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OBJETIVOS

Seleccionar

tubos

comunes

de

laboratorio

para

usarlos

como

cubetas

para

el

espectrofotómetro.
Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un método
espectrofotométrico.
Establecer las condiciones óptimas de los parámetros probados para la aplicación del
método.
INTRODUCCIÓN
La espectrometría es un método químico que se utiliza para cuantificar la concentración de
analitos utilizando la luz. A los métodos que se auxilian con la luz para llevar a cabo un análisis
cuantitativo se le conoce como métodos espectrofotométricos, estos pueden tener una subclasificación dependiendo de la longitud de onda que utilicen para

el análisis entre los más

conocidos están: espectrometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta e infrarrojo.
Para considerar a un método espectrofotométrico como cuantitativo primero debe de cumplir
ciertas reglas como:

El método seleccionado deber ser específico para cuantificar un analito de nuestro interés.

Que el método esté libre de todas las interferencias posibles al momento de hacer la
determinación o en su defecto tratar de controlar lo más posible estas interferencias.

Debe de tener alta precisión y alta exactitud.

El método debe tener una alta sensibilidad y además el límite de detección debe de
corresponder a una concentración baja.

Experimentalmente para el establecimiento de un método espectrofotométrico, después de
optimizar las condiciones químicas del sistema (pH, temperatura, control de interferentes,
concentración adecuada de reactivos, solvente apropiado, protección a la luz para evitar
reacciones fotoquímicas, etc.) que garanticen que se tiene la especie de interés en condiciones
adecuadas para la medida, se establecen los siguientes parámetros:
Longitud de onda analítica, intervalo óptimo de concentraciones, curva de calibración,
sensibilidad del método analítico y límite de detección.
Tubo

%T400

No.

(NiSO4)

1

12.4

2

12.6

3

11.9

4

12.5

5

12.5

6

12.3

7

12.5

8

12.5

9

12.4

10

12.3

RESULTADOS, CÁLCULOS Y PREGUNTAS
Tabla 1. Selección de tubos comunes para usarlos como celdas.

 Explique qué son las superficies ópticas equivalentes y el
diámetro interno equivalente.

Tabla 2.726 1 Absorbancia adicionados de por mililitro en el tubo no.014 g/mol ----------.85 0.300 f(x)1.4x10 g = 1.1591x + 0.513 =1 -0.45 1.010 12 9.018 0.116 0.0.La superficie óptica equivalente se refiere a que las celdas presenten una superficie homogénea.067 0.008 4 0.008 10 6. simplemente usamos la siguiente ecuación: y = 0.05 1.16x + 0.735 -0. 2 por ejemplo: 0.5 13 10.0.07 0.0091 Sustituyendo en x los datos de Fe 3+ (µg/mL) de la tabla anterior.622 0.5 3) -6 X = 1.07) + 0. .062 0.029 0. H20 y NH4SCN µg/mL 3+ 0 0 2 4 6 8 10 X = 0.176 0.847 calibración de 0.07 12 detubo.1 mL (mL FeCl0.002 3 0.014 g/mol Peso molecular Fe3+ = 56 g/mol [FeCl3] = 0.25 0.065 -0.004 11 8.010. Asimismo deben tener igual grosor en toda la circunferencia del tubo.844 1.85(480 nm) 1. Fe3+ (µg/mL) Se realizan los mismos cálculosCantidad para cada Para calcular los valores de A ajustada por regresión lineal.1000 mL X ----------.175 0.505 R² 1.00025 M (1 litro) X = 0.183 0.399 0.020 Límite de detección o concentración mínima detectable (LDD).45 0.020 -0.4 µg entre los 20 mL de la mezcla de FeCl 3.003 Fe3+ Ahora calculamos la cantidad de Fe 5. El diámetro interno equivalente es análogo a la superficie óptica equivalente: el diámetro de los tubos deberá ser igual en cada tubo para que el paso de luz sea constante.003 5 0. se procede al siguiente cálculo: lineal 1 blanco 0 - - 2 0.7 0.35 0.65 1. es decir que sean idénticas o similares en cualquier punto de éstas.290 = 0.004 6 1.037 -0. Curva de calibración de Fe3+ por el método del NH4SCN.071 2 1.1M X (1 litro) --------------.120 -0.399 0 3.0091 = 0.00025 M Curva de0.008 1.009 8 9 56 g/mol --------------.007 7 2.05 0. (µg/mL) A480 por ypráctico- regresión yteórico férrico presente en cada tubo. Para determinar la cantidad de ión A ajustada Tubo Fe3+ No.1591 (0.630 0. Ejemplo tubo 2: y = 0.

