You are on page 1of 30

' ',[ 1''.

'**{
-'.
.\

q-{

'5-.

El citoesqueleto

T-r

vamentelos orgnulosde membrana,dentro del citosol.


hemosanalizadomultitud de
-n los captulosanteriores,
procesos
y rutascelulares,
que tienenlugar en los orgnu- Desempeaun papelsimilar con eIARN mensajeroy otros
componentescelulares.De hecho,muchasde las enzimas
los de clulaseucariotas.
Nos ocuparemosahoradel citono sonsolubles,
del citosol,seguramente
sino queestnfsol, que esla regin del citoplasmaque seencuentraalrededor y entre los orgnulos.Hasta hace unas pocas sicamenteunidas al citoesqueltoy confinadasmuy cerca
de las enzimasimplicadasen la misma ruta, de tal manera
el citosolno suscitaba
ningn intersen particudcadas,
que sefacilita la canalizacnde intermediariosdentro de
y
similara
lar sehacareferenciaa l como una bustancia,
cada ruta. El citoesqueletoparticipa ademsen muchas
el ncleoy otrosorun gel,en la que estabansuspendidos
gnulos.Los bilogoscelularessabanque las protenas formasde movimiento celulary estntimamenterelaciocomola sealizacin
celularo las
del citosol,pero se pensaba nadocon otrosprocesos,
constituanhastael 20-30o/o
unionesclulaa clula.EI citoesqueletosealterapor fenque estasprotenaseran solublesy que eran capacesde
menos que ocurren en la superficiecelular al mismo
moverselibremente.Aparte de aqullascon actividadenzitiempo,pareceque participay moduladichosfenmenos.
mtica,se conocapoco de la importanciaestructuralo
en la estructuradel
En estecaptulo,nos centrarmos
funcionalde lasprotenascitoslicas.
En
16
analizaremos
msdetenicitoesqueleto.
el
Captulo
y en otrastcnicasde inLosavances
en la microscopa
poniendo
del
damentela funcin
citoesqueleto,
especial
han puestode manifiesto,que el interior de
vestigacin,
atencinen el movimiento celular.
una clulaeucariotaestaltamenteestructurado.Partede
un entraestaestructurala proporcionael citoesqueleto:
mado complejo de filamentosy tbulos interconectados
Principales elementos estructurales
que seextiendena lo largo del citosol,desdeel ncleohastalacarainternade la membranaplasmtica.
del citoesqueleto
expresa
una
manera
acertaEl trmino citoesqueleto
de
del citoesqueleto
Los principaleselementosestructurales
da la funcin de estared de polmeros,que esla de propory filamentos inters, microfilamentos
son tres:microtbulo
cionar una estructuraarquitectnicaa las clulaseucariode clulaseucariotas(Figumedios,
todosellosexclusivos
tas. Aporta un alto nivel de organizacininterna a las
ra 15.1).La existenciade tres sistemasdistintosde filaclulasy lespermite asumir y mantenerformas complicamentosy tbulos.sepuso de manifiestopor primera vez
dasque no seranposiblesde otra manera.El nombre no
transmite,sin embargo,la naturalezadinmica y plstica mediante microscopaelectrnica.Posteriormente,se
identificaron,medianteestudiosbioqumicos in-.tnoni el papelcrticoquedesempea
en mudel citoesqueleto,
lgicos,las diferentesprotenasde cadasistema,que son
celulares.
chosprocesos
de clulaseucariotas.
La tcnicade mitambinexclusivas
El citoesqueletotiene.unpapelimportante en el Ag(Tabla
y
pogiciona
qliento
y
gelulare,y
15.2;vasetammueveagticroscopade inmunofluorescencia
en la divisin
--__#
+.
Principales
elementos
estructurales
delcitoesqueleto 465

(a) Microtbulos

(b) Microfilamentos

Figura15.1 Distrbucin
intracelularde microtbulos,
microfilamentosy filamentosintemedios. (a) Imagen de la
distribucin de los microtbulos en clulasde la lnea celular PtK1, de rion de rata canguro,visualizadosmediante la tincin
inmunofluorescente de la tubulina. Como referencia,seha teido
el ncleo con el colorante fluorescenterojo de ADN, ioduro de
propidio. (b) Imagen de la distribucin de los microfilamentos en
clulasde Ia lnea celular de rion de rata, visualizadosmediante
la tincin de la actina con un derivado fluorescentede la faloidina.
(c) Imagen de la distribucin de los filamentos intermedios en las
clulasPtK-1, marcadoscon la tincin inmunofluorescente de Ia
queratina. El ncleo seha teido tambin aqu con ioduro de
propidio.

(c) Filamentos
intermedios

b m

bin Apndice)fue especialmente


importantea la hora de
localizarprotelnasespecficas
en el citoesqueleto.
Aunque
lasestructuras
del citoesqueleto
sehan considerado
exclusivasde lasclulaseucariotas,
seha demostradorecientementeque algunosprocariotas,como los bacilos,poseen
protenasque funcionan de una maneramuy similar a los
microfilamentos(protenasde la familia MreB), microtbulos (la protenaFB\ y filamentosintermedios(una de
ellassedenominacrescentina).
Aunquelasprotenasbacterianasno separecenmuchoa sushomlogaseucariotas,
en lo que a la composicinde aminocidosse refiere,
cuandoseensamblanen polmeros,su estructurageneral
esbastantesimilar.
Cada uno de estoselementosestructuralesdel citoesqueletotieneun tamao,estructuray distribucin intracelular caractersticas,
y cadauno seorigina por la polimerizacindeun tipo de subunidaddiferente(Tabla15.1).Los
microtbulosestncompuestos
por la protenatubulinay
tienen un dimetro de aproximadamente25 nm. Los mi466

Capitulo
15

Elcitoesqueleto

crofilamentos,con un dimetro de unos de 7 nm, son pollmeros de la protena actina.Los filamentosintermedios


poseenun dimetroentre8 y 12 nm. Lassubunidadesque
componenlos filamentosintermedios,difierenen funcin
del tipo celular.Aparte de su protenaprincipal, cadaclase
de filamentodel citoesqueletopresentaun nmero de protelnasasociadas.
Estasprotenasaccesorias
son responsablesde la notablediversidadestructuraly funcional de los
elementosdel citoesqueleto.
Losmicrotbulosylos microfilamentos
sonmsconocidospor el papelque desempean
en la mqlaj&klcelular.
Los microfilamentosson componentesesenciales
de lasfibrillas musculares,y los microtbulos son los elementos
estructurales
delosg@:ylos flqgb,apndices quecapacitan a la clula,tanto para desplazarse
a travsde un medio fluido, como parabatir el medio extracelular.Estasestructuras son lo suficientementegrandescomo para ser
vistasmediantemicroscopiaptica por lo tanto, se conocany fueron estudiadasmucho antesde que seaclarase

y filamentos
intermedios
microfilamentos
delosmicrotbulos,
Tabla15.1 Propiedades
Filamentos
intermedios

Miclofilamentos

Microtbulos
Estructura

Tubo huecocon una paredformada


por 13protofilamentos

Dos cadenas de actina


entrelazadas

Ocho protofilamentos unidos extremo


a extremo, con solapamientos escalonados

Dimetro

Exterior:25 nm
Interior:15nm
Tubulina a
Tubulina p
(+), (-)
Extremos

7nm

8 - 1 2n m

G-actina

Varias protenas; vaseTab\a I5.5

E x t r e m o s( + ) , ( - )

Sin polaridad conocida

Axonema:motilidad celular
Citoplsmica:
organizaciny mantenimiento
de la forma de la clulaanimal
Movimiento de los cromosomas
Disposiciny movimientode los orgnulos

Contraccin muscular
Movimiento ameboide
Locomocin celular
Flujos, corrientes
citoplsmica
Divisin celular
Mantenimiento de la forma
de la clula animal

Soporte estructural
Mantenimiento de la forma de Ia clula animal
Formacin de la 1mina nuclear y el andamiaje
Reforzamiento de los axones de las clulas
nerviosas (protena NF)
Mantenimiento de las fibras musculares
en registro (desmina)

Monmeros
Polaridad
Funciones

mos quitar o alterar selectivamenteIa funcin de las protenas relevantes:en el caso de la tubulina y de la actina,
podemos usar ciertas sustanciaspara alterar la funcin de
la protena en un sentido determinado. Mediante el estudio de los efectosde dichasdrogasen procesoscelularesespecficos, es posible determinar, al menos aproximadamente, las funciones que dependen de los microtbulos o
de los microfilamentos.
Por ejemplo,la colchicina(un alcaloide que se obtiene
del azafrn silvestre,Colchicum autumnale), se une a los
monmeros de tubulina, inhibiendo su ensamblajeen microtbulos y fomentando el desensamblajede los que ya
existen. Por el contrario, el taxol (del tejo americano, Taxus
Tcnicas para el estudio del
brevifolia) se une fuertemente a los microtbulos y los esque gran parte de la tubulina libre en
tabliza,provocando
citoesqueleto
la clula se asociepara formar microtbulos. Por lo tanto,
la sensibilidadde un procesocelular a la colchicina o al tahanrevolucionadoxol, es un buen indicio de que los microtbulos podran
modernas
demicroscopa
Lastcnicas
delcitoesqueleto
el estudio
intervenir en dicho procesoen la clula.De una manera similar, la sustancia citocalasinaD, un metabolito fngico y
Actualmente, el citoesqueletoes un tema de gran inters
la latrunculina A, vna toxina marina que se asla de la espara los bilogos celulares.Gran parte del progresorecienponja del mar Rojo, Latrunculia magnifica,inhiben la polite en la comprensin de la estructura del citoesqueleto,se
merizacin de los microfilamentos de actina. Por el condebe a tres tcnicas microscpicas de gran potencia: mitrario, la faloidina un pptido cclico obtenido del hongo
croscopade inmunofluorescencia,videomicroscopadigioronja verde (Amanita phalloides),bloquea la depolimerital y microscopa electrnica. La Tabla 15.2 resume cada
zacin de la actina, y estabilizando los microfilamentos.
una de estastcnicas,que se describirn ms en detalle en
Los procesosque seven interrumpidos en las clulascon el
el Apndice. Adems, se han empleado drogas y mutaciotratamiento con estassustanciasprobablementedependan
para
anIigran
utilidad
el
que
han
de
sido
nes especficas,
de alguna manera de los microfilamentos. Los usos y los
sis de la funcin del citoesqueleto.
efectosde estassustanciasse discutirn detalladamente a lo
largo del captulo.
y mutaciones
usarciertasdrogas
Sepueden
Adems del empleo de sustancias,tambin nos podeparadesorganizar
citoesquelticas
lasestructuras
mos servir de las mutaciones para estudiar el citoesqueleto. Los bilogos celulares,mediante el uso de la genticay
Aunque las tcnicas microscpicas pueden desvelarmucho
la biologa molecular, han aislado organismos mutantes o
acerca de la estructura del citoesqueleto, no nos permiten
lneas celularesen los que se han introducido mutaciones
deducir mucho acercade su funcin. Para analizar la funespecficasen una protena determinada del citoesqueleto.
cin de un filamento del citoesqueleto en particular, debe-

que los mismos elementosestructuraleseran tambin partes integralesdel citoesqueleto.


Consideraremosdetalladamentecada elemento estructural. Para ello, trataremos a los microtbulos, los microfilamentosy los filamentos intermedios como si fuesenentidadesseparadas,cada una de ellascon una funcin propia
independiente.Sin embargo,recuerdeque los componentes del citoesqueleto estn vinculados, tanto estructural
como funcionalmente, lo que genera nuevas propiedades
arquitectnicas que no son simplemente la suma de las
partes,como veremosen la ltima seccinde estecaptulo.

parael estudio
Tcnicas
delctoesqueleto 467

(
(
d

(
.F

E
.c

u)
N
d

iE

tlr

9F

EO
,.E
X8..91

EA 3 F
J -

.9
L
E
o

U 3

" .

--Y

-;o. >> ! : . e

f,l iF
E6g
u-tr:
AJ;U
2 ft ?',a

S.l

6 E

q ?'=
q.Yo
5 P.trE:
'o_o
I 9
- =

h
.:

FR

HgEX

!; r3i

,^a^Y

v - :

(, d

!.=

E=
ET
o
q,

o
c
E

xHq

c
ro

(,
t
(
t,
a,

.9

.:

46?q

I
.E a
sF.EF 9 P
v

x=

'u
R E 6.'6 -
tr6; rE o
6

6 ' -

;t r . E
!: I
= Y o.= X

!t
5
at
q,

6gFE_gE
o^i5ho

!*oo*!

o)
(g
(E
CL
o
(E

xetr

vx:

q -

q tr.g ^ H
.! o AH c

^U"X
; .

.-ci,Y
F f .Y ?

E fi 8.e
Eg3:E
:

.=

xn:Es

qQ
'=?^o
o

*!
lo'i

'Ao3YE

d Y 6 ^ q

-3.E.iE.E
3 5 .uF :

tr
a
>
5 o
O ^
9:a?-:sq

)-!!

"o

6+"'xe
Y

i ,

sriFeE
9oo.Sts

: .= 6
XnoE

P'r'L
.Yo

3E;

E i.l'os
!9!:F i : ! . ' |
F E Y
E ci
I i
c'SE
I

. = ' "

c*'-9

l?e-:
!i o,F
d
X d .9 :'o
)

s - sg ;
Ad

.O

(,

\q)

q 's
-o;:v

. tr'E:
*s.!{
3:oE
i-Nx"
ts i

9 . EP *

.9

(,
rt 9
E

:'J>

Fl

F
Captulo
15

E
>'tr

oo

.6

E+
Elcitoesqueleto

F d 9.i
;q F.: E

3e

=
.: .^
.

(F.y.
o S

.:H:

,Y

.s

.9

468

EAi=

6uc

s9E.E.9H
ox

.9.bx

3.E h!;

FEgT:
H: X; q

o
o)

ga9

's

s b;.E=
X

6.;;

^>d
!
E

h;.qY^

: 3 . 8v "

c.9

o9

> -F

E -e;;
'-6: p- dr x rEp , r V

X*
o o.:-Y

o'q
F d

o 9 _t
O E.:

!l-o
.::'@

G66

3Rs!s

x !:
tr*.*

7!

