Quim. Nova, Vol. 26, No.

2, 249-252, 2003

Kelly G. Fernandes, Mercedes de Moraes e Jos A. Gomes Neto*

Departamento de Qumica Analtica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista, CP 355, 14801-970 Araraquara - SP
Joaquim A. Nbrega
Departamento de Qumica, Universidade Federal de So Carlos, CP 676, 13560-970 So Carlos - SP
Pedro V. Oliveira
Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, CP 26077, 05513-970 So Paulo - SP

Reviso

PADRONIZAO INTERNA EM ESPECTROMETRIA DE ABSORO ATMICA

Recebido em 18/6/02; aceito em 12/8/02

INTERNAL STANDARDIZATION IN ATOMIC ABSORPTION SPECTROMETRY. This paper describes a review on internal
standardization in atomic absorption spectrometry with emphasis to the systematic and random errors in atomic absorption
spectrometry and applications of internal standardization in flame atomic absorption spectrometry and electrothermal atomic
absorption spectrometry. The rules for selecting an element as internal standard, limitations of the method, and some comments
about the application of internal standardization in atomic absorption spectrometry and the future of this compensation strategy
are critically discussed.
Keywords: internal standardization; atomic absorption spectrometry.

INTRODUO
A espectrometria de absoro atmica com atomizao em chama ou eletrotrmica uma tcnica analtica bem estabelecida e suficientemente robusta para ser implantada em laboratrios envolvidos
com anlises qumicas em larga escala. Por outro lado, erros sistemticos e aleatrios podem prejudicar a exatido e preciso dos resultados bem como o desempenho das tcnicas analticas em questo1,2.
Em espectrometria de absoro atmica em chama (FAAS), as
alteraes que ocorrem na temperatura da chama, na taxa de aspirao da soluo, na composio da amostra, entre outras, podem prejudicar os resultados analticos. Se comparada com a FAAS, a
espectrometria de absoro atmica em forno de grafite (GFAAS)
substancialmente mais sensvel e verstil, face configurao do tubo
de grafite e ao seu carter dual: reator qumico e atomizador. A tcnica GFAAS tambm susceptvel a alteraes instrumentais e
operacionais: variaes na temperatura e na taxa de aquecimento do
tubo de grafite, no volume injetado de amostra, na radiao emitida
da fonte, nas diluies, na estrutura do atomizador, so alguns exemplos de parmetros que podem afetar o desempenho analtico.
Com a finalidade de compensar esses erros em espectrometria
atmica, Gerlach e Schweitzer3 propuseram, em 1929, o mtodo da
padronizao interna que vem sendo utilizado desde ento para compensar erros intrnsecos e garantir a qualidade dos resultados4,5.
A padronizao interna pode ser empregada em espectrometria
de absoro atmica, espectrometria de emisso tica com fonte de
plasma indutivamente acoplado (ICP-OES) e espectrometria de massas com fonte de plasma indutivamente acoplado (ICP-MS) para
compensar vrios tipos de erros sistemticos e randmicos4-9. O princpio desse mtodo baseia-se na comparao de um ou mais sinais
analticos (analito) com um ou mais sinais de referncia de elementos previamente selecionados (padro interno). Um padro interno
deve ser adicionado aos brancos, solues de referncia e s amos-

*e-mail: anchieta@iq.unesp.br

tras10, ou quando presente na amostra, deve-se adicionar uma quantidade elevada desse elemento amostra para anular o efeito da concentrao original da amostra11,12. Quando a padronizao interna
usada, todos os clculos so baseados na suposio de que tanto o
analito como o padro interno sofrem influncias similares da matriz da amostra e de que ambos so perturbados igualmente pelas
alteraes nas condies instrumentais ou operacionais. Portanto, as
sensibilidades das solues analticas de referncia (Ss) esto relacionadas com as das amostras (Sa) conforme a equao:
(1)
sendo que SAs e SPIs so as sensibilidades do analito e padro interno
a
em solues analticas de referncia; SAa e SPI
so as sensibilidades do
analito e padro interno na amostra.
Assumindo que a absorbncia integrada Q = A dt proporcional massa m do elemento no tubo de grafite para GFAAS, pode-se
expressar a sensibilidade como:
(2)
Nesse caso, a seguinte expresso usada para encontrar a massa
do analito na amostra (maA):
(3)
De acordo com as equaes (1), (2) e considerando msPI = maPI,
(4)
Se as massas do analito e padro interno adicionados s amostras e solues analticas forem iguais, as equaes (1), (2) e (4)
podem ento ser reescritas conforme a equao 5:

