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UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE

COLOMBIA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
PRCTICA DE LABORATORIO 11

DETERMINACION DE LA PRESENCIA DE PROTEINAS.


OBJETIVOS
Determinar la presencia de protenas a travs de la valoracin cualitativa con el reactivo
Biuret.
MATERIALES:
Tubos de ensayo
1 Pipeta graduada de 5 ml
1 Gradilla
1 Pera de goma
1 Pinzas de tubo
1 Pipeta pasteur
Mecheros
Placa de calentamiento
Bao mara
Material a cargo del estudiante
Cinta de enmascarar
Toallas absorbentes
Guantes
Marcador

Gelatina sin sabor


Clara de huevo
Goteros
Reactivos:
HCl
0.1 M
NaOH
0.1 M
HNO3
BIURET
NITRITO SODICO
Muestras problema:
Albmina
Casena
Gelatina
Aminocidos (fenilalanina, triptfano,
tirosina, glicina, lisina y alanina)

PROCEDIMIENTO
1. REACCION DE MILLON
Los compuestos que contienen un hidroxibenceno como radical reaccionan con
el reactivo de Millon formando compuestos rojos. Los nicos aminocidos
fenlicos son la tirosina, y sus derivados y solo ellos dan una reaccin positiva.
Tome 1 ml de muestra (aminocido) aada 5 gotas de del reactivo de Millon
Caliente en un bao de agua hirviendo por 10 minutos.
Deje enfriar a temperatura ambiente y agregue 5 gotas de nitrito sdico,
Positivo: si observa una coloracin rojo ladrillo.

2. PRUEBA DEL BIURET


El sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen dos o ms
enlaces peptdicos dando un complejo de coloracin violeta, la intensidad del
color obtenido es una medida del nmero de enlaces peptdicos presentes en la
protena.
Tome 2 ml de muestra (agua, albmina, casena, gelatina)
Agregue 5 gotas de reactivo Biuret
Mezclar vigorosamente y observar los colores formados.

Positivo: si observa una coloracin violeta.

PRUEBA DESNATURALIZACION POR CALOR Y p H EXTREMOS


Tome tres tubos de ensayo y coloque 5 ml de cada una de las muestras
problemas (albmina, casena, gelatina)
Agregar
1 ml de HCl
1 ml de NaOH
1 ml de agua destilada.
Colquelos en el bao mara durante 10 minutos
Deje enfriar a temperatura ambiente.
Ajustar los tubos cido y alcalino hasta la neutralidad.
Observar los cambios.

Tome tres tubos de ensayo y coloque 2 ml de cada una de las muestras


problema
Agregar lentamente por las paredes 2 ml de HNO 3 concentrado hasta que se
formen dos capas
Mezclar cuidadosamente los dos lquidos y observar cambios.

CONSULTA:

Examinar el fundamento de la reaccin del Millon


Cul es el fundamento de la prueba con Biuret?
Cul es el comportamiento de las diferentes protenas sometidas a cambios de
pH y calor?
NOTA:
Reporte los resultados en tablas para cada una de las pruebas.
Recuerde que dentro de la discusin en el informe de laboratorio debe incluir el
fundamento de cada una de las pruebas realizadas