Dichasmutacioneshan sido tiles para indentificarlos


procesoscelularesque requierenla participacinde protenasdel citoesqueletoy paraelucidarqu partesde dicha
parasu funcin.
protenasonnecesarias
estastcnicas,estamosahorapreTeniendopresentes
parados para tfatan cada uno de los tres componentes
principalesdel citoesqueleto.
En cadacaso,considerarela estructuradel
mos la qumicade la(s) subunidad(es),
polmero,el modo de polimerizacin,la funcin de las
y algunosde los papelesestructurales
protenasaccesorias
y funcionalesque desempeacadacomponentedentro de
en primer lugarlos microtbulos.
la clula.Trataremos

eeebgJgs
que son responsables
Existendostipos de microtbulos
en la clula
de muchasfunciones
Los microtbulos(MTs) son los elementosdel citoesqueleto msgrandes(Tabla15.1).Losmicrotbulosde lasclulas eucariotaspueden ser clasificadosen dos grandes
grupos,que sedifcrens;ian*IanlqporsuJr{adode o{tn!zaEIprim grup,losmicrotbulos del axonema,incluye a los microtbulosaltamenteorganizadosy establesque
especficas,
relasubcelulares
seencuentranen estructuras
cionadascon el movimiento celular,como los cilios, los
flagelosy los corpsculosbasalesa los que se unen estos
El elementocentral,o axonemalde un ciiio o de
apndices.
un flageloestformado por un hazmuy ordenadode MTs
Debidoa su estabilidad
del axonemay protelnasasociadas.
que los MTs del axoy ordenamiento,
no essorprendente
nema fuesenel primero de los dos gruposen ser descubierto y estudiado.Yahemosvisto previamenteun ejemplo
de dicha estructura;el axonemade la cola del espermatozoidede la Figura4.12,estformadopor MTs.En el Capla estructura
ms detalladamente
tulo 16 consideraremos
del axonemay losmovimientosmediadospor losmicrotbulos.
El segundogrupo lo forma una red mslaxay dinmicade microtbulos citoplsmicos.LosMTs citoplsmicos
hastaprinen lasclulaseucariotas
no fuerondescubiertos
cipiosde la dcadade 1960,con la aparicinde mejores
de una
tcnicasde fijacin,quepermitieronla observacin
red de MTs,que hoy en da sesabeque predominanen el
A partir de
citosolde Ia mayorade las clulaseucariotas.
fluorescencia
ha
mostrado
la
microscopa
de
esemomento,
y
de
las
redes
de
MTs
en difela diversidad la complejidad
rentestiposcelulares.
Los MTs citoplsmicosdesempeanvarias funciones
(vaseTbla
en lasclu15.1).Por ejemplo,sonnecesarios
las animalespara el mantenimientode los axones,prolonelcgacionesde las clulasnerviosas,cuyaspropiedades
tricas hemos examinadoya en el Captulo 13. Algunas

clulas animales necesitanlos MTs citoplsmicospara


mantener su forma polarizadadurante su migracin. Se
piensaque en las clulasvegetales,
los MTs citoplsmicos
regulanIa orientacincon la que sedepositanlas microfibrillas de celulosaduranteel crecimientode lasparedescelulares.Esparticularmenteimportante el papelde los MTs
citoplsmicosen la formacin de los bugs gilrcqs y
glgifiQ.s,que son esenciales
para el movimiento de los
cromosomasdur ante taettg51lqpaciosb (vase Capitu lo 19).
Los microtbuloscitoplsmicoscontribuyenasimismo
y al movimientodireccionaldevea Ia disposicinespacial
sculasy de otros orgnulos,proporcionandoun sistema
de fibrasorganizado,que guasu movimiento.Por ejemlalocalizaplo, los MTs citoplsmicosardan a establecer
cin de orgnuloscomo el aparatode Gg$9y el retcukr
Adopl.iq1gg,y estnimplicadosen el movimiento activo
(vaseCapitulo
16).
de vesculas
de tubulinason las protenas
Losheterodmeros
con las que se construyenlos mictotbulos
Como seha mencionadoen el Captulo4, los MTs son cilindrosrectosy huecosconun dimetroexteriorcercanoa
los 25 nm y un dimetro interior de aproximadamente
Losmicrotbulospuedenvariarenor15nm (Figura15.2).
mementeen longitud.Algunosmiden menosde 200 nm
de largo;otros,comolos microtbulosdel axonema,pueden llegara medir de variosmicrmetros.La paredde los
microtbulosestformadapor un conjuntode polmeros
linealesllamadosprotofi.lamentos.Normalmentehay l3
protofilamentos,colocadosuno al lado del otro, alrededor
del huecocentralo lumen.
Como semuestraen la FiguraI5,2,la subunidadbsicade un protofilamentoesun heterodmerode la protena
tgpggE/ Los heterodmerosque constituyenla mayor
parte de los protofilamentosestncompuestospor una
molculade tubulina a y una molculade tubulina B.Tan
pronto como se sintetizanlas molculasindividuales de
tubulina a y B, stasse unen no covalentementeuna a la
otra paraproducirun heterodmeroaB queno sedisocia
normales.
en condiciones
Las molculasde tubulina a y B tienen un dimetro
aproximadode 4-5 nm y un pesomolecularde 55 kDa.En
seha comprobadoque las
diversosestudiosestructurales
tubulinasa y B tienen casilas mismasestructurastridimensionales,
a pesarde que slocompartenel 40%o
de su
de aminocidos.
Cadauna sepliegaen tresdosecuencia
minios: un dominio en el extremoN-terminal,que une
GTR un dominio central,dondepuedeunirseel inhibidor
de la polimerizacinde los microtbulos,la colchicinay
un tercer dominio en el extremo C terminal, que interacciona con las protenasasociadasa los microtbulos
(MAPs; hablaremosms tarde de las MAPs en estecaptulo).
Microtbulos 469

Protofilamento
(a) Estructura
del microtbulo

(b) Microtbulos
en un axn

Figwa t5.2 Estluctula de un miclotbulo, (a) Diagrama esquemticoen el que semuestra un microtbulo como un cilindro hueco que
encierra una luz. El dimetro externo es de apromadamente 25 nm y el interno, de unos l5 nm. La pared del cilindro estformada por
13 protofilamentos, la flecha sealauno de ellos.Un protofilamento es un polmero lineal de dmeros de tubulina, cada uno de los cuales
estconstituido por dos poliptidos, tubulina n y B. Todos los heterodmerosde los protofilamentos poseenla misma orientacin,
proporcionando de estamanera la polaridad al microtbulo. (b) Microtbulos en un corte longitudinal de un axn (TEM).

En el interior de un microtbulo,todoslos dmerosde


tubulinaestnorientadosenla mismadireccin.de manera quetodaslassubunidades
detubulinad exponenel mismo extremo.Estaorientacinuniformede los dmerosde
tubulina provocaque un extremodel protofilamentodifiera qumicay estructuramente
del otro,lo queconfiereuna
polaridadinherenteal protofilamento.La orientacinde
los dmerosde tubulinaesla mismaen todoslos protofilamentosde un mismo microtbulo,lo que confieieal propio microtbulouna estructurapolar.
Lamayoria de los organismosposeenvariosgenesmuy
relacionados,
aunqueno indnticospara cadasubunidada
y f de tubulina.Estasformasde tubulina ligeramentediferentessedenominanisoformasde la tubulina.Por ejemplo,
en el cerebrode los mamferosexistencincoisoformasde la
tubulinaa y cincoisoformasdela B.Estasisoformasdifieren
principalmenteen el dominio C Terminal,lapartede la tubulina queseune a lasMAPs.Estoimplicaquelasdiferentes
isoformasdela tubulinaposeerndiferentespropiedades
de
unin a lasMAPs.Sin embargo,no seha estudiadodirectamenteen la mayorade los casos,si las distintasisoformas
tieneno no propiedades
funcionalescaractersticas.
Losmicrotbulos
se foman medantela incorporacin
de dimelosde tubulinaen sus extremos
Los microtbulos se forman por el ensamblajereversible
de los dmerosde tubulina. El procesode polimerizacin
ha sido estudiadoampliamentein vitro; en la Figura15.3
semuestrauna representacin
esquemtica
del ensambla470

Captulo
15

Elcitoesqueeto

je de un microtbuloin vitro. La reaccinde polimerizacin comienzacuando


secalientauna solucinquecontiene una cantidadsuficientede dmerosde tubulina. GTP v
Mg2*,desde0 oChasta37 "C. (Laformacinde MT en la
solucinpuedeobservarse
fcilmenteen un espectrofotmetro como un aumentoen la dispersinlumnica.)La
agregacin
delos dmerosde tubulinaen agrupaciones
denominadasoligmeros,
representa
una etapacrucialen la
formacindelos microtbulos.Estosoligmerosconstituyen un <ncleo>a partir del cualpuedencrecerlos microtbulos,por Io queseconocea esteprocesocomonucleacin. Una vez que se ha nucleado,el microtbulo crece
mediantela adicinde subunidades
en ambosextremos.
un procesodenominadoelongacin.
La formacinde los microtbuloseslentaal principio,
en lo queseconocecomola faseiniciallentadel ensamblaje delos microtbulos(Figura15.4).Esteperiodoreflejala
relativalentitud del procesode nucleacinde los microt-es decir,laadicinde dmebulos.La fasede elongacin
ros de tubulina- esrelativamenterpida,comparadacon
la nucleacin.
Finalmente,
la masade los microtbulosaumentahastaun punto en el que la concentracinde tubulina libre eslimitante.Estoconducea la fasede equilibrio,
en la quela polimerizacinde losmicrotbulosseencuentra en equilibrio con la depolimerizacin.
El crecimientoin vitro de los microtbulosdependede
Ia concertacinde los dmerosde tubulina, de tal manera
que el microtbulo crececuando la concentracinde tubulina esaltay sedespolimeriza
cuandolasconcentracionesde tubulina sonbajas.En algnpunto entreestasdos

,@^

6',q"o
,d-e
'(v

88 o
%@

n
H

o H{

.@'8#H\-/45

%ep

ud6

%E

@o@o

I
Protofilamento

Oligopolios

Dmeros
de tubulina

Lminasde
protofilamentos

Flnn

microtbulo

n en in

del microtbulo

Figura15.3 Modelodel ensamblajede los microtbulosin vitro. Los microtbulos seforman a partir de subunidadescompuestaspor una
molculade tubulina a y una molculade tubulina B, unidasfuertementeformando un dmero,denominadoheterodmerode tubulina aB
o, simplemente,dmero de tubulina.O En el inicio del procesode nucleacin,sepuedenagregarvarios dmerosde tubulina, en
agrupacionesdenominadasoligmeros.@ Algunos de elloscomienzana formar cadenaslinearesde dmerosde tubulina llamadas
protofilamentos.@ Los protofilamentospuedenasociarsedespusuno a1lado del otro formando lminas.@ Laslminas,que contienen13
o ms protofilamentospuedencerrarseen un tubo, formando un microtbulo.@ La elongacindel microtbulo contina con la agregacin
de subunidadesde tubulina en uno o en ambosextremos.

condiciones se encuentra una concentracin de tubulina


en la que la polimerizacin esten perfecto equilibrio con
la depolimerizacin. La concentracin de los dmeros en
estepunto se denomina concentracin crtica global.

tiene
delosdimeros
detubulina
Laincorporacin
ums,
enlosextremos
lugarconmayorrapidez
delosmicrotbulos
La polaridad estructural inherente a los microtbulos es
debida que los dos extremos difieren qumicamente. Otra
Faseiniciallenta
/nrrloain\

diferencia importante entre los extremos es que uno de


ellos crece o se encoge mucho ms rpidamente que el
otro. Estadiferenciaen la tasade polimerizacin, puede visualizarsefcilmente mezclando las estructuras asociadas
de los microtbulos que se encuentran en Ia basede los cilios, llamados corpsculosbasales,con heterodmeros de
tubulina. Los corpsculosbasalessirven de ncleo parala
polimerizacin en ambos extremos, pero los MTs crecen
mucho ms rpidamente por un extremo que por el otro.
(La posicin del corpsculo basal en un microtbulo en

Fase
de equilibrio

Fase
de elongacin

-/
<\
@@

o
C^
fo\

rO
-. 1

M%

a
o

Microtbulo
en crecimiento

co

-_
a

Dmeros
individuales.*
oP

3,--

Protofilamentos

cs@

cocoOligmeros
T i e m Pa
o3 7 ' C +

con
Microtbulos
s u b u n i d a d eqsu e
se aadeny se
ellminan

03

de los
Figura15,4 Cinticade la polimetizacin
microtbulosin vitro, La cinticadel ensamblaje
de los MT puedeseguirseobservandola cantidad
de luz dispersadapor una solucinque contiene
GTP-tubulina despusde calentarlade 0 'C a
37 "C. (La polimerizacinde los microtbulos
seinhibe por fro y seactivapor calor).Las
medidas de la dispersin de la luz reflejan
cambios en la poblacin total de MTs y no la
polimerizacin de microtbulos individuales. Si
semiden de estamanera,la polimerizacinde
los microtbulos presentatres fases:inicial lenta,
elongaciny de equilibrio. La fasede retraso
correspondea la nucleacin.Durante la fasede
elongacinlos microtbuloscrecen
rpidamente,haciendo que la concentracin de
subunidadesde tubulina libre decline. Cuando
estaconcentracin eslo suficientementebaja
como para iimitar la polimerrzacin, se alcanza
la fasede meseta,donde seaadeny eliminan
subunidadesde los microtbulos con una tasa
equivalente.

Microtbulos471

crecimientopuedeestablecerse
por su aspectodiferenteal
microscopioelectrnico;
Figura15.5).El extremode crecimiento rpido del microtbulo se denomina extremo
ms,siendoel otro, el extremo menos.
Lasdiferentestasasde crecimientoen los ertremosms
y menosreflejadiferenciasen las concentracionescrticas
que se requierenpara la polimerizacinen ambosextremos del microtbulo; la concentracincrtica en el extremo msesmenor que en el extremo menol Si la concentracin de tubulina libre es mayor que la concentracin
crtica para el extremo mspero menor que la concentra-

Extremos
ms

cin crticaparael extremomenos,entonces


tendrlugar la
polimerizacinen el extremo ms,y la depolimerizaci1n
en el extremo menos.Esteensamblajey desensamblaje
simultneoproduceel fenmenoconocidocomo recambio
rotatorio (Figura 15.6).El recambiorotatorio surgecuando una determinadamolculade tubulina que seincorpora en el extremo ms,se desplazadaprogresivamentea lo
largo del microtbulo y finalementese pierde, mediante
depolimerizacin,por el extremomenos.
La hidrlisisde GTPcontrbuyea la inestabilidad
dinmicade los microtbulos
En el apartadoanterior,vimos que la tubulina puedepolimerizarin vitro en presenciade Mg2+y GTP.De hecho,el
GTP esnecesarioparael ensamblajede los MT. Cadaheterodmero de tubulina une dos molculasde GTP.La tubulina a une uno de los GTPs;el otro lo une la tubulina B, y
puedehidrolizarsea GDP instantesdespusde que seaada el heterodmeroal MT. AparentementeserequiereGTP
para la polimerizacinde los MT, ya que la asociacinentre dmerosde tubulina unidos a GDP esdemasiadodbil
como para soportarla polimerizacin.Sin embargo,lahidrlisis de GTP no es imprescindiblepara el ensamblaje,
como sedemuestraen experimentosen los que los microtbulos sehacenpolimerizara partir de tubulinasunidasa
un anilogono hidrolizablede GTP.
Los estudiosde la polimerizacinde los MTs in vitro
utilizando como centrosde nucleacincentrosomasaislados (una estructuraque se tratar con detalle ms adelante) muestranque algunosmicrotbulospuedencrecer
por polimerizacin al mismo tiempo que otros seencogen
Extremoms

Extremomenos

On

E"l

--'tt

r'

---z$

O)

Corpsculo
basal

]**"".*'**
-

o5&m

--

polarde losmicrotbulos
Figura15.5 Ensamblaje
in vitro. Se
puededemostrarla polaridaden el ensamblaje
delosMTs,
aadiendocorpsculos
basales
a una solucincondmerosde
tubulina.Losdmerosdetubulinaseaadena los extremosznlsy
menosdelosmicrotbulosdelcorpsculobasal.Sinembargo,los
MTsquecrecendesdeel extremozssonmuchomslargosque
aquellosquecrecendesdeel extremomenos.

