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Cultivo y conservacin de los

microorganismos
Historia
Composicin de los microorganismos y componentes
celulares
Composicin qumica de una clula procariota
Requerimientos nutricionales
Clasificacin de los microorganismos por sus
requerimientos nutricionales
Concepto y clasificacin de los medios de cultivo

HISTORIA
Brefeld (miclogo), aisl y cultiv esporas de hongos en medios
slidos realizados a base de gelatina.
El ao 1878, Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento
rodajas de patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en
recurrir al caldo de carne lquido, diseado por Loeffler, al que, en
1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal
para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.
Walter Hesse ( mdico alemn) introduce el agar-agar (polisacrido
extrado de algas rojas) como solidificante.

HISTORIA
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar
placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus
investigaciones sobre las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de
nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el
desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales,
incorporando indicadores de pH a la composicin de ciertos medios
con lo cual se poda observar la produccin de cidos en la
fermentacin en ciertos microorganismos.

Composicin de los microorganismos


La clula:
Obtiene la mayora de las pequeas molculas del
ambiente
Las macromolculas son sintetizadas en el interior de
la clula
Dentro de la clula se sintetizan molculas pequeas
de las sustancias obtenidas del ambiente.
La masa total est formada de 4 tipos de tomos:
carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno.
En menor cantidad : fsforo, calcio, magnesio, azufre,
fierro, zinc, manganeso, cobre, molibdeno, cobalto y
tungsteno.

Principales componentes celulares


El agua constituye aproximadamente el
94-98% del peso de una clula
Peso
seco
principalmente
de
macromolculas:

protenas
cidos nucleicos (DNA y RNA)
lpidos
carbohidratos.

Requerimientos de los microorganismos

Requerimientos de Nitrgeno: N2, NH4+, NO3-, NO2-, aminocidos.


Requerimiento de Azufre: aminocidos, So, SO4-2
Requerimientos de Fsforo: PO4-2
Requerimientos de macro y micronutrientes:
Macronutrientes (10-3 a 10-4 M); Ca, Na, K, Mg
Micronutrinetes (10-5 a 10-6 M) ; Cu, Zn, Mn, Mo, Cr, Fe, etc.

Requerimiento de factores
de crecimiento

Auxotrofa
Prototrofa

Composicin qumica de una clula procariota


Molcula
Total de macromolculas
Protenas
Polisacridos
Lpidos
DNA
RNA
Total de monmeros
Aminocidos y precursores
Azcares y precursores
Nucletidos y precursores
Iones inorgnicos
Total

Peso seco
(%)b

Molculas
por clula

Clases
diferentes

96
55
5
9.1
3.1
20.5
3.5
0.5
2
0.5
1

24,610,000
2,350,000
4,300
22,000,000
2.1
255,500

~2,500
1,850
2c
4d
1
~650
~350
~100
~50
~200
18

100

Los datos son de Neidhardt, F.C. y col (eds).1996. Escherichia coli y Salmonella typhimurium-Cellular and
Molecular Biology, 2a, ed, ASM; b Peso seco de una clula de E. coli creciendo activamente (2.8 x 10-13 g); c
Asumiendo que la peptidoglicana y el glucgeno son los polisacridos mayoritarios presentes; d Existen diversas
clases de fosfolpidos; de cada uno de ellos se presentan muchas formas debido a la variabilidad de los cidos
grasos entre las especies y las condiciones de crecimiento.

Requerimientos nutricionales
Las sustancias en el ambiente utilizadas por los organismos
para el anabolismo y el catabolismo se denominan nutrientes.
Nutriente. Sustancia requerida por los organismos para la
sntesis de materiales celulares y para la generacin de energa
y que es obtenida del ambiente
Los nutrientes se pueden dividir en dos clases:
Macronutrientes, los que se requieren en grandes cantidades.
Micronutrientes, aquellos que se necesitan en pequeas cantidades.

