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Expresso Gentica

Organizao e transcrio procariotas


Dogma central da biologia molecular

A linguagem utilizada por DNA e RNA basicamente igual (4 letras), muda


apenas o suporte de informao (transcrio). A informao mantm-se.
De RNA para protena, a informao mantm-se mas a linguagem muda (4
letras para 20) traduo.
Crick assumiu que a traduo e transcrio em todas as clulas. Mas a
retrotranscrio s em ocasies especiais.
A transformao de DNA para protena no ocorre naturalmente (no foi
observado), apenas em manipulaes.

Classes de transferncia de informao


Geral: DNA DNA; DNA RNA; RNA Protena
Especial: RNA DNA; RNA RNA; DNA Protena
Desconhecido: Protena DNA; Protena RNA; Protena Protena
A infeo por pries consiste numa protena que infeta outras protenas, que se
tornam pries e saem da clula (objeo ao desconhecimento da replicao
protena protena embora a sequncia de aminocidos no seja alterada, apenas
se altera a forma). As protenas deixam de funcionar e formar aglomerados que
precipitam.
H dois tipos de traduo: RNA Protena e DNA Protena.

Observando a sntese de RNA


Os cidos nucleicos (ncleo) foram marcados radioactivamente. Passado algum
tempo, a radioatividade distribui-se por toda a clula. Assim os mRNA formados no
ncleo so traduzidos no citoplasma.
De 5 (fosfato) para 3 (hidroxilo)
Catalisada por RNA polimerases
Nos genes, apenas uma das cadeias serve para de molde para a sntese.

O RNA muito parecido com o DNA

cido ribonucleico (ribose)

cido desoxirribonucleico
(desoxirribose)
Uracilo
Timina
Cadeia simples
Cadeia dupla
O DNA tem estabilidade muito maior, devido ao excesso de cargas negativas em
torno do carbono 2 do RNA que pode quebrar a ligao fosfodister. O tempo de
vida do RNA pode ser muito curto, ao contrrio do DNA.

Caractersticas do RNA

Diferenas qumicas pequenas do DNA, mas grandes diferenas estruturais


O RNA tem capacidade de criar estruturas tridimensionais, ao contrrio do
DNA, devido estrutura em cadeia simples.

Diversidade estrutural: domnios estruturais ligados por domnios mais flexveis,


ligados a diferentes funes.

Expresso Gentica

Tipos de RNA
Todos os RNA so produzidos por transcrio de genes.

RNA codificante

Mensageiro (mRNA): genes que codificam protenas

RNA no codificante

RNA ribossomal (rRNA): RNA estrutural de ribossomas


RNA de transferncia (tRNA): adaptadores que ligam aminocidos a mRNA
durante a traduo
RNA regulador pequeno

Tipos de RNA regulador pequeno

RNA nuclear pequeno (snRNA): com protenas forma snRNPs


MicroRNAs (miRNA)
RNA de transferncia pequeno (siRNA): formam RNA em cadeia dupla, que
se separa sendo uma das cadeias complementar ao mRNA, ficando este em
cadeia dupla sendo destrudo ou impedindo-se a sua traduo: regulao da
expresso gentica.
RNA de nuclolo pequeno (snoRNAs): o nuclolo o local de montagem dos
ribossomas. Os snoRNAs fazem o processamento dessas protenas.

Riboswitches

RNAs que se ligam e desligam conforme a temperatura, o que permite


clula que haja apenas traduo quando est presente o parasita.

Ribozimas
Molculas com propriedades enzimticas (catalticas) com RNA (em vez de DNA).

Hiptese do mundo de RNA


Diz que os primeiros seres biolgicos se baseavam exclusivamente no RNA; o DNA e
as protenas surgiram depois.
Na transcrio no necessria a helicase. A DNA polimerase assegura a abertura
das cadeias.

