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El ciclo glutamato-glutamina GABA: aspectos del transporte, la homeostasis

de neurotransmisores y la transferencia de amonaco


Las neuronas son metablicamente minusvlidos en el sentido de que no son capaces
de realizar de novo sntesis de neurotransmisor glutamato y cido -aminobutrico
(GABA) a partir de glucosa. Un servicio de transporte metabolito conocido como el ciclo
de glutamato / glutamina-GABA describe la liberacin de glutamato neurotransmisor
GABA o de las neuronas y la posterior absorcin en astrocitos. A cambio, la glutamina
liberacin astrocitos que deben abordarse en las neuronas para su uso como precursor
del neurotransmisor. En esta revisin, se analizarn las propiedades bsicas del ciclo
glutamato / glutamina-GABA, incluyendo aspectos del transporte y el metabolismo. Las
discusiones sobre la estequiometra, se presentan el papel relativo de glutamato vs.
GABA y condiciones patolgicas que afectan al glutamato / ciclismo-GABA
glutamina. Adems, una seccin est dedicada a la que acompaa la homeostasis
amoniaco del ciclo glutamato / glutamina-GABA, el examen de los posibles medios de
transferencia intercelular de amonaco producido en las neuronas (cuando glutamina se
desamidada al glutamato) y utilizado en los astrocitos (por amidacin de glutamato)
cuando el ciclo de glutamato / GABA-glutamina est en funcionamiento. Un objetivo
principal de esta revisin es hacer suya la opinin de que el ciclo de glutamato /
glutamina-GABA debe ser visto como una transferencia bidireccional no slo de
unidades de carbono, sino tambin unidades de nitrgeno.
Abreviaturas utilizadas
AAT
ALAT
BCAT
GABA
GAD
GDH
GS
MeAIB
RMN
PAG

aspartato aminotransferasa
alanina aminotransferasa
transaminasa de aminocidos de cadena ramificada
cido -aminobutrico
glutamato descarboxilasa
glutamato deshidrogenasa
glutamina sintetasa
2- (metilamino) cido isobutrico
resonancia magntica nuclear

glutaminasa activado-fosfato
Ordenador personal
piruvato carboxilasa
TBOA
DL-treo--benzyloxyaspartate
TCA
cido tricarboxlico
El glutamato aminocido sirve una multitud de funciones en el cerebro de los
mamferos; es un neurotransmisor excitatorio, as como el precursor inmediato de la
neurotransmisor inhibidor -aminobutrico (GABA); un componente esencial del
metabolismo intermediario; un bloque de construccin de las protenas; sustrato
energtico; y, paradjicamente, una potente neurotoxina. Tal vez como resultado de
esto, la homeostasis glutamato es bastante complejo que implica varios elementos

especficos de clulas incluyendo transportadores de membrana y enzimas en ambas


neuronas y astrocitos. Uno de los elementos ms sorprendentes con respecto a la
maquinaria enzimtica es la falta de piruvato carboxilasa (PC) en las neuronas,
hacindolos incapaces de de novo sntesis de glutamato y GABA a partir de glucosa
( Patel 1974 ; Yu et al 1983. ; caa et al 1985. ; Schousboe et
al 1997. ; Hertz et al 1999. ). Otro elemento destacable en materia de transporte de
la membrana celular es la opinin generalmente aceptada de un predominante
captacin de glutamato astroctica ( Schousboe 1981 ; Rothstein et al .
1996 ; Gegelashvili y Schousboe 1998 ; Danbolt 2001 ). Los ltimos resultados en
un desage de glutamato de las neuronas a los astrocitos que, debido a la incapacidad
de novo de la sntesis en el compartimiento neuronal se ve compensada por un
suministro de un precursor de glutamato formado en el compartimiento de astrocytic.
El ciclo de glutamato / glutamina-GABA
Entre otros, los descubrimientos de compartimentacin intercelular de glutamina y
glutamato piscinas, relacionadas con los astrocitos y neuronas, respectivamente,
llevaron a la sugerencia de un ciclo de glutamato-glutamina de trabajo entre
(glutamatrgicas) neuronas y astrocitos ( van den Berg y Garfinkel
1971 ; Benjamn y Quastel 1972 ; Berl y Clarke 1983 ; Ottersen et al 1992. ). El
ciclo en una sinapsis glutamatrgica se describe en la Fig. 1a en la que
neurotransmisor liberado se recoge en astrocitos que rodean, transforma en glutamina
por la enzima glutamina sintetasa-astrocito especfica (SG; Norenberg y MartnezHernndez 1979 ) y puesto en libertad en el espacio extracelular de la que se recoge
en las neuronas y se transform de nuevo al glutamato activado por la glutaminasafosfato (PAG; Kvamme et al 2001. ). En la sinapsis GABArgicas (Fig. 1b ), el GABA se
recoge en astrocitos y catabolizado al succinato intermedia ciclo TCA a travs de la
accin concertada de GABA transaminasa y succinato deshidrogenasa semialdehido. La
glutamina puede ser sintetizado a partir de succinato a travs del ciclo TCA incluyendo
condensacin de oxalacetato y acetil-CoA formando citrato y posteriormente sntesis
de -cetoglutarato y glutamato. El glutamato formado por la actividad PAG en las
neuronas GABArgicas se convierte por glutamato descarboxilasa (GAD) a GABA. El
suministro de glutamina a las neuronas GABArgicas podra ser cuantitativamente
menos significativo, ya que estas neuronas ms probable exhiben una mayor
proporcin de la recaptacin del neurotransmisor liberado en comparacin con sus
homlogos glutamatrgicos (por ejemplo Schousboe et al . 2004 ).Estos mecanismos
aparentemente simples son apoyados por el transporte y el metabolismo especfico de
las clulas, como se discutir en las siguientes secciones. Adems, se pondr nfasis
en el dilema inherente de la homeostasis amonaco vinculado a este ciclo. Como puede
verse en la Fig. 1a y b , por cada molcula de glutamato o GABA ciclado, una molcula
de amoniaco se produce en las neuronas y una molcula de amoniaco asimilado en los
astrocitos. Este amoniaco, obviamente, tendr que ser transportados fuera de las
neuronas y de nuevo en los astrocitos para la desintoxicacin, como una elevada
concentracin de amonaco tiene efectos perjudiciales en una serie de funciones
celulares (por ejemplo Felipo y Butterworth 2002 ).
Figura 1.