Funciones de algunos nutrientes


para sntesis de macromolculas o estructuras
como generadores de energa sin ser directamente incorporados al
material celular
algunos nutrientes pueden jugar los dos papeles.

Macronutrientes en la naturaleza y en los medios de cultivo


Elemento Forma habitual del nutriente
en el ambiente

Forma qumica utilizada en medios de


cultivo

Carbono

CO2, Compuestos orgnicos

Glucosa, malato, acetato, piruvato, extracto


de levadura, peptona, etc.

Oxgeno
Nitrgeno

H2O, Compuestos orgnicos


NH3, NO3-, N2, Compuestos
orgnicos nitrogenados
Compuestos orgnicos
PO43H2S, SO42-, Compuestos
orgnicos azufrados, sulfuros
metlicos (FeS, CuS, ZnS, NiS,
etc.)
K+ en solucin o como sal
Mg2+ en solucin o como sal
Na+ en solucin o como sal
Ca+ en solucin o como sal
Fe2+ o Fe3+ en solucin o como
FeS, Fe(OH)3, u otras sales

H2O, Compuestos orgnicos


Inorgnicos: NH4CL, (NH4) SO4, KNO3, N2
Orgnicos: aminocidos, bases nitrogenadas
de nucletidos, compuestos con nitrgeno
KH2PO4, Na2HPO4
Na2SO4, Na2S2O7 Na2S, Compuestos orgnicos
azufrados

Fsforo
Azufre

Potasio
Magnesio
Sodio
Calcio
Hierro

KCl, KH2PO4
MgCl2, MgSO4
NaCl
CaCl2
FeCl2, FeSO4, soluciones de Fe quelado con
EDTA o citrato

Micronutrientes necesarios para los microorganismos


Elemento
Cromo

Funcin Celular

Requerido por los mamferos en el metabolismo de la glucosa, no se conoce


algn microorganismo que lo requiera
Vitamina B12, Transcarboxilasa (bacterias del cido lctico)
Cobalto
Lo requieren como cofactor algunas protenas implicadas en la respiracin
Cobre
(citocromo c oxidasa), la fotosntesis (plastocianina) y las destoxificacin de
radicales libres (superxido dismutasa)
Manganeso Varias enzimas lo requieren como cofactor. Por ejemplo, la superxido
dismutasa, la fotoliasa del fotosistema II.
Molibdeno Presente en enzimas que contienen flavina. Tambin presente en la
nitrogenasa, nitrato reductasa, sulfito oxigenasa, DMSO y TMAO reductasas,
formato deshidrogenasas, etc.
Nquel
La mayora de las hidrogenasas, coenzima F430 de las metangenas,
deshidrogenasa de monxido de carbono, ureasa, etc.
Selenio
Formato deshidrogenasa, selenocistena
Tungsteno Formato deshidrogenasas, oxotransferasas de termoflicos
Vanadio nitrogenasa, bromoperoxidasa
Vanadio
Anhidrasa carbnica, alcohol deshidrogenasa, DNA y RNA polimerasas y
Zinc
protenas que se unen al DNA
Citocromos, catalasas, peroxidasas, protenas con hierro y azufre (ferredoxina),
Hierro
oxigenasas, nitrogenasas

Constituyentes de los microorganismos


Las cuatro principales macromolculas
que constituyen a los
microorganismos:
Protenas
cidos nucleicos
Lpidos
Carbohidratos

Requerimientos de los
microorganismos
De acuerdo con los requerimientos de energa y
carbono, los microorganismos se clasifican en:
Fotoauttrofos (luz + CO2)
Fotohetertrofos (luz + compuestos qumicos)
Quimioauttrofos (compuestos qumicos + CO2)
Quimiohetrertrofos (compuestos qumicos)

Definicin de medio de cultivo


Sustrato o solucin de nutrientes en donde se
cultivan microorganismos en un laboratorio.
Es la imitacin de las condiciones favorables
para el desarrollo de los microorganismos.