O gene e o mRNA
A cadeia a partir da qual se faz a transcrio anti-sense. A outra sense, uma vez
que igual do RNA mensageiro formado.
O fim e o incio da transcrio e traduo so diferentes.

Controlo da transcrio

Mudanas ambientais
Genes on/off (capacidade de ligar e desligar)
Protenas que se adaptam a um novo ambiente (normalmente atravs da
transcrio)
o Muito importante para:
Expressar novos genes quando necessrio
Represso de genes quando no so necessrios
Conservar recursos de energia

Unidades de informao no DNA: genes


Gene: unidade hereditria que, aquando da transcrio, leva formao de uma
molcula de mRNA funcional.

Expresso Gentica

Procariotas
Genes relacionados so colocados linearmente e sequencialmente no DNA: operes
(lactose, triptofano). Uma molcula de mRNA linear sintetizada contendo
informao para a sntese de todas as protenas (policistrnico).

Eucariotas
Genes relacionados podem estar afastados ou em diferentes cromossomas. O
mRNA contm informao para uma nica protena (monicistrnico).
A informao de cada gene fragmentada em exes e separada por intres.
O RNA aps a transcrio possui intres e exes, mas aps o processamento para
mRNA s possui exes.

Modelo de opero de Jacob-Monod

Nem todo o DNA codificante, podendo ser regulador.


Reconhecimento de protenas reguladoras de transcrio dos genes
Estabelecimento de um sistema de controlo de transcrio de genes.

E.coli na glucose: baixa atividade de enzimas do catabolismo da lactose. Opero


inativo (cor branca)
Induo (modificao da qualidade ambiental para que a atividade de
um gene aumente)
E. coli na lactose: alta atividade do catabolismo da lactose. Opero ativo (cor
azul)

Opero lac

Genes estruturais: lacZ, lacY, lacA (esto a ser regulados regies reguladoras).
Regulador: d origem a uma protena que interfere na transcrio dos operes.
Enzimas induzidas na presena da lactose so codificadas pelo opero lac.
Lac I est fora do opero: produz o repressor.
H medida que a transcrio ocorre, d-se a produo de permeases que permeiam
a entrada de mais lactose, originando mais transcrio. Isto ocorre at que a
presena de grandes quantidades de -galactosidase faa com que toda a lactose
seja degradada, e o repressor volta a impedir a transcrio.
um sistema de regulao negativa, pois est dependente de uma protena
repressora (quando ativa reprime o sistema de transcrio).
Se ocorrerem mutaes no lacI, as protenas formadas no vo ser funcionais e o
repressor no funciona: expresso constitutiva.
A lactose o indutor e o substrato das enzimas (permease e -galactosidase).
Enquanto que o X-gal apenas substrato, que quando degradado d origem a um
composto azul.

Expresso Gentica

Com mutaes no lacZ, h transcrio mas forma-se um opero no funcional.


No plasmdeo no h transcrio uma vez que o repressor se liga. No cromossoma
com mutao h transcrio constante uma vez que o repressor no se liga. Assim
a mutao prefervel do que o estado selvagem, pois embora no haja produo
de protenas funcionais, h produo de protenas.
O operador apenas afeta a expresso dos genes na mesma molcula. Os
repressores do cromossoma no se ligam ao plasmdeo.
O IPTG reprime o repressor, havendo transcrio.

O modelo do opero de Jacob-Monod

Mutaes que atuam em cis afetam as sequncias de DNA ligando locais de


protenas que controlam a transcrio: cis-acting elements.
Mutaes que atuam em trans afetam as protenas reguladoras da
transcrio: trans-acting elements.
Elementos trans-acting ligam elementos cis-acting.

Expresso
Constitutiva: o gene est constantemente a ser transcrito.
Indutvel: o gene s transcrito na presena de um indutor. Em muitos casos, o
indutor o substrato das enzimas codificadas pelo opero (ex: lactose).
Repressvel: o gene est a ser transcrito at que uma molcula inibitria se liga.
Geralmente, o repressor o produto final da atividade de enzimas codificadas pelo
opero.