Representaciones esquemticas que describen el ciclo de la glutamina en el
glutamato sinapsis glutamatrgica (a) y el ciclo de GABA glutamina en una sinapsis
GABArgicas (b) En la sinapsis glutamatrgica (a) del neurotransmisor glutamato
liberado se toma predominantemente arriba en astrocitos, donde se amida de
glutamina por GS utilizando amonaco libre y regres a las neuronas. En las neuronas,
la reaccin PAG regenera el glutamato y produce amonaco. Segn lo indicado por la
lnea de puntos, este amoniaco tendr que ser transportado a los astrocitos para la
desintoxicacin. Como se discute en el texto y se muestra en la Fig. 3 , esto podra
llevarse a cabo a travs de un servicio de transporte de aminocidos. El glutamato
fuerza hasta cierto punto se metaboliza dentro del ciclo TCA tanto de neuronas y
astrocitos. En la sinapsis GABArgicas (b) el neurotransmisor GABA liberado se recogi
en tanto los astrocitos circundantes y el terminal pre-sinptica. En los astrocitos, GABA
se metaboliza en dos pasos a succinato, que se metaboliza adicionalmente en el ciclo
de TCA a -cetoglutarato y luego glutamato. A partir de aqu, los pasos son similares a
la sinapsis glutamatrgica. Como se explica en el texto, la sinapsis GABArgicas
tambin necesita amoniaco transporte de regreso a los astrocitos. El papel de la
recaptacin de glutamato y GABA en la neurona presinptica es en la actualidad no se
conoce en detalle, aunque el actual dogma es que las neuronas GABArgicas se basan

ms en la recaptacin de neuronas glutamatrgicas. Abreviaturas: GABA, cido aminobutrico; GAD, glutamato descarboxilasa; Glu, glutamato; Gln, glutamina; GS,
glutamina sintetasa; -KG, -cetoglutarato;PAG, glutaminasa activado-fosfato; Suc,
succinato; TCA, cido tricarboxlico.
Sistemas modelo para estudiar el ciclo glutamato / glutamina-GABA in
vitro e in vivo
Las propiedades individuales de los sistemas de transporte de aminocidos implicados
en el ciclo de glutamato / glutamina-GABA se han estudiado ampliamente en sistemas
de expresin tales como Xenopus laevis ovocitos. Esto, sin embargo, slo ofrece pistas
para la funcin de los transportadores individuales y en consecuencia sobre la base de
las investigaciones in vitro , ex vivo y in vivo en modelos del cerebro debe ser
empleado para delinear las funciones de estos transportadores en sistemas con un
funcionamiento glutamato / GABA-glutamina ciclo.
Para estudiar el ciclo de glutamato / glutamina-GABA in vitro , un sistema en el que las
interacciones neuronales astrocytic intactas estn presentes se necesita. Con los aos,
rebanadas agudas, as como cultivos de cortes de diferentes regiones del cerebro de
diferentes especies se han utilizado para estudiar la interaccin neuronal
astrocitos. Mientras que estas preparaciones pueden constituir un sistema ms
estrechamente relacionados con la in vivo medio ambiente en comparacin con
cultivos de clulas primarias, este ltimo ofrecen la ventaja de preparaciones
enriquecidas en neuronas del fenotipo especfico, es decir, glutamatrgica o neuronas
GABArgicas ( Drejer y Schousboe 1989 ; Hertz et al . 1989 ; Schousboe et al .
1989 ; Sonnewald et al 2004. ). Cuando cerebelosa y neuronas neocorticales se
cultivan junto con astrocitos a partir de las regiones del cerebro correspondientes
( Westergaard et al 1991. ; Schousboe et al . 1993 ), estos co-cultivos
representan una herramienta valiosa para el estudio de la importancia de la glutamatoglutamina y el GABA ciclo de glutamina en glutamatrgica y sinapsis GABArgicas,
respectivamente.
In vivo la espectroscopia de resonancia magntica nuclear (RMN) representa un
mtodo especialmente adecuado para estudiar el ciclo de glutamato / glutamina-GABA
en animales intactos y los seres humanos.Tales estudios han confirmado la existencia
del ciclo glutamato / glutamina-GABA in vivo y el progreso significativo se ha hecho
para cuantificar el ciclismo tanto en condiciones normales como patolgicas
( Sibson et al 1997. ; Lebon et al 2002. ; Petrof et al 2002. ; Oz et
al 2004. ; Patel et al . 2005Hyder et al. 2006 ), como se explica en las siguientes
secciones.
Transportistas del ciclo glutamato / glutamina-GABA
Subrayando la importancia del papel de glutamato y GABA como neurotransmisores,
los sistemas de transporte altamente eficientes y especficas para estos dos
aminocidos se encuentran en todo el cerebro. Para glutamato, cinco transportadores
de alta afinidad se han identificado y clonado, EAAT1 designado (GLAST), EAAT2 (GLT1), EAAT3 (EAAC1), EAAT4 y EAAT5 ( Kanai y Hediger 1992 ; Pines et
al 1992. ; Storck et al . 1992 ; Fairman et al . 1995 ; Arriza et al 1997. ). EAAT1
y 2 son principalmente astroglial y EAAT3 es un transportador neuronal ( Danbolt
2001 ). EAAT4 y 5 son menos abundantes y parecen estar expresado principalmente
por clulas de Purkinje en la capa molecular del cerebelo y clulas de Mller de la
retina, respectivamente ( Danbolt 2001 ). Para la presente discusin los transportistas
astrogliales EAAT1 y 2 son los ms importantes, ya que parecen ser los predominantes
responsables de la captacin de glutamato en el cerebro, aunque con algunas
variaciones regionales ( Danbolt 2001 ; Schousboe et al 2004. ). El transporte hacia
el interior de uno de glutamato se acopla a co-transporte de tres Na + y uno H + , con
una K + ser contra-transportado ( Zerangue y Kavanaugh 1996; Levy et al .
1998 ). Esto proporciona la absorcin con un motor enorme, capaz de mantener un
gradiente de concentracin de dentro a fuera de 10 6 ( Brer 2005 ). Un transportador