Requerimientos de un medio de
cultivo

Fuente de carbono
Fuente de nitrgeno
Fuente de energa
Agua
Sales minerales
Factores de crecimiento

Etapas para la preparacin de medios


de cultivo
Slidos

Lquidos
Pesar

Pesar
Mezclar

Solubilizar

Calentar para solubilizar

Envase
Esterilizacin
Prueba de esterilidad
Pruebas de funcionalidad

Adicin de
substancias
termolbiles
estriles

Envase
Esterilizacin
Solidificacin
Pruebas de esterilidad

Tipos de medios de cultivo por su


composicin qumica
En microbiologa se usan dos grandes grupos de medios de cultivo:
Qumicamente definidos
se preparan aadiendo agua destilada a cantidades precisas de
compuestos orgnicos o inorgnicos altamente purificados. Por
ello se conoce la composicin qumica exacta.
Indefinidos o complejos
Emplean lisados de casena, de carne, de soya, de levadura o
cualquier otra sustancia altamente nutritiva (qumicamente
indefinida) como por ejemplo la sangre, el suero, jugos de
verduras, frutas etc. Entonces los medios complejos no se
conoce con precisin la composicin qumica ni la cantidad
exacta de cada uno de los nutrientes.

Ejemplos de medios de cultivo por


su composicin qumica
Medios complejos
o indefinidos

Medios definidos
Medio E de Vogel y
Bonner.
Medio de Knop
Medio de Fowell para
ascosporas

BHI
Gelosa sangre
Caldo nutritivo
Medio PDA
Medio Luria Bertani
Medio Baird Parker

Tipos de medios de cultivo por su consistencia


Lquidos
Slidos o semislidos
poseen adems agentes solidificantes que pueden ser agar, gelatina
slica gel. El agar proviene de las algas rojas Gelidium, Gracilaria,
Acanthopeltis, Ceramium y Pterocladia y qumicamente es un
polmero de azcares que posee interesantes propiedades que lo
hacen ideal para el cultivo de una gran variedad de microorganismos.
Se funde a altas temperaturas (87oC) y solidifica a 40-45oC. Adems
no es degradado por la mayora de las bacterias. Se usa a una
concentracin del 1.5-2%
La gelatina tiene el inconveniente de que se lica a temperaturas
relativamente bajas y muchos microorganismos la utilizan como
fuente de carbono y nitrgeno. Se utiliza a una concentracin del 510%.
La slica gel se emplea para algunos microorganismos que se inhiben
en presencia de agar.

Tipos de medios de cultivo por su uso


Los medios de cultivo dependiendo de su uso pueden
ser:
Simples
Enriquecidos
Selectivos
Diferenciales
De enriquecimiento
De transporte

Medios Simples
Los medios simples son medios comunes, que slo
tienen un tipo de infusin o extracto adems de
otros componentes. Son medios para fines generales
porque mantienen el crecimiento de muchos
microorganismos que no son muy exigentes.
Ejemplos: la gelosa nutritiva, el PDA, el caldo simple
o caldo nutritivo.

Medios Enriquecidos
Constituidos por algunas sustancias que los hacen ms
nutritivos. En estos medios puede crecer una gran
variedad de microorganismos.

Sangre
Suero
plasma
extractos nutritivos (levadura, carne)

Ejemplos: el BHI, gelosa sangre, medio Eugon, gelosa


chocolate, agar Columbia, medio Infusin de hgado,
etc.

Ejemplos de medios enriquecidos

Gelosa sangre

Medios Selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares debido a
que poseen un inhibidor o sustancia especfica, que nos permite
escogerlos o seleccionarlos.
Agentes Inhibidores: Las sales biliares o los colorantes como la
fucsina bsica, el cristal violeta, la eosina o el verde brillante
permiten el crecimiento de las bacterias Gram negativas, mientras
que inhiben el crecimiento de las Gram positivas.
Incubndolos con nutrientes que puedan utilizar de forma
especfica. Un medio que contenga celulosa ser efectivo para
aislar bacterias que digieran celulosa o bien la adicin de
sustancias tales como el NaCl o la sacarosa a concentraciones
relativamente altas lograr el propsito de aislar microorganismos
definidos.
Ejemplos de medios selectivos son el agar EMB (Eosina Azul de
Metileno), agar ENDO, agar MacConkey, S-110, SS, gelosa Rosa de
Bengala, agar Biggy, agar Verde Brillante, etc.

