PAUTA SEMINARIO 1 DE FISIOLOGIA CELULAR CARRERA DE MEDICINA

MEMBRANA PLASMATICA Y TRANSPORTE

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PRINCIPIO BASICO DEL TEST DE ELISA

ORIGEN Y PROPIEDADES DE LAS CELULA HeLa

Son clulas provenientes de un carcinoma cervico-uterino de
Henrieta Lacks. Su caracterstica ms importante es que son
capaces de crecer en suspensin, vale decir, se pueden cultivar
de manera que son inmortales. Estas clulas corresponden a
una de las lneas celulares disponibles para cultivo actualmente
en el comercio. Su capacidad de sobrevida est dada
principalmente porque tienen una telomerasa activa (aun ms
que otras clulas cancerigenas) pudiendo dividirse
innumerables veces sin alcanzar una seal de muerte celular
por acortamiento de telomeros.

METODOS BASICOS PARA INTRODUCIR SUSTANCIA A UNA

CELULA
Sustancias liposolubles y no liposolubles tienen dos formas
distintas para ingresar a las clulas:
1) No Liposolubles:
inyeccin mediante micro pipeta

 electroporacin(clula entre dos electrodos genera

poros temporales por donde puede ingresar la
sustancia)
liposomas (vesculas que unen su membrana a la
celular depositando su contenido dentro de la celula)
disparo de partculas (pistola de tucsteno).

2) Liposolubles: pueden pasar libremente por la membrana

celular
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PRINCIPIO BASICO DEL SELECCIONADOR DE CELULAS O CELL

SORTER
Es a travs del mtodo de fluorescencia que las clulas son
clasificadas. Aquellas clulas que se detectan fluorescentes se
cargan negativamente, mientras que las que no se detectan
como fluorescentes se cargan positivamente. Por lo anterior al
pasar por el ctodo y el nodo que forman parte de la
estructura medidora se desvan en distintas direcciones
obtenindose aquellas partculas positivas y negativas
separadas del resto de las partculas que no sufrirn desviacin.

DIFERENTES TIPOS DE MEMBRANAS DE UNA CELULA

Plasmtica, Nuclear, Mitocondrial, Lisosomal, Golgi,
Peroxisomal, Reticulo Endoplasmtico.

PRINCIPALES FOSFOLIPIDOS DE LA MEMBRANA PLASMATICA Y

SU POLARIDAD

1) Fosfatidiletanolamina NEUTRO
2) Fosfatidilserina NEGATIVA
3) Fosfatidilcolina NEUTRO
* Esfingomielina, no es un verdadero fosfolipido pero participa
en la membrana comportndose como tal. NEUTRO
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PRINCIPALES MOVIMIENTOS DE LOS FOSFOLIPIDOS DE

MEMBRANA
1) Difusin lateral
2) Rotacin (sobre s mismos)
3) Flexin(en fosfolipidos insaturados)
4) Flip-Flop o Transposicin (cambio de lado en la membrana
colaboran las ezs flipasas)

IMPORTANCIA DEL COLESTEROL EN LA MEMBRANA PLASMATICA

1. Aporta mayor resistencia mecnica a la traccin.
2. Evita la formacin de estructuras cristalinas de
fosfolipidos, pues los separa.
3. Facilita la insercin de protenas en la matriz fosfolipidica.
1 colesterol cada 2 fosfolipidos (m.plasmatica)
proporcin de membranas int. Es mucho menor.

ESTRUCTURA Y ACTIVIDADES EN LOS MICRODOMINIOS O RAFTS

Los RAFTS son segmentos ms anchos de membrana que
contienen una mayor [ ] de colesterol. Cumplen funciones
importantes en el mecanismo de intercambio de colesterol (ej.
Las HDL) y la interaccin/entrada de virus a la celula.