472

Captulo15

Elcitoesqueleto

f$*-

$_
l/

'T

Figura15.6 Cinta sin fln de los microtbulos. La polimerizacin


de los microtbulos ocurre ms rpidamente en el extremo ms del
MT que en el menos,Cuando la concentracin de tubulina es
mayor que la concentracin crltica para el extremo ms,pero
menor que la concentracin crltica para el extremo menos,el
microtbulo puede aadir heterodmerosde tubulina a su extremo
ms,mientras que los pierde por su extremo mnos.

por depolimerizacin. Thnto es as que algunos microtbulos de hecho, crecena expensasde otros.
Para explicar cmo la polimerizacin y la depolimerizacin pueden ocurrir simultneamente, Tim Mitchison y
Mark Kirschner propusieron el modelo de inestabilidad
dinmica. Estemodelo supone la existenciade dos poblaciones de microtbulos, una que crece en longitud mediante la continua polimerizacin en sus extremos ms y
otra que disminuye en longitud por depolimerizacin.La
diferencia entre las dos poblacionesestriba en que los MTs
en crecimiento presentan la tubulina unida a GTP en sus
extremos ms, mientras que los MTs que estn disminuyendo en tamao, presentanGDP. Debido a que las molculas de tubulina unidas a GTP tienen mayor afinidad entre ellas que por la tubulina unida a GDR la presenciade
un grupo de molculasde tubulina unidas a GTP en el exfremo ms,da lugar a la formacin de un casquetede GTR
que proporciona un extremo estableen el microtbulo, al
que se pueden unir ms dmeros (Figura 15.7a).Se piensa
que la prdida de GTP tiene como resultado la aparicin
de un extremo inestable, en el que la depolimerizacin
puede tener lugar rpidamente.
La concentracin de tubulina unida a GTP es crucial
para el modelo de inestabilidad dinmica. Cuando hay
disponibles muchas tubulinas unidas a GTR stas se
aaden rpidamente al microtbulo, formando un gran
casquetede tubulina-GTP. Sin embargo, si Ia concentracin de tubulina-GTP disminuye, la tasade incorporacin
de tubulina decrece.Cuando la concentracin de GTP-tubulina es suficientementebaja,la tasade hidrlisis de GTP
en las subunidadesde tubulina B en las proximidades del
extremo del MT, supera Ia tasa de incorporacin de tubulina unida a GTP nueva. Esto tiene como resultado el
acortamiento del casquete de GTP. Cuando el casquete
de GTP desparece,el MT se vuelve inestable,y la prdida
de subunidades unidas a GDP se ve favorecida por su
extremo,

La observacin in vitro, con el microscopio ptico, de


microtbulos aislados,aporta evidenciasdirectas de la inestabilidaddinmica. Un mismo MT puede alternar entre
periodos de crecimiento y acortamiento (Figura 15.7b).
Cuando un microtbulo pasa de la elongacin al acortaTubulina-GDP

Tubulina-GTP

,-$ E
.-td
Extremoms
Concentracin
alta
deturbina
Casquetede GTP

CRECIMIENTO

I Concentracin
I o u i uo . t u r b u l i n a

I
V

<-ffi-

ACORTAI\i
IENTO

'lf

.:l

O)
C

o
c)
a
.o
_o
E
(5
O

Figura15.7 Elcasquete
deGTPy su funcin
en la inestabilidad
dinmica
delosmicrotbulos.(a)ModeloqueilustraIa funcin
delcasquete
de GTP.CuandoIa concentracin
de tubulinaesalta,
la rapidezconla queseincorporaGTP-tubulinaal extremodel
micotbuloesmayorqueconla quesehidrolizael GTP
incorporado.El casquete
de GTPresultanteestabiliza
el extremo
delMT y promueveel crecimiento.
La tasade crecimientoa
menoresde tubulinadisminuve.aumentandola
concentraciones
(sincasquete
hidrlisisdelGTP.Seformaasun extremoinstable
de GTP)quefavorece
la depolimerizacin
delMT. La existencia
de
la inestabilidad
dinmicaestapoyadapor datosexperimentales.(b)
Lasfasesde crecimientoy acortamientosealternanen un MT
individualobservado
conmicroscopa
ptica.Losextremoszs y
(c) La frecuencia
menoscreceryseencogenindependientemente.
dela catstrofe
y el rescate
delmicrotbulodependendela
concentracin
de tubulina.La catstrofe,
el cambiode crecimiento
a acortamiento,
esmenosfiecuentecon concentraciones
de
tubulinaelevada.
El rescate,
el pasode acortamientoa crecimiento,
esmsfrecuenteconconcentrciones
altasde tubulina.

30
l\,4inutos

FRECUENCIA

.(
O
c
a)
f
O
c)
LL

FRECUENCIA

DECATSTROFEI

OTRESCATE

.**'"S"
Extremo
menos

Extremo
ms

men.os

(c)

5101551015
(mM)
Concentracin
de tubullna

Microtbulos 473

miento, un fenmeno que se conoce como catstrofedel


miciotbulo, ste puede desaparecercompletamente,o
puedevolver repentinamentea la fasede crecimiento,un
eventodenominadorescatedel microtbulo.Lafrecuencia
de la catstrofeestinversamenterelacionadacon la concentracinde tubulina libre. Lasconcentraciones
elevadas
de tubulina hacenque la catstrofeseams improbable,
aunque puede ocurrir. Cuando tiene lugar la catstrofe,
una concentracinde tubulina alta hacems probableel
rescatede un microtbulo que estreducindose(Figura
15.7c).La catstrofeesmsprobableen el extremomsde
un MT, independientemente
de la concentracinde tubulina, esdecir,lainestabilidaddinmicaesmspatenteen el
extremo msdelmicrotbulo. Seha demostradola inestabilidad dinmica en clulasvivas utilizando microscopa
(DIC), mejorada
de contrasteinterferencial-diferencial
por vdeo,paraseguirlos ciclosvitalesde MTs aislados(Figura 15.8).Estosestudioshan demostradoque el fenmeno de la inestabilidaddinmicano esexclusivode los MTs
in vitro.

(a)

(c)

Losmicrotbulos
se orginandentrode la clula
en centrosorganzadores
de microtbulos
En los apartadosanterioreshemos analizadoprincipalmentelas propiedadesde la tubulina y los MTs in vitro, lo
que nos ha proporcionadola basepara entendercmo
funcionan en la clula.Sin embargo,la formacin de MTs
in vivo esun procesoms ordenadoy regulado,que produce grupos de MTs en lugaresdeterminadosde la clula
para funcionesceliilaresespecficas.
Los microtbulosnormalmenteseoriginan a partir de
una estructura celular denominadacentro organizador
microtubular (MTOC). Un MTOC sirvecomo un lugar en
el que seinicia el ensamblaje
de los MTs, alavez queproporcionaun punto de anclajepara uno de los extremosde
estosMTs. Muchasclulasdurante la interfasetienen un
MTOC llamado gglpgry
que est situado cerca del
ncleo.En las clulasanimales,el centrosomaestcompuesto normalmente po, dosfftrrodeados
por un
material granulosodifuso conocido como material pericentriolar (Figura15.9a).En micrograffas
electrnicas
del
centrosoma,se puede observarque los MTs se forman a
partir del materialpericentriolar(Figura15.9b).La estructura simtricade los centrioloses extraordinaria(Figura
15.9a).En la mayor parte de los casos,los centriolosse
orientanperpendicularmente
uno con respectoal otro:la
raznde estacolocacinno seconocean.Sesabequelot
centriolosestnimplicadosen la formacin de los corprisculos hasales,que son importantespara la formacin de
los cjqsy los.flagelos(vaseCapitulo 16).El papelde los
centriolosen las clulasno ciliadasesmenosclaro.En las
clulasanimales,los centriolospuedenservirpara reclutar
el materialpericentriolaral centrosoma,que servirposteriormente como ncleo para el crecimientode los MTs.
474

Capitulo15

Elcitoesqueleto

(e)

(f)

1orm---r

Figura15.8 La inestabllidad
dinmicade los microtbulos
in vivo.
Los microtbulos de una clula viva, observadospor microscopa
de contrasteinterferencial-diferencial (DIC), mejorada
digitalmente, presentaninestabilidad dinmica in vivo. Los MTs,
indicados aqu con varios tipos de flechas,se han registrado a lo
largo del tiempo, desde(a) hasta (f). Los MTs crecenhasta el borde
de la clula y despusseacortan rpidamente.Para una explicacin
del microscopio DIC, consultar el Apndice.

Cuandolos centriolosno estnpresentesen lasclulasanimales,sedispersael materialquesirvecomo ncleoparael


crecimientode los MTs,y desaparece
el MTOC. Lasclulas
queno poseencentriolospuedendividirse,probablemente
porque los cromosomasseancapacesde organizara los
MTs a partir de algunode susextremos.Sin embargo,los
husosque seforman estnpoco organizados.
A diferencia
de lasclulasanimales,las clulasde los vegetales
superioresno poseencentriolos;estoindica que los centriolosno
son imprescindiblesparala formacin de MTOCs.
Los grandescomplejosproteicoscon forma de anillo,
propiosdel centrosoma,contienenotro tipo detubulina,la
tubulina y. Sepuedenver los anillos de tubulina y en la
base de los MTs que emergen del centrosoma (Figura
15.10).Los complejoscon forma de anillo de tubulina y
sirven como ncleo para el ensamblajede nuevos MTs

Material
pericentriolar
Centriolos

--tsir-m-

Microtbulos

quese
Figura15.10 ltubulina en la basede losmicrotbulos
od$nandesdeel centrosoma.Micrograflaelectrnicade un MT
queseoriginadesdeel centrosoma.
La tubulina7 fuemarcadaaqul
partlculasde metal,En la
unidosa pequeas
con anticuerpos
estosanticuerpos
aparecen
comoesferas
micrografaelectrnica,
brillantes(TEM).

Centrosoma
desdeel centrosoma.En el centrosomatambin se encuentran otras protenas, como la pericentrina. Aparte del centrosoma, ciertos tipos celularesposeenotros MTOCs. Por
ejemplo, los corpsculos basalesde la base de cada cilio en
las clulas ciliadas funcionan tambin como un MTOC.

y polarzan
organzan
losmicrotbulos
LosMTOCs
enla clula
microtubuladesempea
El centrosoma
u organizador
un

(c,

Microtbulo

1,4p,m

Figura15.9 Gentrosoma. (a) En las clulasanimales,el


centrosomaestformado por dos centriolos y un material
pericentriolar asociado.Las paredesde los centriolos estn
compuestaspor nueetripletes de microtbulos. (b) Micrograffa
electrnicadel centrosoma,mostrando los centriolos y el material
pericentriolar. Obsrveseque los microtbulos se originan a partir
del material pericentriolar. (c) Nucleacin y ensamblajede MTs en
un centrosomain vitro.

papel importante en el control de la organizacinde los


microtbulos en la clula.El aspectoms importante de
estafuncin, probablementeseala capacidaddel MTOC
de nucleary anclarlos MTs. Graciasa estacapacidad,los
MTs se extiendendesdeel MTOC haciala periferia de la
clula.Es ms,crecendesdeel MTOC con una polaridad
en el MTOC,
determinada-sus sxtsrnosmenosanclados
haciala membranacey susextremosfins.extendindose
lular-. La relacinentre el MTOC y la distribucin y polaridadde los MTs semuestraen la Figura15.11.
El MTOC tambininfluye en el nmero de microtbulos de una clula.CadaMTOC tiene un nmero limitado
de sitios de nucleaciny anclajeque determinancuntos
MTs puedenformar. No obstante,la capacidadde nucleacin de MTs del MTOC puedemodificarseduranteciertos
procesos
comola mitosis.Porejemplo,la cantidaddeperiMicrotbulos 475

+-

rl
ti , til
|t l!
!t
1t
!t
({t

tt

ii
0F,
CI

Centrosoma

l!
t

llnrnricnrrlnc

basales(MTOC)

ft

di f

il l

("lt-')

Extremoapical

1l

it

Haz marginal
de microtbulos
(polaridadmixta)

Extremobasal

(a) Clulanerviosa

( b ) C l u l ae p i t e l i acli l i a d a

(c) Eritrocito
Centrosomas
(MTOC)

Centrosoma

Interfase

ffi
Profasetemprana

( d ) C l u l ae n d i v i s i n

Cromosomas
Metafase

Figuta15.11 Efectosde la poladadde los microtbulosen su orientacindentrode las clulasanimales. En la clula,la distribucin de la
mayoriade los microtbulos,viene determinadapor el centro organizadorde microtbulos (MTOC), que en muchasocasionesesun
centrosoma.La orientacinde los MTs en una clulapuedevariar con 1afuncin de esaclula.Los microtbulossesealanen naranja.
(a) Lasclulasnerviosasposeendos grupos de MTs, aquellosque seencuentranen el axn y aquellosque estnen la dendrita.Los MTs
axonalesestnunidos al centrosomapor su extremo meno5 con susextremosmsen el extremodel axn.Por su parte,los MTs de la
dendrita no estnasociadoscon el centrosomay tienen polaridadesmi-xtas.(b) Lasclulasepitelialesciliadastienen muchos MTOCs
denominadoscorpsculosbasales,
uno en la basede cadacilio. Los MTs ciliaresseoriginan con su extremo menosen los corpsculosbasales
y sealargancon su extremo mshaciael extremodel cilio. (c) Los eritrocitoshumanosmadurosno poseenni ncleo ni MTOC. No
obstante,tienen MTs, cuyapolaridadesmixta y forman una banda circular en la periferiade la clula.Estabanda ayudaa mantenersu
forma discoidal(d) A lo largo del procesode la mitosis,los MTs de una clulaen divisin estnorientadoscon susextremosmenosanclados
en el centrosomay susextremosms apwlando lejos de 1.La divisin celularestprecedidapor la divisin del centrosoma.Despuslos dos
centrosomasseseparan,y forman cadauno un polo del huso mittico. En la metafase,los centrosomasseencuentranen ladosopuestosde
la clula.Cadacentrosoma,o polo del huso,forma la mitad de los MTs del huso,algunosde los cualesseextiendendesdeel polo hastalos
cromosomas,mientrasqr,reotros 1ohacendesdeun polo hastael otro.

centrina flucta durante la mitosis, siendo ms alta en la


profasey la metafase,cuando los polos del huso muestran
la mayor actividad nucleadora.

Laestabilidad
delosmicrotbulos
estestrechamente
regulada
enlasclulas
La capacidad de nuclear de los MTOCs, como el centrosoma, tiene una consecuenciaimportante para la dinmica
de los microtbulos en las clulas.Debido a que los extremos menosde muchos MTs estn ancladosal centrosoma,
el crecimiento y acortamiento dinmico de estosmicrotbulos en sus extremos msliende a sucederen la periferia
de las clulas.