A transcrio o primeiro passo de regulao da expresso


A iniciao da transcrio ocorre atravs da interao entre a RNA polimerase e o
promotor.

RNA polimerase e o promotor

Encontram-se 2 regies (uma a -10 e outra a -35: regies consenso, que


atuam em cis e so locais de ancoragem de protenas envolvidas na
transcrio) onde se concentram mais alguns nucletidos do que nas
restantes regies.
A transcrio inicia-se na posio +1, normalmente com uma purina (G ou A)
A regio -10, ou caixa Pribnow, est presente na maioria dos promotores.

Num promotor, encontramos o incio da transcrio (+1), a caixa Pribnow (-10) e


outra regio consenso (-35).
A distncia entre duas sequncias consenso importante. Normalmente de 16-18
bp em 90% dos promotores.

Promotor procaritico
Importncia das mutaes
Mutaes up: aumenta o nvel de expresso do gene (transcrio). Correspondem
a mutaes que aumentam a homologia do promotor com a sequncia consenso ou
diminuem a distncia entre as regies -10 e -35 para 17bp.
Mutaes down: diminuem o nvel de transcrio dos genes. Correspondem a
mutaes que diminuem a homologia da sequncia do promotor com a sequncia
consenso ou aumentam a distncia entre as regies -10 e -35 para mais de 17bp.
Na regio -35
A RNA polimerase tem menor afinidade, mas quando se liga efetua a transcrio.
Mutaes down na regio -35 dificultam a ligao da RNA polimerase.

Expresso Gentica

Na regio -10
No afeta a formao do complexo RNA polimerase DNA mas dificulta o incio da
transcrio.
A afinidade da RNA polimerase para o promotor pode definir a frequncia de incio
da transcrio.
Promotores fortes: fazem com que sejam produzidas grandes quantidades de
RNA mensageiro por transcrio; h grande expresso do gene.
A sequncia consenso apenas terica, nos promotores procariticos, as
sequncias no so iguais s sequncias consenso.
A ligao in vitro de RNA polimerase a fragmentos de DNA como promotores
permitiram a caracterizao das suas sequncias: adiciona-se RNA polimerase a um
meio com DNA, ao qual se adiciona DNAse e verifica-se que apenas h corte nos
locais onde no h ligao entre o DNA e RNA polimerase.

DNase I footprinting
Aumentando-se a concentrao de RNA polimerase h cada vez menos cortes, logo
a pegada cada vez maior.

Promotor procaritico
Recuperao de um fragmento de 44 bp (-20 a +20).
Capacidade de sntese de RNA ~20 bp: fragmentos contendo a sequncia
envolvida na iniciao da transcrio.
Incapacidade de religar a RNA polimerase: fragmentos no contem a
sequncia reconhecida responsvel pela iniciao da ligao.

Mobilidade eletrofortica
Mobilidade eletrofortica alterada com a ligao a protenas: o DNA ligado a
protenas migra menos pois tem maior massa.
Podemos produzir anticorpos especficos que se ligam a uma protena, podendo
assim saber qual a protena que se ligou ao DNA. Com estes 3 componentes h
ainda menor mobilidade.

RNA polimerase
Muitas protenas envolvidas na incorporao de nucletidos no RNA, usam DNA
como template.
Iniciao e terminao da sntese de RNA requer protenas adicionais.

RNA polimerase em eucariotas e procariotas


Procariotas

1 tipo de RNA polimerase capaz de sintetizar todos os RNAs

Eucariotas

3 tipos de RNA polimerase

RNA polimerase procaritica


2 subunidades iguais, uma subunidade e muito parecidas, um fator sigma e
uma subunidade mega que assiste na montagem da holoenzima.

