10% (v/v). Cada paso de deshidratación duró 30 minutos.cronológicamente. Descripción de los cambios histológicos agudos en riñones de ratones C57BL/6. Finalmente fueron incluidos en bloques de parafina para realizar los cortes. Las piezas se lavaron con agua corriente. iniciando al 70%. Similarmente se procedió con el ratón control. ácido peryódico de Shiff (PAS) o tricrómicro. . a concentraciones crecientes (v/v). 2010). luego dos períodos en xilol de 15 minutos cada uno. luego se dejaron a temperatura ambiente. 80%.. adicionalmente se registró el resultado final de sobrevivencia o muerte. para ello. de un espesor de 3 micras. para eliminar la formalina. previamente tratados con albúmina de Mayer. con microtomo. Luego de fijados los órganos. Una vez enfriados se procedió a fijar y colorear los cortes con Hematoxilina-Eosina (H-E). 95% y finalmente 100%. Seguidamente se practicó incisión en la línea medio esternal y abdominal y se extrajeron las vísceras en bloque. Los 11 cortes fueron colocados en portaobjetos rotulados.

en la cepa C57BL/6.12 RESULTADOS Curso temporal de toxicidad aguda experimental Luego de la exposición. En la figura 2 se presenta el curso temporal de aparición de los signos de toxicidad aguda experimental inducidas por el veneno de T. se obtuvo una frecuencia de 50% (n = 2) de sobrevivencia. durante sesenta minutos. La toxicidad . hembra. como dosis controlada. al tratamiento conformado por una DL 50. zulianus en ratones.

Los signos antes de morir fueron los periodos de bradipnea/apnea (con cianosis peribucal). Algunos efectos relevantes de toxicidad aguda se presentan en la figura 3 (fotografías cortesía de Cornejo. zulianus sobre los riñones. Los ratones que evolucionaron al exitus letalis presentaron apnea prolongada y finalmente convulsiones con parálisis espástica. convulsiones e hipotonía muscular. la toxicidad grave se expresó como hipotonía del tren posterior seguidamente de bradipnea/apnea y finalmente la muerte (precedida por exoftalmos y convulsiones tónico-clónicas con parálisis espástica) o sobrevivencia de los animales.se inició con hiperactividad seguida por taquipnea. moderadamente grave. Los ratones sobrevivientes fueron sacrificados para evaluar los cambios histológicos causados por el efecto tóxico del veneno de T. ocurrió secreción ocular. secreción ocular y defecación pastosa). Luego distensión abdominal. evacuación pastosa y limpieza de nariz/boca. convulsiones y disnea (caracterizada por respiración forzada abdominal). signo de Straub. signos de estimulación muscarínica (sialorrea. marcha atáxica y sialorrea abundante. En todos los casos. En el espectro medio de toxicidad. Otros signos observados: Signo de Straub. . piloerección e inicio de sialorrea. 2008): facies tóxica y piloerección.

13 Figura 2. 14 . Curso temporal de aparición de los signos de toxicidad aguda experimental inducidos por el veneno de Tityus zulianus administrado por vip en ratones C57BL/6.

a b c d e f Figura 3. (c) y (d) Secreción ocular evidente. 2008). Comparación de un ratón C57BL/6 control con uno sobreviviente inyectado. con el veneno de Tityus tenuicauda mostrando algunos signos de toxicidad aguda. 15 Hallazgos histológicos . nótese exoftalmo bilateral (e) Hipotonía. (f) Defecación líquida (tomado de Cornejo. (b). por vip. (a) Ratón testigo (sano). Estas fotos se obtuvieron después de administrar una DL 50 del veneno de Tityus tenuicauda. defecación pastosa y distensión abdominal). En (c y d).

mostrando la integridad de las asas de Henle. 10x. 40x. vasos sanguíneos y tejido intersticial. 10x. Corteza renal. H-E. Sección de médula renal. a b c d Figura 4. (b).Las figuras (4 y 5). (c). todos descansando 16 sobre una membrana basal continua PAS positiva. caracterizada por la integridad de los corpúsculos renales. muestran imágenes de tejido renal normal. observese las caracteristicas nucleo-citoplásma y la presencia del ribete en cepillo de los túbulos contorneados proximales. 40x. . Médula renal. H-E. Tejido renal correspondiente a un ratón control C57BL/6. Notese túbulos renales mostrando la integridad de su pared. (d). (a). de ratones C57BL/6. H-E. túbulos.