0091 /0.68 10 6.59 0.037 91.88 76.14 Absortancia (100-%T) 6 1.82 1.15 0.84 98.07 96. en donde: y = Medida de absorbancia producida por la concentración mínima detectable.32 7 2.85 0.9x10-3 Entonces se obtiene que y = yB + 3SB = 0.844 14.0298−0.90 40 60.86 24.290 -1 5.Para su cálculo.0298 Finalmente se despeja a “x” de la ecuación de la recta de regresión lineal y el resultado obtenido será el límite de detección.39 0.16 0 0 91.76 0.176 66.57 11 8.513 3.0091 + 3(6. primero se obtiene la desviación estándar S B teniendo en cuenta que n = 12 ya S B = 6.175 -0.13 -0.5 Log [Fe3+] 1 1.45 0.120 75.85 1.10 80 13.020 95.5 1. yB = Medida de absorbancia del blanco u ordenada al origen = 0.50 4. Datos para aplicar el Método de Ringbom en la determinación de Fe 3+ por el método del SCN-.1591x + 0.25 0.12 9 5.45 0.9x10-3 que éste fue el número de tubos usados.5 12 9.04 1.68 100 60 - 33.91-1.98 1.72 0. Tubo No.43 94.46 0.13 LDD=x= y−a/¿ Tabla 3.07 -1.93 13 10.87 0.5 .02 0.0091 b=¿ 0.399 39.067 8.065 86.17 4 0.1591=0.0091 SB = Desviación estándar del blanco = 6.90 5 0. Ahora se usa la ecuación y = yB + 3SB.65 0. Fe Log Ringbom para Absortanci Curva de Fe3+ A %T 3+ (µg/mL) [Fe3+] 480 a 120 1 blanco - - - 2 0.622 23.50 3 0. y = 0.15 0.7 -0.735 1.83 8.32 20 85.05 0.10 8 3.35 -0.05 0.9x10-3) = 0.

ya que es cuando la absorbancia obtenida se acerca más al centro de la curva de calibración.303/¿ ×100=¿ %Ep=¿ Gráfica de tiempo vs absorbancia 0. Ahora interpolamos esos dos puntos hacia los ejes de Absortancia y log [Fe3+]. Punto 1 x1 = log [Fe3+] = 0 y1 = Absortancia = 32 Punto 2 x2 = log [Fe3+] = 0. y2 = 0.167 m . marcados con unas “X” en el gráfico.62 y1 = 0.496 90 0.959 Intervalo óptimo de concentraciones Intervalo óptimo de absorbancias y 2− y 1 89−32 m= 2. Para esto se escogen dos puntos sobre la recta. x2 = 5.54 0.56 0.561 30 0. .03 ¿ 2.Para obtener el porcentaje de error fotométrico es necesario calcular a la pendiente de la parte recta de la curva de Ringbom.44 0.42 0 20 40 60 80 100 120 140 Tiempo de reposo (min) ¿Es estable el color? No  ¿Cuál es el tiempo óptimo para hacer las lecturas? Explique porqué.75−0 76 ¿ ¿ ×100=3.52 Tabla 4.515 60 0. Absorbancias (480 nm) Tiempo (min) A480 0 0.75 y2 = Absortancia = 89 Convertimos los log [Fe3+] a concentración de ion férrico y las absortancias a absorbancias para determinar los intervalos donde se presenta el error fotométrico mínimo: x1 = 1 . Al min 0. Estabilidad del color respecto al tiempo.485 120 0. lugar donde se presenta el error fotométrico mínimo.5 0.48 0.303 = =76 x 2−x ¿ 1 0.476  0.58 0.46 0.

Efecto de la concentración de SCN .en la determinación de Fe3+.95 0.3 mL (mL adicionados de FeCl 3) X = 4.706 7 8700.2 µg/mL Para la cantidad de SCN.1000 mL X ----------.00025 M (1 litro) X = 0.0 4.en el tubo 2: [FeCl 3] = 0.2 690.43 0.748 8 11600.564 5 2900.591 6 5800.90 0.2 207.2 2071.0 4.38 0.0 4.168 3 232.0. SCN- Fe3+ SCN-/ (µg/mL) (µg/mL) Fe3+ 1 870.48 0.359 4 870.811 9 14500.806 Tubo No.00025 M .1M X A480 en todos los tubos: Peso molecular Fe 3+ = 56 g/mol (1 litro) --------------.2x10-5 g = 42 µg entre 10 mL (totales) = 4.24 0.014 g/mol 0.046 2 87.0 4.2 1380.2 2761.0 4.Tabla 5.2 3452.0 4. Para la cantidad de Fe 3+ 56 g/mol --------------.0 - - 0.14 0.71 0.2 20.0 4.2 55.0 4.014 g/mol ----------.