Subunidades (40 KDa)

Envolvidas na montagem do complexo proteico e ligao de ativadores


Codificadas por rpoA
Mutaes no rpoA diminuem a afinidade pelos promotores

Expresso Gentica

Subunidades (155 KDa codificada por rpoB) e (160 KDa codificada por
rpoC)

Envolvidas na atividade cataltica (centro cataltico)


As subunidades e , ao fazer a transcrio, ligam-se ao sigma para que a
RNA polimerase reconhea a sequncia (holoenzima)
Mutaes no rpoB e rpoC afetam todos os passos da transcrio

Fator (3-90 KDa)

Envolvido no reconhecimento de promotores.


Apenas se liga ao DNA quando est no complexo com 2

Complexo 2

Alta afinidade para qualquer sequncia de DNA

1. Polimerase (complexo 2) liga-se a qualquer DNA


2. Fator sigma destabiliza a ligao
3. Holoenzima (2) liga-se ao promotor. A transcrio s pode ser iniciada
pela holoenzima.

Fator sigma liberta-se aps a iniciao


O sigma mais um fator de iniciao da transcrio (reconhece o promotor), que se
liberta logo a seguir ao incio da transcrio, ficando disponvel para se ligar.
O complexo 2 liga-se ao DNA de forma no especifica. Apenas a holoenzima
capas de ligar estavelmente os promotores.

RNA polimerases simples


Alguns vrus sintetizam RNA polimerases simples, que reconhecem um pequeno
nmero de promotores, ao contrrio da RNA polimerase de E. coli (2) que
apresenta alta plasticidade: reconhece muitos promotores.

Transcrio
Iniciao
A holoenzima liga-se ao DNA formando o complexo closed. De seguida, ocorre a
desnaturao do DNA complexo open. Por vezes ocorre a iniciao abortiva
porque a DNA polimerase tem afinidade para o promotor e no se desliga,
sintetizando pequenas quantidades de DNA (tem de ocorrer o clearance do
promotor desligar).
Ao fim de 9 nucletidos sintetizados, o fator sigma liberta-se.

Alongamento
A bolha de transcrio move-se com a RNA polimerase.
Deslocando-se a bolha de transcrio formam-se superenrolamentos a montante
negativos (resolvidos pela topoisomerase) e a jusante positivos (resolvidos pela
girase).
A reao de alongamento ocorre dentro do stio cataltico da RNA polimerase (40
bp/segundo).
D-se um ataque nucleoflico pelo 3 OH da nova molcula de RNA formado para
com o -fosfato do nucletido-3-fosfatado. De seguida, a ligao fosfodister formase e o grupo pirofosfato libertado.
A sequncia de incorporao do nucletido trifosfatado ditada pelo template de
DNA.

Terminao
Ocorre quando a RNA polimerase encontra uma sequncia terminadora.
A incorporao de nucletidos termina.
Novo RNA formado liberta-se da RNA polimerase e do template de DNA
As cadeias reemparelham.

Expresso Gentica

Terminadores intrnsecos (no so protenas)


Sequncias palindrmicas (iguais para ambos os lados) ricas em G e C (que
formam ligaes fortes) inscritas no RNA mensageiro.
Chegando a este terminador, forma-se o gancho, que rico em A e T
(ligaes fracas) destabilizando a RNA polimerase
No so suficientes para a terminao.
Protena (rho)
Homohexamero (6 subunidades iguais)
Elevada processividade (ligao prolongada ao RNA)
Atividade de helicase (desfaz duplas hlices: dissocia o DNA do mRNA
acabando com a transcrio)
ATPase (hidrlise do ATP que fornece energia para percorrer o mRNA)
A sequncia rut promove a ligao da protena ao RNA mensageiro.
Modelo de terminao de Chasing
1- RNA polimerase faz a transcrio de DNA
2- Rho liga-se ao local de reconhecimento no RNA
3- Rho move-se ao longo do RNA, seguindo a RNA polimerase
4- RNA polimerase para no terminador e a protena Rho alcana-a
5- Rho desenrola o hbrido de RNA DNA na bolha de transcrio
6- Terminao: RNA polimerase, rho e RNA so libertadas
Na terminao da transcrio em procariotas, a rut est a montante do terminador
intrnseco.