claramente PAS positiva. Sección de corteza renal correspondiente a ratón control C57BL/6. Detállese las caracteristicas normales de los corpúsculos y túbulos renales. Coloracion PAS 100x. Observese la nitidez de las hojas parietal y visceral de la cápsula de Bowman y la membrana basal.Figura 5. 17 .

zulianus. Figura 6.Descripción histológica del tejido renal posterior a la inyección de una DL 50 de veneno de Tityus zulianuss en ratones de la cepa C57/BL6 En el tejido renal de los ratones C57/BL6 inyectados con una DL 50 de veneno de T. 250x . En el tejido renal no se observó inflamación ni necrosis (Figuras 6 a 9). Dilatación de la capsula de Bowman con esclerosis del tejido glomerular. se observó congestión glomerular acentuada con cambios isquémicos tubulares leves. Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus. El túbulo contorneado proximal mantiene su ribete en cepillo. fibrosis intersticial leve con atrofia tubular focal. El túbulo contorneado distal muestra alteraciones celulares leves con pérdida de elementos nucleares compatibles con 18 degeneración celular. PAS. dilatación y ectasia vascular moderada.

Gomérulos dilatados. Dilatación de la capsula de Bowman. Túbulo contorneado proximal con menor daño. PAS. (b). 400x. 19 . Túbulo contorneado distal con daños más acentuados. fundamentalmente en la capa media. 100x. 400x. Depósitos de material hialino. Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus. H-E. Degeneración intersticial intertubular. (d). con membrana basal (hoja parietal) engrosada. (a). vaso sanguíneo renal mostrando pared disgregada. PAS. PAS 400x.a b c d Figura 7. Panorámica de corteza renal. (c).

400x. 100x. Túbulos renales con discreta alteración de la estructura tubular. 100x. (d). Dilatación de la capsula de Bowman con fibrosis glomerular. (a). Glomérulo sustituido por material fibroso. (c). Tricrómico. Fibrosis intersticial. (b). vaso sanguíneo con congestión vascular. 400x.a b c d Figura 8. Tricrómico. Tricrómico. Glomérulo sustituido por material fibroso. 20 . Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus zulianus. Tricrómico. vaso sanguíneo mostrando congestión vascular.

(a). (b). Asas gruesas mantienen sus características aparentemente normales. Médula renal. Capilares glomerulares sustituidos por tejido fibroso. Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL50del veneno de Tityus zulianus.a b c Figura 9. capilares congestionados. 400x. Panorámica de médula renal. 250x. Tricrómico. 100x. Tricrómico. (c). Tricrómico. 21 .

07 μg.g-1 de ratón) que el obtenido en ratones hembra NMRI (DL50 = 28. Cambios histopatológicos encontrados en el riñón de los ratones hembra C57BL/6 En este estudio los ratones C57BL/6 inyectados con una DL 50 del veneno de T. en lo posible.34 veces menor en C57BL/6 que en NMRI y 4. incorporando elementos clínicos (acompañados del curso temporal de toxicidad aguda) y de ensayos de letalidad.18 μg. Al respecto.43 μg. nororientalis. zulianus mostraron diversos cambios histopatológicos en el parénquima renal en comparación con los controles. 22 . demostraron respectivamente cambios histológicos causados por el veneno de T. nororientalis en tejido cardiaco. fue significativamente menor en ratones C57BL/6 (DL50 = 8.DISCUSIÓN Cepa C57BL/6 como modelo funcional para evaluar los venenos de escorpiones del género Tityus Hurtado y colaboradores (2008) demostraron mayor sensibilidad de la cepa C57BL/6 al efecto tóxico del veneno de T. los correlaciona con las alteraciones histopatológicas en el parénquima renal causadas por el veneno de T.g-1 de ratón). Las alteraciones fueron más evidentes en algunos de los componentes celulares y en la arquitectura general del tejido. entre las tres cepas. cualitativamente con daños más severos en los tejidos provenientes de las cepas homocigotas (C57BL/6 y BALBc) que de la heterocigota albina NMRI. Este trabajo ratifica los hallazgos anteriores y. indicaron que el índice letal cincuenta. zulianus. La relación DL50/DL50. y éste. menor que el obtenido en los BALBc (DL 50 = 40. Por los resultados anteriores. Posteriormente. Salomón (2009) y Laucho y López (2011). del veneno de esta especie del oriente venezolano. los autores proponen la utilidad de la cepa de ratones C57BL/6 como modelo funcional de bioensayo para evaluar los venenos de escorpiones venezolanos. Albornoz y colaboradores (2009).g-1 de ratón). sugiere que ésta es 3.75 veces más reducida que en BALBc. renal y pulmonar.