ASIMETRIA DE LOS FOSFOLIPIDOS DE LA MEMBRANA

PLASMATICA

Esta cualidad hace posible el transporte a travs de la

membrana y la conservacin de la celula (medio intracelular

relativamente constante, medio extracelular cambia
constantemente)
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MECANISMOS DE ANCLAJE DE PROTEINAS INTEGRALES Y

PERIFERICAS

SIGNIFICADO DE LOS GRAFICOS DE HIDROPATIA

Los grficos de hidropata se realizan para localizar en una
cadena polipeptdica, segmentos de alfa hlix que atraviesan la
membrana (protenas transmembrana), o sea cuantas veces
pasa por entre la membrana. Se basa en la repulsin que
producen los residuos de aa en ambiente hidrofobico de
fosfolipidos.

CARACTERISTICAS OXIDANTES Y REDUCTORAS DEL ENTORNO

DE MEMBRANA
El entorno intracelular es de carcter reductor encontrndose
los tioles presentes en la estructura de las protenas libres. En
cambio en el entorno extracelular o extracitoplasmatico el
carcter es oxidante y los tioles, antes libres, se encuentran
formando puentes disulfuro

PRINCIPALES DETERGENTES UTILIZADOS EN EL ESTUDIO DE

MEMBRANAS
Se utilizan tanto detergentes inicos como no inicos. Dentro de
los no inicos estn Triton X-100 y el Octilglucosido. En cuanto a
los detergentes inicos se pueden mencionar el Desoxicolato de
sodio, Bromuro de cetiltrimetilamonio y Dodecilsulfato de sodio
(SDS)

PRINCIPALES PROTEINAS DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO

Espectrina alfa, Espectrina beta, Anquirina, protena banda 3,
Glucoforina, protena banda 4.1y Actina.

PRINCIPIO DE LA TECNICA FRAP Y FLIP E INFORMACION QUE

APORTA
La informacin que aportan estas tcnicas es acerca del
movimiento de protenas en la membrana plasmtica. Para esto
utilizan el fotoblanqueo a manera de medir la velocidad de
difusin lateral de estas protenas. En FRAP se hace un
blanqueo con laser y luego una recuperacin, lo que se mide en
este caso es la recuperacin de la fluorescencia. En FLIP se
hacen varios blanqueos y se mide la perdida de la
fluorescencia.

FUNCION CELULAR Y MOLECULAR DE LAS SELECTINAS

Las selectinas son protenas que reconocen glicoprotenas o
glucolipidos extracelulares en forma muy especfica. Se hacen
especficamente significativas en el rolling de leucocitos
donde ayudan con el reconocimiento del este para que pueda
salir del torrente sanguneo en una respuesta inflamatoria por
ejemplo.

PRINCIPALES DIFERENCIAS ENTRE DIFUSION SIMPLE Y

FACILITADA

En la difusin simple, no es saturable, opera segn el

coeficiente de permeabilidad de una molcula (solubilidad
relativa de una molcula en dos solventes de diferente
polaridad), ocurre a travs de los fosfolipidos de la membrana,
es el caso de los gases.
En cambio en la difusin facilitada, como su nombre lo dice,
requiere de ayuda, obedece a una cintica enzimtica. Un tipo
necesita gasto de ATP y el otro no.
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QUE SON LOS IONOFOROS Y COMO FUNCIONAN

Son transportadores o formadores de canales de origen natural
o sinttico que incrementan la permeabilidad de las membranas
a diferentes iones. SOLO TRANSPORTA IONES.