de glutamato neuronal presinptica todava no llega cierta identificacin, aunque se


han hecho intentos para asignar esta funcin a un segundo isoforma de EAAT2, llama
GLT-1b ( Chen et al . 2002 ). Recaptacin neuronal de glutamato se ha demostrado
que desempean un papel en el mantenimiento de la homeostasis del glutamato en
cerebelosa cultivadas (glutamatrgica) neuronas, incluso en la presencia de glutamina
exgena ( Waagepetersen et al . 2005 ), un aspecto a ser discutido con ms detalle
en una seccin posterior. Sin embargo, la captacin de glutamato liberado en cocultivos neuronales del cerebelo se astroctica sustancial en comparacin con la
recaptacin en neuronas en monocultivo ( Bak et al . 2004 ), el apoyo a la opinin
generalmente aceptada de que los astrocitos son las clulas predominantemente
responsables de la captacin de glutamato neurotransmisor.
En cuanto a la captacin de GABA, cuatro transportadores han sido clonado y
caracterizado ( Guastella et al 1990. ; Liu et al 1992, 1993. ; Lopez-Corcuera et
al 1992. ). Desafortunadamente, la nomenclatura aplicada al ratn, rata y homlogos
humanos es ms bien confuso. Los cuatro transportadores de ratn clonados son
productos de la slc6a1 (ratn, GAT1; rata y humano, GAT-1), slc6a12 (ratn, GAT2; rata
y humano, BGT-1), slc6a13 (ratn, GAT3; rata, GAT-2 ; no humano clonado) y slc6a11
genes (ratn, GAT4; rata y humano, GAT-3). La rata y humanos homlogos de GAT2
son, de hecho, un transportador de betana (BGT-1) con una menor afinidad por GABA
de GAT1, 3 y 4 ( Bolvig et al . 1999 ). Transporte de GABA es electrognico y
acoplado a dos de Na + y uno Cl - ( Larsson et al 1980. ; Radian y Kanner
1983 ). GAT-1 parece ser la predominante transportador de GABA neuronal mientras
que los otros muestran una distribucin ms ubicuo ( Minelli et al 1996,
2003. ;Ribak et al . 1996a, b ; De Biasi et al 1998. ; Gadea y Lopez-Colom
2001 ; Schousboe y Kanner 2002 ).
En comparacin con el transporte de glutamato y GABA, los mecanismos de transporte
de glutamina intervienen en el ciclo de glutamato / glutamina-GABA son ms
complejos, como el eflujo de transporte mediada a partir de astrocitos se debe cumplir
por transporte afluencia mediada en las neuronas. Varios transportadores de
aminocidos identificados podran ser capaces de cumplir con esta necesidad y la
Fig.2 muestra los sistemas de transporte sugeridos para participar, como veremos a
continuacin. En general se podra imaginar que los transportistas de la glutamina en
el lado neuronal del ciclo glutamato / glutamina-GABA deben ser altamente
concentracin. Glutamina de lo contrario podra dejar el cerebro, ya que esta es la
manera ms importante para el cerebro de disponer de un exceso de amoniaco, como
se comenta por Hawkins et al . (2002 ). El lado astrocytic, por otro lado, podra ser
suficiente con la difusin facilitada controlada por la concentracin intracelular de
glutamina. Esto se basa en la nocin de que la concentracin de glutamina en
astrocitos refleja la cantidad de glutamato tomado, proporcionando un mecanismo de
regulacin simple para eflujo.
La Figura 2.

Representacin esquemtica que muestra los sistemas de transporte de aminocidos


con la participacin en el transporte sugerido glutamina relacionado con el ciclo
glutamato / glutamina-GABA. Detalles se discuten en el texto. Abreviaturas: aa,
aminocidos; Ala, alanina; Gln, glutamina; Leu, leucina.
El sistema de concentracin, dependiente de sodio y electrognico Un transportador se
ha sugerido que participan en la absorcin de glutamina neuronal ( Varoqui et
al 2000. ; Brer y Brookes 2001 ; Chaudhry et al ., 2002a, b ). Sistema A se
compone de tres isoformas denominadas SNAT1 (ATA1, Glnt, SA2, SAT1, NAT2), SNAT2
(ATA2, SA1, SAT2) y SNAT4 (Ata3, NAT3) de los cuales SNAT1 y 2 se expresan en el
cerebro, con SNAT1 siendo bastante enceflico y neuronal especfica y se encuentran
en la membrana de ambos neuronas glutamatrgicas y GABArgicas ( Varoqui et
al 2000. ; Mackenzie et al 2003. ; Weiss et al 2003. ). SNAT2 parece ms
ampliamente distribuido, y se encuentra en las neuronas y astrocitos ( Reimer et
al 2000. ; Sugawara et al 2000. ). SNAT1 muestra los requisitos antes mencionados
para el transporte eficiente de glutamina en las neuronas, siendo un Na + symporter
-glutamine con una K m para la glutamina de 230 ESTOY en comparacin con 1,65
m M para SNAT2 ( Yao et al 2000. ; Albers et al 2001. ; Mackenzie et
al 2003. ;). Para la parte astrocytic, sistema que comprende N SNAT3 (SN1, NAT1) y
SNAT5 (SN2) ha sido sugerido para mediar en el flujo de salida de glutamina, como se
comenta por Brer y Brookes (2001 ) y Chaudhry et al . (2002a ). Sistema N es un
Na + symporter -glutamine y H + anti-porter, por lo que es dependiente de sodio, pero
electroneutro ( Chaudhry et al 1999. ; Brer et al 2002. ). Una caracterstica
interesante de este transportador es que media la glutamina flujo en ambas
direcciones bajo condiciones fisiolgicas normales, probablemente gobernada por el
intracelular Na + concentracin y pH como se muestra en Xenopus laevis oocitos que
expresan SNAT3 ( Brer et al . 2002 ). El Na + concentracin y pH son parmetros que
se tienden a variar en microdominios sinpticas / gliales durante la
neurotransmisin. En lnea con esto, el sistema de N ha sugerido para constituir un
nuevo sitio regulador en el ciclo de glutamato / GABA-glutamina, como se demostr en
cerebro de rata que la liberacin de glutamina a partir de la gla (que se supone estar
mediada por el sistema N) se redujo cuando el la concentracin de glutamina

