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Centro Universitrio Maurcio de Nassau

Disciplina de Microbiologia Clnica

Identificao laboratorial das principais


bactrias Gram positivas
Professora Gleiciere Maia Silva
Especialista em Microbiologia Mdica e Micologia
Mestre em Biologia de Fungos

Principais bactrias Gram +

Objetivo Geral:
Identificar as principais bactrias Gram + que causam
patologias de interesse mdico;
Objetivos especficos:
Identificar os principais testes da rotina laboratorial para
identificao dessas bactrias;

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +


Colorao de Gram
Cristal Violeta
1 min.: Colorao azul
Lugol
1 min.: Mordente
Soluo
lcoolAcetona (1:1)
Descolorao
Safranina
15 a 30 seg.:

Principais bactrias Gram +

Bactrias Gram Positivas


Cocos: Staphylococcus; Streptococcus
Bacilos: Lactobacillus; Listeria; Corynebacterium

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +

Staphylococcus
Espcies: Staphylococcus aureus; S. epidermidis; S.
saprophyticus; S.haemolyticus
Streptococcus
Espcies: Streptococcus pyogenes; S. agalactiae; S.
pneumoniae; S. grupo viridans; S. grupo D
Enterococcus
Espcies: Enterococcus faecalis; E. faecium; E. bovis

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Bactrias no esporuladas que mais resistem no meio
ambiente;
Podem sobreviver por meses em amostras clnicas secas, so
relativamente resistentes ao calor e podem tolerar uma
concentrao aumentada de sal.
Este microrganismo continua a ser um dos mais importantes
patgenos para o homem.
Indivduos sadios so colonizados desde a amamentao, e
podem albergar o microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente
na pele e raramente na vagina.

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do
paciente, objetos inanimados ou outros pacientes por contato
direto ou por aerossol.
J foram descritos no Brasil casos de infeces causadas por
S. aureus parcialmente resistentes aos antibiticos mais
potentes como a Vancomicina, e relatos da capacidade que os
Staphylococcus coagulase negativa tem de desenvolver
resistncia..

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase
negativa conhecidas, das quais os mais freqentes so:
Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de
cateteres e prteses e o mais freqente microrganismo
encontrado em hemoculturas.
Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria
em mulheres jovens.
Staphylococcus haemolyticus - importante devido
resistncia aumentada aos antimicrobianos, e por ser
comumente confundido com o S. aureus, pois apresenta hemlise
na placa de gar sangue de carneiro.

Principais bactrias Gram +

Catalase;
Coagulase (Livre e Fixa);
DNAse;
Sensibilidade Novobiocina;
gar Manitol.

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Cocos Gram positivos;
Organizados em Aglomerados Irregulares Cachos;
Famlia Micrococcaceae;
Imveis;
Produzem pigmentos: branco amarelo-dourado;
Anaerbios facultativos;
Catalase positiva;

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Prova da Catalase: A catalase uma enzima que decompe o
perxido de hidrognio (H2O2) em gua e oxignio. Com a ala
bacteriolgica ou com um palito coleta-se o centro de uma colnia
suspeita e esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar sobre este
esfregao uma gota de gua oxigenada a 3% e observar a
formao de bolhas. Para a famlia Microccocacea (estafilococos)
a prova positiva,enquanto que para a famlia Streptococcacea
(estreptococos) negativa (ANVISA,2008).

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica

Prova
da Catalase: Ao coletar a colnia, no carregar meio de
cultura (gar sangue), que pode acarretar resultados
falsopositivos porque o sangue do meio contm catalase. Algumas
cepas de enterococos podem dar falsa reao positiva (fazer
Gram e ver disposio em cadeias curtas ou aos pares).

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Prova da Coagulase: A maioria das cepas de S. aureus possui a
coagulase ligada (ou fator aglutinante) clumping factor na
superfcie da parede celular, que reage com o fibrinognio do
plasma causando a coagulao do mesmo.
Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;
Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;
Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plstico
ou madeira;
Observar se h aglutinao em 10 segundos.

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Teste Coagulase em Tubo:
Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por
uma noite, com colnia suspeita a um tubo de
ensaio com 0,5 ml de plasma;
Incubar por 4 horas 35C em estufa ou
banho maria;
A formao do cogulo observada pela
inclinao suave do tubo de ensaio a 90 graus
da vertical.

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Este teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo
DNA, (DNAse test agar) obtido comercialmente.
Adicionar ao meio original azul de ortotoluidina na concentrao
de 0,1%; o meio adquire uma colorao azul intensa; Incubar a
35C por 24 horas;

DNAse Positiva
- Meio adicionado de Indicador -

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Teste de crescimento em gar manitol
O S. aureus tem a capacidade de fermentar o manitol em meio
contendo 7,5 % de cloreto de sdio, denominado gar manitol
salgado. O indicador de pH o vermelho de fenol, que indica
uma reao positiva quando o meio ao redor das colnias se
torna amarelo, e negativa quando permanece avermelhado.

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica
Teste de resistencia a novobiocina
A cepa semeada de maneira semelhante ao antibiograma em
placa de Muller Hinton acrescida de um disco teste de
novobiocina contendo 5 g. As amostras resistentes mostram
zonas de inibio de 6 a 12 mm, enquanto as susceptveis
apresentam halos de 16 mm ou mais. As cepas de S.
saprophyticus so resistentes.