476

Capitulo
15

Elcitoesqueleto

Ya hemos visto que los microtbulos celularespresentan una inestabilidad dinmica: crecen desdeel centrosoma y despusse desensamblan.Esteprocesopuede ocurrir
asen los MTs de vida corta, distribuidos a\ azar en la clula, pero no en los grupos organizadosy estables.Los MTs
son generalmentedemasiado inestablespara permanecer
intactos durante mucho tiempo y se colapsansi no se estabilizan de alguna manera. Una forma de estabilizar los MTs
es (capturar> y proteger sus extremos mas en crecimiento.
Durante la mitosis se puede observar un buen ejemplo
de cmo esta captura de los microtbulos, produce un
conjunto de MTs ordenados de una manera precisa (Figura 15.11d),como analizaremosen el Captulo 19.Antes
de la profase, el centrosoma se replica, dando lugar a dos

centrosomashijos. stosse separandurante la profase


'temprana
y semuevena ladosopuestosde la clula,donde sirven como los polos del huso mittico. Cuandose
desorganizala membrana nuclear,los cromosomasse
conectancon los polospor medio de los MTs. Paraestabilizar estasconexiones,el cinetocorode cadacromosoma
capturalos extremosmsde los MTs.AquellosMTs que
a medidaque crecendesdeel polo del huso,encuentren
Aquellos
un cinetocoro,serncapturadosy estabilizados.
finalmente,
por
que no lo encuentrense desorganizarn
por
inestabilidaddinmica,y sernreemplazados unos
nuevosque experimentarnel mismo proceso.A travs
ciclosde crecimientoy depolimerizacinde
de sucesivos
MTs, el cinetocorode cadacromosomacapturarfinalmente un MT y se conectara los polos del huso acromtico.
no sonlos nicoslugaresdondeseesLos cinetocoros
tabilizanlos extremosmsde los MTs. Los MTs asociados
la red de actinadesarrolladapor debacone\ crtexcelular,
jo de la membranaplasmtica,
en alguson estabilizados
nassituaciones.
Tantoen el cinetocorocomo en el crtex,
de extremosms que
existenunasprotenas<<rastreadoras>>
seasociancon dichosextremosde IosMTs.Secreequeesestabilizan
tas protenas,ya seadirectao indirectamente,
los extremosmsy disminuyenla probabilidadde que sufran una prdidacatastrficade subunidades.
de los microtbulos
Ciertasdrogasafectanal ensamblaje
Existenvariasdrogasque afectanel ensamblajede los microtbulos.La ms conocidaes la colchicina, presentada
anteriormenteen estecapltulo,que actaunindosea los
dlmeros de tubulina. El complejo cochicina-tubulinaresultante,puedeunirse al extremo en crecimientodel MT,
pero bloqueaIa incorporacinposteriorde molculasde
la estructura,promoviendopor lo
tubulina y desestabiliza
la
depolimerizacin
del MT. La vinblastinaylavintanto
queseobtienendela
relacionados
cristinasoncompuestos
(Vinca
que
provocan
de
minor),
la agregacin
vincamenor
(un
la tubulina en el interior de la clula.El nocodazol
benzimidazolsinttico) es otro compuestoque inhibe la
polimerizacinde los MTs y seusa frecuentementeen algunosexperimentosen lugar de la colchicina,porque sus
efectosse puedenrevertir con mayor facilidad cuando se
retirala droga.
Estoscompuestosse conocencomo drogasantimitticasporque desorganizanel huso mittico de las clulasen
divisin,bloqueandoel progresode la mitosis.La sensibilidad del huso mittico a estasdrogasescomprensibleya
que las fibras del huso estncompuestaspor muchosmicrotbulos.La vinblastinay la vincristina tienen tambin
Seutilizan
aplicacinmdicacomo drogasanticancerosas.
sedividen
con estepropsitoporquelasclulascancerosas
rpidamentey son,por lo tanto,mssusceptibles
a lasdrogasque interfierencon el huso mittico.

El taxol, que tambin ha sido presentado anteriormente en estecaptulo, tiene el efecto contrario en los microtbulos: cuando se une a los MTs, los estabiliza. Dentro de las
clulas, provoca que la tubulina libre se una, formando
MTs y secuestrandoa las clulas en mitosis. As, tanto el taxol como la colchicina bloquean a las clulas en la mitosis,
pero lo hacen produciendo efectosopuestosen los MTs, y
por tanto, en las fibras del huso mittico. El taxol se usa
tambin en el tratamiento de algunos tipos de cncer, en
especialen el de cncer de mama.

Losmicrotbulos
estnreguladosen toda su longitud
por protenasasociadasa microtbulos
Sesabeque ciertasprotenasmodulanla estructura,el ensamblajey la funcin de los microtbulos.Estasprotenas
asociadasa los microtbulos (MAPs) representanel 10l5o/ode la masade MTs aisladosde las clulas.LasMAPs
confierenun nivel de regulacinextra a la organizaciny
funcionesde losMTs.ParamodularIa funcindelos MTs.
muchasMAPs se unen a ellosa intervalosregulares,
fordesdela pared,quepermitenla intermandoproyecciones
accin con otros filamentosy estructurascelulares.Las
MAPs son tambin importantesen la regulacindel ensamblajede los MTs,probablementeunindoseal extremo
msen crecimientode un microtbulo y estabilizndoloy
previniendoassu desensamblaje.
Seha demostradoquela
mayorade lasMAPs aumentanla estabilidadde los MTs,y
Lasdifealgunaspuedeninclusoestimularsu ensamblaje.
rentesMAPs difierenprincipalmenteen la forma en la que
y en cmosereunenMTs entres o con otrasestructuras,
gulan susefectosen los MTs.
La funcin de las MAPs ha sido muy estudiadaen las
ya que constituyenla fuenteprincipal de
clulascerebrales,
estasprotenas.Sepuedendistinguirdos clasesde MAPs
las protenas
asociadasa los MTs de las clulascerebrales:
a los MT (MAPsmotoras)y las MAPs
motorasasociadas
no motoras.LasMAPs motoras sedenominanasl porque
usanAIP para dirigir el transportede vesculasu orgnulos o para generarfuerzasde deslizamientoentreMTs.Entre ellasseencuentranla quinesinay la dinena.Estudiareen el Captulo 16.
mos estasprotenasms detalladamente
Las MAPs no motoras parecencontrolar la organizaUn ejemplollacin de los microtbulosen el citoplasma.
en lasneuronas.
mativo de dichafuncin puedeobservarse
El correctofuncionamientodel sistemanerviosodepende
de las conexionesque establecenlas neuronasentre s, y
con otros tipos celulares.Paraello, las neuronasemiten
prolongacionesllamadasneuritas,que se encuentranreforzadaspor hacesde MTs.Lasneuritasal final sediferencian en axones,que transportansealeselctricasdesdeel
cuerpo celular de Ia neurona,y en dendritas,que reciben
sealesde lasclulasvecinasy lastransportanal cuerpocelular. Loshacesde MTs sonparticularmentemsdensosen
los axonesque en las dendritas.
Microtbulos 477

Larazn de estasdiferenciasradicaen quelasdendritas


y los axonescontienendiferentesMAPs.Por ejemplo,una
MAP especficade axonesllamada Thuhaceque los MTs
formen hacestensos.Una familia de MAPs denominada
MAP2 estpresenteen lasdendritasy provocaque los hacesde MTs seanmslaxos.
Sepuededemostrarla importanciade lasMAPs en el
procesode formacin de neuritasintroduciendoIa protena Tauen una lnea celularno neuronalque normalmente no puedefabricarningunade estasprotenas.EstascIulassonredondasen condicionesnormales,pero cuando
se introduce el gen de tau y se expresa,estasclulasextiendenprolongaciones
largas,notablementesimilaresa
los axones.
La diversidadde las MAPs puede ayudar a explicar
cmo puedendiferir las clulasen la organizacinde sus
microtbulos.Adems,lafuncin de algunasMAPspuede
alterarsemediantefosforilacin,lo que proporciona a la
clulaun medio rpido de control dela organizacindelos
microtbulos.

Microfilamentos
Con un dimetrocercanoa los 7 nm, los microfilamentos
(MFs) son los filamentosms pequeosdel citoesqueleto
(vaseTabla
15.1).El aspectomejor conocidode los microfilamentosesla funcin que desempeanen lasbps
contr"rilesdelasclulasmrtscrll^""",dondeinteraccionan
con filamentos de miqsila, ms gruesos,para provocar las
contraccincaracterstiCa
del msculo. Sin embargo,los
MFs no sonexclusivosde lasclulasmusculares;estnpresentesen casitodaslas clulaseucariotasy participan en
muchos otros fenmenos,que incluyen varias funciones
locomotorasy estructurales.
Algunos ejemplos de los movimientos celularesen
los que participan los microfilamentos son el movim.ientaryeboide, movimiento de las clulassobreun sustrato
al que estn unidas, y las corrientescitoplsmicas,trn
patrn de flujo citoplsmico regular de algunasclulas
vegetalesy animales.Los MFs tambin producen los surcosde segmentacin
que dividen el citonlasmade las clulas animalesdurante la citocinesis.Trataremoscon ms
detalletodosestosfenmenosen el Capltulo16.LosMFs
tambin estnpresentesen los lugaresde unin de una
clula con otra y con la mat"rizextracelular(vaseCapitulo 17).
Ademsde mediar algunostipos de movimientoscelulares,los MFs ta
mantenimientode lu fogq" ..lolut Por ejemplo,casitgdas
rincadared de microfilamentosjusto debajode la membranaplasmticaque se
denomjnacrleixcelular.El crtex aporta rigidez estructural en la superficiede la clulay facilita los cambiosde
forma y el movimiento celular.Por otra parte, el ncleo
478

Gaptulo
15

Ecitoesqueleto

estructuralde lasmicrovellosidades,
lasextensiones
en forma de dedo que seencuentranen la superficiede muchas
clulasanimales,estformado por hacesparalelosde MFs
(vaseFigura
4.2).
La actinaes la protenacon la quese construyen
los microfilamentos
La actina es una protena extremadamenteabundanteen
prcticamentetodaslas clulaseucariotas,incluyendolas
clulasde las plantas,las algasy los hongos.La actina se
sintetizacomo un nico polipptido de 375 aminocidos,
con un peso molecular aproximado de 42 kDa. Una vez
sintetizada,sepliegatomando una forma similar a una U,
con una cavidad central que une AIP o ADP (Figura
15.12).Lasmolculasindividualesde actinasedenominan
actina-G(actinaglobular).Bajo las condicionesapropiadas,las molculasde actina-Gpolimerizanpara formar
microfilamentos;
estaforma,seconocecomoactina-F(actina filamentosa).La actina,tanto en su forma G como Fis,e
une a muchasotras protenas.Estasprotenasde unin a
actina bien regulany modican la funcin de la actina,
bien son reguladasu organizadasellasmismaspor la asociacincon la actina.

Figura15,12 Estructuramolecularde un monmerode G-actina.


La cristalograffade rayosX muestra que el monmero de actina-G
tiene una conformacin similar a una U. Un nucletido (AIP o
ADP) seune reversiblementeen una cavidad de la protena.
Cuando los monmeros de actina-G pomerizan formando
F-actina,Ia entrada de la cavidad setapa por otro monmero
de G-actina, atrapando en el interior el nucletido unido. Adems,
la unin de una actina-G a otra, provoca que la entrada a la cavidad
se cierre ms fuertemente sobre el nucletido unido, promoviendo
la hidrlisis del AIP.

En las clulasexistendifetentestipos ie actinas


y de protenaslelacionadas
con la actina

polimedzan
deactna-G
Losmonmeros
deactna-F
enmicroflamentos

La actinaesla msconservadadelos trestipos de protenas


En ensayosfuncionales,todaslasactinas
del citoesqueleto.
parecenidnticasy las de diferentesorganismospueden
copolimerizaren filamentos.A pesarde estealto grado de
similitud en la secuencia,las actinasson diferentesentre
diferentesorganismosy entre distintostejidos de un misen la similitud en la secuencia,
mo organismo.Bsndonos
podemos.distinguir dosgrandesgruposprincipales:lasacdel msculo (actinasa) y las actinasno
tinas especficas
(actinasfryy).Enelcasodelasactinas
musculares
Fyy,se
ha demostradorecientementeque selocalizanen diferentesregionesde la clulay que pareceque interaccionande
maneradiferentecon las protenasde unin a actina.Por
ejemplo,en lasclulasepiteliales,quepresentanuna regin
y otra basal,unida a la
apical,dotadade microvellosidades,
(vaseFigua
17.17),laactinaB seenmatrizextracelular
'cuentrapredominantementeen el extremo apical,mientras quela actina1,seconcentraen el extremobasaly en los
ladosde la clula.
Ademddelos diferentestipos de actinas,existeuna coleccinde protenasparecidas,quesedenominanpygiag
rebcjpnaaasconJs-ejgt (Arpt.El grado de semejanza
con las actinasesmenor y as,por ejemplo,las actinasde
las levadurasy del pollo son idnticasen ms del 90%ode
sus aminocidos,mientrasque las Arps presentanslo el
50olode similitud con variasactinasdiferentes.Como veremos mstarde en estecapltulo, Arp2y Arp3 participanen
la nucleacinde nuevosmicrofilamentosen las clulasen
migracin.

De maneraparecidaa losdmerosdetubulina,losmon-

ATP

ADp

l<-36

en
merosde actina-Gpuedenpolimerizarreversiblemente
filamentos,con una fasede iniciacinlentaque corresponde a la nucleacindel filamento,seguidapor una fasems
rpidade crecimientodel polmero.La cinticade la polimerizacindela actinapuedeestudiarseen una disolucin,
Sepuedemedir la fluoresutilizandoactina-Gfluorescente.
cenciade la actina-Fmarcada,para obtenerdatosmuy similaresa los de la tubulina. Los filamentosde actina-Fque
se forman, estncompuestospor dos hebraslinealesde
actina-Gpolimerizada,unidasuna a la otra formando una
hlice,con ms o menos 13,5monmerosde actinapor
vuelta(Figura15.13).
Todoslos monmerosde actinaestnorientadosen la
misma direccin dentro de un mismo microfilamento,
por lo que el MR al igual que el microtbulo,poseeuna
polaridad inherente,con un extremo que difiere del otro
Dicha polaridad
tanto qumica como estructuralmente.
puedeserfcilmentedemostradaincubandoa MFs con el
subfragmentolde la miosina (S1),un fragmentoproteoItico de la miosina (Figura15.14).Los fragmentosS1 se
a los MFs de actinasiguiendoun paunen,o <decoran>,
flecha,
con todaslas molculasde Sl
trn en forma de
apuntandoen la mismadireccin(Figura15.14c).Basndoseen estepatrn en forma de flecha,frecuentementese
utilizan los trminos extremopuntiagudoy extremobarbado,para identificar los extremosmenosy ms,respectivamente,de un MF. La polaridaden el MF esimportante
porquepermiteuna regulacinindependientede la poli-

nm----l

-t
(a) Ensamblaje
del MEF

(b) Actina-Fpurificada

Fj-dlrm-f

Figura15.13 Modelodel ensamblajede los microfilamentosin vitro. (a) Los monmeros de actina-G polimerizan en filamentos largos de
actina-F con un dimetro aproximado de 7 nm. La hlice da una lrrelta cada36-37 nm, y serequieren cercade 13,5monmeros para una
vuelta completa. La incorporacin de cadamonmero de actina-G estacompaadao seguidade la hidrlisis de la molcula de ATP,que
lleva fuertemente unida el monmero. De todas formas, no se requiere la energade hidrlisis del ATP para llevar a cabo la reaccin de
polimerizacin. (b) Micrograffa electrnicade actina-F purificada (TEM).