extracelular alcanz un nivel (aproximadamente> 2,4 m M ) a la que el transporte


neuronal (que se supone estar mediada por el sistema A) est saturado ( Kanamori y
Ross 2005 ). Este mecanismo es probablemente tambin importante durante la
hiperamonemia cerebral (ver ms abajo). La importancia del sistema de N (SNAT3)
para flujo de salida de astrocytic de glutamina fue corroborada por la demostracin de
que la K m de este transportador se redujo en astrocitos en cultivo por incubacin en
presencia de glutamato (30-60 min, 10-100 M ; Brer et al . 2004 ). Adems de
sistema de N, flujo de salida de glutamina a partir de astrocitos podra estar mediada
por otros sistemas de transporte, como el sistema L y ASC. En astrocitos de rata en
cultivo, Deitmer et al . (2003 ) encontraron que el eflujo de glutamina fue mediada
por cuatro sistemas diferentes de transporte, a saber, sistema de N (SNAT3), sistema
de L (Lat2), ASC sistema (ASCT2) y un sistema de transporte an no identificado que
media 40% del flujo de salida. Sistema L es un antiporter aminocido ( Kanai et al .
1998 ) que comprende dos isoformas, LAT1 y 2, de los cuales muestran afinidad LAT2
de glutamina. Este sistema puede mediar en la liberacin de glutamina en presencia de
sustratos de aminocidos extracelulares tales como alanina y leucina, que podra ser
importante para dos lanzaderas propuestas que implican la leucina y la alanina,
respectivamente, como se ha sealado por Deitmer et al . (2003 ) y se discute en
una seccin posterior. ASC System es un anti-porter dependiente de sodio, que existe
como dos isoformas diferentes ASCT1 llamado y 2 con ASCT2 que tiene afinidad por
glutamina, aunque esta actividad de transporte es probablemente de menor
importancia en el cerebro de los mamferos adultos ( Brer et al 2000. ; Brer
2005 ).
En apoyo de un papel importante del sistema de A en las neuronas, se ha demostrado
recientemente que la 2- (metilamino) de cido isobutrico (MeAIB), un sustrato
competitivo relativamente especfico de sistema A, aumenta el nivel extracelular de
glutamina in vivo , un mecanismo probable que implica inhibicin de la captacin
neuronal glutamina ( Kanamori y Ross 2004 ). Sin embargo, Rae et al . (2003)
demostraron en Guinea cerdo cortes de tejido cortical que la histidina, pero no MeAIB,
flujo inhibido de 13etiqueta C de [1- 13 C] glucosa en glutamato y GABA. Estos autores
proponen que una actividad de transporte diferente del sistema de A, pero inhibirse por
histidina, est involucrado en el lado neuronal.
Metabolismo del ciclo de glutamato / glutamina-GABA
Varias enzimas necesarias para el mantenimiento de la homeostasis del glutamato y
GABA se distribuyen heterogneamente entre neuronas y astrocitos. La enzima
sintetizadora glutamina, GS, se localiza selectivamente en los astrocitos ( Nrenberg
y Martnez-Hernndez 1979 ) y la enzima glutamina transformando al glutamato,
PAG, parece expresado preferentemente en las neuronas ( Kvamme et al . 2001 ),
aunque se ha observado una baja actividad en astrocitos cultivados ( Schousboe et
al 1979. ; Kvamme et al 1982. ). PAG ha sugerido que se encuentra en la superficie
externa de la membrana mitocondrial interna ( Kvamme et al . 2001 ), aunque esto
es controversial ( Zieminska et al . 2004 ). Por ltimo, la PC, la enzima anaplertico
cuantitativamente ms activo en el cerebro ( Patel 1974 ) se limita al compartimiento
astroctica como se muestra mediante tcnicas de inmunohistoqumica, estudios en
cultivos celulares, as como el trabajo que utilizan las mitocondrias no sinpticas y
sinpticas aisladas ( Yu et al 1983. ; Vstago et al . 1985 ; faf-Michalak y
Albrecht 1991 ).Esto, a su vez, significa que las neuronas deben confiar en los
astrocitos proporcionar precursores de anaplerosis del ciclo TCA, que es un requisito
previo para la sntesis del neurotransmisor glutamato y GABA ( va glutamato) de cetoglutarato. En este contexto, se debe mencionar que varios otros sustratos que la
glutamina se han sugerido para ser transportados a partir de astrocitos a las neuronas
a fin de reponer el ciclo TCA neuronal. Por lo tanto, citrato, malato, succinato y cetoglutarato se liberan en un grado ms alto de astrocitos en cultivo que de neuronas
cultivadas ( Sonnewald et al 1991. ; Westergaard et al , 1994a, b. ). -