M -1

M-1: S. epidermidis
M-2: S. saprophyticus

M-2

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Staphylococcus aureus
Colorao amarelo-dourado (tipicamente);
Prova da Coagulase Positiva;
Importante agente de Infeces Hospitalares;
Geralmente so hemolticos em gar sangue;
Capaz de despolimerizar DNA (Meio DNAse);
Cresce em meio salgado (12% NaCl);
Fermentao do manitol positiva;
Possui vrias Hemolisinas e Toxinas (Virulncia e
Patogenicidade).

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Staphylococcus epidermidis
Colorao branca;
Coagulase Negativa;
DNAse Negativa;
Fermentao do manitol negativa;
Novobiocina Sensvel;
Habitante Normal da pele e mucosas;
Causa ocasionalmente sepses.

Principais bactrias Gram +


Caractersticas: Staphylococcus
Staphylococcus saprophyticus
Colorao branca;
Coagulase negativa;
DNAse negativa;
Fermentao do Manitol negativa;
Novobiocina resistente;
Causa Infeces genito-urinrias.

Principais bactrias Gram +


Identificao bioqumica

Anvisa, 2008

Streptococcus: Identificao laboratorial das


principais espcies

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Cocos Gram Positivos;
Colnias Pequenas e Translcidas;
Famlia Streptococcaceae;
Disposio aos pares ou em cadeias Colar de contas;
A maioria so imveis;
Aerbios ou Anaerbios facultativos;
Catalase negativa;
So fastidiosos (altamente exigentes);
Constituinte da Microbiota Normal;
A maioria possui importncia clnica.

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco
hospitalar na era pr-antibitica, causando surtos de infeco
e morte de purperas. Apesar de no serem atualmente uma
importante causa de infeco hospitalar, provocam, no entanto,
doenas muito graves e muitas vezes letais, mesmo em
pacientes imunocompetentes, sendo importante o rpido
diagnstico deste agente.

Principais bactrias Gram +


Provas Bioqumicas: Streptococcus
Catalase;
Hidrlise do Hipurato;
Prova de CAMP;
Hidrlise da Esculina;
Tolerncia a Caldo Salgado (NaCl 6,5%);
Sensibilidade Optoquina;
Sensibilidade Bacitracina.

Principais bactrias Gram +


Provas Bioqumicas: Streptococcus

Streptococcus pneumoniae;
S. pyogenes;
S. agalactiae;
S. grupo viridans;
S. grupo D

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
- -Hemlise (Hemlise
Total);
- Streptococcus pyogenes;
- S. agalactiae.

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
-

-Hemlise
Parcial);

(Hemlise

- Streptococcus Viridans;
- S. pneumoniae;

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
- -Hemlise (Sem Hemlise);
- Streptococcus Grupo D;
- Enterococcus spp.

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

Hidrlise do Hipurato
Negativa

Hidrlise do Hipurato
Positiva

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

Prova de CAMP Positiva


Streptococcus agalactiae

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

ANVISA

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

Hidrlise da Esculina

Hidrlise da Esculina

Negativa

Positiva

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

M-1: Streptococcus Viridans


M-1

M-2

Sensibilidade Optoquina

M-2: Streptococcus pneumoniae

Principais bactrias Gram +


Streptococcus

Streptococcus pyogenes

Sensibilidade Bacitracina

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Streptococcus pneumoniae
Pneumococos- Pneumonia bacteriana (90% dos casos);
Apresenta-se aos pares (em forma de Chama de
Vela;
-Hemolticos (Hemlise Parcial);
Sensvel Optoquina (5g/mL).

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Streptococcus pyogenes
Grupo A de Lancefield;
So -Hemolticos (Hemlise Total em gar Sangue);
Sensvel Bacitracina
Provocam Infeces nas Vias areas superiores e
pele; Febre reumtica, glomerulonefrite (natureza
imunolgica);
Possui vrias toxinas e enzimas (hemolisinas):
Virulncia e patogenicidade.

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Streptococcus Grupo Viridans
Microbiota normal da boca, mucosas, pele e Intestino;
Principais espcies:Streptococcus sanguis, salivarius,
mitis, mutans
Ocasionalmente causam processos endocrdicos
-Hemolticos (Hemlise Parcial);
Resistentes Optoquina (5g/mL).

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Streptococcus agalactiae
Grupo B de Lancefield;
So -Hemolticos (Hemlise Total em gar Sangue);
Provocam Infeces na Via Genito-Urinria;
Resistente Bacitracina;
Prova de CAMP positiva;
Hidrolisa o Hipurato de Sdio.

Principais bactrias Gram +


Streptococcus
Streptococcus Grupo D
Classificao segundo Lancefield;
, ou -Hemolticos;
Microbiota Intestinal;
Hidrolisam a Bile;
No crescem em meio hipertnico (6,5% NaCl);
Infeces Genito-Urinrias.

Principais bactrias Gram +


Enterococcus
Enterococcus
Antigo Representante dos Streptococcus Grupo D;
Principais espcies
faecalis, faecium, bovis
-Hemolticos (Sem Hemlise);
Microbiota Intestinal;
Hidrolisam a Bile;
Crescem em meio hipertnico (6,5% NaCl);
Infeces Genito-Urinrias.

Principais bactrias Gram +


Enterococcus

Referncias Bibliogrficas
Microbiologia- Gerard J. Tortora.
Microbiologia Ilustrada- Willian A. Strohl
Procedimentos Bsicos em Microbiologia ClnicaCarmen Oplustil et al.
ANVISA