Microfilamentos479

Extremo
menos

Extremomenos(apuntado)

Miosina
Subunldad
de actina

Cabezas

K+

Segmento
de miosina

Meromiosina
ligera
(LN/M)

(b) Tratamlento
posteriorc. +';^^i^^

Aq

OOOOI +
Subfragmento
2

(s2)

Subfragmento
1

(s1)

^mfl
-v
Subfragmentol
( S t

Extremo ms l--------------0,25um

'

Extremorns(barbado)

(c) EM y diagramade los fragmentos51 "decorando"


microfilamentosde actina

Figuta15.14 Utilizacinde subfiagmentos


de miosina51 pala determinarla poladdadde la actina, La miosina II forma parte de Ia
maquinaria contrctil de Ias clulasmusculares.La cabezaglobular de ia molcula de miosina se une a la actina, mientras que las colasde
miosina pueden asociarsecon filamentos de miosina (los miofilamentos gruesosde las clulasmusculares).(a) La miosina II puede ser
escindidapor accinde proteasas,
como Ia tripsina,en dos partes,la meromiosinapesada(HMM) y la meromiosinaligera (LMM). (b) La
HMM puede digerirse posteriormente, quedando slo Ia cabezaglobular. Estefragmento, denominado, subfragmento I de ia miosina (Sl),
conservasus propiedadesde unin a actina. (c) Cuando seincuban los microfilamentos de actina con la miosina Sl y se examina despus
con un microscopio electrnico,los fragmentos Sl parecen<decorar>los microfilamentos como puntas de flecha.Todaslas puntas de flecha
S1 sealanel extremo menos,indicando la polaridad del MF.

merizaciny depolimerizacinde la actina,en cadaextremo del filamento.


La polaridad de los microfilamentossereflejaen la incorporacino prdidade actina-G,msrpidaen el extremo ms,y la incorporacin o prdida de actina-G,ms
lentaen el extremomenos(Figura15.13a).Si seaadeactina-G a pequeosfragmentosde actina-Fdecoradacon
S1,la polimerizacinsucedermucho ms rpida en el
extremobarbado,lo que indica que esteextremodel filamentocoincidecon el extremoms.Aunquelascondiciones seanfavorablespara la incorporacinde monmeros
en ambosextremosdel filamento,el extremo ms crecer
msrpidoqueel extremomeno*
A medidaque los monmerosde actina-Gse ensamblan al microfilamento,el$! que llevanunido sehidrolizalentamente{4B de la mismamaneraque el GTP unido a la tubulina sehidrolizabaa GDP.As,los extremosen
crecimientode un MF tiendena tenerAlP-actina-F,mientras que la mayor parte del MF estcompuestopor ADPactina-F.No obstante,la hidrlisis del ATP no esun requisito indispensable
parala elongacinel MR ya quelos MF
480

Captulo
15

Elcitoesqueleto

puedentambinelongarse
conADP-actina-G
o a partirde
anlogos
no hidrolizables
deAlP-actina-G.
pueden
Lasclulas
regular
dinmicamente
la manera
y el lugardondeseensambla
la actina
Como acabamosde ver, al igual que ocurre con los microtbulos, las clulaspueden regular dinmicamente dnde
y cmo debe ensamblarseIa actina-G, para formar los microfilamentos. Las clulasque se desplazanpor un sustrato, tienen estructuras especializadasen su extremo de
avance,denominadas lamelipodiosy filopodios,queles permiten caminar sobre la superficie (trataremos con ms detalle estasestructurasespecializadasen el Captulo 16). El
tipo de protrusin parece depender de la naturaleza del
movimiento celular y de Ia organizacin de los filamentos
de actina en la clula. En aquellas clulas que estn fuertemente adheridas al sustrato y que no se mueven bien, existen unos hacesde actina, denominado s fibras de estrso de
refuerzo, que se extienden desdela cola de la clula, o esteIa hastael frente (Figura 15.15a).Las clulasque semueven

Figura15.15 Alquitectutade la actinaen


las clulasque se anasttan, La actina
estpresenteen diferentesestructurasen
clulasreptantes,como estemacrfago.
(a) Las fibras de estrs,hacescontrctiles
de actina, recorren la clula desdeel lado
de la cola hasta el frente de avance.(b) En
la periferia de la clula seencuentra el
crtex, que estconstituido por una malla
de filamentos de actina entrecruzados
formando un gel. (c) El extensolado de
avancede los lamelipodios puede
producir proyeccionesdelgadas,con
forma de dedo, llamadasfilopodios.
Mientras que la mayor parte de los
lamelipodios tienen una malla de actina,
los filopodios presentanhacesparalelos
de filamentos de actina.

Fibra de estrs

(a) Haz contrctil

rpidamenteno poseenestoshacesde actinatan peculiares.En estasclulas,el crtexcelular,que subyaceinmediamuy quePresenta


tamentebajola membranaplasmtica
cha actina, est entrecruzadoformando un gel o un
entramadolaxode microfilamentos(Figurai5.15b).En el
extremode avance,y principalmenteen los$op95!!99,los
microfilamentos forman cablespolarizadosy altamente
orientados,con su extremobarbado(ms) orientadohacia
la punta de la protrusin(Figura15.15c).La actinade Ios
lamelipodiosestpeor org^nizadaque la de los filopodios
(Figura15.16).La comprensinde cmo lasclulasregulan tal variedadde estructurasbasadasen actina,requiere
entendercmo las clulaspueden regular la polimerizacin delosMFsy cmolosMFs,navezyapolimerizados,
redes.
establecen

Crtexcelular

Filopodio

(c) Haces paralelos

(b) Gel

Haces de actina
en los filopodios

Ciertasproteinasy drogasespecficasafectan
a la dinmicadel polimetoen los extremos
de los mictofilamentos
Lasclulascontrolanel procesode polimerizacindel MF
en variospuntos,incluyendola nucleacinde nuevosMFs
tambincontrolan
yla elongacinde los MFsya existentes;
la tasade depolimerizacinde actina.Tanto las protenas
como los lpidos de membranaregulanla formacin' estabilidady la rupturadelosMFs.Aqu participanvariasprotenasde unin a actina,fosfolpidosde inositol,que seencuentranen la carainterna de la membranaplasmtica,y
RAc,Rho y Cdc42,que son protenasreguladoraspequeasqueliganGTP (protenasG monomricas).
En ausenciade otros factores,el crecimientode los microfilamentosdependede la concentracinde actina-G

Red de
actnaen el
lamelipodio

T,sp^Figura15.16 Micrografiaelectrnicade cilogtabadoptofundo


mostrandolos haces de actina en los filopodios. Estavista de la
periferia de un macrfago muestra dos grandeshacesde actina
dentro de los filopodios que se extienden desdela superficie celular.
Los frlamentos de actina en los filopodios se fusionan con una red
de filamentos de actina que yacenjusto debajo de la membrana
plasmticadel lamelipodio.

Microfilamentos481

unida a ATP.Si es elevada,se formarn microfilamentos


hastaquela concentracin
de actina-Gunidaa AIP sealimitante.Sin embargo,en la clulano se disponede una
gran cantidadde actina-Glibre parala formacinde microfilamentos,porque la mayoriaestunida a la protena
timosinap4.En la transferencia
de monmerosde actinaG desdeel complejo timosinaB4 al extremode un microfilamentoen crecimiento,pareceestarimplicadauna segunda protena llamada profilina, pero esto slo sucedesi
existenfilamentoscon extremoslibresdisponibles.Sesabe
que otra protena,conocida como ADF/cofilina,es capaz
de unirse a ADP-G-actinay a F-actina;se cree que la
ADF/cofilinaincrementa
la tasaderecambiodeIaADP-actina-G en los extremostnenosde los MFs.Estohacequela
ADP-actina-Gliberada,estdisponibleparaserconvertida
enATP-actina-G,
quepuedeserreutilizaday aadirsea los
extremosmsen crecimientode los MFs,
Las drogas que provocan la depolimerizacinde los
microfilamentos
afectana la capacidad
dela clulaparaincorporar actina-Gen los extremosmsde los MFs. Las
citocalasinas,presentadas
anteriormente,bloqueanla incorporacinde nuevosmonmerosa los MFs polimerizadosexistentes.
Como las subunidades
sepierdengradualmente por los extremosmenos,al finaj p.orroiur urru
depolimerizacin.
Porel contrario,la latrunculinaA acta
secuestrando
los monmerosde actina,impidiendosu incorporacinen los extremosmsdelos MFs en crecimiento. En amboscasos,el resultadoneto esla prdidade los
MFs en lasclulastratadas.
El crecimientodependeademsde que los microfilamentos estno no encasquetados.
El encasquetamiento
' tienelugar cuandouna protena casqueteseune al extemo
del filamentoe impide la incorporacino prdidaadicional de subunidades,
provocandoassu estabilizacin.
Una
de estasprotenasque actacomo una capuchaen los extremos ms de los microfilamentosse denomina CapZ,
CuandoCapzseune al extremodel filamentosebloqueala
incorporacin adicional de subunidadesen el extremo
ms;ctando CapZ sequita, puedereanudarsela incorporacinde subunidades.
Losfosfolpidos
de nostolregulana las molculas
que afectana la polimerizacin
de la actina
Los fosfolpidosde inositolson uno de los fosfolpidosde
membrana.Un derivadodel inositol, el inositol trifosfato
(IPr), es un componenteclaveen la va de sealizacin
a
travsde protenasG heterotrimricas,
como veremosen
el Captulo 14.Los gruposhidroxilo del anillo inositol del
fosfatidil inositol, otro derivado del inositol, pueden ser
fosforiladosen el citoplasmapor quinasasespecficas,
producindose
variosproductosfosforiladosconocidoscomo
p olifosfoinostidos. Ngunos polifosfoinostidosse unen a
protenasde unin a actina.Por ejemplo,elfosfatidil inosi(una de lasformasdel PIP'),puedeunirtol (4,5)btfusfato
sea la profilinay a CapZ,y secreequeregulala capacidad
482

Captulo
15

Elcitoesqueleto

de estasprotenas de interaccionar con la actina. CapZ se


une fuertemente a PIP2,lo que tiene como resultado su eliminacin del extremo del microfilamento, permitiendo de
esta manera, tanto la depolimerizacin del filamento,
como el incremento de monmeros disponibles para la
formacin de nuevos filamentos.

Laramificacin
porel
dela actnaestcontrolada
complejoAtp2/3
Ademsde los filamentosindividualesde actinaque se
alargan o encogen,existen otras redes de actina en las clulas. Por ejemplo, los lamelipodios contienen filamentos de
actina que constituyenuna red en forma dendrticao de rbol (Figura 15.I7a). Ya hemos comentado anteriormente
que los extremos barbados de las ramas rectas formadas
por la polimerizacin de monmeros de actina por medio
de la profilina, se encuentran probablemente bloqueados
por protenascasquete.En el lamelipodio intervienen adems protenas adicionales.El complejo complejo Arp2l3,
constituido por protenasrelacionadascon la actina,participa en la ramificacin mediante la nucleacin de varias
ramas en los lados de filamentos ya existentes,fenmeno
demostrable cuando se aade actina-G fluorescente (por
ejemplo, monmeros marcados con un colorante rojo
fluorescente)a microfilamentos formados por actina marcada con una sealfluorescentediferente (por ejemplo, un
colorante verde). Se observaque brotan ramas rojas de los
microfllamentos verdesexistentescuando se aaden complejos Arp 213 activados(Figura 15,17b). Si se examinan
las ramas utilizando anticuerpos que detectan Arp2l3, se
observa que los complejos Arp2l3 se encuentran en los
puntos de ramificacin (Figura l5.l7c). Los miembros de
una familia de protenas, que incluye ala protena del sndrome de Aldrich o WASP, activan la ramificacin a travs
de Arp2l3. Los enfermos que no pueden producir WASP
funcional, tienen un dficit en la capacidadde sus plaquetas de cambiar de forma, y como consecuenciatienen problemas de coagulacinsangunea.
La polimerizacin de actina puede regularseindependientementedel complejo Arp2l3,a travsde protenasconocidas como forminas. Las forminas son necesariaspara
ensamblar ciertas estructuras de F-actina, como los haces
compactos y el anillo contrctil de la divisin celular (vaseCaptulo l9).

Rho,Racy Cdc-42
regulanla polimerizacin
dela actina
La clulasen migracindebenregularcundoy dnde
forman expansiones, organizando redes de actina en dichos lugares y desorganizndolas cuando ya no se necesiten ms. Un caso llamativo de dicha regulacin es el
cambio dramtico que experimenta el citoesqueletoen clulas expuestas a determinados factores de crecimiento.
Por ejemplo, los fibroblastos crecen,se dividen y forman
extensionesmembranosas ricas en actina, similares a los

'0,2pm

f
^rPlo

(b)

por
Crecimiento
los extremos
barbados

t-crotelnao" t

,t

?.