cetoglutarato, pero no citrato, se ha demostrado que acta como precursor para


neurotransmisor glutamato, aunque no en la misma medida que la glutamina ( Kihara
y Kubo 1989 ; caa et al 1989. ; Peng et al 1991. ; Westergaard et al .
1994b ). La captacin de malato, as como la incorporacin de 14 etiqueta C en
glutamato de 14 C-etiquetados malato es limitado en comparacin con la necesidad de
la sntesis de glutamato durante la neurotransmisin ( Shank y Campbell
1984 ; Hertz y Schousboe 1992 ). Adems, la utilizacin de intermediarios del ciclo
TCA para la sntesis de glutamato requiere un donante de grupo amino que no es el
caso cuando glutamina acta como un precursor del glutamato. En conclusin, ninguno
de los intermediarios del ciclo TCA investigados parece ser precursores eficientes para
la sntesis de glutamato en las neuronas.
Una cuestin importante relacionada con glutamato y GABA homeostasis es la
estequiometra del ciclo de glutamato / glutamina-GABA. Parece claro que para el ciclo
funcione, las neuronas deben recibir por lo menos la misma cantidad de carbono, ya
que pierde en un determinado perodo de tiempo, lo que significa que la transferencia
de glutamina a partir de astrocitos (u otra unidad C4, C5 o C6 capaz de reponer el ciclo
TCA neuronal como se discuti anteriormente) deber ser al menos igual a la del
neurotransmisor glutamato perdido o GABA.
La medida en que el glutamato es completamente oxidado es un problema
desenredado. Es importante porque el glutamato oxidada debe ser sustituido por de
novo sntesis de constituyentes de ciclo TCA con el fin de formar el -cetoglutarato /
glutamato para la sntesis de la glutamina y la exportacin a las neuronas. Numerosos
estudios en astrocitos en cultivo han demostrado que una gran proporcin de la
glutamato tomado se metaboliza en el ciclo de Krebs y en cierta medida se oxida
completamente a salir del ciclo de Krebs ( a travs de las reacciones enzimticas o
carboxiquinasa fosfoenolpiruvato mlico) para volver a entrar como acetilo CoA, un
proceso conocido como reciclaje piruvato ( Sonnewald et al 1993. ; McKenna et
al ., 1996a, b ; Bakken et al 1997. ; Hertz Hertz y 2003 ). Un informe reciente
sugiere que en cerebro de rata, flujo a travs de PC no slo es significativa, pero
dependiente de la actividad, demostrando que los astrocitos hasta cierto punto
dependen de anaplerosis para mantener los niveles de glutamina durante la
neurotransmisin ( Oz et al . 2004 ). Esto favorece la idea de que los astrocitos en
cierta medida oxidan exgena de glutamato / GABA in situ , as, como se indica
tambin en vivo RMN espectroscpicas estudios en humanos ( Lebon et
al 2002. ; Patel et al 2005. ).
Regulacin de la va GS ha sido investigado elegantemente en astrocitos neocorticales
cultivadas por Fonseca et al . (2005 ). Se observ un aumento de 9 veces en flujo a
travs de la va de GS durante un perodo de tiempo de hasta 48 h mediante la adicin
de glutaminasa al medio de cultivo para imitar la presencia de neuronas (productoras
de glutamato de glutamina). Tanto la actividad y el nivel real de la enzima se
incrementaron, aunque el aumento fue bastante lento y por lo tanto probablemente no
es importante para la regulacin a corto plazo de ciclismo glutamina-glutamato en
respuesta a un aumento de la actividad de la neurotransmisin. Por lo tanto, fue ms
bien interpretarse como una regulacin de la actividad de GS a un nivel ms
comparable a la in vivo situacin, ya que los astrocitos en cultivo no desafiados con
una alta concentracin de glutamato durante el desarrollo de la cultura podra regular a
la baja esta va. En este mayor nivel de actividad de GS, que constitua la principal va
de glutamato-metabolizacin, que muestra slo un bajo flujo de glutamato con el ciclo
TCA que fue mediada principalmente por la actividad transaminasa, en contraposicin
a GDH.
Una novela de control mediada por el receptor del ciclo de glutamato / glutamina-GABA
en el nivel metablico se inform recientemente por Rae et al . (2005 ). Se ha
demostrado en rebanadas de cerdo de Guinea que los agonistas y antagonistas de los
receptores de glutamato metabotrpicos de tanto el grupo I y II, junto a la