Regulao da transcrio em procariotas


Intervenientes

Fatores proteicos que interagem com sequncias nucleotdicas (ex: protena


rut)
RNA polimerase

Quando elementos trans-acting (podem exercer a sua funo noutras molculas) se


ligam a elementos cis-acting, a regulao ocorre dando-se:
Ativao da expresso (regulao positiva por ativadores)
Inativao da expresso (regulao negativa por repressores)

Regulao do opero lac

Expresso por controlo negativo, pois quando a protena est ativa faz a
represso da transcrio.
Expresso induzida pela lactose (indutor e substrato) ou pelo IPTG (apenas
indutor) sistema induzvel.

Regulao do opero do triptofano

Ausncia do triptofano no meio expresso de genes que codificam para


enzimas da biossntese do triptofano
Presena de triptofano no meio inativao da expresso de genes que
codificam para enzimas da biossntese do triptofano (represso)

A regulao negativa pois quando est ativa reprime a expresso.


O repressor, por natureza, no se liga ao opero. Logo h elevada expresso do
opero.

Quando o triptofano est presente


Nestas condies, o triptofano liga-se ao repressor fazendo com que este se ligue
ao operador, deixando de haver transcrio. O triptofano o repressor.

Expresso Gentica

Quando h pouco triptofano, o repressor deixa de funcionar, havendo novamente


transcrio sistema reprimvel.

Regulao do opero lac


Elementos de controlo
A glucose atenua a transcrio dos genes do opero lac.
Na ausncia de glucose, a protena CAP liga-se ao AMP cclico e interage com a RNA
polimerase, logo esta trabalha rapidamente. Na ausncia desta ligao, a RNA
polimerase desloca-se lentamente.
A protena CAP no interage com o repressor.
O AMP cclico transmite o sinal aos genes das condies extracelulares: um
mensageiro secundrio. Quando h pouca glucose no meio extracelular, o cAMP
aumenta no interior da clula e vice-versa.
Na presena de glucose, a transcrio ocorre lentamente pois o metabolismo est
concentrado no seu consumo. Uma vez consumida, passa a haver uma transcrio
rpida.
O opero lac sofre regulao positiva pela protena cap e negativa pelo repressor.
Na presena de:
Glucose: no h induo (o repressor liga-se ao operador).
Lactose: induo (repressor inativo pela ligao da glucose: modificao
conformacional)
Lactose + Glucose: baixos nveis de expresso

AMP Cclico como ativador

Quando os nveis de glucose baixam, a clula sintetiza AMP cclico


cAMP liga-se protena CAP
cAMP-CAP ligam-se ao stio CAP e interagem com a RNA polimerase
estimulando a sua atividade

Represso catablica: permite a utilizao de apenas uma fonte de carbono,


mesmo quando h vrias disponveis no meio (normalmente a glucose).

Dois componentes regulatrios em bactrias


Muitas respostas bacteriais so controladas por um sistema regulatrio com dois
componentes.
O fosfato serve de interruptor para ativar protenas.
Cinase fosforila o substrato, logo ativa-o.
Fosforilase desfosforila o substrato, logo inativa-o.
Se h muito fosfato no meio de cultura, liga-se ao sensor (que fica inativo). Quando
acontece o contrrio, o sensor fica inativo, ativando uma protena (pela fosforilao
e ativa a expresso de genes para produo de fosfato).

Regulao da iniciao
A RNA polimerase reconhece uma ampla variedade de promotores pela associao
com diferentes fatores . Por exemplo:
28 orienta a DNA polimerase para se adaptar a uma determinada condio
32 genes induzidos por choque trmico so transcritos
38 orienta a DNA polimerase para genes envolvidos na resposta a
condies de stress
Fator muda durante:
Esporulao
Condies de stress
Mediante um sbito aumento da temperatura:
Alguns genes diminuem a taxa de transcrio, uma vez que as protenas
desnaturam
Alguns genes aumentam a taxa de transcrio: genes de choque trmico.