Medios diferenciales
Distinguen, separan, diferencian grupos distintos de
bacterias e incluso permiten una identificacin tentativa
de los microorganismos segn sus caractersticas
metablicas.
Ejemplos de medios diferenciales son el Gelosa sangre,
SS (Salmonella-Shigella), agar MacConkey, agar BairdParker, agar XLD, agar Vogel Johnson, Citrato de
Simmons, LIA, Kligler, Verde Brillante, etc. Ntese que
algunos de estos medios son adems selectivos.

MacConkey: medio selectivo y diferencial


Sustancias que
lo hacen
selectivo (rojo neutro y cristal
violeta) que permitirn el
crecimiento de bacterias Gram y diferencial (lactosa) que
definir
entre
aquellos
microorganismos que fermentan
la lactosa (colonias rojas) de los
que no pueden utilizar este
azcar
(colonias
incoloras,
amarillas o blancas).

Agar Sal manitol (ASM), medio selectivo y


diferencial

Desarrollan
microorganismos
capaces
de
crecer
en
concentraciones de NaCl del
7.5%, adems diferencia a
aquellos que fermentan el
manitol provocando el vire del
indicador de pH (rojo de fenol) de
rojo a amarillo.

Medio de gelosa sangre: enriquecido y diferencial

Gelosa sangre, medio de cultivo enriquecido y diferencial


El medio de gelosa sangre medio
enriqucido
que
estimula
el
crecimiento de microorganismos
denominados fastidiosos, adems
permite diferenciar la capacidad de
las bacterias de utilizar los
eritrocitos
la parcial llamada alfa (),
hemlisis total o beta ()
no utilizan a los eritrocitos y que no
provocan ningun cambio en el
medio y se conoce como hemlisis
gamma ().

SS ejemplo de un medio selectivo y diferencial


En esta imagen se observa el
desarrollo de tres tipos de
colonias crecidas en medio
SS (Shigella-Salmonella). Las
colonias rojas pertenecen a
bacterias
capaces
de
fermentar la lactosa (Lac+),
las incoloras son bacterias
que no fermentan este
azcar (Lac-) y las negras son
las que producen cido
sulfhdrico (H2S).

Medios de enriquecimiento
Enriquecer significa, en este caso, proporcionar al
microorganismo que se desea aislar todos los elementos
nutritivos necesarios para que alcance su ptimo crecimiento.
Se usan para aumentar el nmero relativo de organismos de un
tipo en relacin al total. Por ejemplo, enriquecer un patgeno
minoritario particular presente en una muestra altamente
contaminada con otros microorganismos irrelevantes desde el
punto de vista mdico.
Ejemplos de estos medios son: caldo tetrationato de Meller,
caldo selenito de sodio, caldo selenito, caldo urea, caldo
tioglicolato, agua peptonada, Monsur, etc.

Tcnicas de enriquecimiento
Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar
el microorganismo que nos interesa aislar.
Ejemplo 1: Nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas.
Tomamos un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz,
de manera que crezcan las bacterias fotoauttrofas.
Ejemplo 2: Queremos aislar bacterias quimiolittrofas del
azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de carbono
(disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar
fotoauttrofos.
Para incubar enterobacterias como Enterobacter hay que
incubar a 37, mientras que para incubar otra enterobacteria,
E. coli, hay que incubar a 45

Medios de transporte
Se utilizan para el transporte de diversas muestras
biolgicas evitando la muerte de los
microorganismos de inters.
Su composicin permite la viabilidad de los
microorganismos
pero
no
permite
su
multiplicacin
Ejemplos de estos medios son los medios de
Stuart, de agua peptonada para Vibrio, Cary y
Blair, Glicerol-Solucin Salina, Amies y Douglas,
Hajna, Caldo de Fildes etc.