DIFERENCIACION ENTRE UNIPORTADOR, SIMPORTADOR Y

ANTIPORTADOR
Uniportador
Simportador
Antiportador
Transporta 1 molec
2 molec
2 molec
Transporte Pasivo
Transporte
Transporte
Acoplado
Acoplado
Funcionan
1 a favor de la
Molec que pasa a
abrindose y
gradiente y 1 en
favor de la
cerrndose por
contra de la
gradiente saca a
cambio
gradiente junto a
una en contra de
conformacional para ella hacia la celula. ella.
transportar a la
Ej. Simportador
Ej. Antiport potasiomolec a favor de la
sodio-glucosa.
protones.
gradiente.
Ej. Glut2

FUNCIONAMIENTO Y CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DE

LOS GLUT

Los glut estn encargados de transportar la glucosa tanto a

clulas como desde clulas a torrente sanguneo. Se abren para
recibir la glucosa, luego sufren un cambio conformacional que
encierra la glucosa dentro de ellos para finalmente abrirse por
el otro extremo. Los glut son protenas integrales multipasaje,
pasan 12 veces y existen distintos tipos para distintas clulas.
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CARACTERISTICAS DE LOS CUATRO TIPOS DE BOMBAS

MOLECULARES

EFECTO DE GLICOSIDOS (OUABAINA) EN LA FUNCION CARDIACA

La ouabaina aumenta la contraccin cardiaca. Logra esto

porque inhibe la bomba de sodio potasio, por lo tanto la
concentracin intracelular de sodio empieza a aumentar lo que
inhibe el antiport sodio-calcio, pues no puede entrar ms sodio.
Esto provoca aumento del calcio en la celula dando como
resultado un aumento de la contraccin (frecuencia) cardiaca.
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PRINCIPALES TIPOS DE CANALES IONICOS

MECANISMOS DE ABERTURA O CIERRE DE CANALES IONICOS

1) Cambio de voltaje: afecta solo momentneamente la

membrana no el contenido intracelular completo, ni tampoco
la membrana completa.
2) Ligando interno o externo a travs de receptores: ligando se
une al canal ya se intracelular o extracelularmente para abrir
el canal respectivo.
3) Forma Mecnica: cambio conformacional bloquea el espacio
abierto del canal. Por presin por ej.
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IONES Y SU CONCENTRACION EN LA DETERMINACION DEL

POTENCIAL DE MEMBRANA
Una membrana en equilibrio sin existir paso de iones tiene
potencial de membrana equivalente a 0mV. Cuando la
membrana es solo permeable a sodio al equilibrio este potencial
es negativo -59mV. En cambio con una membrana permeable al
potasio el potencial es positivo +59mV. De esto se obtiene que
el potencial de reposo celular es entre -40 y -100 mV siendo la
explicacin de esto que las cargas positivas se pueden mover
libremente ya que siempre hay canales de K abiertos, dejando
una mayora de cargas negativas en reposo dentro de la celula.

ESTRUCTURA MOLECULAR DE LOS CANALES DE SODIO,

POTASIO Y CALCIO
El canal de potasio es el mas simple siendo una protena
multipasaje, 6 veces, los canales de sodio y de calcio son la
repeticin de un canal de potasio 4 veces, sin embargo el canal
de calcio es ms largo que el de sodio.

HIPOTESIS SOBRE LA SELECTIVIDAD DE LOS CANALES DE SODIO

Y POTASIO
Con respecto al canal de sodio se postula que para que el Na
pueda pasar debe pasar en su forma hidratada, como el K es
ms grande en su forma hidratada no pasara por el orificio de
este canal, sin embargo el Litio si pasa por los canales de sodio
(efecto antidepresivos). En cambio el canal de K la interaccin

no es con la forma hidratada sino como anhdrido, como el Na

no puede deshacerse tan fcilmente del agua no podra pasar
por el canal de K, adems se postula que el K establecera 4
enlaces con su canal, lo que le permite pasar, sin embargo el
Na solo podra establecer 2 de estos siendo imposible su paso.
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QUE ES EL PATH-CLAMP Y CUAL ES SU UTILIDAD EN

INVESTIGACION
Es una tcnica que permite medir la abertura y cierre de
canales inicos, la permeabilidad de la membrana y potencial
de reposo. Es una tcnica de pinzamiento de la membrana que
permite tomar un canal de la membrana mediante el uso de
una micropipeta, con el fin de estudiarlo por separado.