Expresso Gentica

Os genes de choque trmico so importantes na proteo celular. O gene que


codifica o fator (32) ativado pelo calor vindo da desnaturao das protenas.
Em modificaes ambientais drsticas, a transcrio de genes indutores regulada
pela sntese de fatores .
A transcrio de genes depende do equilbrio entre os 70 gerais e os fatores
especficos na competio por se ligar mnima RNA polimerase.
Cada fator sigma reconhece uma gama especfica de promotores.
A substituio de fatores conduz inativao de genes controlados pelo fator
substitudo e ativao de genes controlados pelo novo.
Em Bacillus subtilis, a transcrio controlada por cerca de 10 fatores :
Produzidos por clulas vegetativas (43)
Produzidos durante a infeo por fagos ou esporulao
Produo em cascata de fatores com diferentes especificidades.
B. Subtilis infeo pelo fago SPO1
Incio
Genes precoces do fago tem promotores que so reconhecidos pela holoenzima
bacterial.
Meio
Gene precoce 28 codifica para um novo fator sigma que desloca o fator sigma
bacterial (1 substituio).
So transcritos os genes do meio do fago, pelo complexo gp-28.
Fim
Genes do meio 33 e 34 codificam para protenas que repem gp-28 (2
substituio).
So transcritos genes tardios pela enzima gp-33-gp-34.
Na expresso em cascata de fatores , quando um fator substitudo por outro:
A RNA polimerase torna-se capaz de reconhecer os promotores de um novo
conjunto de genes
A RNA polimerase torna-se incapaz de reconhecer o antigo conjunto de
genes
A mudana na expresso irreversvel.
A regulao tambm pode ocorrer na terminao: terminadores fracos dentro de
genes podem causar terminao prematura da transcrio.

Antiterminao
Impedimento da terminao
A RNA polimerase insensvel a sinais de terminao
Dependncia de uma fator de antiterminao: controlo positivo.

Durante a infeo fgica:

Genes precoces so separados de genes tardios por terminadores


Fatores de antiterminao promovem transcrio de genes tardios

No gene lambda, a antiterminao ocorre pela preveno da atividade da protena


rho.
No geral, o produto de um gene precoce exerce controlo positivo em genes tardios:
Sntese de fatores (regulao da iniciao)
Sntese de um fator de antiterminao (regulao da terminao)
Transcrio de muitos operes (principalmente biossntese de aminocidos)
regulada por mecanismos de atenuao. Estes mecanismos dependem da presena
de terminadores intrnsecos no incio da unidade de transcrio (atenuadores).

Expresso Gentica

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Se o loop de terminao se foram: no h transcrio.


Se o loop de terminao no se forma: transcrio ocorre.

Transcrio em eucariotas
Caractersticas comuns com os procariotas:
Reao de polimerizao catalisada por uma RNA polimerase
Regies do promotor controlam a expresso
Elementos cis-acting e trans-acting
H alguns aspetos que tornam a transcrio em eucariotas mais complexa.

RNA polimerases eucariotas


RNA polimerase
RNA polimerase I
RNA polimerase II
RNA polimerase III

Localizao
Ncleo
Nucleoplasma
Nucleoplasma

Sntese
Precursor de rRNA (28S,5.8S e 18S)
Precursor de todos os mRNA
RNAs pequenos (tRNA, miRNA,
5SRNA)
Todas as RNA polimerases contm duas grandes subunidades e 12 a 15
subunidades pequenas, que no so comuns a todas.