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Fernandes et al.

(5)
na qual QaA e (QaA)cor so os sinais original e corrigido do analito,
respectivamente. A equao (5) pode ser usada para comparar os
sinais corrigidos do analito em diferentes amostras13.
Portanto, se a razo do sinal analtico pelo sinal do padro interno utilizada ao invs do sinal do analtico apenas, h a possibilidade de compensar qualquer perturbao negativa ou positiva nos sinais, melhorando a preciso e exatido das medidas.
De acordo com a literatura, um pr-requisito importante para
que um elemento seja escolhido como padro interno que ele possua propriedades fsico-qumicas semelhantes s do analito, seja solvel nas solues analticas e amostras, e que no interfira na determinao do analito4,5,13.
Desde a proposta da padronizao interna em espectrometria de
emisso atmica, vrios trabalhos foram publicados aplicando-se esse
mtodo de compensao para melhorar a preciso e exatido. Essas
duas caractersticas analticas tambm podem ser melhoradas em
espectrometria de absoro atmica em chama se a padronizao
interna for utilizada para compensar alteraes instrumentais ou
operacionais que modificam as condies de atomizao e absoro
da radiao: temperatura da chama, composio da chama, composio da amostra, taxa de aspirao e nebulizao, potncia da fonte
de radiao, etc. De acordo com Radziuk et al.13, a padronizao
interna em espectrometria de absoro atmica foi introduzida em
1965 por Massman14 para reduzir problemas relacionados com a introduo da amostra por nebulizao pneumtica. No mesmo ano,
Butler e Strasheim6 projetaram e desenvolveram um instrumento de
absoro atmica multicanal e empregaram Au como padro interno
na determinao de Cu em ligas metlicas por FAAS. Em 1968, Smith
et al.11 usaram Zn e Cr como padres internos na determinao de
Mg, Fe e Pb, ou Al, Cd e Cu, respectivamente, em materiais base
de zinco por FAAS. A estratgia de padronizao interna foi tambm adotada no trabalho de Feldman et al. em 196915. Os autores
compararam a determinao direta e a padronizao interna (Cd, Mn,
Cr ou Zn) com respeito preciso e exatido na determinao de Al,
Ca, Cr, Cu, Fe, Mg, Mn, Ni, Si e Zn em cimentos, ligas metlicas e
raes animais por FAAS. No ano seguinte, Feldman16 estudou os
principais fatores que afetam o sinal analtico em FAAS e FAES, tais
como vazo de ar e combustvel, composio da matriz, temperatura
e taxa de aspirao. Nesse trabalho demonstrou-se a vantagem da
padronizao interna para diferentes determinaes e enumerou-se
cerca de 23 elementos que podem ser empregados como padro interno na determinao individual de 18 metais16.
A estratgia de padronizao interna foi tambm usada por
Katskov e Lvov17 para determinar elementos trao em amostras de
xido de zircnio e grafite utilizando zinco e prata como padro
interno, respectivamente.
Em 1979, Takada e Nakano desenvolveram um espectrmetro
multicanal e aplicaram o conceito da padronizao interna em
espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica
para determinar ferro, usando cobalto como padro interno4. Para
ilustrar a vantagem da padronizao interna, os autores representaram a influncia da concentrao de potenciais interferentes no sinal
atmico de Fe e na razo dos sinais atmicos de Fe e Co. A interferncia de ctions em espectrometria de absoro em forno de grafite
comum quando no h separao eficiente da matriz e quando o
ambiente no isotrmico. Com exceo do Ca, para a maioria dos
elementos testados, a razo da absorbncia entre Fe e Co foi independente do tipo e da quantidade de interferente presente na matriz
para at 5,0 mg L-1, ou seja, 100 vezes a concentrao do analito em
soluo. Logo, efeitos de matriz puderam ser eficientemente e amplamente corrigidos com o uso da padronizao interna4. Por volta