phosphoinositide / Ca 2+ y los sistemas de segundo mensajero AMP cclico,


respectivamente, afectaron la actividad del ciclo TCA, as como el glutamato tasa de
ciclismo glutamina. La tendencia general es que los grupos I agonistas / antagonistas
afectados actividad del ciclo del TCA, mientras que el grupo II agonistas / antagonistas
influyeron en el glutamato / tasa ciclismo GABA-glutamina.
El glutamato / ciclismo-GABA glutamina y la homeostasis amoniaco
intercelular
Claramente, el amonaco generado en la reaccin PAG neuronal durante la actividad
neurotransmisin debe eliminarse, ya que los niveles de amonaco elevados tienen
efectos perjudiciales. Esto bsicamente puede ocurrir de dos maneras
diferentes; amoniaco en s podra simplemente difusa (como NH 3 ) o ser transportado
(como NH 4 + ) a travs de las membranas celulares en y fuera del espacio extracelular
o un sistema de transporte que implica molculas portadoras (aminocidos) podran
ser empleados.Ciertamente, el amonaco se puede difundir a travs de membranas de
lpidos y se ha demostrado que el amonaco puede ser transportado por K + / CI - cotransportadores, tal como fue revisado extensamente por Marcaggi y Coles
(2001 ). Adems, cabe sealar que el amonaco podra difundirse a travs de las
acuaporinas ( Nakhoul et al 2001. ; Jahn et al 2004. ). Las acuaporinas 1, 4 y 9 se
han observado en las clulas del cerebro ( Nielsen et al 1997. ; Badaut et
al 2001. ) y acuaporina 4 en astrocitos en cultivo est regulado como consecuencia de
tratamiento con amonaco ( Rama Rao et al 2003. ).
Como la difusin y el transporte de amoniaco libre a travs de la membrana celular
requerir una respuesta reguladora de pH de la clula, de una manera aparentemente
ms atractiva y regulado de transporte de amonaco entre el neuronal y el
compartimiento astrocytic es a travs de un servicio de transporte de aminocidos. En
un servicio de transporte tal, el amonaco generado en las neuronas se incorpora en un
aminocido no neuroactivo y llevado a travs del espacio extracelular atrapado dentro
de este aminocido. Se han propuesto dos lanzaderas de aminocidos estar operando
de esta manera entre las neuronas y astrocitos glutamatrgicos ( Fig. 3A y B ). Uno se
basa en leucina ( Yudkof et al 1996. ; Bixel et al 1997, 2001. ; Lieth et al 2001. )
y otro se basa en alanina ( Waagepetersen et al 2000. ; Zwingmann et al 2000. )
como el cido amino transloca en la direccin opuesta de la glutamina, es decir, desde
las neuronas a los astrocitos. En la direccin opuesta del aminocido (es decir, alanina
o leucina), una molcula correspondiente se transloca; para alanina esto se propuso
ser lactato, y para la leucina, la cetocido correspondiente a la leucina, la cetoisocaproato se supone que debe desempear este papel.Los detalles
experimentales especficos que dan lugar a estas lanzaderas est ms all del alcance
de esta revisin y se remite al lector a las publicaciones originales citados. El resto de
esta seccin se preocupar con dos cuestiones principales. (I) El dilema de la
asimilacin de amonaco en glutamato por glutamato deshidrogenasa (GDH) en la
mitocondria neuronal, un requisito previo para los traslados al trabajo, como puede
verse en la Fig. 3a y b . (Ii) El acoplamiento entre el servicio de transporte individual y
el ciclo de glutamato glutamina. Ambas lanzaderas se basan en una sinapsis
glutamatrgica, aunque las sinapsis GABArgicas con toda probabilidad se encontrarn
con un desequilibrio amonaco similar, aunque probablemente en menor medida (como
se discuti en las secciones anteriores y siguientes).
Figura 3.

Representaciones esquemticas de los transbordadores de aminocidos propuestos en


la sinapsis glutamatrgica involucrado en el regreso de amoniaco generado en las
neuronas cuando el ciclo-glutamato glutamina est ejecutando. En el servicio de
transporte de lactato-alanina (a) el amonaco producido en las neuronas se fija en cetoglutarato por la reaccin GDH para formar glutamato, a continuacin,
transaminada por ALAT lactato en piruvato derivado para formar alanina que se
exporta a astrocitos. En los astrocitos este proceso se invierte entonces, y el lactato se
transporta en la otra direccin. Cabe sealar que el transporte no es estequiomtrica,
es decir, alanina y lactato no son transportados en las mismas cantidades. La cifra es
una adaptacin de Waagepetersen et al . (2000 ). El servicio de transporte de
aminocidos de cadena ramificada (b) se representa utilizando leucina como un
ejemplo. Aqu, el amoniaco fijo en la reaccin de GDH en las neuronas se transaminado
en -cetoisocaproato para formar leucina, que se exporta a los astrocitos. En los
astrocitos, el proceso se invierte. -Ketoisocaproato se transporta en la otra
direccin. Observe que dos isoformas de clulas especficas de BCAT estn
involucrados en los transaminaciones de -cetoisocaproato / leucina. La figura se
modific a partir de Lieth et al . (2001 ). Abreviaturas: Ace-CoA, la acetil-CoA; Ala,
alanina; ALAT, alanina aminotransferasa; -KG, -cetoglutarato; -KIC, cetoisocaproato; BCAT, de cadena ramificada aminotransferasa (mit, mitocondrial y cyt,
isoformas citoslicas); GDH, glutamato deshidrogenasa; Glc, glucosa; Gln,