Caractersticas nicas da RNA polimerase II

Vrias repeties de uma sequncia consenso de 7 aminocidos no terminal


C da subunidade L
26 repeties em levedura e 50 em mamferos
Necessria para a viabilidade

Anlise de promotores
Promotor basal: TATA box + Inr
Mutaes pontuais na TATA box alteram o nvel de transcrio
Alguns promotores contem um elemento denominado iniciador (Inr), sem
uma sequncia consenso definida
A RNA polimerase II no reconhece todos os elementos encontrados nos
promotores. Outras protenas esto envolvidas no reconhecimento: fatores de
transcrio.
Os genes so transcritos apenas se existirem os fatores de transcrio gerais, mas
no de forma totalmente correta: s na presena de fatores de transcrio
reguladores.
A RNA polimerase liga-se ao promotor basal com a participao dos fatores de
transcrio gerais.
Fatores de transcrio reguladores ligam-se a elementos de controlo proximais no
promotor.
Os fatores de transcrio reguladores tambm podem ligar-se a elementos de
controlo distais no promotor (potenciadores ou silenciadores).

Elementos de controlo distais

Podem ser constitudos por mltiplos elementos cis-acting


Esto geralmente longe das regies do promotor
Podem estar situados a jusante ou a montante da posio +1

Os elementos de controlo proximais so compostos por muitos elementos cis-acting


no essenciais, situados 200 bp a jusante da posio +1.

Fatores de transcrio gerais

Necessrios para iniciar a sntese em todos os promotores (envolvidos no


posicionamento da RNA polimerase II)

Expresso Gentica

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Fatores de transcrio reguladores

Reconhecem elementos cis-acting de sequncias consenso pequenas


Melhoram a eficincia da iniciao pela ligao com o complexo de ligao
Cada promotor tem um conjunto de fatores de transcrio definidos
envolvidos na sua transcrio
Fundamentais na regulao da transcrio

Fatores de transcrio gerais e reguladores


Coativadores: ligam-se aos fatores de transcrio, ativando a transcrio.
Tambm existem coinibidores que retardam a transcrio.

Transcrio em eucariotas
1. TBP (TATA binding protein) que reconhece a TATA box, liga-se ao promotor e
dobra o DNA
2. TFIIB (fator de transcrio) liga-se TBP ficando na posio +1 do incio da
transcrio, ficando a RNA polimerase II no local da transcrio.
3. TFIIF e TFIIE so recrutadores do TFIIH (mais ativo), permitindo a ligao
deste, formando o complexo de iniciao da transcrio.
4. A extremidade CTD (C-terminal domain) fica fosforilada. Se esta extremidade
for removida, a RNA polimerase no atua.
TFII codificam para RNA polimerases
Fatores de transcrio gerais
Participam na montagem do complexo de iniciao
Reconhecimento do promotor (papel fundamental neste reconhecimento)
TFIID contem a subunidade TBP que reconhece a TATA box.

TBP

Domnios C-terminal muito semelhantes entre eucariotas (80% de identidade


entre leveduras e humanos)
Promove a distoro do DNA
Importante no posicionamento do complexo de iniciao

TFIIH (disparo da transcrio)

Helicase (separa as cadeias de DNA)


ATPase (hidrlise do ATP)
Cinase (fosforilao)

Iniciao da transcrio

Primeira ligao fosfodister forma-se


Fosforilao do CTD promove a dissociao de fatores de transcrio

Iniciao abortiva: a transcrio d origem inicialmente a fragmentos muito


curtos de RNA. Isto acontece devido tenso causada pela afinidade pelo promotor
e pela necessidade de se libertar para iniciar a transcrio.

Fatores de transcrio reguladores

Ligam os elementos proximais e distais ao promotor


Estes fatores podem aumentar a eficincia da montagem do complexo de
iniciao da transcrio por interaes protena-protena.
Regulam a eficincia da iniciao da transcrio.

1. Protenas ativadoras ligam-se a elementos de controlo do DNA dentro do


potenciador.
2. O DNA dobra-se para tornar os ativadores mais prximos do promotor.
3. Os coativadores ligam o acentuassoma ao TFIID, ajudando no
posicionamento do TFIID no promotor.