;=t=-'
en loslaterales
Las protenasde la
familiaWASPactivan
al complejoArp2/3

de losfilamentos

Protenas
casquete

L, protena
casquere
la
flnaliza
elongacin

o tO

CITOSOL

t'

Reservoriode profilina-actina

(d)

Figun 15.12 El complejo Atp2/3 y las redesramificadasde actina. Las redesde actina, como las que seencuentran en las clulasen
migracin, presentanun patrn de ramificacin caracterstico.(a) Filamentos de actina ramificados en un queratocito de una rana. Los
filnentos e actina ramificados estncoloreadospara facilitar su identificacin (TEM de criograbado profundo). (b) La actina polimeriza
formando ramas cuando se aaden monmeros d actina marcadosfluorescentemente(rojo), y protenasWASP y Arp2l3, a filamentos de
actina preexistentesmarcadoscon fluorescencia(verdes).Algunas ramas forman filamentos nuevos de actina (medio), mienttas que otras
,u-", i. forman en los lateralesde filamentos de actina preexistentes(parte superior) (microscopa de fluorescencia).(c) La protelna Arp2l3
(detectadamediante el uso de anticuerpos conjugadoscn partculas de oro, en amarillo), selocalizan en los puntos de ramificacin (TEM
iriograbado profundo). (d) Modelo de ramificacin depenientede Arp2l3. Las protenas de la familia WASP estimulan Ia ramificacin; las
protenas casqueteparticipan en la regulacin de la longitud de las nuevasramas.

lamelipodios,cuandoson estimuladospor el factor de crecimieito derivadode plaquetas(PDGF) Otros factores,


como el cidolisofosfutil.o(LPA)inducena lasclulasa
formar fibras de estrs.
Cmoprovocandichassealestal espectacularreorgaiizacinin el citoesqueletode actina?Muchasde estas
i'eRalesproducen camblosen el citoesqueletode actina a
travsde su accinsobreun pequeogrupo de protenas
relacionadascon la proterru *ono-rica Ras,que est
implicadaen la traniduccin de sealesmediadaspor re."pto. (vaseCapitulol4). Laspequeasprotenas-GRac,
Rho y Cdc42sonimportantesieguladoresde la polimerizaci,ndeactina,deniro de lasclulas.De hecho,estasprotenasson imprescindiblespara que los factoresde creci-

miento, como el PDGF y el LPA, eierzansusefectos.Cada


una de estasprotenasprovoca efectosprofundos y difede actina(Figura15.18).
rentesen el citoesqueleto
Por ejemplo,la estimulacindela va de Ractienecomo
resultadola extensinde lamelipodiosy la inhibicin de
normal al PDGF De una manera
Racimpide estarespuesta
similar,la activacinde la va de Rho tienecomo resultado
Ia formacinde fibrasde refuerzo,y la inactivacinde Rho
impide la aparicinde estasfibras,despusdela exposicin
delos fibroblastosa LPA.Porltimo,la activacinde Cdc42
producela formacin de filopodios.Estosesultadosindican que las protenasG pequeasregulanla formacin de
diferentestipos deprotrusiones.Lo llevana caboregulando
la polimerizacinlocal de microfilamentos,que seensamMicrofilamentos483

A ne x o

puEDENMovERSE
Los vrrcRooRcANrsMosrNFECCrosos
DENTRO DE LAS CTUTNS USANDO (COLAS) DE ACTINA
Uno de los hallazgosmsnotablesen la investigacinde la movilidad celular,esel descubrimientode que ciertosmicroorganismos que causrn
las enfermedades,
pueden aprovecharse
de los
sistemasde adhesiny movilidad de una clulapara sortearsus
defensase introducirse en ellas(vaseCaptutoiZ. Et ejemplo
msestudiadoesel de la bacteriagram-positivaListeriamonocytogenes.
Una de las formas de adhesinListeria es mediantela
protelnainternalinaA,,que seune ala cadherinaE,protelnade la
superficiede la clulahusped.(Parasaberms sobrelas cadheri:nas,vaseel Capltulo 17.) Una vez unida, Listeriaseintroduce
en la clula,se muevepor ella a una velocidadde 1l pmlmn y
avanzahacialasclulasvecinassin infectar,dondecontinuarsu
ciclo infectivo (Figura 15.Ala).Desdela bacteriairradian pequeos filamentosde actina,formando <colasde cometa>de actinaF ramificada(Figura 15.A1b).Seha descubierto,utilizando actina marcadafluorescentemente,
que las colasse forman por la
polimerizacinde actinadependientede Arp2l3,quecomienzaa
nuclearcercade la superficiede la bacteriainternalizada.La pro-

Acoplamiento
despusde la
uninposterior
de la bacteria

a
(

Internalizacin

tenade la superficiede Listeria,quepromuevela polimerizacin


de actina,se conocecomo ActA. Dado que los microfilamentos
nucleadospor ActA son extremadamentesimilaresa aquellos
que seencuentranen el extremode avancede las clulasen migracin,probablementelas colasseformen utilizando gran parte de Ia propia maquinariacelular.
Otras bacteriasinducenla formacin de otros tipos diferentes de <colas>de actina.Las bacteriasdel gnero Rickettsia,que
provocanel tifus, inducenla formacin de largascolasde actina
sin ramificar que recuerdana los filopodios.As,diferentespatgenoshan desarrolladoformasdistintasde valersedel citoesqueleto del huspedparapropulsarse.
Otros patgenosseunen a Ia superficiecelular,pero no seinternalizan.Por ejemplo,la forma enteropatgena
de E.coli, que
forma coloniasen la superficiede lasclulasepitelialesintestinalesy provocala diarreaen nios, seune al exteriorde las clulas
intestinalesdondeforma <pedestales>
ricosen actina,quefuncionan de manerasimilar a lascolasde actinainducidaspor Lsteria.

.$
Infeccin
de la clula
vectna

\)
\
\
\

La bacteriapuede
dividirsedentro
de la clula infectada

(a)

Formacin
de la "cola"
(b)

0.1m

Figuta154.1 fnfeccinde un mactfagopot Listeriamonocytogenes. (a) Ciclo vital de Listeria.Una bacteria seacopla a la superficie de una
clula sin infectar. La bacteria despussemueve dentro de la clula,donde puede dividirse y producir ms bacteriaspara postriormente
dispersarsea una clula vecina a travs de Ia formacin de <colasde cometa>de actina polimirizada. (b) Micrograf elecirnica de
transmisin, qne muestra una clula de Listeria dentro de un macrfago infectado y la <colade cometa>de filamentos de actina, en la parte
posteriorde la bacteria.

484

Captulo
15

Elcitoesqueleto

Fibrasde estrs

(a) Privacinde suero

Filopodios

Lamelipodio

(d) Cdc 2 actlvada

(b) Rho activada

lo rrf

(c) Ra9 activada


Figura15,18 Regulacinde las protrusionespor protenasG monomricas. (a) Si setie la actina de un fibroblasto en cultivo en ausencia
de factoresde crecimiento (<privacin de sueror), se observanunos pocos hacesde actina y una actividad de formacin de protrusiones
baja. (b) Las fibras de refuerzo se forman en situacionesque activan Ia ruta de sealizacinde Rho (como la adicin del cido lisofosfatdico,
LPA). (c) Cuando se activa la vla de Rac (en estecasomediante la inyeccin de una forma Rasmutante, constitutivamente activa), se forman
lamelipodios. (d) Si se activaCdc42 (por ejemplo, a travs de la inyeccin del factor de intercambio del nucletido guanina que activa
Cdc42),se forman filopodios.

blan en diferentestipos de protrusiones.Una manerade


conseguiresto,esa travsde la activacinde las protenas
junto con PIPr,pueWASP.Por ejemplo,Cdc42activada,
den unirsea WASPy activarla,estimulandode estamanera
la polimerizacinde actinapor el complejo Arp2l3.
Lasproteinasde unina actnaregulanla interaccin
entremcrofilamentos
Comohemosvisto,la polimerizacindelosMFspuedeser
un procesomuy dinmico.Adems,los MFs, como componentesestructuralesdel citoesqueleto,pueden formar
una gran variedadde polmerosde actina con diferentes
gradosde organizaciny estabilidad.La estructuralocal
del citoesqueletode actina, dependedel funcionamiento
de protenas de unin a actina y de cmo interaccionan
stascon los microfilamentos.

Un buen ejemplo de la funcin de las protelnas de


unin a actinaesel del crtex celular. El crtex celulares
una malla tridimensional de microfilamentosy protenas
justodebajodela membranaplasmasociadas,localizada
tica de casitodaslas clulasanimales.El crtex sostienela
membranaplasmtica,confiererigideza la superficiecelular,y facilitalos cambiosde forma y el movimiento celular.
Una funcin importante de lasprotenasde unin a actina
en el crtex es agrupar a los MFs en una red establecon
propiedades
similaresa un gel.Una de estasprotenasentrecruzadoras.esla
filamina,una molculagrandequeest
formadapor dospolipptidosigualesunidospor suscabezas,y con un sitio de unin de actinaen cadacola.Lasmolculasde filamina actancomo (enganches>,
uniendo dos
MFs en el punto dondesecruzan(Figura15.19).De esta
manera.los MFs se unen entre s formando redestridimensionales
de grantamao.
Microfilamentos485

2l

oooo

ffi

Filamentos
reforzados
Protenasde unin
a los monomeros

oaoo

''
r

-7
Complejos
de G-actinaproTerna

...:.-l
-o-

Ir

Haz de filamentos

I \
Monmeros
de actina Filamento\
de actina \

1
T'

t
Filamento
encasquetado

de los
medianteel reforzamientoy/o el encasquetamiento
protena
puede
desemla misma
MFs;en algunasocasiones
y
pearambasfunciones.Una de estasprotenasreforzantes
cuyafuncin esromper los
esla gelsolina,
encasquetadoras
los extremosms rccin exMFs de actinay encasquetar
puestos,impidiendo su polimerizacinposterior.La gelsolina esotra protenade unin de actinaquepuedeserregulada mediante su unin a polifosfoinostidos;cuando la
ya no es
gelsolinaseune a un polifosfoinostidoespecfico,
el extremomsde un MR permitiencapazde encasquetar
do al extremosin encapucharsufrir cambiosen sulongitud.
Loshacesde filamentosde actinaformanel ncleo
de las microvellosidades

(gel)
Redde filamentos

Figura15.19 Relaciones
entre las pdncipalesfotmasestructuales
de actina. Las protenas de unin a actina (verde,morado y
canela)son las responsablesde la conversin de los filamentos de
actina de una forma a otra.

el papelopuesto,rompienOtrasprotenasdesempean
do la red de microfilamentosy provocandoque el gelcortical de actinaselicue y ablande.Llevana caboestafuncin

quepresentala actina
A diferenciade la pocaorganizacin
en el crtexcelular,otrasestructurasformadaspor actina
en clulasno migradoraspuedenestaraltamenteorganizadas.El ejemplomejor estudiadode polmerosde actinaal=
tamenteorganizadosesel de los hacesde filamentosque se
encuentranen las microvillosidades.Las microvillosidades (o is6yilli; en singular:microvillus) son un rasgo
muy importantede lasclulasde la mucosaintestinal(Figura15.20a).
Porejemplo,una solacluladelintestinodelcadauna de ellas
gado,tienecientosde microvellosidades,

Complejosde
MicrovellosidadesG-actina-protena
electrn-densa

Mlcrofilamentos
de actrna
Entrecruzamientos
laterales

Protenasformadoras
oe naces
Membrana
plasmtica

(b) Estructura
de una microvellosidad

(a) Intestinal
microvilli

486

15
Captulo

0,2L,m

Elcitoesqueleto

Figura15.20 Estructurade un
microvellosidad. (a) Micrografa
electrnicade las microvellosidadesde las
clulasde la mucosa intestinal (TEM).
(b) Diagrama esquemticode una nica
micovellosidad, que muestra el ncleo de
microfilamentos que confiere a la
microvellosidad su particular rigidez. El
ncleo estformado por varias docenasde
hacesde microfilamentos orientados con
susextremosmshaciala punta y con el
extremo menoshactalaclula.Los
extremos ms esfnembebidosen una
olaca amorfa electrn-densa.Los MFs
stn unidos fuertemente uno a otro a
travs de protenas formadoras de haces
(entrecruzadoras)
y seconectana la
superficie interna de la membrana
plasmticamediante entrecruzamientos
Iaterales.

de I-2 tm de longitud y 0,1 pm de dimetro,lo que aumentala superficiede la clulaunas20 veces.Estareatan


grandeesesencialpara la funcin intestinal,ya que la absorcin del alimento digerido requiereuna superficiede
absorcingrande.
Como seilustraen la Figura15.20b,el coraznde una
microvellosidadintestinalestformado por un hazde microfilamentos.El extremomsestdirigidohaciala punta,
donde quedaunido a la membranaa travsde una placa
amorfa electrn-densa.
Los MFs del haz estnunidos a la
membranaplasmticaademspor entrecruzamientoslateralesformadospor lasprotenasmiosinaIy calmodulinq.
Estos entrecruzamientosse extiendenhacia fuera 20-30
nm desdeel hazhastacontactarcon la placaelectrn-densade la superficieinterna de la membrana.Los MFs adyacentessemantienenunidos fuertementedentro delhaz,a
travsde Ia unin a intervalosregularesde las protenas
entrecruzadoras
fimbrinay villina (llamadastambinprotenasformadorasde hacesde actina).
En la basede la microvellosidad,
el haz de MFs seextiendeformandouna red de filamentosconocidacomola
red terminal (Figura15.21).Los filamentosde staestn
compuestosprincipalmentepor miosinay espectrina,que
conectanlos microfilamentosentres,con protenasde la
membranaplasmtica,
yposiblementetambincon los filamentosintermediosque sehallanbajo la red terminal.
La red terminal supuestamente
confiererigideza las microvellosidades
anclandosushacesde MFs de tal manera
que seproyectenerguidosdesdela superficiecelular.
La actinase unea las membfanaspor mltiples
protenas
Hemosvisto que los microfilamentosparticipan en el soporte de estructurasrelacionadascon membranas,como
las microvellosidadesde las clulasepiteliales.Los MFs
participan ntimamenteen el movimiento celular y en el
estrangulamientode la membranacelulardurantela citocinesis.Parallevara acaboestasfunciones,los MFs deben
estarconectados
a la membranaplasmtica.
La unin de
los MFs a la membranaplasmticaesindirectay requiere
una o msprotenasde unin queanclenlosMFs a protenastransmembrana
de la membranaplasmtica.
Las protenasde unin a actina de la familia FERM
(banda4.7,ezrina,radixinay moesina),
son un grupo de
protenascuya funcin generalpareceser la de unir los
microfilamentosa lasmembranas.
Si estasprotenasestn
mutadas,muchosprocesoscelularescomo la citocinesis,
la secreciny la formacin de microvellosidades
se ven
afectados.
Lasprotenasdel eritrocitoespectrinay anquirina (mencionadaen el Captulo 7) constituyenotro
ejemplode cmola actinasepuedeunir a lasmembranas.
Como seilustraen la Figura15.22,1a
membranaplasmtica del eritrocitoestcimentadapor una red de filamentos de espectrinaque estnentrecruzadoscon cadenas

Red terminal

0,2 p'm

Figura15.21 Redteminal de unaclulaepitelialintestinal, La red


terminal que subyacea Ia membrana plasmticasepuede observar
en estamicrografia electrnica de criograbado profundo de una
clula epitelial del intestino. El nricleo de las microvellosidadesest
formado por hacesde microfilamentos, que se extienden formando
en una red terminal.

muy cortasde actina.Estared seconectaa la membrana


plasmticaa travsde lasprotenasanquirinay banda4.1,
que unen los filamentosde espectrinaa protenastransmembranaespecficas.
Existenprotenasparecidasa la espectrina,la anquirina
y la banda4.1en otrasclulasanimalesademsdel eritrocito. Por ejemplo,en el extremoapicalde las clulasepitelialesseencuentrala banda4.I.La mutacinde estasprotenas en Drosophilay en el nematodo Caenorhabditis
elegans
impiden Ia organizacinde las clulasepitelialeso
su capacidadde cambiarla forma. stey otros muchosexperimentosdemuestranque la membranaplasmticaest
soportadapor una red cortical de microfilamentos,y que
la unin de estared a la superficiecelular esun requisito
indispensable
panael funcionamientonormal de lasclulasanimales.
Microfilamentos487

Glucoforina

Actinay
Banda4.1 Espectrina Anquirina

IFs seencuentransoloso formandohaces,y dondeparece


que desempean
un papelestructuralo de mantenimiento
de la tensin.La Figura15.23esuna micrografaelectrnica de los IFs de un fibroblastohumano en cultivo.
Losfilamentosintermediossonel elementomsestable
El
y menossolublede los constituyentesdel citoesqueleto.
o consoluciones
tratamientode lasclulascon detergentes
de elevadaobaja fuerzainica, elimina la mayor parte de
y otrasprotelos microtbulosy de los microfilamentos,
nasdel citosol,pero no la red de filamentosintermedios,
que mantienensu forma original. Muchos cientficossugieren que, graciasa esta estabilidad,los IFs funcionan
como un andamiajeque soportatoda la estructuradel ciA diferenciade los MTsy los MFs,los IFs patoesqueleto.
polaridad.
no
tener
recen
Lasprotenasde los filamentosintermedios
son especficasparacadatejido

ol lm

FiguraL5.22 Sostnde la membranaplasmticade un etitrocito pol


La membranaplasmticade
una red de actina-especttina-anquilina,
un glbulo rojo estcimentada en su superficie interna por una red
filamentosa que aporta flexibilidad y resistenciaa la clula. Largos
filamentos de espectrinase entrecruzan con filamentos cortos de
actina. La red se ancla a la protena transmembrana banda 3, por
medio de la protenaanquirina.