glutamina; Glu, glutamato; GS, glutamina sintetasa; Lac, lactato; Leu, leucina; OAA,
oxalacetato; PAG, glutaminasa activado-fosfato; PC, piruvato carboxilasa; Pyr,
piruvato; TCA, cido tricarboxlico.
(I) GDH, que se localiza en la matriz mitocondrial cataliza la NAD (P) + desaminacin
oxidativa dependiente de glutamato a -cetoglutarato. Esta enzima est
estrechamente regulada por el NAD + / ratio de NADH y tiene una relativamente alta
K m para el amonaco ( Chee et al 1979. ; Colon et al 1986. ; Zaganas et al 2001. )
haciendo que la aminacin reductora de -cetoglutarato a glutamato un proceso poco
probable que se produzca bajo la mayora de condiciones. Sin embargo, segn lo
sugerido por Waagepetersen et al . (2000 ), la concentracin de amonaco en el
microambiente local de mitocondrial cerca de la reaccin PAG bien podra ser lo
suficientemente alta para empujar la reaccin en la direccin de aminacin
reductora. La incubacin de las neuronas corticales cultivadas en presencia de 0,3
m M [ 15N] amoniaco dio lugar a una formacin muy baja glutamato por GDH
( Yudkof et al . 1990 ), al igual que superfusin de las neuronas cerebelosas
cultivadas en presencia de 0,3 m M [ 15 N ] amoniaco en combinacin con 0,25
m M glutamina o [5- 15 N] glutamina ( Bak et al . 2005 ). Esto podra ser explicado por
el hecho de que la piscina glutamato generada a travs de GDH en este entorno de
alta amonaco podra ser muy pequeo, con una tasa de turn-over rpido. Un estudio,
sin embargo, por Kanamori y Ross (1995 ) sugiere, que en condiciones de
hiperamonemia leves en el cerebro de rata in vivo inducida por infusin de [ 15 N]
acetato de amonio, la reaccin GDH podra ser significativo para de novo sntesis de
glutamato. Curiosamente, la actividad de GDH en cerebelosas cultivadas
(glutamatrgicas), las neuronas se encontr que era 60% mayor que en cultivadas
(GABArgicas), las neuronas corticales. Adems, la K m para el amonaco era 1,7 veces
mayor en los ltimos culturas ( Zaganas et al . 2001 ), sugiriendo diferentes
funciones de GDH en neuronas glutamatrgicas y GABArgicas.
(Ii) Una cuestin importante explorar experimentalmente es si hay un acoplamiento
dependiente de la actividad entre los transbordadores y el ciclo-glutamato
glutamina. Hasta el momento, slo un estudio se ha dirigido a esta pregunta, lo que
demuestra que en co-cultivos de cerebelo (glutamatrgicas), las neuronas y astrocitos,
sin acoplamiento evidente entre el ciclo-glutamato glutamina y la lanzadera de lactatoalanina se podran encontrar ( Bak et al . 2005 ). Esto se evidencia por el hallazgo de
que superfusin estos co-cultivos en presencia de [ 15 N] alanina (0,2 m M ) y lactato (1
m M ) no etiquet glutamina, glutamato y aspartato ms extensivamente bajo
condiciones de repetitivo glutamato vesicular neuronal liberar y aumento de la
actividad del ciclo-glutamato glutamina. Aunque esto parece indicar que el servicio de
transporte de lactato-alanina no se acopla a la actividad del ciclo-glutamato glutamina,
que no descarta un papel para la alanina como portador de nitrgeno entre las
neuronas y astrocitos.
El apoyo a un papel tanto de alanina y leucina para shuttling de amonaco en
preparaciones de tejidos cerebrales de cobaya fue proporcionada por Rae et
al . (2003 ). Se ha demostrado que la inhibicin de la ciclo-glutamato glutamina
(mediante el bloqueo de transporte glutamina) redujo el flujo de 13 C etiqueta de
[1- 13 C] glucosa o [3- 13 C] de lactato en alanina, as como la cantidad de leucina
liberada al medio de incubacin.
En conclusin, un escenario, en el que ambas lanzaderas pueden estar operando en el
cerebro, al mismo tiempo y / o en diferentes condiciones de actividad, parece estar
emergiendo de las consideraciones anteriores.
Glutamatrgica vs. sinapsis GABArgicas: importancia relativa del ciclismo
neurotransmisor
Como se mencion anteriormente, Rae et al . (2003 ) han aportado pruebas de que la
inhibicin del transporte de glutamina en Guinea cortes de tejido cerebral porcino
reduce el flujo de 13 C etiqueta de [1-13 C] glucosa en tanto glutamato y GABA, lo que

indica que tanto glutamatrgica y neuronas GABArgicas dependen de glutamina a


partir de astrocitos para mantener la homeostasis del neurotransmisor. Un punto de
vista predominante es que la recaptacin de GABA juega un papel importante para las
neuronas GABArgicas, mientras que las neuronas glutamatrgicas dependen
principalmente de glutamina a partir de astrocitos como precursor del glutamato
( Schousboe 2003 ; Schousboe y Waagepetersen 2003 ; Schousboe et
al 2004. ). Un informe reciente, sin embargo, indica que la recaptacin de glutamato
en cerebelo cultivado (glutamatrgicas) neuronas es necesaria para mantener la
homeostasis del glutamato ( Waagepetersen et al . 2005 ). Es bien sabido que las
neuronas cultivadas expresan transportadores de glutamato ( Drejer et al . 1982 ),
sin embargo, la evidencia de la existencia de un transportador de glutamato
presinptica in vivo es escaso (como ya se ha discutido en la seccin anterior). Un
estudio basado en inmuno etiquetado de forma exgena aplicada D aspartato y
glutamato, mostr captacin en estructuras presinpticas en rodajas de hipocampo de
rata ( Gundersen et al . 1993 ). Recientemente, unin vivo 13 C RMN estudio utilizando
infusin de [1,6- 13 C] glucosa y [2- 13 C] acetato durante la anestesia halotano trat de
arrojar luz sobre la importancia relativa de GABA y glutamato en el glutamato / GABAglutamina ciclismo en la corteza cerebral de rata ( Patel et al . 2005 ). Este informe
lleg a la conclusin de que la contribucin de la bicicleta-GABA glutamina al total
ciclismo glutamato / GABA-glutamina fue del 23%, lo que indica una, pero el papel
relativamente menor pronunciada del ciclismo GABA-glutamina. Vale la pena sealar
que el nmero de sinapsis inhibidoras en general es menor que la de las sinapsis
excitadoras ( Waldvogel et al . 2000 y referencias en el presente documento). Sin
embargo, a pesar de que esto implica que el ciclismo GABA-glutamina constituye una
cuarta parte del glutamato / ciclismo total de GABA-glutamina, la importancia relativa
de la recaptacin neuronal frente a la captacin astroglial de GABA liberado y el
glutamato en la sinapsis individuales todava espera una descripcin satisfactoria .
Ciclismo glutamato / GABA-glutamina en condiciones patolgicas
Numerosos informes han sido publicados que indica que el ciclo de glutamato /
glutamina-GABA se ve afectada en una variedad de trastornos y enfermedades
neurolgicas (por ejemplo, revisin por Cruz y Cerdan 1999 ). Una visin completa de
todas esas patologas est ms all del alcance de esta revisin, y ser discutido por
tanto, slo unos pocos estudios recientes sobre las condiciones patolgicas
representativas.
Las biopsias de tejido del hipocampo esclertico de los sujetos humanos que sufren de
epilepsia han demostrado disminucin de la bicicleta-glutamato glutamina ( Petrof et
al . 2002 ). En co-cultivos de neuronas y astrocitos del hipocampo inhibicin de la
sntesis de glutamina por metionina sulfoximina llevado a la reduccin de la actividad
epileptiforme, al igual que el bloque de transporte de glutamina por MeAIB en una
cultura neuronal correspondiente ( Bacci et al . 2002 ). Un estudio reciente en un
modelo de rata de litio-pilocarpina inducida epilepsia del lbulo temporal mostr el
mismo grado de [1,2- 13 C] acetato de metabolismo en los controles como en los
animales epilpticos, lo que implica que el metabolismo astrocytic no se vea
comprometida en estos animales ( Melo et al . 2005 ). Sin embargo, el etiquetado de
glutamato [1- 13 C] glucosa se redujo sugiriendo mal funcionamiento metablico
preferencial en el compartimiento neuronal. En general, los modelos animales de
diferente actividad epileptiforme muestran alteraciones metablicas de las neuronas y
astrocitos, sin embargo, los cambios iniciales o primarias pueden tener lugar en un solo
tipo de clulas ( Sonnewald y Kondziella 2003 ).
Otra patologa en la que el ciclo de glutamato / glutamina-GABA podra verse
comprometida es la enfermedad de Alzheimer, como la expresin aberrante de GS ha
sido reportado ( Robinson 2000, 2001). Adems, un estudio empleando vivo
en espectroscopa de RMN mostr disminucin de la actividad neurotransmisin de
glutamato y TCA tasa de ciclismo en pacientes que sufren de la enfermedad de