Expresso Gentica

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4. Outros fatores de transcrio gerais e RNA polimerase ligam-se; a


transcrio pode comear.
Os fatores de transcrio e o promotor basal garantem a transcrio.
O nvel de transcrio influenciado pelos elementos proximais e distais (quando
presentes h elevado nvel de transcrio).

Elementos proximais e distais


No repem o promotor basal
So colocados a uma distncia varivel do promotor basal
So colocados em ambas as direes
Podem ser encontrados a jusante ou a montante da posio +1
Os promotores para diferentes rgos dos mesmos organismos so iguais. A
expresso de certos genes definida pela presena de fatores de transcrio.

Transcrio pela RNA polimerase I

Requer fatores de transcrio especficos (TFI)


No requer a hidrlise de ATP
Os promotores so todos iguais e constitudos por 2 elementos promotores

Genes promotores da RNA polimerase I


Seletor ou promotor basal (-45 a +20): compreende o local de iniciao
(+1) e essencial para a transcrio.
Elemento de controlo a montante (UCE): compreende ~50 bp e est
localizado ~100 bp a montante do local de iniciao.

Transcrio pela RNA polimerase III

Requer fatores de transcrio especficos (TFII)


No requer a hidrlise de ATP para iniciar a transcrio
Os elementos do promotor esto dentro do gene transcrito

Elementos internos do promotor da RNA polimerase III


A box (+10 a +30) e B box (+50 a +70) esto presentes em genes tRNA
C box (+50 a +90) est presente em 5S rRNA
Alm de atuarem como promotores, estes elementos, pela transcrio, so tambm
parte da molcula de RNA.
Fatores de transcrio da RNA polimerase III
TBF
TFIIB
TFIIC (elevado teor de protena capaz de ligar boxes A e B)
A RNA polimerase III liga-se aps a montagem dos fatores de transcrio.

Outros sistemas de transcrio


RNA polimerase do bacterifago (T7 e T3)

Monomrica
No regulada
Promotores contem o local de iniciao

RNA polimerase mitocondrial

Codificada por DNA nuclear


2 subunidades: cataltica maior e reconhecimentos de sequncias menor

RNA polimerase plastidial

Codificada por cpDNA


Muito parecida com a RNA polimerase eucariota, sem o fator
Promotores contem 2 sequncias: -10 e -35

Expresso Gentica

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Regulao da transcrio
A transcrio de genes eucariticos regulada a dois nveis

Iniciao da transcrio
Ativao estrutural de genes

Iniciao da transcrio

Iniciao controlada pela habilidade de formar o complexo de iniciao


Depende da concentrao de ativadores e repressores
Estes so regulados durante a diferenciao e como resposta a hormonas e
estmulos externos
A transcrio tambm pode ser regulada por repressores.

Ligao do DNA a fatores de transcrio

Permitem alguma flexibilidade: localizao e orientao variveis


Estimulao por interaes protena protena

Ligao do DNA
Usualmente hlices ligam a maior poro de DNA com ligaes de hidrognio e
interaes Van der Waals.

Tipos de fatores de transcrio


Hlix-turn-helix
Fatores de transcrio que regulam genes ligados a biossntese da
antocianina.
Duas hlices separadas por uma volta na cadeia polipeptdica; funcionam
como dmeros
Dedos de zinco
COP1 em Arabidopsis
Vrias estruturas nas quais o zinco tem um importante papel estrutural; Liga
o DNA como monmeros ou dmeros
Hlix-loop-hlix
Elemento GT-protena ligante do citocromo regula genes
Uma pequena -hlix ligada por um loop a uma -hlix longa; funcionam
como dmeros.
Leucine zipper
Uma -hlix de cerca de 35 aminocidos contendo leucina a cada stima
posio. Dimerizao ocorre ao longo da cadeia hidrofbica.
Fatores de transcrio dimricos