Aislamiento y Seleccin
Uso de procedimientos que permiten la seleccin
y aislamiento de solo aquellos microorganismos
de inters, entre una gran poblacin microbiana.
Seleccin Primaria (Primoaislamiento).
Seleccin Secundaria (Resiembra).

TCNICAS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS


FUENTE
NATURAL

CULTIVO

SUELO
AGUA
AIRE
SUPERFICIES
ALIMENTOS
BIOTA NORMAL HUMANA
PRODUCTOS BIOLGICOS

TUBO
PLACA
MATRZ
GARRAFN
FERMENTADOR
CULTIVO CELULAR

TCNICAS COMUNES DE AISLAMIENTO


ESTRA CRUZADA
(CUALITATIVA)

PREPARACIN DE LA MUESTRA

CULTIVO PURO O AXNICO


IDENTIFICACIN
CONSERVACIN

DILUCIONES
CUALITATIVA Y
CUANTITATIVA

Presin de seleccin

Factores Nutricionales.
pH.
Atmsfera (Oxgeno).
Temperatura.
Osmolaridad y Aw.
Inhibidores.
Potencial Redox

Aislamiento

permiten obtener cultivos axnicos a partir de cultivos mixtos

Mtodos Cualitativos
Estria Cruzada ECONMICO, RPIDO, POCO MATERIAL, FCIL.

AISLAMIENTO EN PLACA POR ESTRA CRUZADA


Consiste en:
cargar el asa con la muestra y hacer estras paralelas
en la cuarta parte de la superficie de la placa;
se quema el asa,
se enfra,
se gira la placa aprox. 45
se vuelve a estriar tocando 3 4 veces el rea
sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de
placa.
Por ltimo sin quemar el asa, se estra el resto de la
superficie sin sembrar

AISLAMIENTO EN PLACA POR ESTRA CRUZADA

Mtodos Cuantitativos
Dilucin y Dispersin con varilla acodada

MS TARDADO, MS CARO, MS ADIESTRAMIENTO TCNICO,


MS MATERIAL

Aislamiento por dilucin en medio slido


Tcnica de dispersin en superficie:
1) Se colocan 0.1 mL de la dilucin de la muestra con
pipeta estril en el centro de la placa y se distribuye con
un varilla de vidrio acodada estril

Aislamiento por dilucin en medio


slido
Tcnica de diluciones y vaciado en
placa:
1) Se coloca 1 mL de la muestra en
una placa estril vaca, en el
centro de la misma. Sobre ella se
vierte 12-15 mL del medio de
cultivo fundido a una temperatura
de 45C, luego se incorpora el
inculo girando la placa en una
superficie horizontal movindola
6 veces en el sentido de las
manecillas del reloj, 6 en sentido
antihorario, 6 veces de arriba
abajo y 6 de izquierda a derecha.

TCNICA DE LAS DILUCIONES


2) Tambin se puede
preparar las diluciones
directamente en tubos de
agar fundido a temperatura
de 45C, se agita por
rotacin entre las manos y
se vierte en cajas de Petri
estriles.

COLONIA BACTERIANA

CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS PROVENIENTES


DE UNA CLULA , UN GRUPO DE ELLAS O UNA ESPORA
EN UN MEDIO SLIDO.
EL TRMINO UTILIZADO CUANDO SE DETERMINA LA
CANTIDAD POR UNIDAD DE VOLUMEN ES EL DE:
UNIDAD FORMADORA DE COLONIA (UFC) / mililitro o
gramo