se establecería diferencias en toxicidad histológica entre los venenos de T. en la C57BL/6. la necrosis celular fue más acentuada. especialmente con la presencia de material hialino en el área subyacente al endotelio arterial. se evidenció desprendimiento de la pared con signos de necrosis y (3) degeneración de los vasos venosos y arteriales. mostró mayor afectación degenerativa que los encontrados en este trabajo con el veneno de T. en apariencia. especialmente relacionadas con el ión calcio asociado a sistemas de transporte activo. Los resultados hallados en este trabajo confirmarían los hallazgos de Borges y colaboradores (2004a). zulianus posee mayor poder pancreatotóxico que el de T. se presenta la comparación de los cambios histológicos agudos observados en riñones con el veneno de T. sugiriendo mecanismos especie-específicos relacionados con la especie. demostró que. (2000) demostraron que los daños ultraestructurales inducidos por el veneno de T. Adicionalmente.Salomón (2009) en los ratones C57BL/6 observó perdida de la citoarquitectura tanto a nivel de la corteza como de la médula con afectación de los tres elementos (Figuras 10 y 11): (1) en los glomérulos los capilares se observaron congestionados. Los resultados observados por Salomón (2009) indicarían que el tejido renal de los ratones C57/BL6 inyectados con una DL50 de veneno de T. nororientalis. (2) en los túbulos contorneados (proximales y distales) y en los colectores. en las cepas homocigóticas (BALBc y C57BL/6) y. discrepans. discrepans. nororientalis sugiriendo tal mecanismo especie-específico. discrepans y T. En la tabla 1. nororientalis (Salomon. 2009) y con el de T. fueron causados en apariencia por alteraciones iónicas. 23 . en parte. Rodríguez-Acosta y col. discrepans. En este caso. observados en glándula suprarrenal de ratones C57BL/6. particularmente. discrepans (evidenciados en esta investigación). aun cuando los daños microscópicos encontrados en el tejido renal de las cepas estudiadas fueron similares. quienes demostraron que el veneno de T.

Sección de corteza renal. Sección de corteza. Dilatación glomerular. H-E. 24 .a b c d Figura 10. H-E. pérdida de epitelio de algunos túbulos. (d). ruptura de otros. 40x. Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50 del veneno de Tityus nororientalis (Salomón. 100x. fragmentación citoplasmática y núcleos vacuolizados y rotos. (a). (b). 100x. (c). 10x. H-E. Imagen aumentada de la figura 10c. 2009). se observa la congestión de los capilares glomerulares con abundante celularidad. En los túbulos contorneados se observa la presencia de “gránulos rojizos” en el citoplasma celular. Los túbulos contorneados proximales y distales están caracterizados por pérdida de la arquitectura normal. Se observa con mayor detalle las alteraciones citoplasmáticas y nucleares de los túbulos renales descritos en la figura anterior. H-E. la mayoría de las células muestran cambios degenerativos severos.

la cual se caracteriza por la ausencia de fibras musculares normales. asi como la hialinización de la misma. Sección de médula renal mostrando asas de Henle con alteración en su epitelio. Tejido renal de ratón C57BL/6 inyectado con una DL 50del veneno de Tityus nororientalis (Salomón. H-E. 100x.a b Figura 11.Vista de una arteria observada en tejido renal de un ratón C57BL/6. 25 . 100x. Apréciese la degeneración de la pared arterial. 2009). la mayoría de ellos muestran sólo la silueta de los que fueron células de su pared. (a). (b). los cuales presentan pérdida de sus elementos celulares. H-E.