Alzheimer, como se evidencia por los patrones de etiquetado en glutamato y glutamina


de infusa [1- 13glucosa C] ( Lin et al . 2003 ).
Hiperamonemia en el cerebro, que se producen tpicamente como una complicacin
secundaria de la enfermedad de hgado primario y conocido como la encefalopata
heptica, es una condicin que tiene un impacto en glutamato / glutamina ciclismoGABA en el cerebro. Varias revisiones extensas sobre este tema ya existen (por
ejemplo Felipo y Butterworth 2002 ), por lo que esta discusin se centrar en un
trabajo reciente de Kanamori y Ross (2005 ), que muestra que el amonaco elevada
afecta el transporte de glutamina y por lo tanto el ciclismo-glutamato glutamina (una
novela regulacin del transporte sistema de N tambin se sugiri en este trabajo, como
se discute en otra parte en esta revisin). Como el cerebro carece de un ciclo de la
urea, la reaccin astrocytic GS y flujo de salida de glutamina a partir de cerebro a la
sangre que constituye el mecanismo ms importante para excretar el exceso de
amonaco. Como parte de un intento de desarrollar un in vivo modelo de rata para
estudiar las condiciones de hiperamonemia por microdilisis y in vivo espectroscopa
de RMN, Kanamori y Ross (2005 ) mostraron un patrn complejo de eventos
relacionados con la infusin continua de [ 15 N] acetato de amonio. Uno de los
principales puntos hizo fue que cuando la concentracin extracelular de glutamina se
eleva a un nivel en el que la captacin neuronal est saturado, entonces el flujo de
salida a partir de astrocitos es en realidad inhibida por reversin de transporte sistema
N (como se discute en una seccin anterior).
Objetivos farmacolgicos potenciales del sistema de bicicleta
neurotransmisor
En el tratamiento de la epilepsia, las drogas dirigidas a ambos transportadores de
GABA (tiagabin) y el GABA metabolizar enzima GABA-transaminasa (vigabatrina) se
han comercializado, proporcionando la prueba de principio para los sistemas de
ciclismo neurotransmisor como dianas farmacolgicas ( Sarup et al . 2003 ). Sin
embargo, con respecto al transporte de glutamato y el metabolismo de estos frmacos
no se han desarrollado, a pesar de un mal funcionamiento en el ciclo-glutamato
glutamina estn claramente presentes (ver seccin anterior). Esto probablemente
refleja que las sinapsis glutamatrgicas son tan abundantes y que el glutamato es un
metabolito importante en el metabolismo intermediario, por lo que la interferencia con
la homeostasis del glutamato una pesadilla potencial de efectos adversos. Hasta el
momento, la mayor parte del desarrollo de frmacos dirigidos al sistema
glutamatrgico parece haberse centrado en los receptores de glutamato ionotrpicos
como dianas farmacolgicas, aunque los receptores acoplados a protenas G-han
estado atrayendo cada vez ms atencin en los ltimos aos. El trabajo de Rae et
al . (2005 ) muestra que los receptores metabotrpicos de glutamato podran
constituir objetivos atractivos de medicamentos para la regulacin del metabolismo
asociada con el ciclo de glutamato / glutamina-GABA.
Conclusin
El ciclo glutamato / GABA-glutamina no puede ser visto de manera aislada, sino que
debe ser visto como una va de transferencia no slo unidades de carbono entre las
neuronas y astrocitos, sino tambin unidades de nitrgeno. Esta ltima necesidad para
razones discutidas tener lugar predominantemente en forma de servicio de transporte
de aminocidos, en lugar de difusin nicamente como simple o transporte facilitado
de amonaco / amonio. Adems, para entender el ciclo en relacin con la homeostasis
neurotransmisor parece particularmente pertinente para elucidar la importancia de la
glutamato / ciclo relativa GABA-glutamina para la recaptacin neuronal en el
glutamatrgico individual y las sinapsis GABArgicas. Adems, debe hacerse hincapi
en que de novo sntesis de glutamato en funcin de anaplerosis debe ser
cuantitativamente estrechamente relacionado con la prdida neta de glutamato
causada por el metabolismo oxidativo a travs de reciclaje piruvato. En la actualidad, el

conocimiento especfico sobre esta interrelacin entre la carboxilacin del piruvato y el


reciclaje es incompleta. La comprensin de estos aspectos podra lograrse in
vitro usando co-cultivos de astrocitos y neuronas glutamatrgicas o GA-BAergic,
respectivamente. Sin embargo, para confirmar in vitro hallazgos en animales intactos
perfeccionamiento significativo de in vivo tcnicas se requiere. A este respecto, las
mejoras de in vivo mtodos de espectroscopia NMR probablemente sern de
importancia instrumental.