UNA COLONIA TIENE ORGANISMOS QUE COMPARTEN


CARACTERSTICAS
GENOTIPICAS Y FENOTIPICAS YA QUE
PROVIENEN DE LA MISMA CLULA
LAS COLONIAS AISLADAS CON DIFERENTES CARACTERSTICAS
FENOTPICAS, ES DECIR CON DIFERENTES CARACTERSTICAS
MORFOLGICAS, SE PUEDEN DISTINGUIR DEBIDO A QUE CADA
GRUPO FILOGENTICO DE MICROORGANISMOS TIENE
CARACTERSTICAS PECULIARES QUE SE VEN INFLUENCIADAS POR
LAS CONDICIONES DEL MEDIO DE CULTIVO (TCNICA
CUALITATIVA).
LA ESTIMACIN DEL NMERO DE MICROORGANISMOS
CULTIVABLES PRESENTES EN UNA MUESTRA (TCNICA
CUANTITATIVA) SE PUEDE CALCULAR MEDIANTE LA SIGUIENTE
ECUACIN:

UFC=Unidades Formadoras de Colonias


Cuenta de Colonias.
Escoger la dilucin que tenga entre 25 y 250
colonias.
Aplicar la formula:

UFC/ml

10-6

10-7

10-9

10-8

10-10

Escherichia

CLCULOS
V (diluyente) + V (muestra) = V (total)
9mL
+
1mL
= 10mL
Se divide entre el volumen de la muestra

9mL

Dilucin

1mL
1mL

= 10mL
1mL
1:10

AISLADAS
DE 25-250
EJEMPLO:
DILUCIN: 10-8
250)

10-8

ALCUOTA: 0.1mL

NCOL. : 198 (cumple el intervalo de 25-

UFC/mL = 198.5 (1/0.1mL) (1/ 10-8)


UFC/mL = 198.5 X 10 X 108
UFC/mL = 198.5 X 109
UFC/mL = 19.8510
UFC/mL = 1.985X1011

Diluciones en tubo: Nmero Ms Probable


Tcnica estadstica se basa:
mientras es mayor el nmero de bacterias en una muestra
debe realizarse una dilucin mayor para reducir la densidad
hasta un punto en donde no quede ninguna bacteria capaz
de crecer en una serie de tubos.
El mtodo del NMP es muy til:
cuando los microorganismos que se cuentan no son
capaces de crecer en medio slidos, como es el caso de la
bacterias nitrificantes quimioauttrofas
tambin es til cuando el crecimiento de las bacterias en un
medio lquido y diferencial se utiliza para identificar ciertos
microorganismos.

TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE


(NMP)

Clasificacin de Bacterias

Bacterias Aerobias
Aquellas capaces de crecer con la
concentracin de oxgeno que existe en la
atmsfera (21%).
Sistema enzimtico de desintoxicacin de
radicales libres del metabolismo del oxgeno.
Radicales libres:
H O , O -, OH., O .
Enzimas contenidas en las bacterias
aerobias.
Catalasa, peroxidasa, Superxido dismutasa
2

Relacin de los microorganismos con el


oxgeno
Microorganismos aerobios: El oxgeno acta como aceptor
final de electrones en la respiracin aerbica. Existen dos
grupos de organismos aerobios:
Aerobios
estrictos:
Requieren
oxgeno
en
concentraciones similares a la atmosfrica (20%)
Aerobios microaeroflicos: Requieren oxgeno en
concentraciones inferiores a las atmosfricas; 5-10%.
Presentan enzimas como la hidrogenasa, que son
activas a las presiones parciales de oxgeno. La
hidrogenasa proporciona energa para el crecimiento.
En concentraciones atmosfricas, la hidrogenasa no es
activa y por ende la clula no crece y muere.

Relacin de los microorganismos con el


oxgeno
Microorganismos anaerobios: Son aquellos organismos que
no requieren el oxgeno:
Anaerobios facultativos: Crecen en ausencia y presencia de
oxgeno, pero crecen mejor con oxgeno. En ausencia
realizan la fermentacin y en presencia, la respiracin
aerbica.
Anaerobios estrictos: Aquellos que, no slo no requieren
el oxgeno, sino que su presencia los destruye. Su
metabolismo no requiere oxgeno, y realizan fermentacin
o respiracin anaerbica.
Anaerobios aerotolerantes: Aquellos que no requieren
oxgeno pero lo toleran; no mueren en su presencia. Son
microorganismos fermentativos y se diferencian de los
facultativos en que no crecen ms en presencia del
oxgeno.