Filamentos intermedios
Los filamentos intermedios (IFs) tienen un dimetro aproximado de 8-12 nm, 1o que les confiere un tamao intermedio entre los microtbulos y los microflamentos (vase
Tabla 15.1),o entre los filamentos finos (actina) y gruesos
(miosina) en las clulasmusculares,donde se describieron
por primera vez. Hasta la fecha, la mayora de las investigaciones se han centrado en las clulas animales,donde los

488

Captulo
15

Elcitoesqueleto

Losfilamentosintermediossloseencuentranen organisy a diferenciade los microtbulosy de


mo pluricelulares,
presentanuna secuencia
de aminolos microfilamentos,
cidosmuy diferentede un tejido a otro. En funcin del tipo
celularen el que seencuentren,podemosdiferenciarseis
I y II comprendena las
clases
de IFs(Tabla15.3).Lasclases
queratinas,las protenasque constituyenlos tonofilamentos de las clulasepitelialesque tapizanlas superficiesdel
(LosIFs que seobservan
cuerpoy bordeansuscavidades.
bajo la red terminalde la clulade la mucosaintestinalde
la Figura15.21,estnformadospor queratina.)Lasqueratinas de claseI son queratinascidas,mientrasque las de
claseII sonqueratinasbsicaso neutras;cadauna de estas
clasesestformadapor al menos15queratinasdiferentes.
La claseIII de IFsla componenla vimentina,la desmina
y la protenagliofibrilar cida.Lavimentinaespresenteen
el tejido conjuntivoy en otras clulasderivadasde clulas
Losfilamentosdevimentinasonconstituyenno epiteliales.
tes importantesen fibroblastosen cultivo, donde forman
una red radial que seorigina en el centroy que seextiende
hastala periferiade la clula.La desminaseencuentraen las
clulasmuscularesy la protenagliofibrilar cida(GFA) es
de las clulasglialesque rodeany aslana las
caracterstica
clulasnerviosas.La claseIV de IFsIa constituyenlasprote(NI) que se encuentranen los
nas de los neurofllamentos
neurofilamentosde las clulasnerviosas.La claseV son las
A, B y C, que forman un andamiofilalminqsnucleares
mentosobajo la superficieinternade la membrananuclear
Losneurofilade prcticamentetodaslasclulaseucariotas.
mentosde lasclulasembrionariasdel sistemanerviosoestn formados por nestina,que constituyela claseVL
lasprotenasde
A medidaquesehan ido secuenciando
ha quedadoclaroqueestasprotenaseslosIFsy susgenes,
por una nica (aunquegrande)familiade
tn codificadas
genesrelacionadosy que,por lo tanto,puedenserclasificadastambin en funcin de la similitud en su secuenciade

(a)

(b)
200 nm

200nm

Figura15'23 Filamentosintemedios. Micrograffas electrnicasde filamentos intermedios reconstituidos in vitro y teidos mediante
tincin negativa(a) Filamentosformadospor queratina5 y la. (b) filamentosde vimentina (TEM).

Tabla15.3 Clases
defilamentos
intemedios
Clase
I
II

ProteinadellF

III

Citoqueratinascidas
Citoqueratinas
bsicas
Vimentina

III

Desmina

ProtenaGFA
Protenas
de los
neurofilamentos
NF-L (ligeros)

IV

NF-M (intermedios)
NF-H (pesados)
Lminasnucleares

VI

Peso
(kDa)
molecular
40-56,5
53-67
54

50

Funcin

Teiido
Clulasepiteliales
Clulasepiteliales
Fibroblastos;clulasde origen
mesenquimal;cristalino
Clulasmusculares,especialmente
del msculoliso
Clulasglialesy astrocitos
Sistemanerviosocentraly perifrico

Resistenciamecnica
Resistencia mecnica
Mantenimiento de la forma celular
Soporte estructural para la
maquinaria contrctil
Mantenimiento de la forma celular
Rigidez axonal. Determinan
el tamao del axn

OL

t02
110
Todoslos tiposcelulares

LminaA

70

LminaB
LminaC
Nestina

67
60
240

Forman un andamiaje nuclear para


dar forma al ncleo

Clulasmadrenerviosas

aminocidos. Utilizando este criterio, se han distinguido


seisclasesde protenas de los IFs (Tabla 15.3).
Debido a la especificidadtisular de los IFs, se pueden
distinguir las clulas animales de diferentes tejidos atendiendo al tipo de IF presente,utilizando el microscopio de
inmunofluorescencia. Esta determinacin por el tipo defilamento intermedio se utiliza como herramienta diagnstica
en medicina. La determinacin del tipo de IF es especialmente til en el diagnstico del cncer,ya que se sabe que
las clulastumorales mantienen las protenas de IF caractersticasdel tejido en el que se han originado, independientemente de dnde se encuentre el tumor en el cuerpo.
Habida cuenta de que el tratamiento apropiado depende

Desconocida

con frecuenciadel tejido de origen,la determinacin del IF


es especialmentevaliosa en los casosdonde el diagnstico
por las tcnicas de microscopa convencionaleses difcil.

Losfilamentos
intermedios
se formana partir
desubunidades
flamentosas
Todos los IFs son producto de una familia de genesrelacionadosyposeen rasgoscomunes,aunque presentandiferencias significativas en el tamao y en las propiedades
qumicas. A diferencia de la actina y la tubulina, que son
protenas globulares, los IFs son protenas filamentosas.
Todas las protenas de los IFs tienen un dominio central en

Filamentos
intermedios 489

forma de bastnde 310-318aminocidos,notablemente


conservadoen tamao,estructurasecundaria en cierto
Como se muestraen la Figura
sentido,en su secuencia.
15.24,eldominiocentralestformadopor cuatrosegmenpor segmentos
separados
enlazatos de hlicesenrolladas,
dorescortos.A ambosladosdel dominio centralhelicoidal
seencuentranlos extremosN- y C-terminal, que difieren
mucho en tamao,secuenciay funcin entre las distintas
protenasde los IFsy que presumiblementeexplicanla diversidadfuncional de estasprotenas.
En la Figura15.25semuestraun posiblemodelodelensamblajede los IFs. La unidad estructuralbsicade los filamentosintermediosla forman dos polipptidos de IF
Los
entrelazadosformando una espiral sobreenrollada).
dominios centraleshelicoidalesde cadapolipptido estn
con las regionesN- y C-terminal
alineadosparalelamente,
globularesen cadaextremo.
dominios
sobresaliendo
como
Dos de estosdmerossealineanlateralmentey forman un
protofilamenfo
tetramrico.Losprotofilamentosinteracciolateraly
nan unoscon otrosy seasociansuperponindose
longitudinalmenteparaformar una estructurafilamentosa.
Un filamentointermedio,cuandoestplenamenteensamblado,tiene un dimetrode ocho protofilamentosen cualquier punto, con los protofilamentosprobablementesolapadospor susextremosde formaescalonada.
Losfilamentosntermedosconfierenresstencia

mecnica
a losteiids
Los filamentosintermediosseconsideranimportantesdeterminantesestructuralesen muchasclulasy tejidos.Los
filamentosintermediosselocalizancon frecuenciaen lugaresde la clulasometidosa estrsmecnico,por lo que
se cree que desempeanuna funcin de resistenciaa la

tensin.Por ejemplo,en las clulasepiteliales,lostonofilamentoscompuestosde queratina,rodean unas placascoque son puntos de unin fuernocidascomodesmosomas,
tes entre dos clulasvecinas(vaseFigwa 17.18).Otra
establece
coestructuraalgo diferente,el hemidesmosoma,
nexionesentrela superficiebasalde una clulaepitelialy la
matrizextracelular(vaseFigwa17.17).El sistemade dey tonofllamentossoportala
mosomas,hemidesmosomas
mayorpartede la tensinmecnicacuandoel epitelioseve
sometidoa un estiramiento.La modificacin genticade
los filamentosde queratinade los queratinocitosen un ratn transgnico,tiene como consecuenciaque las clulas
epidrmicasseanfrgilesy serompan fcilmente.En el ser
humano, existenmutacionesnaturalesen las queratinas,
que provocanuna enfermedaden la que seproducenfrebucuentesampollasen la piel,denominadaepidormolisis
la existenciade dellosasimple(EBS).Tambinsesospecha
patolgicas,
comola
fectosen los IFs en otrascondiciones
lateralamiotrfica(ALS),yen ciertostipos de caresclerosis
que seoriginanpor defectosen la organizadiomiopatas,
cin del msculocardaco.
Aunque nuestroanlisisde los IFs puedadar la impreestono escierto.Por
sin de que son estructurasestticas,
losIFssontransportados
y remoejemplo,en lasneuronas,
deladosde una maneradinmica.OtrosIFs forman el andamiajeestructuralen la superficieinternadela membrana
nucleardenominadolmina nuclear(setratardetalladamenteen el Captulo19).La lminanuclearestcompuesta por tresIFs diferentesllamadoslmina nuclearA, B y C.
de estaslminasforman
La fosforilaciny el desensamblaje
partedel procesode desorganizacn
de la eruueltanuclear
al inicio de la mitosis.Despusde la mitosis,las fosfatasas
de laslminaseliminan los gruposfosfato,y permiten que
de nuevo.
la envueltanuclearpuedaagregarse

tl

Dominior^^_,^,amini

Ntefminal

I
t^

uurrriiocentralen formade bastn --------------*i


:"
:
|
u-termtnal

helicoidales
Segmentos

r.-uo
o

n.itl|

Segmentos
de unin

ll

'

Tinn

c-o-

H"N*
-ll^

ll /nrroreiinac

hciac

r na rtrac\

o
desminay proteaGFA)
_O_ Tipolll (vimentina,

H^N"

ii"

n,N-

f-o_

Tipo|V(protena
NF)

,tO
i
H3N*C-O-"vv

'l

Ii^

\v/ / l m i n r e
'q"""qu

nr r.laaraa\
"uv'vqrvu/

Figura15.24 Similitudesestructuralesen las protenasde los filamentosintemedios. Los seistipos de protenasde los filamentos intermedios
tienen un dominio central en forma de bastn formado por cuatro segmentoshecoidalesque estninterrumpidos por tres segmentos
enlazadores.Secreeque el dominio central desempeaun papel importante en el ensamblajedel IF. Estedominio estaltamenteconservadoen
tamao, estructurasecundariay secuencia,si bien las homologasserestringena las regioneshelicoidales.En los tipos del I al IV los segmentos
helicoidalespresentan276 aminocidosy los segmentosde unin no son helicoidales.En los del tipo V, los segmentoshelicoidalescontienen
318 aminocidosy sussegmentosde unin son tambin helicoidales.Los dominios N- y C-terminal que flanqueanla parte central no son
helicoidalesy son mucho ms variablestanto en tamao como en secuencia.(La estructuradel sextotipo, nestina,no semuestra.)

490

Capitulo15

Elcitoesqueleto

-{

B-12nm
(a) Dmero

(b) Tetrmero (c) Protofilamentos


", il,,ffi:::"

Figun 15.25 Modelodel ensamblajede los filamentosintemedios


in vitro. (a) El punto de partida para el ensamblajeesuna pareja
de polipptidos IF. Los dos polipptidos son idnticos en todos los
IFs, exceptoen los filamentos de queratina, que son
obligatoriamente heterodmeros,con un polipptido del tipo I y
otro del tipo II. Los dos polipptidos se enrollan uno sobre el otro
formando una hlice enrollada de dos cadenas,con sus dominios
centralesconservadosalineadosparalelamente.(b) Dos dmeros se
alinean lateralmente para formar un protofi.lamento tetramrico.
(c) Los protofilamentos se ensamblanen fi"lamentosms hrgos a
travs del alineamiento por sus extremos o por los laterales.(d) Se
consideraque el filamento intermedio estcompletamente
ensambladocuando tiene un grosor de ocho protofilamentos en
cualquier punto.

tn unidos a los filamentos intermedios a travs de los


miembrosdela familia de protenasdelaplaquina,comola
plectina,desmoplaquina
y el antgeno1 pemfigoidebulloso
(BPAGI; ttaseCapitulo17).Dichasunionesproporcionan
y hemidesmosola resistenciamecnicaa los desmosomas
mas.Sin embargo,la funcin de las plaquinascomo nexos
mecnicosno se reducenicamentea los desmosomasy
Por ejemplo,la plectinaesuna protena
hemidesmosomas.
de unin verstilque seencuentraen lugaresde conexin
entre los filamentosintermediosy los microfilamentoso
los microtbulos (Figura L5.26).La plectina,al igual que
otras plaquinas,poseesitios de unin para los filamentos
intermedios,los microfilamentosy los microtbulos. A
travsde la unin de estostres polmerosprincipales,las
plaquinasparticipanen la formacinde una red citoesqueltica mecnicamenteintegrada.Como resultado,las estructuras del citoesqueletopuedenadaptarsea las fuerzas
de estiramientode tal manera,que los elementosque soportan la tensin,sealineanen la direccindel estrs.Las
propiedadesde resistenciaal estrs,son especialmente
importantesen las clulasepiteliales,como las clulasque revistenel intestino.Estasclulasestnsometidasa constante
tensin,ya queel msculoliso de la paredintestinalsecontrae,presionandosobreel contenidodel intestino.

El citoesqueletoes unaestlucturantegrada
mecncamente
En los apartadosanteriores,hemos consideradolos diferentescomponentesdel citoesqueletocomo entidadesseparadas.Cuandoobservamospor primera vezlas fotograffas del citoesqueleto,pareceuna red enmaraadapoco
organizada.En realidad,la arquitecuracelulardependede
las propiedadesnicasde los diferentescomponentesdel
actuandode una maneraconjunta.Normalcitoesqueleto,
mentesepiensaquelos microtbulosresistenla distorsin
cuandosecomprimea una clula,mientrasquelos microfilamentosfuncionancomo elementoscontrctilesque generan tensin.Los filamentosintermediosson elsticosy
puedenresistirfuerzasde tensin.
La integracinmecnicade los filamentosintermedios,
los microfilamentosy los microtbulosesposiblegraciasa
la accinde protenasde unin que los conectanentre s.
y los hemisdesmosomas
esRecuerdeque los desmosomas

6,T;;
Figura15.26 Conexionesentre los filamentosintermediosy otros
componentesdel citoesqueleto, Los filamentos intermedios estn
conectadostanto a los microtbulos como a los filamentos de
actina a travs de una protelna llamada plectina. La plectina (en
rojo) une los IFs (en verde) a los MTs (en naranja). La plectina est
marcada con partculas de oro (en amarillo). Las plectinas pueden
unir tambin MFs de actina (no se muestra). Los IFs sirven aqu
como conectoresfuertes alavezque elsticos,entre los diferentes
filamentos del citoesqueleto.