absorción 0  ¿Cuál 0 1es 2el 3pH 4 recomendado 5 6 7 8 para que se efectúe la 3+ reacción Fe y el SCN? pH = 3 pH Tabla 7. el sistema pierde la capacidad de 0.847 0.913 4 3 0.0.7x10-4 g = 870 µg entre 10 mL (totales) = 87 µg/mL Gráfica de A vs pH 1 Tabla 6.924 5 7 0.= 58 g/mol (1 litro) --------------. Efecto del pH. 0.893 3 1 0.03 mL (mL adicionados NH 4SCN) X X = 8. Anión A480 inicial A480 final Fluoruro 0.SCN-.6 Peso molecular SCN .810 0.6 pH’s ácidos se mantiene el sistema colorido.1000 mL 0 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Relaciónde de SCN-/ Fe3+ ----------.811 0.4 Blanco 2 0 0.1M Absorbancias (480 nm) 0.8 58 g/mol --------------. 1 pH A480  ¿De qué manera influye el pH en el sistema colorido? 0.5 M 0.5 M 0. Efecto de algunos aniones en la reacción Fe 3+ .007 6 7 0.8 Tubo No.823 0.0.4(1 litro) X [NH 4SCN] = 0.798 Fosfato 0.004 aumenta el valor de pH.701  ¿Cuál es el efecto de los diferentes aniones sobre la reacción entre el ión férrico y el tiocianato? .2 de la radiación y se obtienen absorbancias muy bajas.346 Oxalato 0.2 X = 29 g/mol 29 g/mol ----------.069 Tartrato 0.0. Conforme Absorbancias (480 Anm) 0.

CONCLUSIONES .13 DISCUSIÓN DE RESULTADOS Para la selección de tubos. por lo que se puede decir que nuestro método espectrofotométrico es sensible gracias a que se obtuvo un límite de detección pequeño. Condiciones óptimas para la determinación de Fe 3+ con NH4SCN. los valores nos variarían más del 2% de diferencia establecida. Existe un valor de porcentaje de error fotométrico máximo. Este último presenta una interferencia muy pequeña. ya que si no fuera de esta manera. se eligieron a aquéllos que presentaban características visualmente similares. fosfato y tartrato 0. Parámetro Valor óptimo pH 3 Tiempo 0 Concentración de SCNLímites de concentración con %Ep mínimo Aniones que interfieren (en orden creciente) Límite de detección del método (LDD) 870 µg/mL 1-5.03% por lo que nos encontramos dentro del intervalo permitido de error. mismo grosor y con boquilla gruesa y pronunciada. Tabla 8. Existe una relación entre el LDD y la sensibilidad. De igual manera. el paso de luz es constante o casi constante cuando se realiza una selección de tubos de la forma antes descrita. En orden creciente de interferencia se tienen a los aniones: oxalato. como: mismo diámetro.13. fluoruro.62 µg/mL Oxalato.Disminuyen los valores de absorbancia. el cual es del 5%. fluoruro. fluoruros y oxalatos aun en pequeñas cantidades interfieren formando complejos estables con los iones férricos. El límite de detección. obtenido en este experimento fue de 0. que se define como aquella concentración que proporciona una señal instrumental significativamente diferente de la señal del blanco. Todas estas características nos facilitan las lecturas de porcentaje de transmitancia. fosfato y tartrato. El %Ep que obtuvimos fue del 3. La palabra sensibilidad se utiliza como sinónimo de límite de detección bajo.  ¿A qué se debe este efecto? Los fosfatos.

“Técnicas instrumentales. . Editorial Universidad Politécnica de Valencia. oxalatos y fosfatos. Las condiciones óptimas para el buen funcionamiento del método espectrofotométrico realizado son pH’s ácidos (de 0 a 3). Manual de Laboratorio”. BIBLIOGRAFÍA  Torres Cartas Sagrario.Para un buen establecimiento de un método espectrofotométrico es necesario elegir inicialmente tubos con superficies ópticas equivalentes y diámetros similares. 60-61. pp. concentración de SCN de 870 µg/mL y evitar la presencia de aniones como fluoruros. concentración de analitos y presencia de interferencias. Gómez Benito Carmen. tiempo mínimo de reposo (menos del minuto). tiempo. al igual que controlar variables como pH.