Quim. Nova

de 1980, as principais dificuldades para generalizao do uso da padronizao interna em espectrometria de absoro atmica residiam
na indisponibilidade de um equipamento comercial que possibilitasse medidas simultneas ou seqenciais do analito e padro interno e
no escasso conhecimento de regras gerais para a seleo de um padro interno4,5,13.
Takada e Nakano, em 1981, avaliaram alguns parmetros experimentais de modo a elaborar alguns critrios de seleo de padro
interno para FAAS5. A mudana nas condies de atomizao e os
fatores que afetam a eficincia da atomizao foram enfatizados. Para
ilustrar a influncia da taxa de aspirao na atomizao, os autores
selecionaram 14 elementos e introduziram as solues individuais
via nebulizador a diferentes vazes. Quanto mais similar o comportamento entre os dois elementos, maior a probabilidade de serem
escolhidos como analito e padro interno. Assim, demonstrou-se que
os pares Cu-Ag, Cd-Zn, In-Tl, Fe-Co, Ni-Co e Ni-Sb podem ser
escolhidos como padro interno/analito ou vice-versa. Por outro lado,
qualquer elemento selecionado para esse estudo dificilmente seria
um bom padro interno para Mo, Cr e Pb5.
Com o desenvolvimento de espectrmetros de absoro atmica
multielementar simultneo em forno de grafite na segunda metade
da dcada de 80, as aplicaes em GFAAS aumentaram e o uso da
padronizao interna ressurgiu. Neste contexto, em 1991 Atsuya et
al.12 propuseram Cu e In como padres internos para Pb e Se, respectivamente, em amostras de gua usando um espectrmetro de
absoro atmica multielementar simultneo Hitachi, modelo Z-9000,
equipado com forno de grafite para amostragem slida. As
absorbncias desses elementos permaneceram constantes entre 500
e 800 C. Uma temperatura de pirlise de 600 C foi selecionada.
Apesar da impossibilidade de determinar Se em funo da sensibilidade atingida, Pb foi determinado em nveis de ng/g e Cu e In foram
utilizados como padres internos para determinao desse elemento
em amostras de gua12.
Em 1999, Radziuk et al.13 testaram Tl e Bi como padres internos
na determinao de Pb em amostras de sangue, urina e placenta usando um espectrmetro de absoro atmica multielementar simultneo equipado com um atomizador de grafite com aquecimento transversal (THGA) e um sistema de correo de fundo por efeito Zeeman
longitudinal. Bismuto apresentou comportamento eletrotrmico semelhante ao do Pb e foi usado para compensar alteraes nos seus
sinais atmicos de Pb, melhorando assim o desempenho analtico.
Com o objetivo de expandir o conceito da padronizao interna
em GFAAS, a aplicao de Bi como padro interno na determinao
de Pb em vinhos foi avaliada por Fernandes18. Nesse trabalho investigaram-se vrios fatores que usualmente afetam o sinal atmico do
analito, tais como a variao no tempo de atomizao, no volume injetado de soluo analtica ou amostra e da matriz, a influncia da temperatura de pirlise e de atomizao e da variao da corrente aplicada
s lmpadas, os erros de diluio, a vida til do atomizador etc. Para
ilustrar a potencialidade do Bi como padro interno, alguns desses
parmetros foram avaliados, tais como o comportamento eletrotrmico
de Pb e Bi em vinho tinto e branco usando Pd(NO3)2 + Mg(NO3)2
como modificador, o efeito da variao do volume injetado na
absorbncia e na preciso, os quais sero mostrados a seguir. Na Figura 1 encontra-se ilustrado o comportamento eletrotrmico de Pb e Bi
nos meios 0,2% v/v HNO3, vinho branco suave e vinho tinto suave.
Bismuto apresentou comportamento eletrotrmico semelhante ao do
Pb. A boa correlao existente entre os comportamentos eletrotrmicos
de Pb e Bi em soluo analtica e nas amostras de vinho indicaram que
Bi seria um potencial elemento para ser testado como padro interno
na determinao de Pb em vinhos18,19. O efeito da variao do volume
injetado na absorbncia em meio contendo 0,2% v/v HNO3 e amostra
est ilustrado na Figura 2. Os sinais de absorbncia de Pb e Bi cresce-