Filamentos
intermedios

49r

El citoesqueletoesun elementoestructural de las clulaseucariotas,que sepuede


observar muy bien mediante videomicroscopadigital, microscopaelectrnica
y microscopa de inmunofluorescencia.
Consisteen una red tridimensionalamplia de microtbulos,microfilamentosy
filamentosintermedios,que determinala
forma celular y que permite los movimientoscelulares.
Los microtbulos (MTs) son tubos
huecoscuyasparedesestnformadaspor
heterodmeros
de tubulina a y B polimerizadas linealmente,formando protofilamentos.LosMTs sonestructuraspolaresy
que crecenpreferentementepor uno de
sus extremos,conocido como extremo
ms.Los microtbulosfueron identificados por primera vez como constituyentes
de estructurasdel axonemade ciliosy flagelosy dei huso mittico de lasclulasen
divisin, y estnreconocidoshoy en da
como un elementobsicodela mayorade
las clulaseucariotas.Los microtbulos
puedensufrir ciclosde acortamientocatastrficoo de crecimiento,un fenmeno
queseconocecomo inestabilidaddinmica,En el interior celular,la dinmicay crecimiento de los MTs estdirigida por los
centros organizadoresde microtbulos

(MTOCs).EI centrosomaes un MTOC


importante,quecontienesitiosde nucleapara
cin ricos en tubulina 7, necesaria
nuclearel crecimientodel MT. Los microtbulos se estabilizana lo largo de su extensiny en susextremosms,por medio
de protenasasociadas
a los microtbulos.
Los microfilamentos(MFs) son polmerosde actinade doble cadenaque fueron descubiertosinicialmentepor la funcin que desempeanen las fibrillas
contrctilesde las clulasmuscularesractualmenteselesreconocecomo un componentede casitodaslasclulaseucarioson necesarios
tas.Los microfilamentos
comoen la
en muchosprocesos
celulares,
locomocincelulary en el mantenimiento de la formade la clula.Al igualquelos
microtbulos,los MFs son estructuras
polares,en lasquelos monmerosde acpor
tina se incorporanpreferentemente
un extremoy se eliminanpor el otro. El
ensamblaje
de losMFsen Ia clulaestreguladopor lasprotenasG monomricas
Rho, Rasy Cdc42,por los derivadosdel
fosfatidilinositol, conocidos como poliy por las protenascasfosfoinostidos,
quete.Otrasprotenasestabilizadoras
de
actinaregulanla organzacnde los MFs
en lasclulas,
desdelosfilamentosparale-

los de la actinade lasmicrovellosidades,


a
lasredesde actinaramificada.
Los filamentosintermediosconstituyen el componentems establey menos
solubledel citoesqueleto.
Parecendesempear un papel estructuralo de resistenciaa la tensin.LosIFssonespecficos
de
cada tejido y pueden utilizarse para Ia
identificacin del tipo celular. Dicha
identificacin del tipo es til en el diagnstico del cncer,ya que sesabeque las
clulascancerosasconservanlas protenas de los IFs del tejido del que provienen.Todaslasprotenasde los IFs tienen
un domino centralaltamenteconservado
flanqueadopor regionesterminalesque
difieren en tamaoy en secuencia,
1oque
presumiblementejustifica ia diversidad
funcionalde lasprotenasde los IFs.IFs,
MTs y MFs estninterconectados
en la
clula formando redes citoesquelticas
quepuedensoportarla tensiny la compresin,y que proporcionanresistencia
mecnicay rigidez a lasclulas.
Con estosconocimientos,estamosya
preparadospara enfrentarnoscon el siguiente captulo, donde exploraremos
con ms detallela funcin de los microtbulosy losmicrofilamentos,
en la motilidad y contractilidadcelular.

Problemas
estnmarcados
conun..
Losproblemas
demayor
dificultad
15.1 Filamentosy tribulos. Indique si lassiguientes
paralos microtbulos(MT),los
afirmaciones
sonverdaderas
(MF),los filamentosintermedios(IF) o para
microfilamentos
ninguno de ellos(N). Alguna de lasafirmacionespuedetener
msde una respuesta.
(a) Implicadosen la contraccinmuscular.
(b) Iimplicadosen el movimiento de cilios y flagelos.
(c) Ms importante para el movimiento de los cromosomas
queparala citocinesis.
(d) Ms importante parala citoquinesisque para el
movimientode los cromosomas,
en lasclulasanimales.
(e) El que probablementeresistanal tratamientode las clulas
con detergentes
no inicoso con solucionesde elevada
f:uerzainca.
(0 Seencuentranen lasbacterias.
(e)Tienendiferentecomposicinen lasclulasmuscularesy
en las clulasnerviosas.
( h ) Puedendetectarse
con microscooade inmunofluorescencia.

492

Captulo
15

Elcitoesqueleto

(i)

Lasfuncionesquedesempean
en el movimientocelular
sonbien conocidas.
(j) Seensamblan
a partir de protofilamentos.
L5,2 Verdadero,falso o depende.Indique cul de las
afirmaciones
esverdadera(V), falsa(F), o depende
siguientes
(D), entendindose
comodependeuna afirmacinquepuede
serverdaderao falsadependiendode las circunstancias.
Expliquepor qu,en loscasosquerespondaVo F.
(a) El extremomenosde Iosmicrotbulosy de los
microfilamentossellama asporque en 1,lassubunidades
sepierdeny no seaaden.
(b) La energanecesariaparala polimerizacinde la tubulina y
de la actinala proporcionala hidrlisis de un nuclesido
trifosfato.
(c) Los microtbulos,los microfilamentosy los filamentos
intermedioscoexisten,en una clulaeucariotatpica,en un
equi-libriodinmico con un reservoriode subunidades
proteicas.
(d) El tratamientocon latrunculinaA bloquearalos
movimientosintracelularesde Listeria.

(e) Una clula de un alga no tiene ni tubulina ni actina


(0 Todas las subunidades proteicas de los filamentos
intermedios estn codificadospor genesde la misma
iamilia gnica.
(C) Todos los microtbulos de las clulas animales tienen su
extremo menos anclado al centrosoma.
(h) Mientras los monmeros de actina continen
incorporndose al extremo ms de un microfilamento, ste
continuar creciendo.
15,3 Estudios del citoesqueleto. A continuacin se describen
los resultados de estudios recientes de las protenas del
citoesqueleto.Exponga en cada caso,la conclusin que se puede
sacarde los resultados.
(a) Las vesculaspigmentarias de las clulasepidrmicasde los
peces,se agregano se dispersanen respuestaal tratamiento
con ciertassustanciasqumicas. Cuando se aade
nocodrazol a las clulas cuyos grnulos de pigmentos han
sido inducidos previamente aIa agregacin,los grnulos
no pueden dispersarsede nuevo.
(b) Cuando se trata con colchicina una clula animal, sus
microtbulos se depolimerizan y prcticamente
desaparecen.Si posteriormente se retira Ia colchicina
mediante lavados,los MTs aparecende nuevo, comenzando
en el centrosomay creciendo hacia fuera con una tasa
(1 pmlmin) similar a la que polimeriza la tubulina in vitro.
(c) Cuando se introduce y se expresaun gen que codifica para la
actina del msculo cardaco en una clula en cultivo, que
normalmente slo sintetizala actina del msculo
esqueltico,la protena producida por el gen <forastero>se
combina fciimente con las molculas de actina indgenas
sin ningn efecto adverso sobre la forma o Ia funcin celular.
(d) Se ha observadoque los extractosobtenidos de huevos de
rana en faseG2 del ciclo celular,contienen estructurasque
podran inducir la polimerizacin de la tubulina en
microtbulos in vitro. EI examen mediante inmunotincin
de estasestructuras,revela que contienen pericentrina.
. L5.4 Estabilizacin y la concentracin crtica. Suponga que
se ha determinado la concentracin crtica global de una
muestra de tubulina purificada. Despus se aade una
preparacin de centrosomas(centros organizadoresde
microtbulos), que nuclean los microtbulos, de tal manera que
el extremo menos queda unido al centrosoma y est estabilizado
contra la depolimerizacin. Cuando se determina de nuevo Ia
concentracin crtica global, el resultado es diferente. Explique
por qu cambia Ia concentracincrtica global.
15.5 Polimerizacin de actina. Se puede seguir la
polimerizacin de la actina-G en microfilamentos, utilizando
actina marcada con pirenos y un aparato que mida Ia
fluorescencia de la actina polimerizada en un tubo de ensayo.
EI aumento en la fluorescencia puede representarsefrente
al tiempo, de una manera similar a los experimentos de
dispersin de la luz para medir Ia polimerizacin de la tubulina
(Figura 15.27).Examine el grfico e identifique cul de las
curvas correspondea cada una de las siguientessituaciones.En
cada caso,razone su respuesta.
(a) Adicin slo de actina unida a pirenos, en presenciade un
tampn.
(b) Adicin de actina unida a pirenos, junto con protenas del
complejo Arp2l3

.(g

o
c
O
a
c)
l

tr

Tiempo
por
de la polimerizacin
Figwa15.27 Cintica
dela actinamedida
la incorporacin
deactinaunidaa pirenos,
envariascondiciones
(Vase
Problema
15.5.)
experimentales.
(c) Adicinde actinaunida a pirenos,junto con protenas
purificadasdel complejo Arp2l3 y un fragmentoproteico
purificadoque corresponde
a N-WASPactivo(una
protenade la familia WASP)
.15.6 Actina esponjosa.Supongamos
queustedest
en los efectosprecisosde la citocalasina
D sobrelos
interesado
microfilamentos,
a lo largodel tiempo.Basndose
en lo que
conoceacercadel mecanismode accinde iascitocalasinas,
de lo quelessucedea los microfilamentos
dibujediagramas
en
lasclulastratadascon la droga.En particular,expliquepor qu
los polmerosde actinaya existentes,
sedespolimerizan
al final.
.15.7 Una nuevaarruga.Losfibroblastos
sepuedenmeteren
normales,los
lminasfinasde silicona.En condiciones
fibroblastos
ejercenla suficientetensinsobrela silicona,para
quesearrugue.Expliquecmo sepodracompararIa capacidad
de los fibroblastosde arrugarla silicona,con la de lasclulas
normales,bajolassiguientes
condiciones.
(a) Lasclulasseinyectancon grandescantidadesde gelsolina
purificada.
(b) Lasclulasprovienende un ratn modificadopor
quecarecede filamentosintermedios
ingenieragentica,
de vimentina.
(c) Lasclulassetratancon taxol.
(d) Lasclulassetratancon colchicina,la drogaseelimina
y lasclulasseobservanperidicamente.
mediantelavados,
15.8 Activa, gusteo no. Sepuedenconstruir por ingeniera
gentica,formasconstantemenete
activasde lasprotenasG
monomricas(<constitutivamente
activas>),
o queactencomo
<dominantes
negativas).
El efectode estasltimasprotenasG
permanentede la va de sealizacin
esla desactivacin
asociada
con esaprotenaG pequea.
(a) ExpiiquequIe suceder
a un fibroblastoen reposoen
sueronormal cuandosele introduce un dominante
negativode Rho.
(b) Expiiquequ le sucederal mismo fibroblasto,si seIe trata
con el factor de crecimientoderivadode plaquetas
(PDGF).
(c) Expliquequ le sucedera un fibroblastoal que sele ha
introducido Rho constitutivamenteactivocuandosele
trata con cidolisofosfatdico(LPA).

Problemas 493

Bibliografa recomendada
Lasreferencias
histrica
estnmarcadas
conimportancia
con..
parael estudiodelcitoesqueleto
Tcnicas
.Bridgman,P.C. y T. S.Reese.
The structureof coplasm in
directly frozencultured cells.l. Filamentousmeshworksand
groundsubstance.
the cytoplasmic
J. CellBiol.99 (1980):
1655.
'Hirokawa,N.y ]. g. Heuser.Quick-freeze,
deep-etch
visualizationof the cytoskeletonbeneathsurface
differentiationsof intestinalepithelial celIs.J. CelIBiol. 9|
(1981):399s.
Microtbulos
Bornens,M. Centrosome
compositionand microtubule
anchoringmechanisms.
Curr.Opin. CelIBioI.14 (2002):2534.
Desai,A. y T. Mitchison.Microtubulepolymerizationdynamics.
Annu.Rev.CellDevelop.
Biol.13 (1997):83.
Gundersen,
G. G.,E.R. GomesyY.Wen.Corticalcontrolof
microtubulestabilityandpolarization.Curr.Opin.CellBioL16
(2004):1-7.
Joshi,H. C. Microtubule dynamicsin living cells.Curr. Opin.
CelIBiol.10 (1998):35.
.Mitchison,T.y M.Kirschner.Dynamicinstabilityof
microtubulegrowth.Nature372(1984):237
.
Moritz, M. y D. A. Agard.Tubulin complexesand microtubule
nucleation.Curr.Opin.Struct.BioI.11(2001):174.
Nicolaou,K. C.,R. K. Gu et al.Taxoids:Newweaponsagainst
cancer.Sci.Amer.274 (1996):94.
Microfilamentos
Ayscough,
K. R. In vivo functionsof actin-bindingproteins.
Curc.Opin.CellBiol.10(1998):102.

494

Capitulo
15

Elcitoesqueleto

Cameron,L. A., P.A. Giardini, F.S.Sooy I. A. Theriot. Secretsof


actin-basedmotility revealedby a bacterialpathogen.Na.
Rev.Mol. CellBiol.J (2000):110-119.
Etienne-MannevilleS.yA. Hall. Rho GTPasesin cellbiology.
Nature 420Q002\: 629- 635.
Heintzelman,M. B. y M. S.Mooseker.Assemblyof the intestinal
brushborder cytoskeleton.
Curc.TopicsDev.Biol.26 (1992):
93.
Pollard,T. D. y G. G. Borisy.Cellularmotility driven by
assemblyand disassembly
of actin filaments.CeIIll2
(2003):4s3-46s.
.Schroder,R. R., D. f. Manstein,W. Iahn, H. Holden,I. Rayment,
K. C. Holmesy I. A. Spudich.Three-dimensional
atomic
modelof F-actindecorated
with DictyosteliummyosinS1.
Nature364(1993):17I.
T. P.,J.Condeelis,
Stossel
I. L. Coole f. H. Hartwig,A. Noegel,
y S.S.Shapiro.Filaminsasintegratorsof cell
M. Schleicher
mechanics
and signalling.Nat.Rev.Mol. CellBioLZ (200I):
138-145.
Yin, H. L. y P.A. |anmey.Phosphoinositide
regulation
of the actincytoskeleton.
Ann. Rey.Plrysiol.65(2003):
761-789.
intemedios
Filamentos
Fuchs,E. y D.W. Cleveland.
A structuralscaffoldingof
intermediatefilamentsin healthand disease.
Science2T9
(1998):51a.
Herrmann.H. v U. Aebi.Intermediatefilamentsand their
associates:
Multi-talentedstructuralelementsspeciffing
cytoarchitectureand codynamics. Curr. Opin. CeIIBioL12
Q000):79.
Ingber,D. E. The architecture
of life. Scl.Amer.278(1998):48.