INTERVENCION DE CANALES Y TRANSPORTADORES EN EL

TRANSPORTE DE GLUCOSA EN LAS CELULAS INTESTINALES
Los Glut 1(superficie apical) son transportadores que permiten
que la glucosa entre a las clulas intestinales cuando la
concentracin del lumen es mayor que la concentracin de las
clulas en cuanto a glucosa. Sin embargo cuando esta
concentracin se invierte existen simportadores sodio glucosa
en la superficie apical, que ingresan 2 molculas de sodio junto
con una de glucosa, esto hace que aumente la concentracin
intracelular de Na y comienzan a actuar las bombas de Na K en
la superficie basal de la celula para sacar el sodio de la celula. A
su vez la glucosa es sacada de la celula a la sangre por el Glut
2 que se ubica en la superficie basal.

MECANISMO DEL INTERCAMBIO OXIGENO-ANHIDRIDO

CARBONICO EN LOS ERITROCITOS
En los capilares sistmicos: (alta presin de CO2 y baja de O2)
1. CO2 atraviesa la membrana del eritrocito
2. El agua presente al interior del glbulo rojo se disocia en
iones hidroxilos y en protones.

3. El dixido carbnico reacciona con el grupo hidroxilo y

mediante la accin de la anhidrasa carbnica se transforma
en ion bicarbonato
4. El HCO3- atraviesa la membrana plasmtica con ayuda del
antiport cloruro-bicarbonato y es liberado a la sangre. (Entra
cloro)
5. El protn que resulto de la disociacin de agua se une a la
hemoglobina, cambiando su estado de oxidacin,
permitindole soltar hacia los tejidos el oxgeno al que
estaba unida.
En los capilares pulmonares: (baja presin de CO2 y alta presin
de O2)
1. Debido a la alta presin de O2, el O2 ingresa a los
eritrocitos y se asocia a la hemoglobina, lo cual ocasiona
la liberacin de un H+.
2. Simultneamente, hay HCO3- ingresando mediante el
antiportador Cloruro-Bicarbonato, mientras que el CL sale
del eritrocito. La anhidrasa Carbnica es una enzima
reversible, por lo que puede transformar el HCO3- en
CO2 + OH-. Aquel OH- que queda en el limbo se asocia al
H+ que haba sido liberado por la incorporacin del
oxgeno a la hemoglobina.
3. La disociacin entre el OH- y el CO2, en conjunto con la
baja presin de CO2 al exterior de la clula ocasionan que
este (el CO2) salga de ella.

MECANISMO DE PRODUCCION DE HCL EN EL LUMEN GASTRICO

En las clulas del estomago ocurren mltiples procesos

simultneos que resultan en la produccin de HCl.
En primer lugar la anhidrasa carbonica transforma el CO2 que
entra a la celula en bicarbonato, pero para eso necesita que el
agua se disocie en sus iones y unir el dixido de carbono al OH-,
en este paso tenemos dentro de la celula estomacal,
bicarbonato, protones H+. Lo que se busca ahora es ingresar Cla la celula y poder sacarlo de ella hacia el lumen junto con los
protones de H+ para producir HCl.
Para ingresar Cl- acta el antiportador cloruro bicarbonato que
saca el bicarbonato producido y hace entrar el Cl que luego va a
salir al lumen gstrico por el canal de cloruro. Por otro lado la
bomba protn potasio est encargada de sacar el H+ al lumen
gstrico al ingresar potasio a la celula, este potasio sale
libremente luego por los canales de K. De esta manera llegan al
lumen gstrico el H+ y el Cl- producindose HCl.

Fernando San Cristbal Brahm (apuntes).

Dr. Alfonso Valenzuela Bonomo (imgenes).
Dra. Nora Morgado Tapia (imgenes).