Formas txicas del oxgeno


Bacteria aerobia

O2

Metabolismo

Productos
Txicos
O2OH.
O2.
H2O2

Rutas
detoxificantes
1. Superxido
dismutasa
2. Catalasa
3. Peroxidasa

Productos
no txicos
H2 O
O2

Bacteria anaerobia
O2

Metabolismo

Productos
Txicos
O2OH.
O2.
H2O2

No hay rutas
detoxificantes

Muerte
bacteriana

Relacin de los microorganismos con el


oxgeno
Grupo

Requerimiento
de O2

Metabolismo

Ejemplo

Hbitat

Obligados

Si

Respiracin
aerbica

Micrococcus luteus

Piel, polvo

Facultativos

No

Respiracin
aerbica y
anaerbica,
fermentacin

Escherichia coli

Intestino

Si, baja
tensin

Respiracin
aerbica

Spirillum volutans

Lagos

No

Fermentacin

Streptococcus
pyogenes

Tracto
respiratorio

Letal

Fermentacin,
repiracin
anaerbica

Methanobacterium
formicicum

Diverso

Aerobios:

Microaeroflicos
Anaerobios:
Aerotolerantes
Obligados

Cultivo de microorganismos aerobios


En cajas de Petri sobre medios slidos. La superficie del medio
de cultivo est en contacto con el oxgeno atmosfrico, luego
no hay ningn problema para cultiva este tipo de
microorganismos.
En medio lquido, el microorganismo crece en la disolucin,
donde la concentracin de oxgeno es menor y disminuye en
funcin del crecimiento del microorganismo. Para evitar esa
disminucin de oxgeno, utilizamos dos recursos:
Agitacin
Adicin de aire u O2 estril mediante burbujeo.

Cultivo de microorganismos anaerobios


estrictos
En medio lquido, aadimos al medio de cultivo agentes
reductores que toman el O2 disuelto en el agua y forman H2O.
Estos agentes son: cistena, tiglicolato.
Caldo tioglicolato: medio reductor. Contiene un indicador de
xido-reduccin (Resazurina), la cual cuando est oxidada es de
color rojo e incolora cuando est reducida.
Contiene agar en pequeas concentraciones (0.5%), dndole
consistencia semislida, previene el movimiento de los
organismos inoculados y de la introduccin de oxgeno.
Otra forma para cultivar en medios lquidos es bombeando un gas
inerte (N2) libre de O2, mediante burbujeo.

Tcnicas de cultivo de anaerobios


Caldo carne cocida (extracto de corazn de bovino) con sello
de nujol. Agente reductor; aminocidos azufrados de la
carne.
Medio Leche-Fierro con sello de nujol. Agente reductor;
Fierro. Sustrato e indicador; Leche.
Jarra de anaerobiosis. Sistema de sustitucin de oxgeno de
la jarra por CO2 e H2.
Cmara de anaerobiosis: Cmara hermtica saturada con gas
libre de oxgeno como el nitrgeno o el hidrgeno.

Cultivo de anaerobios en medio slido


En medio slido, se emplean jarras de anaerobiosis o jarras de
Gas Pak. Su tamao es similar al de un termo. En su interior se
colocan las cajas de Petri invertidas. El recipiente se cierra con
una tapa hermtica. En la parte inferior hay un agente
desecante (slica gel) y en la tapa se encuentra el catalizador
(Pd). Para conseguir la anaerobiosis, introducimos sobres
generadores de anaerobiosis, que contienen Na2CO3 y NaBH4.
Al aadir agua al sobre, se libera H2 y CO2.