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Padronizao Interna em Espectrometria de Absoro Atmica

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Figura 2. Efeito do volume injetado na absorbncia da soluo 0,2% (v/v)

HNO3 (a) e amostra (b) contendo 25 g L-1 Pb e Bi

Tabela 1. Efeito do volume injetado na repetibilidade

Volume

Figura 1. Curvas de temperatura de pirlise e de atomizao para Pb e Bi

na presena de modificador Pd(NO3)2 + Mg(NO3)2 em meio 0,2% (v/v) HNO3
(a), vinho branco (b) e vinho tinto (c). Os sinais correspondem a suspenses
de vinho contendo 0,2% (v/v) HNO3 + 25 g L-1 Bi. A concentrao de Pb
a originalmente presente no vinho

ram proporcionalmente com o volume de soluo introduzido, mas a

razo de absorbncias permaneceu praticamente constante. Na Tabela
1 pode-se observar a influncia que o volume injetado tem na
repetibilidade das medidas feitas pelo mtodo direto e pelo mtodo da
padronizao interna. Nota-se que desvios padro relativos maiores
so obtidos quando aplicado o mtodo direto, enquanto que aplicando-se o mtodo da padronizao interna os desvios padro so menores e praticamente constantes. O uso da padronizao interna possibilita que maiores volumes de soluo sejam injetados no atomizador
sem prejuzo da preciso18,19.
O uso do mtodo da padronizao interna em espectrometria de
absoro atmica, apesar de pouco explorado na literatura, permite
minimizar os erros resultantes de alteraes nas variveis instrumentais e/ou operacionais, melhorando o desempenho analtico4-6,10-20.
As aplicaes da padronizao interna visando a melhoria do desempenho analtico esto restritas aos instrumentos com deteco
multielementar, pr-requisito fundamental desse mtodo de compen-

Mtodo direto

Padro interno

(L)

APb

ABi

RSD (%)

20
40
60

0,0604
0,1029
0,1480

0,0217
0,0355
0,0524

1,3
2,1
3,0

APb/ABi RSD* (%)

2,8
2,9
2,8

0,3
0,5
0,5

A = Absorbncia integrada; * (n=3)

sao. Outra limitao para uma maior aplicabilidade dessa estratgia reside na disponibilidade comercial de um pequeno nmero de
lmpadas multielementares com uma combinao restrita de elementos em cada lmpada. Com o surgimento de instrumentos de absoro atmica com fonte contnua em um futuro prximo, o carter
multielementar dessa tcnica tender a se tornar mais usual assim
como o campo de estudos relacionados com a seleo e uso de padro interno em AAS, levando a mtodos analticos mais exatos e
precisos e instrumentos com desempenhos analticos ainda melhores. O estudo de elementos adequados como padres internos para
diferentes analitos e amostras um pr-requisito tambm essencial
para o uso mais efetivo dessa estratgia.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem FAPESP pelos auxlios concedidos (Projetos 98/14636-2 e 00/14887-7) e ao CNPq pelas bolsas de ps-graduao (K. G. Fernandes) e de pesquisa (J. A. Gomes Neto e J. A.
Nbrega)

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Fernandes et al.

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