Depósitos de material hialino. túbulos necróticos. vip = 11. vacuolización nuclear y cromatolisis. discrepans. produjo alteraciones inmunohistoquímicas detectadas en la matriz extracelular de . Túbulos proximales con pérdida del ribete en cepillo. Tityus zulianus DL50. fundamentalmente en la capa media. Fibrosis intersticial (degeneración intersticial intertubular).g-1 de ratón Dilatación de la capsula de Bowman Todos los túbulos colectores y contorneados proximales y distales mostraron alteración de su citoaqrquitectura. en la túnica media se aprecian fibras musculares en degeneración con gran vacuolización. vip = 14.13 µg.Tabla 1. Degeneración del epitelio tubular. células con citoplasma fragmentado y núcleos con vacuolización y cromatólisis.22 µg. que fue más evidente en los túbulos contorneados distales.g-1 de ratón Dilatación de la capsula de Bowman con membrana basal (hoja parietal) engrosada y esclerosis del tejido glomerular. rotos e irregularmente descamados. 2009). Vaso sanguíneo renal mostrando congestión vascular y pared disgregada. inyectado por vía subcutánea. Túbulos renales con discreta alteración de la estructura tubular. Comparación de los cambios histológicos agudos observados en riñones de ratones C57BL/6 inyectados con una DL50 del veneno de Tityus zulianus (este trabajo) y una DL50 del veneno de Tityus discrepans (Salomón. La coloración PAS demostró el engrosamiento de algunas membranas basales y el contenido de los túbulos fue PAS negativo lo que sugiere que su contenido era material de desecho y no producto de la secreción D´Suze y colaboradores (2004) demostraron que el veneno de T. El túbulo contorneado proximal con menor daño mantiene su ribete en cepillo. El túbulo contorneado distal con daños más acentuados muestra alteraciones celulares leves con pérdida de elementos nucleares compatibles con degeneración celular. Tityus discrepans DL50. tal deterioro se caracterizó por fragmentación del citoplasma. Presencia de “gránulos rojizos” en el citoplasma de las celulas epiteliales tubulares. Ruptura de la capa íntima de los vasos sanguíneos.

estos resultados vienen a reforzar los criterios que contribuyen con la elaboración del mapa de letalidad de las especies de Tityus propuesto por Borges (1996) y. incorporando nuevos elementos de evaluación histopatológica a los componentes clínicos (acompañados del curso temporal de toxicidad aguda) y de ensayos de letalidad al conjunto de evidencias moleculares. hígado.26 piel.. para una demarcación del país en “Provincias Toxinológicas” planteada por Borges y De Sousa (2006) y por Borges y colaboradores (2010b) para una comprensión integral del escorpionismo en el país. Da Camara y col. (2008). Alcances de los resultados y su contribución con la elaboración del mapa de letalidad de la escorpiofauna venezolana de importancia médica De manera característica. Los autores relacionaron estos cambios con la liberación de citoquinas. propone la utilidad de la cepa de ratones C57BL/6 como un excelente modelo funcional de bioensayo para evaluar los venenos de escorpiones venezolanos. posiblemente. intestino. 2006a. bazo y pulmón de carneros. Las alteraciones se caracterizaron por infiltración celular (neutrófilos. (2008) y Hurtado y col. inmunológicas. causados por el veneno de otras especies de escorpiones. bioquímicas y fisiológicas ya disponibles que indican que los venenos de estos artrópodos son altamente complejos relacionados. Por lo pronto. En el sitio de inyección evidenciaron infiltración masiva neutrofílica alrededor de los nervios y vasos sanguíneos. con la liberación (en parte) de varios mediadores inflamatorios (tipo autacoides) como prostaglandinas (E2). páncreas. 27 . pero también supeditado de la cepa de ratón utilizada para evaluar la toxicidad de los venenos. principalmente las interleucinas 6. 2004b. especialmente en el lumen de las venas y vénulas localizaron agregación de masas de aspecto fibrinoide con signos de vasculitis. similarmente han asociado los cambios histopatológicos. el presente trabajo reconfirma que el síndrome del envenenamiento por escorpiones del género Tityus en vertebrados es especie-específico (Borges y col. monocitos y macrófagos). más recientemente. con sus variaciones estructurales y/o funcionales sugeridas por Cova (2008). Cova 2008). 8 y 10. Otros autores. Por lo cual. leukcotrienos (B4) y los tromboxanos (A2).

zulianus a una DL50. consistentes en ruptura de la túnica interna. 6. vacuolización e hialinización de la túnica media y en algunos casos se evidencio ligero infiltrado perivascular. 4. Las alteraciones consistieron principalmente en degeneración de los tres elementos básicos. glomérulos. 28 . En los vasos sanguíneos se evidenciaron alteraciones estructurales de su pared. Las manifestaciones colinérgicas predominaron en el cuadro neurotóxico agudo. produjo alteraciones histológicas en el tejido renal de los ratones de experimentación. El veneno de T.CONCLUSIONES 1. En los glomérulos renales se evidenciaron grandes signos degenerativos consistentes en ovillos capilares dilatados en su mayoría y amplias capsulas de Bowman con contenido fibroso en su interior 5. 2. En los ratones utilizados como control no se evidenció ninguna alteración histopatológica. 3. túbulos contorneados (distales) y vasos sanguíneos.

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